Está en la página 1de 10

Técnicas de análisis.

Para el estudio de una posible reacción transfusional inmunológica se realizará las


siguientes pruebas: determinación del grupo ABO y Rh, Coombs directo del
paciente y del componente sanguíneo, Investigación de anticuerpos irregulares (IAI)
y pruebas cruzadas. Siendo todas ellas manuales, utilizando las tarjetas de
aglutinación en columna de gel.

Para el estudio de una posible reacción transfusional no inmunológica se realizará


las siguientes pruebas: hemocultivos, siembra en placas y pruebas serológicas.

1.1 Determinación del grupo ABO y Rh.

Las células sanguíneas poseen en su membrana antígenos, los cuales


condicionarán la compatibilidad entre la sangre de diferentes personas.
Definiéndose así, el grupo sanguíneo. Estos antígenos están codificados por
un locus o por varios genes homólogos.

La identificación habitual de muchos antígenos se realiza a través de los


sistemas ABO y Rh.

1.1.1 Sistema ABO.

En el sistema ABO, los antígenos son cadenas cortas de oligosacáridos


unidas a esfingolípidos de la membrana eritrocitaria. Los tres antígenos del
sistema, se diferencian por el residuo terminal de la cadena.

La expresión de estos antígenos viene determinada por el gen H y por el gen


ABO. Por lo que dependiendo de qué antígeno o antígenos se expresan en la
membrana, se diferencian cuatro grupos sanguíneos:

- Grupo A: los eritrocitos presentan el antígeno A.


- Grupo B: los eritrocitos presentan el antígeno B.
- Grupo AB: los eritrocitos presentan el antígeno A y B.
- Grupo O: los eritrocitos no presentan los antígenos A y B. Si no que
presenta el antígeno H, el cual es la base de la síntesis de los
antígenos mencionados anteriormente.

La característica más importante del sistema ABO es que el suero contiene


anticuerpos fuertemente reactivos contra aquellos antígenos que no expresan los
eritrocitos del propio organismo.
Grupo Grupo hemático Grupo sérico
sanguíneo
Hematíes A Hematíes B Anti A1 Anti B

A Pos Neg Neg Pos

B Neg Pos Pos Neg

AB Pos Pos Neg Neg

O Neg Neg Pos Pos

Para determinar el grupo ABO se realiza de forma doble:

- Grupo celular: se usan anticuerpos anti-A y anti-B para establecer la


presencia o ausencia de los antígenos A y B.
- Grupo sérico: se usan hematíes reactivos A y B para establecer la presencia
o ausencia de anticuerpos anti-A y anti-B en el suero.

Esta doble determinación posee un control, por lo que no es necesario realizar otras
pruebas para la verificación de resultados.

Para su determinación se utiliza la técnica de aglutinación, pudiendo ser en:

- En placa o en microplaca.
- En tubo.
- En columnas de gel.

Si existe una discrepancia entre el grupo celular y el sérico, es necesario investigar


el motivo de ello y poner una solución, ya que esto podría suponer una reacción
adversa letal ante una transfusión. Las discrepancias se dividen en dos grandes
grupos:

- Discrepancia por eritrocitos.

● Antígeno débil o ausente: no se detecta ni el antígeno A ni el


anticuerpo anti-A.
● Antígeno B adquirido: se detecta antígeno B y anticuerpo anti-B.
● Glóbulos poliaglutinables: se detectan antígenos A y B, y anticuerpos
anti-A y anti-B.
● Campos mixtos: es el patrón en que algunos eritrocitos aglutinan y
otros no, siendo la causa la presencia de más de una población
celular.

- Discrepancia por errores técnicos.


● Conservación incorrecta de los anticuerpos y hematíes comerciales.
● Muestra de sangre contaminada o muestra insuficiente: solicitar nueva
muestra.
● Formación de pilas de monedas o pseudoaglutinación: esto ocurre
debido a que el paciente tiene una proporción albúmina/globulina
anormal, pudiéndose confundir con una hemaglutinación.
● Presencia de autoanticuerpos y anticuerpos de reacción en frío:
algunos pacientes contienen autoanticuerpos que reaccionan con las
células A, B y O en la determinación del grupo sérico. Se corrige
incubando la preparación a 37ºC antes de leer los resultados.
● Técnica empleada incorrecta: los falsos positivos y falsos negativos se
producen por no aplicar la técnica de manera minuciosa, ya sea por el
tiempo de centrifugación, la preparación de la disolución, la
incubación,...

