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Protocolo Transitorio Práctica Microbiologia - Contingencia COVID 19
Protocolo Transitorio Práctica Microbiologia - Contingencia COVID 19
CURSO MICROBIOLOGÍA
Código 151006
1
Contenido
Pág.
Introducción.................................................................................5
Actividad práctica 1 A. Medios de cultivo, métodos de siembra y
características macroscópicas de cultivos bacterianos.........................7
Actividad práctica 1 B. Siembra de Microbiota normal.......................18
Actividad práctica 2. Caracterización microscópica de cultivos
bacterianos: Coloración de Gram...................................................22
Actividad práctica 3. Prueba de susceptibilidad a antimicrobianos:
difusión en disco.........................................................................26
Actividad práctica 4. Caracterización macroscópica y microscópica de
hongos......................................................................................30
Actividad práctica 5. Parásitos de importancia en salud.....................35
Bibliografía.................................................................................40
2
Lista de tablas
Pág.
3
Lista de figuras
Pág.
4
Introducción
5
cuales les permitan la identificación de posible causalidad, factores de
riesgo y medidas preventivas en los eventos infecciosos en salud.
Por último, es bueno resaltar que esta guía no tiene la pretensión de ser
un profundo estudio teórico, ni una guía exhaustiva para el desarrollo de
prácticas, sino que principalmente se centra en interpretar lo mejor
posible a términos prácticos algunos aspectos propios de la
Microbiología, de modo que se facilite su manejo por parte de los
interesados.
6
Actividad práctica 1 A. Medios de cultivo, métodos de siembra y
características macroscópicas de cultivos bacterianos
Introducción
Sin embargo, los medios de cultivo no son los únicos necesarios para
generar multiplicación y desarrollo de microorganismos, se hacen
necesarias condiciones físicas tales como el pH, temperatura, luz,
presión, entre otras, su conocimiento permite el diseño de métodos para
control o destrucción de poblaciones de estos organismos. Según sean
estas condiciones, se desarrollarán algunos microorganismos y otros no,
por ello se han establecido clasificaciones para cada condición (Tabla 1).
Clasificación de
Condición Definición los Significado
microorganismos
Indica la Crecen entre
Acidófilas
concentración de pH 0 y 5.0 pH
H+ en una solución Crecen entre
pH Neutrófilas
e interfiere en el pH 5.0 y 8.0
funcionamiento de Crecen entre
Alcalófilas
biomoléculas pH 8.5 a 11.5
Pueden crecer
Magnitud que mide a 0°C, pero su
el calor de un Psicrófilas temperatura
Temperatura objeto e influye en optima es
la velocidad de las 15°C
reacciones Se desarrollan
Mesófilas
químicas en los 25-40°C
microorganismos Se desarrollan
Termófilas
45-60°C
Concentración El oxígeno es un Aerobias Se desarrollan
7
Clasificación de
Condición Definición los Significado
microorganismos
gas incoloro e en 20% de O2
inodoro que Se desarrollan
de Oxígeno Anaerobias
interviene en en presencia o
facultativas
procesos de ausencia de O2
crecimiento Se desarrollan
Anaerobias
bacteriano en <2% de O2
Se expresa como Viven en
actividad de agua medios
Disponibilidad (aw) que es una hipertónicos y
Osmófilos
de agua medida del agua se subdividen
disponible para el en halófilos y
microorganismo sacarófilos.
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)
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Figura 1 Clasificación de los medios de cultivo.
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Tabla 2 Métodos para el cultivo de microorganismos en medios
sólidos
Método Proceso
1. Esterilizar asa bacteriológica recta y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
Siembra en 3. Introducir el asa –con el inoculo- de forma
picadura o vertical y en el centro del tubo con medio de
punción cultivo.
4. Saque el asa rápidamente y evite tocar las
paredes del tubo.
5. Esterilizar asa.
1. Esterilizar asa bacteriológica recta y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
3. Introducir el asa –con el inoculo- de forma
Siembra en estría vertical, en el borde inferior del tubo con medio
de cultivo inclinado.
4. Sacar, lentamente el asa, e inmediatamente
realizar estrías (líneas en zigzag) en la
superficie del medio, hasta su borde superior.
5. Esterilizar asa.
1. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
3. Suspender la muestra en un extremo de la caja
con medio de cultivo, realizando estrías –no
superpuestas- sobre una tercera parte de la
Siembra por caja.
agotamiento 4. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
enfriar.
5. Realizar estrías en dirección perpendicular a las
estrías antes hechas, comenzando en la última
estría.
6. Repetir el paso 4 y 5.
7. Esterilizar asa.
Siembra en 1. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
cuadricula enfriar.
2. Poner volumen de muestra en caja con medio
de cultivo, usando pipeta automática.
3. Distribuir la muestra con el asa, en forma de
línea recta por el centro del medio de cultivo.
4. Hacer estrías de lado a lado del medio de
10
Método Proceso
cultivo y en sentido contrario a la línea recta
antes hecha.
