Inhibición enzimática: reversible, competitiva y acompetitiva

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA
SALESIANA
ENZIMOLOGÍA
UNIDAD CUATRO
MODULACIÓN
DE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA
Ing. Gilda Gordillo Vinueza MSc.

ENZIMOLOGÍA
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
1. Inhibición reversible: competitiva, acompetitiva y mixta.
2. Análisis cinético, constantes de inhibición y

representaciones.
3. Inhibición irreversible: modificación covalente de enzimas,

eficiencia del inhibidor; constante de inactivación.
Clasificación de los inhibidores irreversibles; características

4.
estructurales y cinéticas.
5. Aplicaciones del estudio de la inhibición enzimática.
2
1. INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
INHIBIDORES ENZIMÁTICOS
Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y

disminuyen su actividad.
Este tipo de compuestos son específicos.
La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del

sustrato al sitio activo de la enzima y/u obstaculizar que la
enzima catalice su reacción correspondiente
3
INHIBICIÓN
BENEFICIO - INHIBIDORES ENZIMÁTICOS
La actividad enzimática no siempre es biológicamente útil.
Una actividad incontrolada, por ejemplo de las proteasas de la coagulación, tendría fatales
consecuencias.
Por este motivo, la naturaleza ha desarrollado un gran número de inhibidores enzimáticos

que frenan la actividad enzimática o llegan a anularla por completo.
Estos inhibidores enzimáticos naturales están implicados en la regulación del metabolismo

de la célula.
4
INHIBICIÓN
CLASIFICACIÓN INHIBIDORES ENZIMÁTICOS
INHIBIDORES
REVERSIBLES PSEUDOIRREVERSIBLES IRREVERSIBLES
No Reactivos de Inhibidores
Competitivos Acompetitivos Agentes desnaturalizantes
competitivos centro activo suicidas
5
INHIBICIÓN
CLASIFICACIÓN INHIBIDORES ENZIMÁTICOS
REVERSIBLES
Competitivos Acompetitivos No competitivos
6
1. INHIBICIÓN REVERSIBLE
Normalmente, los inhibidores reversibles se unen a la enzima de forma no covalente, tales

como;
- Puentes de hidrógeno,
- Interacciones hidrofóbicas
- Enlaces (Iteracciones) iónicos.
Los enlaces débiles múltiples entre el inhibidor y el sitio activo se combinan para producir una
unión fuerte y específica.
Los inhibidores reversibles generalmente no experimentan reacciones químicas cuando se

unen a la enzima y pueden ser eliminados fácilmente por dilución o por diálisis.
7
𝐸 [𝐼]
𝐾𝐼 =
[𝐸𝐼]
𝐾𝐼 : Constante de inhibición
[𝐼]: Concentración de inhibidor
[𝐸]: Concentración de enzima
[𝐸𝐼]: Concentración del complejo enzima inhibidor
[𝐼]
α=1+
𝐾𝐼
α: factor inhibición lineal
8
INHIBIDORES REVERSIBLES
Competitivos Acompetitivos No competitivos
Puros
Mixtos
Normalmente, los inhibidores reversibles se unen

a la enzima de forma no covalente, dando lugar a
diferentes tipos de inhibiciones, dependiendo de si
el inhibidor se une a la enzima, al complejo enzima-
sustrato o a ambos.
9
1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA
1.1] INHIBICIÓN REVERSIBLE - COMPETITIVA.
Tienen la característica de ser químicamente muy parecidos al

sustrato, de tal manera que pueden ocupar el sitio activo de la
enzima, pero ésta no los transforma, mientras el inhibidor esté dentro
del sitio activo el verdadero sustrato no puede entrar y por lo tanto no
es posible que se forme ES y no hay formación de producto.
10
1.1.] INHIBICIÓN COMPETITIVA- ACCIÓN.
11
La pendiente de una Los inhibidores

recta sin inhibidor es competitivos
igual a Km/Vmax, si los producen un aumento
inhibidores de la Km de la enzima
competitivos no un inhibidor
modifican Vmax la competitivo
única forma de disminuye la afinidad
aumentar el quebrado de la enzima por el
anterior es sustrato.
aumentando la Km.
El intercepto es igual a 1/Vmax, se puede concluir

que un inhibidor competitivo no modifica la
velocidad máxima de la enzima.
12
1.2] INHIBICIÓN REVERSIBLE - ACOMPETITIVA.
El inhibidor se puede unir a la enzima al mismo tiempo que el sustrato.