1.1.2 Sistema Rh.

Los antígenos del sistema Rh, son glicoproteínas que se expresan en la


membrana del eritrocito. Los antígenos más importantes son: D, C, c, E y e. Los
términos Rh positivo o Rh negativo hacen referencia a la expresión o represión del
antígeno D en los eritrocitos debido a su alta inmunogenicidad.

Los genes RHD y RHCE determinan la expresión de los diferentes antígenos,


siendo el primero el que codifica el antígeno D, y el segundo para los antígenos C,
c, E y e; formando parejas de antígenos: CE, Ce, cE y ce.

Los anticuerpos contra estos antígenos suelen ser inmunes, activos a 37ºC y son
clínicamente significativos ya que generan la destrucción eritrocitaria extravascular.
Los que se presentan con mayor frecuencia son el anti-D, anti-E y anti-C.

Se determina igual que el grupo ABO, por medio de la aglutinación. Utilizando los
anticuerpos anti-C, anti-c, anti-E y anti-e comerciales. Esta determinación también
posee un control.

Grupo Rh Resultados

D C E c e

Neg Neg - - + +

+ - + +

- +
- + + +

- +

+ + + +

- +

+ -

- -

Pos Pos - - + +

+ - + +

- +

- + + +

+ -

+ + + +

- +

+ -

- -

Estas dos determinaciones son muy importantes debido a cualquier error que se
produzca, puede causar la muerte al paciente transfundido. Siendo el error más
común el administrativo, es decir, a una errónea identificación tanto del paciente
como el componente sanguíneo a transfundir.

1.2 Coombs directo.

La prueba de Coombs directo o antiglobulina directa detecta los anticuerpos o


complemento unidos a los antígenos de la superficie del hematíe. Los anticuerpos
son de clase IgG, IgM y IgA. Las fracciones de complementos son C3c y C3d.

- Inmunoglobulina G: es una de las cincos clases de anticuerpos humorales y


la predominante en fluidos internos del organismo. Es una proteína
especializada que el cuerpo humano sintetiza en respuesta a la invasión de
bacterias, hongos y virus.
- Inmunoglobulina M:
- Inmunoglobulina A: pertenece a los anticuerpos humorales.
- Complemento C3c:
- Complemento C3d:
Los eritrocitos de la muestra del paciente son enfrentados al Suero de Coombs
monoespecífico, el cual contiene anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM y anti-C3.

1.3 Investigación de anticuerpos irregulares.

Los anticuerpos irregulares o aloanticuerpos son aquellos anticuerpos, fuera del


grupo ABO, capaces de inducir la hemólisis de los hematíes. Siendo un
aloanticuerpo, un anticuerpo producido por el individuo contra antígenos
eritrocitarios que no están presentes en el organismo. Estos anticuerpos se detectan
a través de la prueba de la antiglobulina indirecta o Test de Coombs indirecto; se
fundamenta en la detección de anticuerpos libres en el plasma sanguíneo.

Los anticuerpos irregulares suelen aparecer por dos causas diferentes:

- A la exposición de un antígeno eritrocitario extraño, ya sea por transfusión o


trasplante.
- Incompatibilidad materno-fetal.

Los antígenos que se estudian con esta técnica pertenecen a los sistemas: Kell,
Duffy, Rh-hr, Kidd, Lewis, P, MNS y Lutheran.

● Sistema Kell.

El sistema Kell está formado por 32 antígenos; siendo los más importantes:
K, k, Kpa, Kpb, Jsa y Jsb. Estos antígenos tienen un índice de inmunogenicidad
muy elevado, ocupando el tercer lugar en importancia clínica y se detectan en
banco de sangre frecuentemente.

Los anticuerpos de este sistema son IgG inmunes. Capaces de producir


reacciones postransfusionales o la enfermedad hemolítica del recién nacido.

● Sistema Duffy.

El sistema Duffy está constituido por 5 antígenos los cuales son: Fya, Fyb,
Fy3, Fy5 y Fy6. Siendo los que más relevancia clínica tienen los antígenos
Fya y Fyb. Estos antígenos poseen un índice de inmunogenicidad moderado y
son sensibles a enzimas proteolíticas como la ficina, papaína, tripsina o
bromelina. La frecuencia de posesión de dichos antígenos varía en la raza de
la persona.

Los anticuerpos son de carácter inmune y de clase IgG cuya procedencia


deriva de una aloinmunización producida por una transfusión sanguínea, por
consiguiente, son anticuerpos adquiridos en su mayoría ya que es poco
frecuente que sean innatos. Capaces de producir reacciones hemolíticas
extravasculares o la enfermedad hemolítica del recién nacido.

