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Capitulo 3
Capitulo 3
Para alcanzar el éxito en el diagnóstico mico- 3. La muestra debe recogerse antes de instaurar el
lógico es fundamental realizar adecuadamente la tratamiento y siempre de la parte activa de la
recogida de la muestra, su transporte y procesamien- lesión (cuando se sospecha una micosis pulmo-
to, la siembra de la misma en los medios idóneos y a nar es preferible una muestra respiratoria antes
la temperatura adecuada, así como la identificación que un hemocultivo).
e interpretación correcta de los aislamientos.
4. Los hisopos deben ser evitados, siempre que el
A la hora de valorar un crecimiento fúngico, tipo de lesión lo permita. Pero hay muestras
hay que tener siempre presente la necesidad de dife- (conducto auditivo, faringe, vagina o cérvix) que
renciar un “aislamiento significativo” de otros debi- no pueden ser recogidas de otra manera.
dos a hongos contaminantes, ya que no es lo mismo
identificar una especie fúngica que diagnosticar una 5. En el caso de heridas abiertas, drenajes o lesio-
micosis. nes superficiales, debe limpiarse la zona previa-
mente para evitar contaminaciones.
En este Capítulo se detallan los fundamentos
y recomendaciones básicas del diagnóstico micoló- 6. Las muestras de lesiones cerradas y abscesos
gico y en los siguientes, las características específi- suelen ser de gran rendimiento. Deben ser aspi-
cas del procesamiento de cada muestra según el radas con jeringa y transferidas a un contenedor
origen anatómico de la misma. estéril, prestando atención a la recogida de grá-
nulos, si los hubiese.
7. El raspado de lesiones de piel y faneras puede
realizarse con distintos materiales; los más utili-
zados son bisturí, moqueta o cepillo.
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8. En situaciones que requieran un estudio epide-
miológico, debe establecerse la necesidad de una
recogida de muestras ambientales, familiares o
El diagnóstico de las micosis comienza con de animales.
su sospecha clínica por lo que una adecuada obten-
ción de la muestra, a partir de la lesión, y su correc-
ta manipulación, para mantener la viabilidad del
agente etiológico y evitar posibles contaminaciones,
son aspectos fundamentales que siempre deben
tenerse en cuenta para la obtención de un correcto íòîò Ì®¿²-°±®¬» ¼» ´¿- ³«»-¬®¿-
diagnóstico micológico.
No debe olvidarse la importancia de etiquetar
y rellenar adecuadamente el volante de petición, de Las muestras deben ser transportadas en un
forma que refleje claramente la sospecha clínica y recipiente estéril, humidificado y a prueba de verti-
los factores predisponentes del paciente; destacan- dos; sin embargo, las muestras dermatológicas pue-
do, si los hubiera, la existencia de tratamientos que den transportarse en un recipiente seco (placa de
pudieran interferir en el aislamiento del miceto. Petri, papel de fotografía negro, entre dos portas,
etc.) o, de forma ideal, sembrada directamente sobre
el medio de cultivo.
En términos generales, los procedimientos 2. Los líquidos orgánicos (LCR, pleural, peritone-
utilizados en el laboratorio de bacteriología son ade - al, articular, etc.) deben concentrarse por centri-
cuados para el cultivo de hongos, pero hay que tener fugación (1.500-2.500 g durante 10 min) o
en cuenta que, habitualmente, la carga microbiana filtración (0,2 µm de poro), siempre que haya
es inferior en el caso de los hongos con respecto a suficiente cantidad. Estas muestras pueden
las bacterias. Esto obliga a recoger mayor cantidad requerir un procesamiento especial, o ser sem-
de muestra para obtener un rendimiento óptimo. bradas directamente en el medio de cultivo.
3. Los fragmentos ungueales se trocean progresiva -
mente con un bisturí y se pulverizan.
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C. Selectivos: Son medios que favorecen el aisla- seguir las especificaciones del documento M22-A
miento de los microorganismos deseados impi- del NCCLS en aquellos casos en los que está esta-
diendo el de otros. Los componentes más blecido [3].
utilizados como agentes selectivos son antibac-
terianos (cloranfenicol, gentamicina, penicilina, Los controles de calidad deben realizarse
estreptomicina) y también inhibidores de hon- tanto, a los medios elaborados en el laboratorio,
gos, como la cicloheximida que es especialmen- como a los medios comerciales ya preparados; en
te útil en las muestras cutáneas y respiratorias de este caso, es conveniente solicitar al fabricante los
micosis sistémicas endémicas. controles a utilizar y los resultados para el lote
suministrado. En el Capítulo 18 de esta Guía se
E. Diferenciales: Se utilizan para ayudar a la iden- detallan todos los aspectos del control de calidad de
tificación del hongo basada en la apariencia de los medios de cultivo.
