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INFORME DE PRACTICAS
CURSO INMUNOLOGÍA BÁSICA
TITULO:
PRÁCTICA 4:
ANTICUERPOS MONOCLONALES
PRESENTADO POR:
MACHACA CALCINA, MAX RUSSEL
PUNO-PERÚ
2020
UNA-PUNO
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA INMUNOLOGIA BASICA
ÍNDICE
I. INTRODUCCIÓN...............................................................................................................3
OBJETIVOS...........................................................................................................................5
OBJETIVOS GENERALES..............................................................................................5
OBJETIVOS ESPECIFICOS............................................................................................5
2. ANTICUERPOS MONONUCLEARES...........................................................................6
ANTICUERPO...................................................................................................................6
ANTICUERPO MONOCLONAL......................................................................................7
HIBRIDOMA.......................................................................................................................7
ENZIMA HGPRT...............................................................................................................7
ENZIMA TK........................................................................................................................8
MEDIO HAT.......................................................................................................................8
CLONAMIENTO..............................................................................................................11
CUESTIONARIO.................................................................................................................14
V. CONCLUSIONES............................................................................................................18
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I. INTRODUCCIÓN
El reconocimiento de un componente protector (anticuerpos) en el suero de
pacientes convalecientes de enfermedades infecciosas, marcó los inicios del
desarrollo de la medicina preventiva. El uso de estos anticuerpos protectores
como fracciones de inmunoglobulinas crudas que se unen a los antígenos
representó el primer tratamiento efectivo de numerosas enfermedades
infecciosas. Los anticuerpos, también denominados inmunogloblulinas (Ig), son
glucoproteínas especializadas que hacen parte de la inmunidad humoral; son
producidas por las células del sistema inmune llamadas células B, que tienen la
capacidad de reconocer otras moléculas específicas llamadas antígenos. La
respuesta inmunológica específica se desarrolla cuando un organismo ha sido
expuesto a uno o varios antígenos, originando una respuesta policlonal, es
decir, la producción de anticuerpos contra un rango amplio de estructuras
presentes en los antígenos. Por el contrario, la respuesta monoclonal se da por
la selección de un solo clon activado de células B que produce un anticuerpo
para un determinante antigénico único.
En los años treinta del siglo xx Landsteiner, el descubridor del sistema ABO,
identifica todas esas funciones y las centra en una sola molécula, los
anticuerpos, y al tiempo va sustituyéndose el nombre de toxina por el de
antígeno. Años más tarde, este mismo autor, junto con Pauling, desarrolla la
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Frente a la teoría instruccionista, Jerne propuso en los años cincuenta que los
anticuerpos preexistían en el organismo y que la función de los antígenos sería
la selección de los más adecuados. Poco después, Burnett y Talmage
adelantan la teoría de la selección clonal que completa y expande las ideas de
Jerne, y que presupone que cada célula B produce un solo tipo de anticuerpo
con una especificidad concreta, el cual se genera por mutaciones somáticas al
azar durante el proceso de maduración celular; más adelante, la exposición a
los antígenos hace que esas células B proliferen.
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En los años treinta del siglo xx Landsteiner, el descubridor del sistema ABO,
identifica todas esas funciones y las centra en una sola molécula, los
anticuerpos, y al tiempo va sustituyéndose el nombre de toxina por el de
antígeno. Años más tarde, este mismo autor, junto con Pauling, desarrolla la
teoría instruccionista de formación de los anticuerpos, según la cual los
antígenos determinarían la conformación de los anticuerpos acomodándola a
su estructura. A finales de los cuarenta se descubre el origen celular de los
anticuerpos en las células B y plasmáticas. Años más tarde se describen las
cadenas ligeras y se identifican las inmunoglobulinas A, D y E.
OBJETIVOS
OBJETIVOS GENERALES
Conocer utilidad en nuestra vida actual de los anticuerpos monoclonales
para solucionar problemas de salud.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Conocer la importancia de los anticuerpos.
Determinar cuáles son los usos que se pueden dar en la vida actual.
Comprender el proceso por el cual actuan.
Comprender los mecanismos que intervienen.
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2. ANTICUERPOS MONONUCLEARES
ANTICUERPO
Son glicoproteínas del tipo gamma globulina. Pueden encontrarse de forma
soluble en la sangre u otros fluidos corporales de los vertebrados, disponiendo
de una forma idéntica que actúa como receptor de los linfocitos B y son
empleados por el sistema inmunitario para identificar y neutralizar elementos
extraños tales como bacterias, virus o parásitos.
El simple acto de unión del anticuerpo puede ser suficiente para inactivar a un
patógeno o mantener inocua a una toxina. Por ejemplo, el anticuerpo que
recubre un virus puede impedir que este ingrese en las células diana y
“neutralizar”, por consiguiente, el virus. Sin embargo, en muchos casos se
despliega una segunda función de la molécula de anticuerpo para activar la
eliminación del material extraño. En términos moleculares, esto implica la unión
de ciertas moléculas (moléculas efectoras) al material extraño recubierto por
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ANTICUERPO MONOCLONAL
Se denomina anticuerpo monoclonal al producido mediante el cultivo de un solo
tipo o clon de células hibridas (hibridoma), entre células capaces de producir
anticuerpos y células de mieloma; por tanto, está constituido por moléculas de
una sola especie de inmunoglobulina que provienen de un único clon.
