Microscopía y

Coloraciones
PRACTICA N°04

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA ESTRADA

 Reconocer las partes de un Microscopio óptico.
 Conocer su utilización para la observación de distintas
muestras.
 Identificar la diferencia entre coloración simple y coloración
diferencial.
 Explicar el fundamento de la coloración de Gram.
 Establecer la diferencia entre las bacterias Gram positivas y
Gram negativas
 Microscopía

 Microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a

hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están
fuera del rango de resolución del ojo normal.
 Microscopía óptica (microscopía de luz clásica), consiste en
hacer pasar luz visible de una fuente ( (difractada, reflejada o
refractada en el sujeto de estudio) a través de lentes ópticos
simples o múltiples, para lograr una vista ampliada de la
muestra.
 Robert Hooke (1665), se le atribuye el descubrimiento de la
estructura celular de los organismos.
 Anton Van Leeuwenhoek (1683), logró observar bacterias,
hongos y protozoos.
Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA
ESTRADA
Instrumento óptico Resolución Magnificación
Ojo humano 0,1 mm
Microscopio óptico 0, 2 u 2 500
Microscopio electrónico 0,1 nm 1 000 000
 Características del microscopio

RESOLUCIÓN, PODER DE RESOLUCIÓN, LÍMITE DE RESOLUCIÓN

Es simplemente la capacidad para ver dos

Resolución puntos vecinos en el campo visual como

entidades diferentes

Poder de resolución
Capacidad del microscopio para entregar
imágenes nítidas.

Es la distancia mínima que debe existir entre

Límite de resolución
dos puntos para que se puedan distinguir
como separados

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
Poder de resolución del microscopio

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
Poder de resolución del microscopio

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
Tipos de microscopios

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
 Microscopio óptico
Microscopio compuesto

El microscopio óptico
común está conformado
por tres sistemas: El
sistema de iluminación,
el sistema óptico y el
sistema mecánico

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
 Sistema óptico

Lente objetivo

Los objetivos utilizados corrientemente son de

dos tipos:
- objetivos secos
- objetivos de inmersión

Lente ocular

Utiliza como objeto la imagen formada por la

lente objetivo para formar una imagen virtual,
derecha y amplificada

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
Imagen es: VIRTUAL
MAS GRANDE
INVERTIDA

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
 Sistema de iluminación
Sistema de iluminación

Fuente de luz: necesaria para iluminar la muestra. Puede ser

natural o artificial

Portafiltro: opcional. Sirve para colocar filtro de distintos

colores.

Condensador :
Concentra los rayos de luz dispersos sobre la preparación.
Permite observar las partes muy pequeñas de la muestra luego
de la amplificación

Diafragma: regula la cantidad de luz que llega a la preparación

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
SISTEMA MECÁNICO

Sistema mecánico

Revólver

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA
ESTRADA
FLUJOGRAMA DEL TRABAJO EN MICROBIOLOGIA
MUESTRA

COLORACION Y
OBSERVACION IDENTIFICACION DEL
MICROSCOPICA AGENTE PATOGENO Y
DETERMINACION DE SU
SUSCEPTIBILIDAD A
CULTIVO ANTIBIOTICOS

ANTIBIOGRAMA

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
  Técnicas que permiten observar
microorganismos en función de la
capacidad de los mismos para retener
(o no), determinadas sustancias
colorantes, lo que depende de la carga
de la célula y del colorante

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
 TIPOS DE COLORANTES

Pueden ser

CATIÓNICOS ANIÓNICOS LIPOSOLUBLES

o o
Básicos Ácidos

Tienen carga (+) Tienen carga (-) Se mezclan con lípidos

Penetran interior celular No penetran interior celular celulares
Ej.: Tinción negativa Ej.:
Azul de Metileno Ej.: Negro Sudán
Cristal Violeta Nigrosina
Safranina Eosina
Fucsina Básica Fucsina Ácida
Rosa de Bengala
Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA
ESTRADA
 TIPOS DE TINCIONES

Pueden ser

SIMPLES DIFERENCIALES SELECTIVAS

•Un solo colorante •Más de un colorante •Uno o más colorantes

•Tiñe o no la célula •Importancia taxonómica •Estructuras celulares
Ej.: Ej.: especiales
Azul de Metileno Tinción GRAM Ej.:
Safranina Tinción AAR Tinción de Esporas
Nigrosina Tinción de Flagelos
Tinción de Paredes Cel.
Tinción de Corpúsculos
Metacromáticos

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
El mecanismo de coloración de las muestras
biológicas pueden ser afectados por:
 Pureza del colorante.
 Concentración del colorante.
 pH de la solución del colorante.
 Temperatura del medio ambiente.
 Sustancias adicionales (mordientes).
 Tiempo de coloración.
Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA
ESTRADA
 Lunes
TINCIÓN SIMPLE DE AZUL DE METILENO: PROCEDIMIENTO
Frotis y fijación

2.- Tomar la muestra con el asa de 3.-Extender sobre el agua y fijar a

MUESTRA siembra la llama del mechero

Tinción

1.- Cubrir la preparación con Azul de 2.- Lavar con agua, dejar secar y observar al Micrococcus
Metileno 1’ microscopio luteus
Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA
ESTRADA
Observación de bacterias en muestras teñidas con coloración simple
(colorante Básico azul de metileno)

Observacion de
levaduras en
muestras teñidas
con coloracion
simple (colorante
Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA
ESTRADA
acido Nigrosina)
 Lunes

Tinción
L-3.2.3.- Tinción de Gram
Frotis y fijación

MUESTRA

2.- Tomar la muestra con 3.- Extender sobre el

el asa de siembra agua y fijar a la llama 1.- Cubrir la 2.- Añadir Lugol
del mechero preparación con (mordiente) durante 1’
Cristal Violeta 1’

3.- Decolorar con

4.- Lavar con agua 5. Teñir con Safranina 1’ 6.- Lavar con agua,
Alcohol 96º hasta que no
suelte colorante dejar secar y observar
al microscopio

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA
ESTRADA
Gram negativa Gram positiva
ESTRADA
 El alcohol/acetona empleado
En las Gram (-), los lípidos de la
para aclarar, deshidrata las
pared son mas abundante que en
paredes de los Gram (+)
Gram (+) estos se disuelven por
tratados con mordiente, y
este tratamiento, lo que permite
forma una barrera que el
el escape del complejo I2/Cristal
complejo I2/Cristal violeta no
violeta.
puede atravesar.

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
 TINCIÓN GRAM:
OBSERVACIONES
MICROSCOPICAS

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
CONCLUSIONES:
- Las coloraciones son técnicas de ………………
- Los tipos de colorantes pueden ser por …………………
- La práctica consiste en ……………………………

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA
Bibliografía

• Koneman Diagnóstico Microbiológico 6ª edición.

2008.Editorial Médica Panamericana
• Murray P. Microbiología Médica. 5ª edición
2008.Editorial Elsevier

Mg. CAROLINA SUSANA LOAYZA

ESTRADA