éste en dicho medio, merced a la adición de
determinados componentes como por ejemplo
sustancias cromógenas, o indicadores de pH
como en el DTM (que también es selectivo). íòìòíò ͱ°±®¬» ¼» ´±- ³»¼·±- ¼» ½«´¬·ª±
F. Especializados: Son aquellos medios que con-
tienen algún componente (Guizotia abyssinica) El soporte habitual para los medios de culti-
destinado a aislar un agente concreto vo en Micología suele ser tubos de cristal o placas
(Cryptococcus neoformans) o a favorecer la de Petri (90 mm). La elección depende del usuario;
identificación de ciertas especies (medio de autores como De Hoog y Guarro proponen el uso
Czapeck). habitual de placas excepto, por razones de seguri-
dad, en los casos de sospecha de histoplasmosis,
coccidioidomicosis, blastomicosis, paracoccidioido-
micosis e infecciones por Penicillium marneffei [4].
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Si se utilizan tubos, deben incubarse en posi-
ción horizontal las primeras 24 h para que el inóculo
La buena calidad de los medios es indispen- no se concentre en el fondo. Los tubos no deben ser
sable para conseguir el aislamiento y la identifica- los habituales de Microbiología porque, en ellos, las
ción en Micología; por lo tanto, cuando se utilicen colonias no son fáciles de aislar. Si los tubos utiliza-
medios comerciales es necesario tener en cuenta la dos son de tapón de rosca, el cierre debe mantenerse
garantía que aporta el proveedor y la calidad de la parcialmente abierto para garantizar las mejores
distribución. condiciones atmosféricas.
Cuando se prepara un medio deshidratado Cuando se eligen placas, es conveniente que
deben seguirse rigurosamente las instrucciones del contengan 40 ml de medio para evitar que se sequen
fabricante, evitando errores en la forma de disolver- y deben sellarse con cinta adhesiva para que no se
lo o suspenderlo, en la temperatura y/o duración de abran involuntariamente. El precintado debe ser per-
la esterilización, para preservar la calidad del pro- meable al aire, ya que cuando el aire circula libre-
ducto final. La esterilización en autoclave es más mente se favorece la producción de pigmento y la
eficaz si se utilizan frascos de volúmenes inferiores superficie del agar se seca, permitiendo el desarrollo
a 500 ml; si se han utilizado imanes para la disolu- de micelio aéreo y esporas.
ción, deben retirarse antes de introducir los medios
en el autoclave. También hay que tener presente que
algunos antibióticos deben añadirse al medio una
vez esterilizado y a la temperatura adecuada, para íòìòìò ß´³¿½»²¿³·»²¬±
no ser desactivados por las altas temperaturas de la
esterilización.
Los medios se deben guardar refrigerados a
2-8 °C. Para mejorar su conservación y prevenir la
desecación, es aconsejable invertir las placas e
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Las placas de Petri suelen conservarse en
Para asegurar la correcta utilización de los buen estado unos tres meses, mientras que los
medios, debe controlarse periódicamente sus carac- medios semisólidos o líquidos en tubo de rosca se
terísticas más importantes: apariencia, esterilidad, conservan bien hasta seis meses. Sin embargo, cier-
pH y funcionamiento. El funcionamiento se puede tos medios, al contener sustancias inestables (anti-
evaluar utilizando las cepas de control adecuadas bióticos, vitaminas, sangre, etc.), no se conservan en
para cada medio. En este proceso se recomienda buen estado tanto tiempo. También hay que tener
presente que algunos componentes de ciertos iii) medio para Cryptococcus, para facilitar su detec-
medios pueden verse afectados por la luz, por lo que ción en muestras donde es frecuente el aisla-
estos medios deben almacenarse en contenedores miento de otras levaduras (muestras respiratorias).
opacos.
Para la identificación, puede ser necesario un
Como norma general, todos los medios número mayor de medios que dependerá del número
deben utilizarse antes de la fecha de caducidad indi- de muestras, las etiologías más probables en la zona
cada por el fabricante y, antes de su utilización, geográfica, las posibilidades del laboratorio y el
deben atemperarse, durante unos minutos, a tempe- nivel diagnóstico esperable según el tipo de centro.
ratura ambiente.
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