HIBRIDOMA
Una hibridoma es una célula híbrida (quimera) producto de la fusión de una
célula mieloma (un tumor que produce anticuerpos) y una célula plasmática.
Cada clon de hibridomas produce un tipo de anticuerpo de la célula plasmática:
un anticuerpo monoclonal.
ENZIMA HGPRT
La Hipoxantina Guanina Fosforibosil Transferasa es una enzima codificada en
humanos por el gen HPRT1.
HGPRT es una transferasa que juega un papel central en la generación de
nucleótidos de purina a través de la vía de recuperación de purina.
Las células B contienen esta enzima, lo que les permite sobrevivir cuando se
fusionan con las células de mieloma cuando se cultivan en un medio HAT para
producir anticuerpos monoclonales.
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ENZIMA TK
La Timidina Quinasa es una enzima que permite a una célula utilizar una vía
metabólica alternativa para incorporar timidina en el ADN. Se utiliza como
marcador seleccionable para identificar las células eucarióticas transfectadas.
MEDIO HAT
Es un medio de cultivo especial que contiene
hipoxantina/ aminopterina/ timidina, que se utiliza para seleccionar las células
hibridas durante el proceso de anticuerpos monoclonales destruyendo las
células de mieloma deficientes de TK (Timidina Quinasa) o aquellas deficientes
de HGPRT (Hipoxantina Guanina Fosforibosil Transferasa).
INMUNIZACIÓN
En teoría, es factible producir anticuerpos monoclonales específicos para
cualquier antígeno capaz de ser reconocido por los linfocitos B. Para la
inmunización es conveniente el uso de preparaciones puras de antígeno en las
cuales el peligro de competencia antigénica, que pudiese desviar la respuesta
inmune humoral hacia una molécula irrelevante, no existe. Pero en muchos
casos el antígeno de interés se encuentra en una molécula de la superficie
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FUSIÓN
Luego de culminado el protocolo de inmunización y que se tiene la certeza de
que el mismo ha sido efectivo, el animal experimental es sacrificado y se le
extrae el bazo. Los linfocitos B, bien como parte del total de la suspensión de
células esplénicas o previamente purificadas, se mezclan con un número
apropiado de células de mieloma que se mantienen creciendo
exponencialmente in vitro. Lo que sigue a continuación es el proceso de fusión
en sí, el cual debe realizarse a 37º y consiste en añadir a la mezcla de células
un pequeño volumen de un agente fusógeno denominado polietilenglicol
(PEG), mezclando suavemente por espacio de uno a tres minutos. En estas
condiciones, las membranas de algunas de las células se fusionan, uniéndose
los citoplasmas y formándose los hibridomas. El PEG luego se elimina por
lavado y las células fusionadas se siembran en microplacas de cultivo.
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SELECCIÓN
Dado que la fusión es un evento completamente al azar, la mezcla de células
obtenidas luego de la misma estará formada por esplenocitos, células de
mieloma, esplenocitos fusionados entre sí, células de mieloma fusionadas entre
sí y además por las hibridomas linfocito B-célula de mieloma. En cultivo, los
esplenocitos no fusionados mueren con el tiempo por ser células normales. Sin
embargo, las mielomatosas al ser células tumorales pueden vivir
indefinidamente y como se replican con mayor rapidez que las hibridomas,
crecerían en forma predominante, "ahogando" al resto de las células.
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Existe aún otro evento de selección, el cual está destinado a identificar y aislar,
del total de híbridos producidos, a las hibridomas productoras de los
anticuerpos de interés. La identificación se logra con un método apropiado para
la evaluación de los sobrenadantes de cultivo y el aislamiento se realiza
mediante el clonamiento.
CLONAMIENTO
Para obtener una preparación monoclonal de anticuerpos, es necesario aislar
clones de células, en los que cada una es réplica exacta de la otra. El
procedimiento mediante el cual se obtienen muchas células idénticas por
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CUESTIONARIO
1. ¿QUÉ SON LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES?
Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un solo clon de
linfocitos B. Los anticuerpos monoclonales (en acrónimo mAB, del inglés
monoclonal antibody) son anticuerpos idénticos porque son producidos por un
solo tipo de célula del sistema inmune, es decir, todos los clones proceden de
una misma célula madre. Es posible producir anticuerpos monoclonales que se
unan específicamente con cualquier molécula con carácter antigénico. Este
fenómeno es de gran utilidad en bioquímica, biología molecular y medicina.
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Las células tumorales de mieloma de ratón procedían todas ellas de una línea
creada por Michael Potter en los años sesenta denominada MOPC21,
deficitarias en enzimas clave para la síntesis de oligonucleótidos por la vía de
rescate. El agente fusionante inicial era el virus Sendai, pero pronto se
sustituyó por polietilenglicol. Las células B provenían de ganglios linfáticos o del
bazo de ratones inmunizados repetida y eficazmente con el antígeno deseado.
Estas células se cultivaban con las de mieloma y el agente fusionante en un
medio de cultivo de composición especial (HAT) que no permite la
supervivencia de las de mieloma no hibridadas; los linfocitos B no fusionados
morían también y quedaban las células fusionadas. La especificidad se
analizaba en los sobrenadantes de los pocillos de las placas de cultivo,
seleccionando sólo los deseados y al final se llevaba a cabo la clonación por
dilución límite u otros medios7,8.
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V. CONCLUSIONES
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