UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA 2018 PONENCIA CIENTÍFICA
Hipótesis. Las diferencias en la actividad enzimática se deben a la presencia de inhibidores en el medio de cultivo 1
Evidencia. Para abordar el tema de la hipótesis planteada se realiza una serie de ensayos que ayudan con la búsqueda continua de microorganismos eficientes en la producción de alfa amilasa un inhibidor importante presente también en plantas; para optimizar la producción de esta enzima, se ha aislado tres cepas de microorganismos amilolíticos, sin embargo, se desea saber cuál de las tres cepas es más eficiente en la degradación de este polisacárido. Una vez realizados ensayos se estudia una serie de datos arrojados por el laboratorio que dan una noción sobre el comportamiento microbiano, después de los procesos de inoculación, incubación y prueba de absorbancia realizados se puede determinar, ¿Cuál de los microorganismos es más efectivo? Prueba de Absorbancia por activación de bacteria en caldo nutritivo.
Prueba Absorbancia de cuantificación de almidón (YODO-LUGOL) Y SALES
CUANTIFICACION DE BIOMASA Peso del tubo vacío Peso relación tubo vacío-tubo con muestra
DATOS DE BIOMASA TOTAL ( Diferencia entre X-Y)Expresado en gr/L
Observados los datos se puede ver que microrganismo más efectivo, es el
obtenido del cultivo A, dado que en las pruebas de Cuantificación de almidón, presenta una absorbancia mayor que las demás muestras, esto no da una idea que este grupo de bacterias tiene la propiedad de degradar más rápidamente la concentración de sustrato presente en la enzima (amilosa) , ya que sus características bioquímicas las hacen más eficientes , en especial hacer uso del sustrato y convertirlo en una fuente de azucares reductores ; los microorganismo más probables que estén presentes son de cepas de ( hongos como, Aspergillus,Rhizopus, Penicillum) conocidos por hacer esta actividad bioquímica. [ CITATION Rub15 \l 9226 ] En cuanto al proceso de cuantificación de biomasa, los microorganismos presentes en el cultivo C son los que presentan más contenido de este, pueden ser bacterias nitrificantes provenientes de los suelos que degradan el nitrógeno y otras sustancias químicas para alimentación de las plantas. [ CITATION NRo07 \l 9226 ]
Garantía. Las diferencias en la actividad enzimática se deben a la presencia de inhibidores en el medio de cultivo 1 La actividad enzimática está ligada a diferentes factores, uno de ellos es la presencia de sustratos que le permitan activarse, enzima como la pepsina digestiva se obtiene por medio de fermentación de sustratos, (pepsinogeno-ácido clorhídrico), que se hallan en PH de 2-3, mientras otras enzimas como las proteolíticas trabajan sobre la neutralidad, las cuales se desnaturalizan a pH alcalino o acido; de allí la importancia de controlar esta variable, junto con la temperatura y presencia de compuestos químicos, que pueden actuar como inhibidores específicamente en la enzima impidiendo el crecimiento enzimático, las enzima desarrollan su actividad en medios acuosos a temperatura y pH cerca a la neutralidad, esto le permite unirse al sustrato y liberar sus productos , podemos considerar la existencia de un tipo de inhibición reversible competitiva ,esto hace que la enzima no compita con la fuente de sustrato sino con el inhibidor, la probabilidad del uso de medios de cultivos de carácter selectivo es relativo ya que en muchos casos la composición de muchos de ellos puede contener cloranfenicol que ayudan a inhibir el crecimiento de bacterias del genero Bacillus sp. . [ CITATION Mat14 \l 9226 ] , productoras de alfa-amilosa (enzima). [ CITATION Alf95 \l 9226 ]. En los ensayos realizados se hizo uso de sustratos con fuente de carbono que se obtienen por ejemplo de suero de leche tienen una gran incidencia en la actividad enzimática, mientras que si se extraen de harinas (maíz, papa, u otros tubérculos) tienen más fuente de hidrogeno. [ CITATION Adr08 \l 9226 ]. Por ello el experimento realizado el medio de cultivo 1 posee sustratos de carbono obtenidos de harina de yuca la cual está en más cantidad adicionada que la harina de frijol la cual tiene más fuente de nitrógeno que permite una mejor actividad enzimática. [ CITATION Adr08 \l 9226 ].
Respaldo de la Garantía. El frijol común de la familia (fabáceas) leguminosas, posee entre sus componentes anti nutritivos inhibidores de a- amilosa, se sabe que los inhibidores se encuentran en especies vegetales como gramíneas y leguminosas, el medio de cultivo 1 está compuesto por harina de yuca y frijol, esto nos permite establecer que las diferencias en la actividad enzimática están relacionadas por su presencia en el medio, ya que retarda la absorción y metabolismo de almidón. Los resultados del ensayo muestran que en el medio 1 tiene un contenido de 5g * litro, es decir que comprende casi un 40% del total del cultivo, y podría decirse que este factor puede estar influyendo en la diferencia y variaciones de la actividad enzimática, a diferencia del medio 2 el cual se empleó harina de trigo que también contiene inhibidores de amilosa pero en menor cantidad, con la diferencia en porcentaje ( harina de frijol 80% de inhibición mientras el trigo posee un 50% de inhibición enzimática de la enzima a-amilasa. [ CITATION BEA06 \l 9226 ]. Por otra parte los comportamientos de PH, están establecidos en relación a esta condición; ya que este se dio inversamente proporcional a la actividad enzimática, es decir entre mayor sea el pH, menor es la actividad enzimática, eso se puede observar en las características dadas en el medio 1 (pH final de 5,7 y U/A DE 4,6 por otra parte también se identifica que la tener una mayor temperatura y pH alto la actividad enzimática es menor. Observar los siguientes cuadros: Datos Tomados de (tutorial de enzimas- entorno de aprendizaje colaborativo)
muestra temperatura pH final Análisis
s M1 Y M2 30°c M1=5,9 Las dos muestras que contienen la M2= 5,9 misma temperatura y pH final obtiene una variación diferente, a temperatura ambiente se puede dar mayor crecimiento M1 Y M2 35°C M1=5,4 Aunque las 2 muestras se incuban a M2= 5,2 una misma temperatura el resultado final de pH final es diferente por tanto su variación enzimática en los resultados se muestra más alta de la M2 a un 14,2 Datos Tomados de (tutorial de enzimas- entorno de aprendizaje colaborativo)
Excepciones. Los procesos de producción de enzimas microbianas se realizan mediante cultivos aerobios, las enzimas se producen en pequeñas cantidades durante la fase de crecimiento activo, pero se acumulan en grandes cantidades en la fase estacionaria de crecimiento. [ CITATION Rog92 \l 9226 ] Enzimas inducibles como la a-amilosa, se producen solo cuando el medio se encuentra el inductor del sustrato.[ CITATION Mar04 \l 9226 ]
Concluya. Sin duda la a-amilosa está presente en diferentes alimentos, (leguminosas) que por sus propiedades son utilizados para hacer parte del contenido nutritivo de medios de cultivo, así que casi siempre en todo proceso de crecimiento microbiano la actividad enzimática, tendrá estados inhibitorios por la acción de variables como temperatura y pH que son determinantes a la hora de realizarse la actividad enzimática. El uso de sustratos con fuente de hidrogeno permiten una mayor actividad en el crecimiento microbiano.
