INTRODUCCIÓN

La realización del siguiente trabajo de manera individual tiene como propósito que el

estudiante se apropie de la contextualización del curso de Biotecnología, con el propósito

de comprender la biotecnología microbiana, como son su comportamiento mediante la

implementación de procedimientos tales como siembra de microorganismos y con ello los

métodos para la medición del crecimiento.

Tener conocimiento como objetivo principal el concepto, la interpretación y la realización

de La curva de crecimiento de microorganismos.

La realización de este informe será necesario para la realización del próximo trabajo

colaborativo.
 TRABAJO INDIVIDUAL

I. Fundamentación científica
Cuestionario

1. Realización de laboratorio virtual 1 Curva de crecimiento y desarrollo

del cuestionario.

a. ¿Qué fases de crecimiento puede identificar en la gráfica?

En la gráfica de la curva de crecimiento podemos identificar las siguientes fases

 Fase de aceleración positiva

 Fase exponencial

 Fase de aceleración negativa

 Fase estacionaria

b. Explique el comportamiento de la gráfica, desde el punto de vista metabólico.

Teniendo en cuenta el concepto de metabolismo como la trasformación de las

sustancias, en la gráfica podemos observar desde la primera etapa; el incremento

de población microbiana las cuales inician su reproducción desde el momento de la

 siembra, determinando por medio de la realización de análisis por

espectrofotometría la concentración gradual de acuerdo al tiempo. Aumentando

cada vez más su intensidad de color y como consecuente la concentración (mayor

población de microorganismos) que por cada lectura nos arroja un resultado de

absorbancia más elevado, esto con relación al tiempo, y es así como ocurre el

metabolismo el cual es una transformación que se da en el interior de las células, lo

que permite que por medio de la absorbancia logremos determinar que se está

originando cambios a nivel celular con el paso del tiempo, en un medio de siembra

determinado.

c. ¿En el gráfico es posible observa todas las fases de crecimiento? Explique su

respuesta

No, en el comportamiento de la gráfica solo podemos observar 4 fases.

Debido a que en este procedimiento de incubación de microorganismos no tenemos

fase de latencia debido a que el medio de cultivo del que procede el inoculo es el

mismo y por ende no necesita tiempo para reponerse o adaptarse a las condiciones

del medio.

Tampoco tenemos fase de la muerte debido a no hay agotamiento de hidratos de

carbono.

d. Investigar otros métodos con los que se pueda determinar la curva de

crecimiento.
 Recuento de colonias por placas: En este medio se realiza siembra de una muestra

en laminillas, y en las cuales por medio de incubación se genera duplicación por

colonias y se pueden leer al microscopio por medio de conteo de colonias formadas.

Medida de la Turbidez: Esta se realiza a los medios de cultivo en los cuales se

realiza la siembra de un microorganismo dado, y es visible por las partículas en

suspensión generan apariencia turbia al medio liquido donde se encuentran, las

cuales son las células del microorganismo, y su lectura o medida se puede realizar

en un equipo el cual es muy similar al espectrofotómetro.

e. Cuál es la aplicación industrial de conocer la curva de crecimiento de un

microorganismo.

La aplicación industrial de conocer la curva de crecimiento microbiano es poder

predecir mediante su aplicación como va a evolucionar un cultivo, como será su

comportamiento frente a lo que se desea; como por ejemplo la industria láctea y

cervecera que tiene un proceso de fermentación; reproducción de microorganismos

para la elaboración de productos estandarizados, mediante la curva se podrá tener

una idea del crecimiento que se obtendrá.

Sin conocer y realizar previamente como prueba del nivel de crecimiento una curva,

sería muy inadecuado iniciar un cultivo de fermentación.

f. ¿Qué entiende por absorbancia?

Absorbancia es la intensidad de luz que con una longitud de onda es absorbida por

una sustancia en medio líquido, y que su valor aumenta de acuerdo a la

concentración de la muestra, a mayor turbidez mayor absorbancia.

g. Por qué es necesario utilizar una solución blanca, cada vez que se hace una

nueva lectura en el espectrofotómetro.

Es necesario utilizar la solución blanco entre cada lectura que se realiza ya que esta

funciona como un patrón de medida y como un ajuste o calibración del

espectrofotómetro; que permite la obtención de un resultado confiable.

h. ¿Qué es lo que mide realmente el espectrofotómetro y como se relaciona esto

con las fases de crecimiento microbiano?