5. Girar el medio de cultivo 90°grados y hacer
estrías de lado a lado del medio y en sentido
contrario a las estrías hechas antes.
6. Esterilizar asa.
1. Destapar el hisopo estéril.
2. Introducir el hisopo en la muestra.
3. Sacar el hisopo y escurrirlo en las paredes del
recipiente dónde está la muestra.
4. Hacer estrías estrechas de lado a lado de la
Siembra con caja con medio de cultivo, desde el borde
hisopo superior hasta el borde inferior.
5. Girar el medio de cultivo 90°grados y hacer
estrías estrechas de lado a lado del medio y en
sentido contrario a las estrías hechas antes.
6. Repetir el paso 5, tres veces más.
7. Arrojar el hisopo en Guardián de desechos.
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)
Características
Tamaño Grande >1mm
Mediano 1mm
Pequeño <1mm
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Características
Forma Puntiforme
Circular
Filamentosa
Irregular
Rizoide
Lanceolada
Borde Continuo
Ondulado
Lobulado
Espinoso, dentado o
lacerado
Filamentoso
Convexa
Mamelonada
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Características
Pulvinada
Umbilicada
Superficie Lisa
Rugosa
Consistencia Blanda
Dura
Mucoide
Aspecto Brillante
Opaco
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017). Modificado de
Rojas 2011.
Objetivos
Materiales
Acceso a internet
Protocolo de laboratorio
Gelatina de cualquier color (simulará el medio de cultivo),
palillos largos (simulará el asa bacteriológica), recipientes
redondos (simulará cajas de Petri) y un vaso angosto o tubo de
vidrio (simulará tubo de cultivo inclinado).
Ver vídeo introductorio en: https://www.youtube.com/watch?
v=30htD86TWzE
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Procedimiento-Ejercicio trazo de siembra
Cuestionario y resultados
1. Complete la siguiente tabla con datos consultados en internet:
Agar MacConkey
Agar Nutritivo
14
Agar SIM
Incorpore fotografía
Incorpore fotografía
Incorpore fotografía
Incorpore fotografía
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4. Describa las características macroscópicas de las colonias
resultantes de la siembra en los medios de cultivo usados en el
siguiente video de la Universidad de Salamanca.
https://www.youtube.com/watch?v=6hfS1XbPfQk
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Medio de cultivo Agar MacConkey cepa sembrada:_________________
Características Dibujo o fotografía tomada
Descripción de la cepa
macroscópicas del vídeo
Aspecto
Color
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Actividad práctica 1 B. Siembra de Microbiota normal.
Introducción
18
áreas principales del cuerpo (cavidad oral y orofaringe, piel, fosas
nasales, tracto gastrointestinal y vagina) de 242 adultos sanos. Las
comunidades encontradas en cada uno de los hábitats del cuerpo
poseían una fuerte especialización en su sitio, tanto dentro de este como
entre individuos. Así mismo, se observó que, dentro de los hábitats, la
variabilidad interpersonal es alta, mientras que los individuos presentan
una variabilidad temporal mínima.
Objetivo
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Evidenciar la diversidad de microorganismos existentes en las
diferentes zonas del cuerpo humano en estado de salud.
Materiales
Acceso a internet
Protocolo de laboratorio
Ver vídeo de microbiota humana de la Universidad de Sevilla
en: https://www.youtube.com/watch?v=TVVfAEdpj7I
Cuestionario y resultados
Boca
Tracto respiratorio
superior
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Tracto
gastrointestinal
Tracto genital
Agar nutritivo
Agar MacConkey
Agar Sabouraud
21
Actividad práctica 2. Caracterización microscópica de cultivos
bacterianos: Coloración de Gram
Introducción
22
Con la coloración de Gram se pueden establecer dos grandes grupos de
bacterias: Gram positivas y Gram negativas. Las bacterias Gram
positivas se observarán moradas, debido a que retienen el complejo
cristal violeta-lugol, a pesar de la exposición a la solución de alcohol-
acetona; mientras que las bacterias Gram negativas se observaran
rojas, debido a que no retienen el complejo cristal violeta-lugol y por lo
tanto dejan el espacio al colorante de contraste: la safranina. Esta
diferencia en la afinidad tintorial está dada por la pared celular
bacteriana, compuesta de peptidoglicano o mureína, que para las
bacterias Gram positivas es más gruesa y forma más entrecruzamientos
que en las bacterias Gram negativas.
Objetivos
Materiales
Acceso a internet
Protocolo de laboratorio
Hojas blancas y colores, o uso de Word con herramientas para
gráficos con colores.
Ver vídeo de coloración de Gram de la Universidad de Navarra
en: https://www.youtube.com/watch?v=nqzDzuwOvXo
Revise la clasificación de las bacterias con tinción de Gram en el
simulador de tinción de bacterias en
http://glencoe.mheducation.com/sites/dl/free/0078802849/383
941/BL_06.html (Recuerde habilitar en su computadora adobe
flash para visualizar el simulador)
23
Cuestionario y resultados
24
4. Según el video de la coloración de Gram, diligencie la siguiente tabla.
Características
Gram positivas Gram negativas
microscópicas
Morfología
Afinidad tintorial
Agrupación
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Actividad práctica 3. Prueba de susceptibilidad a
antimicrobianos: difusión en disco.
