Escherichia coli se hizo crecer en un medio conocido como “medio sintético” con 5 µg de

tiamina/mL y 1 % de glucosa o 0.5% de succinato. Durante 4 o 5 horas a 37 ºC, haciendo pasar 2

volúmenes de aire estéril/ volumen por cultivo/min. Para condiciones anaeróbicas, los cultivos se
rociaron con una mezcla de 95% N2 + CO2.

Las bacterias se centrifugaron y se lavaron con regulador de fosfatos al 0.05 M a pH 7.3 y se

rompieron con un sonificador Branson de 10 kHz. Esto se hace en 3 periodos sucesivos de 15 s
cada uno. El extracto se centrifuga a 40ºC durante 15 min y el sobrenadante su utiliza como
extracto crudo.

Las envolturas bacterianas se re suspendieron en 0,5mL de solución tampón tris-HCL 0,05 M pH

8,3 que contenía sacarosa al 20%y 2 mg de lisozima. Posteriormente, se congela en una mezcla de
acetona-C02 sólido y después, se descongeló a 37ºC. Esto se repite 4 veces.

El extracto crudo se centrifugó a 50000 g durante 10 min, el sobrenadante se eliminó y el residuo

se resuspendió en 1 mL de regulador de fosfatos. Por último, se centrifugó a 500 ° C en un
gradiente lineal de sacarosa (50 a 20%) durante 20 min. Los sobres bacterianos aparecieron como
una banda opalescente dentro del gradiente.

Para la determinación de la actividad respiratoria. La absorción de oxígeno se midió con un

electrodo Clark de oxígeno, conectado a un cilindro de Perspex con una capacidad de 3-2 mL.