El espectrofotómetro mide la turbidez de una solución mediante luz, que atraviesa

mediante un prisma monocromático que permite obtener el grado de turbidez de la

solución, se relaciona con las fases de crecimiento microbiano por el nivel de

absorbancia; a mayor concentración mayor población de microorganismos y con las

dos variables absorbancia y tiempo nos permite realizar la curva de crecimiento la

cual nos lleva al análisis del comportamiento microbiano en cuanto a su nivel de

reproducción.
2. Calcule el valor de g (tiempo de generación) y de k (Velocidad de crecimiento) en un

experimento de crecimiento en el que se inoculó un medio con 3 x 10 3 Células /ml de E.

Coli y que después de un período de latencia de una hora creció exponencialmente durante

8 horas, alcanzando una población de 8,4 x 10 9 células / ml

Numero de generaciones

log N −log No
n=
log 2 a

log 8,4 x 109 −log 3 x 103

n=
0.301

9,92−2,47
n=
0,301

7 , 45
n= =24,75
0,301

Tiempo generacional

t
g=
n

8
g=
24,75

G¿ 0,32 h.

Velocidad decrecimiento

¿2
μ=
td
 0,6931
μ=
0,32

μ=2,16

3. Compare y señale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, derivados

del metabolismo de los microorganismos y dé dos ejemplos de cada uno de ellos y sus

posibles aplicaciones industriales

METABOLITOS PRIMARIOS METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Abundantes en la naturaleza y 1. Son los compuestos que se
uno de sus beneficios en biosintetizan a partir del los
aplicación industrial es que se metabolismos primarios.
encuentran presentes en grandes 2. Constituyentes indispensables en
cantidades, de fácil extracción y proceso vitales de los seres vivos
su explotaciones relativamente Ejemplo: La glucosa, fructosa
económica. 3. Algunos No son indispensables en
2. Son sintetizados por el el organismo
organismo y se desarrollan para Ejemplos: Esteroides, Alcaloides,
el crecimiento terpenos, etc.
3. Desarrollan funciones de
complemento como la de defensa
y comunicación.
4. No desempeñan un papel directo
en las funciones de crecimiento y
 reproducción.
5. Su ausencia en un cuerpo no
impide la supervivencia aunque si
puede la puede afectar
6. Son indispensables en el
organismo
Ejemplos: Proteínas, ácidos
tricarboxilos, Lípidos,
monosacáridos, aminoácidos,
glúcosidos, etc

4. De acuerdo a la ova sobre fermentación. Determine por medio de un esquema las etapas

de un proceso de Biotecnología de las fermentaciones para la obtención de un producto a

nivel industrial y explique cada uno de los pasos.

Recepción de la materia prima: se realiza limpieza especial de los granos de cebada

germinados

Mezcla: cebada más agua para la obtención de la malta

Molienda: malta y se trituración en molinos industriales

Maceración: se macera la malta en (tanque de mezcla) y se adiciona agua haciendo una

mezcla homogénea

Agitación: agitación hasta obtener mezcla homogénea

Cocción: el mosto para al tanque de cocción donde se lleva a ebullición por determinado

tiempo 0 min aproximadamente donde se agrega demás componentes como el azúcar y el

lúpulo: un ingrediente que se obtiene del fruto de la planta hembra humulus lúpulus, que

aporta sabor característico amargo

Enfriamiento: posteriormente, el mosto de enfría a una temperatura de 8 a 12 grados, en

este punto se inyecta levadura y se envía a los tanques de fermentación

Fermentación y maduración: en estos tanques se inicia el proceso de fermentación por

acción de la levadura proceso que dura 7 días a continuación la cerveza pasara e 15 días de

enfriamiento a 0 grados y será el proceso de maduración: se divide a grandes rasgos en dos

procesos principales: el primero corresponde a la conversión del almidón de un cereal en

azúcares fermentables por acción de las enzimas que se encuentran en la malta y la

posterior fermentación alcohólica de los mismos.

Filtración: se separa la materia soluble de la insoluble mediante filtración, obteniendo

como resultado líquido claro azucarado y rico en proteínas llamado Mosto

Sedimentación: el proceso continúa con la etapa de sedimentación donde se separan

algunas sustancias insolubles que se han formado durante la cocción

Clarificado: la cerveza es enviada al filtro de clarificado donde se obtiene como resultado

una cerveza clara, brillante estable y lista para ser envasada

Envasado: mediante inyectores se dosifica en iguales cantidades y en botellas de vidrio de

color ámbar o transparentes la cerveza

Distribución: distribución en grandes cantidades al cliente.