● Sistema Rh-hr.

Véase el punto 1.1.2.

● Sistema Kidd.

El sistema Kidd está integrado por 3 antígenos: Jka, Jkb y Jk3. Los de mayor
relevancia clínica son: Jka y Jkb. Estos antígenos están codificados por dos
alelos codominantes del gen HUT11. Una función a destacar de los antígenos
pertenecientes a este sistema es la transportación de la urea a través de la
membrana. Los antígenos, al contrario que los antígenos del sistema Duffy,
son resistentes a enzimas proteolíticas.

Un dato curioso acerca de este sistema es el fenotipo Kidd nulo (Jka-, Jkb-)
debido a su extrema rareza ya que solo se encuentra en países como
Polinesia o Finlandia. Este fenotipo nace por el gen silencioso homocigoto en
el locus Jk, producto de varias mutaciones.

Los anticuerpos del Sistema Kidd son adquiridos ya que proceden de una
aloinmunización previa. Son anticuerpos de clase IgG y raramente son de
clase IgM (anti-Jka y anti-Jk3). Están implicados en RTHE inmediata y
retardada. Esto es debido a que los niveles de anticuerpos cae de manera
indetectables en la IAI, dando falsos negativos.

En cuanto al anticuerpo Jk3, no se estudia debido a la alta positividad de la


población en la posesión de este antígeno.

● Sistema Lewis.

El sistema Lewis está compuesto por 6 antígenos: Lea, Leb, Leab, LebH, ALeb y
BLeb. De los antígenos mencionados anteriormente, solo se estudian Lea y
Leb por su relevancia clínica. Estos antígenos son solubles y están presentes
en el plasma, es decir, no son sintetizados por los propios hematíes; son
absorbidos por la membrana eritrocitaria. Por consiguiente, estos antígenos
pueden eludirse por el aumento de volumen plasmático provocando el
fenotipo Lewis nulo transitorio, este fenotipo se encuentra mucho en mujeres
embarazadas.

La frecuencia de manifestar los antígenos Lea- y Leb+ es mucho mayor que


los antígenos Lea+ y Leb-, sobre todo en las razas caucásicas,
afroamericanas y asiáticas.
Los anticuerpos del sistema Lewis son naturales y de clase IgM.
Ocasionalmente, pueden provocar RTHE inmediatas o retardadas
moderadas. Pero no provocan EHRN.

● Sistema P.

El sistema P solo tiene un único antígeno denominado P1. Las personas que
manifiesten ese antígeno tienen un fenotipo P1 y las que carecen de él tienen
el P2. En la actualidad, se conocen 5 fenotipos distintos:

Fenotipo Frecuencia

P1 80%

P2 20%

Pk1 Raro

Pk2 Raro

p Raro

En cuanto a los anticuerpos, se destacan anti-P1 y anti-PP1Pk. Los


anticuerpos P1 son de clase IgM y activos a 4ºC, no provocan la enfermedad
hemolítica del recién nacido. Los anticuerpos PP1Pk son de clase IgG o IgM
y activos a 37ºC, estos pueden provocar reacciones transfusionales
hemolíticas y también están asociados a abortos espontáneos.

● Sistema MNS.

El sistema MNS está formado por tres grupos sanguíneos M, N y S y cuentan


con 49 antígenos, siendo los de mayor relevancia clínica: M, N, S, s, U y Mur;
en especial los cuatro primeros. Los antígenos son sensibles a las enzimas
proteolíticas, excepto el antígeno U.

Poseer los antígenos M+, N+, S-, s+ es más frecuente en caucásicos,


afroamericanos y asiáticos, aunque estos últimos poseen M- y N-.

Los anticuerpos de este sistema son naturales e inmunes:

- Anti-M: los anticuerpos pueden ser de clase IgG o IgM. Son activos a
4ºC por ello no son relevantes clínicamente. Pero pese a ello, pueden
provocar, ocasionalmente, RTHE retardada y aguda.
- Anti-N: al igual que los anti-M, pueden ser de clase IgG o IgM. Es
menos frecuente que el anti-M. Son activos a 4ºC por ello no son
relevantes clínicamente. Pero pese a ello, pueden provocar,
ocasionalmente, RTHE retardada y aguda y anemias hemolíticas
autoinmunes (AHAI).
- Anti-S: son de clase IgG y estos sí son relevantes clínicamente ya que
son activos a 37ºC. Capaces de provocar EHRN grave, RTHE
inmediata y retardada y AHAI.
- Anti-s: son de clase IgG y son activos a 37ºC. Capaces de provocar
EHRN grave, RTHE inmediata y retardada.
- Anti-U: aparece de forma inmune en pacientes con fenotipos S-s-U-.
Capaces de provocar EHRN severa, RTHE inmediata y retardada y
AHAI.
- Anti-Mur: son de clase IgG, capaces de provocar RTHE retardada y
EHRN grave.