Introducción
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terapéutico. Mientras que, en la categoría de susceptibilidad intermedia,
se encuentra la bacteria que es inhibida in vitro por una concentración
de un antimicrobiano que se asocia a un efecto terapéutico incierto.
Objetivos
Materiales
Acceso a internet
Protocolo de laboratorio
Ver vídeo Bacterias, Antibióticos y Resistencia de Medlineplus
en: https://www.youtube.com/watch?v=ODgdIVu1xac
Cuestionario y resultados
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2. Investigue y defina los siguientes conceptos: Betalactámicos,
Resistencia microbiana, Antibióticos, amplio espectro.
3. Observe las siguientes fotografías y registre el resultado obtenido y
su interpretación en el siguiente cuadro, recuerde que la numeración
de los sensidiscos es igual en todas las fotografías.
Resultado e Interpretación
Interpretación (Describa porque es
Resultado (Sensible o Resistente a
Fotografía cada antibiótico)
sensible o resistente según lo que
puede observar)
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
28
4. Usted tiene que seleccionar 4 antibacterianos para hacer la prueba de
susceptibilidad a antimicrobianos de una cepa de S. aureus (Indique
sus nombres). En la siguiente tabla mencione 3 aspectos que tendría
en cuenta para hacer esta selección, explíquelos brevemente y con
sus palabras.
Aspectos Explicación
29
Actividad práctica 4. Caracterización macroscópica y
microscópica de hongos.
Introducción
30
Fuente: *Mold (Filamentos), Yeast (levadura). Tomado de Wolfe (2014).
Objetivo
Materiales
Guantes y tapabocas
Acceso a internet
Protocolo de laboratorio
Explorar el Atlas Socalemi, sección de micología en
http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-microbiologia
Ver vídeo Levaduras y Hongos en:
https://www.youtube.com/watch?v=rT5cFN0fOYY
Procedimiento
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2. Tómele fotos, obsérvela de cerca, describa lo que observa. recuerde
durante la observación no tocarla directamente, no respirar u oler la
fruta, verdura o pan seleccionado, no estornude, no sople o quite el
nada de allí.
3. Deseche cuidadosamente los guantes, tapabocas, y elementos
contaminados y posteriormente lávese las manos adecuadamente.
1. Paso 2. Paso
3. Paso
Detecte cambio en Utilice todos los
elementos de Deseche lo
apariencia contaminado
bioseguridad
Colores blanco, café Continué con el
o negro Observe y describa
cuestionario
Cuestionario y resultados
32
2. De acuerdo al cultivo micótico de la fruta verdura o pan complete el
siguiente cuadro.
Describa las
Investigue que tipos de
Fotografía de la Describa las Características
hongos pueden haber
Fruta, Verdura o Características microscópicas del
atacado la Fruta
Pan contaminado macroscópicas hongo que supone
verdura o pan
crece en él
33
4. De las siguientes fotografías al microscopio, defina por sus
características que hongo cree ver:
A. B.
C.
Fuente: Fotografías tomadas de Pinterest e imágenes de google de
acceso libre.
34
Actividad práctica 5. Parásitos de importancia en salud.
Introducción
35
(arañas, ácaros), Crustáceos, Hexápodos (insectos: moscas, mosquitos,
pulgas, piojos), Miriápodos (ciempiés y milpiés). Su importancia radica
en que estos pueden causar patologías directas (parasitosis, reacciones
alérgicas) o patologías indirectas, debido a que pueden actuar como
vectores o huéspedes intermediarios de microorganismos patógenos.
Objetivo
Materiales
Acceso a internet
Protocolo de laboratorio
Explorar el Atlas Socalemi, sección de parasitología en
http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-microbiologia
Ver vídeo Parásitos en: https://www.youtube.com/watch?
v=RTI1DB42BZ4
Cuestionario y resultados
36
2. Observe las siguientes fotografías y complete la tabla:
A. B.
C. D.
Tipo de parasito
Características Patología
Nombre del Nombre del (protozoario,
observadas para su con la que
organismo organismo helminto (huevo-
tipificación se relaciona
adulto), artrópodo)
A.
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Tipo de parasito
Características Patología
Nombre del Nombre del (protozoario,
observadas para su con la que
organismo organismo helminto (huevo-
tipificación se relaciona
adulto), artrópodo)
B.
C.
D.
38
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Bibliografía
40
Rodríguez, P. E. G. (2013). Parasitología médica. México, D.F., MX:
Editorial El Manual Moderno. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/detail.action?
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http://www.scielo.org.ve/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1315-
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Woese, C. R. (1996). Whither microbiology? Phylogenetic trees. Curr
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Wolfe, B. (2014, Julio 24). Techniques: Using a microscope to explore
fermented foods. Recuperado de http://microbialfoods.org/using-
microscopy-to-monitor-artisan-fermentations/
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