5. Estudie la ova sobre fermentación, que se encuentra en el entorno de conocimiento de la
unidad uno. Realice un esquema de un Biofermentador básico, describa sus partes y su
funcionamiento. (5 puntos)

Fermentador

Partes del fermentador

 Manómetro Es un instrumento de medición para la presión de fluidos contenidos en

recipientes cerrados. Se distinguen dos tipos de manómetros, según se empleen para medir
la presión de líquidos o de gases En la industria se emplean casi exclusivamente los
manómetros metálicos o aneroides, que son barómetros modificados de tal forma que
dentro de la caja actúa la presión desconocida que se desea medir y afuera actúa la presión
atmosférica.

 Motor: Es la parte sistemática de una máquina capaz de hacer funcionar el sistema,

transformando algún tipo de energía (eléctrica, de combustibles fósiles, etc.), en energía
mecánica capaz de realizar un trabajo
 Agitador es parte de una unidad de proceso destinado a garantizar la homogeneidad de
un medio (en términos de homogeneización de los componentes del medio y / o de la
temperatura). Existen diferentes tipos de agitador de acuerdo con el medio, de la
configuración de la unidad y el efecto deseado. Agitador en Mezcla Radial Agitador en
Mezcla Axial Tipo de agitador: Turbina, Ancla, Plancha, Rejilla, Impulsor Tipo de
agitador: Hélice, Turbina de paletas inclinadas Banda agitadora

 Agua de enfriamiento: Es una la parte del fermentador por donde el agua para
enfriamiento o calentamiento sale del sistema, para ser desechada. Se puede reciclar esta
agua. Es importante que este conducto no se cierre o tape, pues puede causar un gran
problema al fermentador

 Deflector: También conocidos como bafles, son laminas verticales de metal unidas a la
pared del tanque por medio de corchetes, que se encargan de reducir los vórtices del líquido
y por lo tanto mejoran la mezcla en el fluido. Para líquidos de alta velocidad, su misma
resistencia a fluir, amortigua la formación del vórtice al grado que el ancho de los
deflectores puede reducirse. En el caso de fluidos viscosos se puede colocar los bafles a
una distancia de la pared igual al ancho del bafle para poder evitar zonas estancadas detrás
de ellos. 9

 La camisa de un fermentador se entiende como una capa dentro de él, que puede ser de
Acero Inoxidable generalmente. Los fermentadores de camisa húmeda son aislados los
cuales disponen entre el fermentador interior y la aislación un tercer aro que forma una
camisa de agua para refrigeración.

 Salida de gases: Es la parte del fermentador por donde el oxígeno que se le suministro, o
cualquier otro gas salga del fermentador. Puede ser regulado por una válvula. Los gases
pueden ser recuperados si es que son útiles para otro proceso.

 Aireador: Es utilizada para mantener el sistema de fermentación a una temperatura

estable. Pasa constantemente por todo el sistema, regulando la temperatura. Esta agua debe
salir en cuanto su temperatura suba y ya no sea útil para el sistema.

 Carga: Es por donde se suministra tanto el sustrato como el microorganismo al sistema

de fermentación 13
6. De acuerdo a la ova sobre fermentación Realice un cuadro comparativo donde diferencie
los tipos de fermentación industrial (Batch, Fed-batch y discontinua) y de un ejemplo de
producción de cada uno de ellos.