● Sistema Lutheran.

El sistema Lutheran está conformado por 25 antígenos, y estos actúan de


diferentes maneras ante enzimas proteolíticas. Si son tratados con enzimas
como la tripsina, estos serán destruidos; en cambio, cuando son tratados con
enzimas proteolíticas como la papaína, estos permanecen en los eritrocitos.
De los 25 antígenos, sólo se estudian dos: Lua y Lub.

La frecuencia de poseer los antígenos Lua- y Lub+ es mucho mayor que los
antígenos Lua+ y Lub-, sobre todo en las razas caucásicas y afroamericanas.

Los anticuerpos son inmunes y pueden ser de clase IgG, IgM o IgA. Pudiendo
causar RTHE retardada de leve a moderada, y también EHRN leve.

1.4. Pruebas cruzadas.

Las pruebas cruzadas son un test en el que enfrentan el componente sanguíneo del
donante con el receptor al que se va a transfundir. Existen dos tipos de pruebas
cruzadas:

- Prueba cruzada mayor: consiste en enfrentar el plasma/suero del receptor


con los hematíes del donante. Si se produce la aglutinación, se considera que
existe una incompatibilidad mayor.
- Prueba cruzada menor: consiste en poner en contacto los eritrocitos del
receptor con el plasma del donante. Si se produce la aglutinación, se
considera que existe una incompatibilidad menor. Esta técnica está en
desuso.
Estas pruebas se realizan en tarjetas ya sea manualmente o a través de un
autoanalizador. Esta elección se debe a que ofrecen mejores prestaciones, mejor
visualización de los resultados, uso menor de muestras y reactivos. También es
necesario conocer la técnica en tubo de ensayo ya que esta se realiza cuando los
resultados son dudosos y se ha realizado varias veces en tarjeta, por inexistencia de
tarjetas en el almacén del laboratorio, etc…

El objetivo de estas pruebas es saber cuánto de compatible es el componente a


transfundir al paciente.

Los resultados de las pruebas cruzadas son:

- Positivo: existe aglutinación, por lo tanto se declara como incompatible.


- Negativo: no existe aglutinación, por lo tanto se declara como compatible.
- Menos compatible: ante este resultado, se debe avisar al hematólogo.

1.5 Hemocultivos.

Los hemocultivos son frascos con medio de cultivo que se utilizan para
determinar la presencia de microorganismos en sangre como son las
bacterias. Siendo los hemocultivos, una herramienta diagnóstica esencial en
los casos de reacciones adversas.

Hay dos tipos de hemocultivos:

- Frascos aerobios: en ellos crecerán aquellos microorganismos que


necesitan oxígeno para su proliferación.
- Frascos anaerobios: solo crecerán aquellos microorganismos que no
necesitan oxígeno.

Esta diferenciación es muy útil ya que ayudará en la identificación del


microorganismo.

Cuando un receptor recibe una transfusión sanguínea existe la posibilidad de que


haya incompatibilidad con alguno de los otros 4 antígenos del sistema Rh, con los
antígenos principales del sistema Kell, o con antígenos de otros sistemas
sanguíneos. De ocurrir esto, induce, en primera instancia, una aloinmunización a
mediano plazo, es decir, la formación de anticuerpos específicos contra los
antígenos que están ausentes en el receptor 23,24. Sin embargo, en un segundo
contacto con el mismo antígeno, la unión antígeno-anticuerpo desencadena
reacciones hemolíticas intra o extravasculares, con intervención del sistema del
complemento, que varían en cuanto a severidad y frecuencia, en dependencia del
sistema sanguíneo involucrado.
CARTERA DE SERVICIOS BANCO DE SANGRE

Reserva y transfusión de componentes sanguíneos o Concentrado de hematíes o


Plasma fresco congelado o Plaquetas (pooles de plaquetas o plaquetas obtenidas
por aféresis de un solo donante) Autotransfusión (por donación autóloga del
paciente en cirugía programada) Interconsultas con hematología sobre temas
transfusionales 24 horas. Interconsultas hematológicas clínicas, médulas óseas,
anticoagulación, el hospital lo tiene concertado con otro equipo (Dra. Góngora).