Sin embargo, la unión del inhibidor afecta la unión del sustrato, y viceversa.
Este tipo de inhibición resulta generalmente de un efecto alostérico donde el inhibidor se

une a otro sitio que no es el sitio activo de la enzima.
La unión del inhibidor con el sitio alostérico cambia la conformación (es decir, la estructura
terciaria o la forma tridimensional) de la enzima de modo que la afinidad del sustrato por el
sitio activo se reduce
13
1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y MIXTA.
1.2.] Inhibición Acompetitiva- acción.
14
1.2.] Inhibición Acompetitiva.
A mayor concentración de
inhibidor, el intercepto está
más arriba. Esto significa que
Cuando no hay inhibidor, el la presencia de un
punto de intersección es inhibidor no
igual a 1/Vmax. competitivo
Para que este punto se disminuye la
desplace hacia arriba y velocidad máxima
coincida con los puntos de de la enzima.
intersección de las rectas
con inhibidor, Vmax debe
ser más pequeña
Los inhibidores no competitivos no afectan la Km de
la enzima, es decir, no alteran la afinidad de la
enzima por su sustrato
15
1.] INHIBICIÓN REVERSIBLE - NO COMPETITIVA.
A] No competitiva pura
B] No competitiva mixta
16
1.2.] Inhibición No competitiva PURA- acción.
17
1.2.] Inhibición No competitiva MIXTA- acción.
18
INHIBICIÓN
INHIBIDORES
IRREVERSIBLES
Agentes desnaturalizantes Reactivos de centro activo Inhibidores suicidas
19
2. INHIBICIÓN IRREVERSIBLE
1.1] INHIBICIÓN IRREVERSIBLE – AGENTE DESNATURALIZANTE
Calor y frío
Presiones
FÍSICOS
hidrostáticas
Agitación intensa
AGENTES
DESNATURALIZANTES Detergentes
Disolventes
orgánicos
QUÍMICOS
pH
Fuerza iónica
20
1.3] INHIBICIÓN SUICIDAS- centro activo
PROPIEDADES:
1.Deben ser químicamente inactivos en ausencia de las enzimas.

2. Las moléculas de estos inhibidores se activan específicamente por la enzima a la que, a su
vez, van a inactivar.
Una vez activados por la enzima, reaccionan rápidamente con la proteína uniéndose
covalentemente a algún resto de aminoácido e inactivando la enzima.
La mayoría están basados en reactivos capaces de alquilar un grupo nucleófilo de la proteína

enzimática.
21
1.] INHIBICIÓN IRREVERSIBLE - REACTIVOS DE CENTRO ACTIVO

Modifican una enzima covalentemente, con lo que la inhibición no puede ser invertida.
Contienen grupos funcionales reactivos como:
- Mostazas nitrogenadas
- Aldehídos
- Haloalcanos
- Alquenos.
Estos grupos electrofílicos reaccionan con las cadenas de aminoácidos para formar uniones
covalentes.
Los inhibidores irreversibles son generalmente específicos para un tipo de

enzima y no inactivan a todas las proteínas.
Por lo general son altamente tóxicos.
Casi todos los inhibidores enzimáticos irreversibles son sustancias tóxicas

(naturales o sintéticas).
22
Los residuos modificados son aquellos que contienen en sus

cadenas laterales nucleófilos como por ejemplo un grupo hidroxilo
o un grupo sulfhidrilo. Esto incluye a los aminoácidos serina,
cisteína, treonina o tirosina.
diisopropilfluorofosfato
23
Inhibidores irreversibles
Bloqueo al aminoácido Dirigida
Normalmente, los inhibidores irreversibles

reaccionan con la enzima de forma covalente y
modifican su estructura química a nivel de
residuos esenciales de los aminoácidos
necesarios para la actividad enzimática.
24
2.] Inhibición IRREVERSIBLE - acción.
Los inhibidores irreversibles forman inicialmente un complejo

reversible y no covalente con la enzima (EI o ESI), que
reaccionará posteriormente para producir una modificación
covalente en lo que se denomina el "complejo del punto muerto"
EI*.
Donde ki, es la tasa de inactivación

25
2.1.] Irreversible- por bloqueo al amino ácido activo.

• Cisteín-enzimas
• Agentes S-alquilantes
• (iodoacetato, pCl-Hg-benzoato)
• Serín-enzimas
• Organofosfato
26
2.2.] Irreversible- dirigido
27
3. APLICACIONES
Los inhibidores enzimáticos pueden ser encontrados en la naturaleza, pero también

son diseñados y producidos como parte de la farmacología y la bioquímica.
Metotrexato
Potente inhibidor de dihidrofolato

Muchos de estos reductasa que, al estar
inhibidores son capaces relacionada con la síntesis de
Farmacología de actuar sobre enzimas nucleótidos, presenta una
humanas y así corregir toxicidad específica de aquellas
determinadas patologías. células con una rápida tasa de
crecimiento. Por ello, el
metotrexato se utiliza a menudo
como fármaco anticancerígeno en
quimioterapia.
28
3. APLICACIONES
Importantes a nivel del control metabólico
Muchas de las rutas metabólicas que tienen lugar

BIOQUÍMICA en la célula son inhibidas por metabolitos que
controlan la actividad enzimática mediante
procesos de regulación alostérica o inhibición por
sustrato.
A modo de ejemplo cabe destacar la regulación alostérica de la glucólisis.
Esta ruta catabólica consume glucosa y produce ATP, NADH y piruvato.
Una de las etapas clave en la regulación de la glucólisis es la reacción

catalizada por la fosfofructoquinasa-1 (PFK1). Cuando los niveles de ATP
aumentan, el ATP se une a un sitio alostérico de la PFK1, con lo que se
reduce la actividad de la enzima, la glucólisis se inhibe y los niveles de ATP
se reducen de nuevo.
29
3. APLICACIONES
La inhibición enzimática fisiológica también