BATCH O DISCOTINUA ALIMENTADO O FED- COTINUO O

BATCH QUIMIOSTATO
 Es un Sistema  Una mejora del  sistema abierto.
cerrado. proceso cerrado  La solución nutritiva
 en la fermentación discontinuo es la estéril se añade
se añade un agente fermentación continuamente al
antiespumante y alimentada. biorreactor y una
ácidos o bases para  En los procesos cantidad equivalente
controlar el pH y alimentados, los de solución utilizada
oxígeno (en forma sustratos se añaden de los nutrientes,
de aire escalonadamente a con los
 Cuando se ha medida que progresa microorganismos.
alcanzado el nivel la fermentación.  Opera por periodos
deseado de reacción,  formación de largos; tiempos
se vacía el reactor, muchos metabolitos muertos bajos.
se limpia y el secundarios está  El medio nutriente
proceso se repite. sometida a represión es inoculado con el
 En los procesos catabólica (efecto cultivo microbiano
comerciales la glucosa). al entrar al reactor y
fermentación  Los elementos los organismos
frecuentemente se críticos de la llevan a cabo su
interrumpe al final solución de actividad a medida
de la fase nutrientes se añaden que el líquido fluye
logarítmica en pequeñas a través del sistema
(metabolitos concentraciones al y salen del sistema
primarios) o antes principio de la junto con el medio.
de que comience la fermentación y  Los organismos
fase de muerte continúan pueden separarse de
(metabolitos añadiéndose a la corriente que
secundarios). pequeñas dosis lleva al producto y
 Dificultad de durante la fase de reciclarse para
controlar la producción. inocular el líquido
velocidad de  Útil en procesos en de alimentación.
crecimiento, excepto los que el  Alto costo por alta
variando la crecimiento celular calidad de equipos y
composición del y/o la formación de accesorios.
medio o las producto son -Requiere gran
condiciones de sensibles a la reservorio para
proceso. concentración del almacenamiento de
 Alta demanda de sustrato limitante. medio o suministro
 oxígeno puede  Se emplea cuando continuado de
generar una se quieren evitar sustrato.
limitación debido a fenómenos de  El cultivo se
una insuficiente inhibición por mantiene con
capacidad del sustrato y se coeficientes de
reactor para requiere alcanzar crecimiento
transferir O2 al una alta constante,
medio. concentración de crecimiento
 Inconvenientes para biomasa. balanceado,
remover calor.  Limitar la demanda composición celular
 Tiempos muertos de O2 del cultivo. constante.
entre procesos  Obtener altas  Generación de
disminuye la concentraciones de biomasa constante
productividad. sustrato evitando el como productividad
efecto osmótico y y conversión.
tóxico de nutrientes.  Volumen de reactor
 Maximizar el reducido en
crecimiento celular comparación a la
(efecto Crabtree en productividad
levaduras). similar en proceso
por lotes.
 Se incrementa el
riesgo de
contaminación
debido a la amplia
operación.
 Posibilidad de
mutación,
incremento de fagos
por los cambios
genéticos debido a
la presencia de
plasmidios e
incremento de estos.
FERMENTACIÓN PRODUCTO(S) PRODUCCION

Fermentación Lactato Este proceso lo realizan muchas bacterias

láctica llamadas bacterias lácticas, hongos, algunos

protozoos y en los tejidos animales. En

condiciones de ausencia de oxígeno (anaerobias),

la fermentación responde a la necesidad de la

célula de generar la molécula de NAD+, que ha

sido consumida en el proceso energético de la

glucólisis.

Fermentación etanol, CO2 Este tipo de fermentación tiene como finalidad

alcohólica biológica proporcionar energía anaeróbica a

los microorganismos unicelulares(levaduras) en

ausencia de oxígeno a partir de la glucosa.

Fermentación etanol, Se puede definir como la combinación de la

ácida-mixta succinato, Fermentación láctica y la alcohólica. Los

acetato, microorganismos que forman parte de ella son:

formiato, Streptococcus, Lactobacillus, Bacillus,

lactato, CO2,H2 Saccharomyces, Escherichia, Acetobacter y

Salmonella
Fermentación Ácido Acético Fermentación bacteriana por acetobacter, un

Acética género de bacterias aerobias que transforman el

alcohol en ácido acético.

Fermentación aceto Acetato, Se produce a partir de la lactosa con formación
 - butírica acetona, de ácido butírico y gas. Es característica de las

butirato, bacterias del género Clostridium y se caracteriza

butanol, etanol, por la aparición de olores pútridos y

CO2 Y H2 desagradables entre ellos los intestinales.

II. Ponencia científica

Problema: La búsqueda continua de microorganismos más eficientes en la producción de

alfa amilasa es una alternativa, para optimizar la producción de esta enzima de importancia

comercial.
Para ello, se ha aislado tres cepas de microorganismos amiloliticos, sin embargo, se desea

saber cuál de las tres cepas es más eficiente en la degradación de éste polisacárido.

Preparación de medios de cultivo

SUSTRATO MEDIO 1 MEDIO 2

Fuente de carbono Harina de yuca (10 g.L -1) Harina de trigo (10 g.L -1)
fuente de nitrogeno Harina de frijol (5 g.L -1) Harina de sangre (5 g.L -1)
mezcla de nutrientes k (1 ml . L-1) k (1 ml . L-1)

MEDIO DE °T PH FINAL UA/ENZIM

CULTIVO INCUBACIÓ MC ATICA
M1 30°C 5,9 5,4
M1 35°C 5,4 4,6
M2 30°C 5,9 13,3
M2 35°C 5,4 14,2

Pregunta 1. ¿Cuál de los microorganismos es más efectivo? Fundamente su

respuesta de acuerdo al experimento realizado.

Hipótesis 1: Las variaciones en la actividad enzimática se debe a las diferencias de las

concentraciones de almidón en la fuente de carbono

Las enzimas se caracterizan por ser catalizadores muy potentes y eficaces, las cuales actúan

en pequeña cantidad y se recuperan indefinidamente.

Evidencia: No presentan reacciones energéticamente desfavorables, no alteran ni modifican

el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran su consecución. Son grandes

proteínas que aceleran las reacciones químicas.

Para la degradación del almidón la amilasa es una de las principales enzimas que actúan en

este proceso, y por ende las variaciones en la actividad enzimática dan lugar a las

diferencias en las concentraciones de almidón presente en las fuentes de carbono.

Para el medio dos la harina de trigo posee un porcentaje de almidón de 75 %, la harina de

frijol 1,7 %. Mientras que para el medio número uno, la harina de yuca presenta un

porcentaje de 95% y por último la harina de frijol 1,8%.

La alfa amilasa (α-amilasa) de alta importancia comercial, tiene la propiedad de hidrolizar

el almidón independiente de su origen, sí este se aplica en una concentración del sustrato,

pero de manera saturada, permitiendo entonces encontrar variación en la concentración de

enzima. Allí se observa que aumenta el producto de la reacción, en condiciones de pH y

temperatura de manera constante. Si se conserva o mantiene la concentración de la enzima

(constante) y varía la concentración de substrato se obtiene una curva hiperbólica.

Al principio observamos que en un aumento de la concentración de substrato se produce un

aumento rápido de la velocidad de reacción, pero si se sigue aumentando la concentración

de substrato, la velocidad de reacción empieza a disminuir y si tenemos altas

concentraciones de substrato, se observa que la velocidad de reacción no cambia, es por tal

razón que se puede llegar a pensar que los centros activos de la enzima se pueden encontrar

saturados.

Se logran obtener máximos rendimientos de la enzima cuando el contenido del almidón del

medio es mayor , sin embargo otros factores como otros compuestos en el medio pueden

incrementar o favorecer el crecimiento de la enzima, como lo es en el caso de fuentes de

nitrógeno, como se logra evidenciar en el medio número 2 cuyo porcentaje de almidón es

menor que la sumatoria de contenido de almidón del medio número 1, no obstante el medio
dos contiene harina ñ, la cual posee buena fuente de nitrógeno, lo que favorece actividad y

optimización la actividad final.

La alfa amilasa normalmente tiene actividad óptima de pH entre 4,8 y 6,5, por lo que no es

un factor que interfiere en los medios 1 y 2 ya que el pH que se maneja allí es el óptimo en

la actividad de α-amilasa; mientras que la fuente de nitrógeno es un factor decisivo para la

óptima actividad final, sumado que la composición de almidón en la harina de trigo es alta

aportando el sustrato necesario para la actividad.

BOBLIOGRAFIAS

[CITATION Muñ12 \l 9226 ]

http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2162/openurl?
sid=EBSCO:edsebk&genre=book&issn=&ISBN=9789875582552&volume=&issue=&date
=20120101&spage=&pages=&title=Biotecnologi01a&atitle=Biotecnologi%CC
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[CITATION Ort12 \l 9226 ]

http://hdl.handle.net/10596/9950

[CITATION FOr13 \l 9226 ]

 http://stadium.unad.edu.co/ovas/10596_9964/index.html

[ CITATION Att13 \l 9226 ]

http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/reader.action?
ppg=1&docID=10853641&tm=1479512703653

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[ CITATION Gao \l 9226 ]

https://es.slideshare.net/luisbryang/tipos-de-fermentadores-y-sus-partes

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