BIOQUÍMICA puede ser producida por inhibidores proteicos
específicos
Este mecanismo se puede observar en el páncreas, donde se sintetizan multitud de

precursores de enzimas digestivas denominadas zimógenos.
Muchos de ellos son activados por la tripsina, una proteasa, por lo que es muy
importante inhibir la actividad de la tripsina en el páncreas con el fin de prevenir
fenómenos de autodigestión.
Uno de los mecanismos para mantener la tripsina inactiva es la producción de

un potente y específico inhibidor de tripsina en el páncreas. Este inhibidor se une
con una alta afinidad a la tripsina, previniendo así su actividad. 30
3. APLICACIONES
BIOQUÍMICA Inhibidores de la acetilcolinesterasa
La acetilcolinesterasa (AChE) es una enzima que se encuentra en los

animales, desde los insectos hasta los humanos. Es esencial en la
actividad que desempeñan las neuronas, ya que su función consiste
en la ruptura del neurotransmisor acetilcolina en sus constituyentes,
acetato y colina. Es un caso único entre los neurotransmisores, ya que la
mayoría de ellos, como la serotonina, la dopamina o la noradrenalina, son
reabsorbidos en la brecha sináptica.
Insecticidas
Desinfectantes
ARTIFICIALES
Venenos (naturales y
artificiales)
Antibióticos (naturales y
artificiales)
31

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Ing. Gilda Gordillo Vinueza MSc.

2. Análisis cinético, constantes de inhibición y

3. Inhibición irreversible: modificación covalente de enzimas,

Clasificación de los inhibidores irreversibles; características

5. Aplicaciones del estudio de la inhibición enzimática.

Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y

Este tipo de compuestos son específicos.

La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del

BENEFICIO - INHIBIDORES ENZIMÁTICOS

La actividad enzimática no siempre es biológicamente útil.

Por este motivo, la naturaleza ha desarrollado un gran número de inhibidores enzimáticos

Estos inhibidores enzimáticos naturales están implicados en la regulación del metabolismo

CLASIFICACIÓN INHIBIDORES ENZIMÁTICOS

REVERSIBLES PSEUDOIRREVERSIBLES IRREVERSIBLES

CLASIFICACIÓN INHIBIDORES ENZIMÁTICOS

Competitivos Acompetitivos No competitivos

Normalmente, los inhibidores reversibles se unen a la enzima de forma no covalente, tales

Los inhibidores reversibles generalmente no experimentan reacciones químicas cuando se

α: factor inhibición lineal

Competitivos Acompetitivos No competitivos

Normalmente, los inhibidores reversibles se unen

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

1.1] INHIBICIÓN REVERSIBLE - COMPETITIVA.

Tienen la característica de ser químicamente muy parecidos al

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

1.1.] INHIBICIÓN COMPETITIVA- ACCIÓN.

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

La pendiente de una Los inhibidores

El intercepto es igual a 1/Vmax, se puede concluir

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

1.2] INHIBICIÓN REVERSIBLE - ACOMPETITIVA.

El inhibidor se puede unir a la enzima al mismo tiempo que el sustrato.

Este tipo de inhibición resulta generalmente de un efecto alostérico donde el inhibidor se

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y MIXTA.

1.2.] Inhibición Acompetitiva- acción.

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

1.2.] Inhibición Acompetitiva.

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

1.] INHIBICIÓN REVERSIBLE - NO COMPETITIVA.

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

1.2.] Inhibición No competitiva PURA- acción.

1. INHIBICIÓN REVERSIBLE: COMPETITIVA, ACOMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

1.2.] Inhibición No competitiva MIXTA- acción.

Agentes desnaturalizantes Reactivos de centro activo Inhibidores suicidas

1.1] INHIBICIÓN IRREVERSIBLE – AGENTE DESNATURALIZANTE

1.3] INHIBICIÓN SUICIDAS- centro activo

1.Deben ser químicamente inactivos en ausencia de las enzimas.

La mayoría están basados en reactivos capaces de alquilar un grupo nucleófilo de la proteína

1.] INHIBICIÓN IRREVERSIBLE - REACTIVOS DE CENTRO ACTIVO

Los inhibidores irreversibles son generalmente específicos para un tipo de

Por lo general son altamente tóxicos.

Casi todos los inhibidores enzimáticos irreversibles son sustancias tóxicas

Los residuos modificados son aquellos que contienen en sus

Bloqueo al aminoácido Dirigida

Normalmente, los inhibidores irreversibles

2.] Inhibición IRREVERSIBLE - acción.

Los inhibidores irreversibles forman inicialmente un complejo

Donde ki, es la tasa de inactivación

2.1.] Irreversible- por bloqueo al amino ácido activo.

2.2.] Irreversible- dirigido

Los inhibidores enzimáticos pueden ser encontrados en la naturaleza, pero también

Potente inhibidor de dihidrofolato