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Presentado por:
Docentes:
JANETH SANABRIA GOMEZ - PhD
DANY MERCEDES ACEVEDO - MICROBIÓLOGA
OLGA LUCÍA CASTAÑO - PhD
Contenido
1. Introducción ........................................................................................................................... 3
2. Justificación ........................................................................................................................... 5
3. Objetivos ................................................................................................................................ 6
3.1. Objetivo General. .......................................................................................................... 6
3.2. Objetivos Específicos..................................................................................................... 6
4. Marco Teórico ........................................................................................................................ 7
5. Metodología ......................................................................................................................... 14
5.1. Siembra de Plantas: .................................................................................................... 14
5.2. Montaje de Biorreactor: ............................................................................................. 15
5.3. Montaje Semillero Hidropónico: ............................................................................... 16
6. Resultados Y Observaciones................................................................................................ 18
6.1. Plantas: ......................................................................................................................... 18
6.2. Biorreactor:.................................................................................................................. 18
6.3. Semillero Hidropónico: ............................................................................................... 19
7. Conclusiones ........................................................................................................................ 24
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1. Introducción
ambiente de laboratorio en casa para poder llevar con éxito el curso de microbiología y
promedio cada 2 o 3 días, siempre procurando crear condiciones asépticas con el fin de evitar
que se pueden encontrar normalmente en la canasta familiar, durante dos meses se observó el
cuáles no, a partir de estas observaciones se eligió la de mayor crecimiento, para ser utilizada
en la comparación de 4 diferentes variables, que implican el uso del efluente del biorreactor,
semillas de frijol, se utilizaron recipientes plásticos como botellas gaseosas y cajas de helado,
las botellas plásticas fueron adaptadas para poder ubicar espumas dentro de ellas, y dentro de
cultivo llamado “Medio RBA Modificado”, para poder hacer un recuento en placa y tener una
idea general de cuantas bacterias hay en el reactor, esto debido a que con el laboratorio en
casa, no se cuenta con todos los materiales y equipos necesarios para hacer un estudio con
más detalle.
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2. Justificación
funcionamiento y el uso de estos, debido a que en el campo laboral se utilizan los reactores
Se debe comprender que existen diferentes aspectos ambientales que pueden hacer eficiente o
deficiente un proceso, y también que las componentes dentro del reactor pueden afectar el
3. Objetivos
zanahoria, limón, lentejas), e identificar cual tiene una mayor velocidad de crecimiento.
aplicarles solo agua, sobrenadante del biorreactor, el efluente del biorreactor en mezcla
4. Marco Teórico
En general hay dos factores que influyen en el crecimiento y desarrollo de las plantas:
determina el carácter de la planta, pero la medida en que este se desarrolla depende del
ambiente. El factor genético hace referencia a que el genotipo de una planta afecta su
crecimiento. Por ejemplo, algunas variedades de una planta específica, como el arroz, pueden
crecer rápidamente, madurando en 110 días, mientras que otras variedades, en las mismas
condiciones ambientales, crecen más lentamente y maduran en 155 días. Un productor tiene
control sobre el factor genético al elegir la variedad que quiere cultivar. Por otro lado, el
factor ambiental alude a todos los factores, bióticos y abióticos, diferentes al factor genético.
Factores Abióticos
disposición del terreno. Incluye las características físicas de la tierra, como la elevación del
climáticos que afectan el crecimiento de las plantas son: humedad, aireación, luz y
temperatura. En la naturaleza, existe una interacción entre estos factores y todos se afectan
entre sí. Otro factor es el suelo, cuyas propiedades físicas y químicas se conocen como
factores edáficos del entorno vegetal. Las propiedades físicas incluyen la textura del suelo, la
estructura del suelo y la densidad aparente que afectan la capacidad del suelo para retener y
Factores Bióticos
refiere a los organismos que se alimentan de partes de plantas. Los herbívoros con efectos
"plagas". Los daños causados por estos factores bióticos son variados. Pueden ocasionar la
organismo, llamado parásito, se beneficia, pero causa daño a otro, llamado huésped. Por
último, la alelopatía se refiere a la inhibición química de una especie por otra. La sustancia
de las plantas vecinas. Las especies objetivo se ven afectadas por estas toxinas de diferentes
Medios de Cultivo
diferenciales. Y, respecto a su estado físico pueden ser líquidos, semisólidos o sólidos. Deben
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apropiadas de humedad, pH y temperatura óptimas, y una esterilidad del medio para evitar
Biorreactor
activo, en el que se lleva a cabo un proceso químico que involucra organismos o sustancias
bioquímicamente activas derivadas de dichos organismos. Estos procesos pueden ser aerobios
Los microorganismos son seres vivos que han dominado el planeta tierra por millones
de años, estos han ido evolucionando conjuntamente. En todos los lugares del planeta se
encuentran los microorganismos, son tan diversos y tan resilientes que se han adaptado a cada
uno de los cambios que ha sufrido el planeta tierra y se pueden encontrar incluso en lugares
cianobacterias las cuales hace 3.500 millones de años hicieron fotosíntesis y acumularon
oxígeno molecular en la atmósfera; se dio el origen a la vida terrestre y a una gran variedad de
electrones es el oxígeno.
El metabolismo es propio de todos los seres vivos, por medio de este se obtiene
energía para crecer y reproducirse, este está compuesto por dos formas: Anabolismo y
moléculas de ATP, la cual posteriormente es utilizada por las células para llevar a cabo sus
funciones vitales.
capaz de duplicarse a sí misma esto se conoce como fisión binaria, así cada célula hija
célula hija recibe una copia de ADN, este proceso se lleva a cabo, por medio de diferentes
reacciones, unas en las cuales se libera energía y otras en las que absorbe energía, esto ocurre
encontrar en aguas limpias y suelo, son bacterias consideradas relativamente grandes con
tamaños entre 1,5 y 2,0 μm, se mueven a través de flagelos, son bacterias anaeróbicas;
enzima que favorece la fijación del nitrógeno, estos mecanismos de protección que crean las
azotobacter protegen la nitrogenasa, ya que esta es muy sensible al oxígeno, los mecanismos
los cuarenta, hasta finales de los sesenta. Uno de los personajes destacados fue Jacques Monod,
2014).
Se pueden mencionar tres aspectos muy importantes que son indispensables para el
crecimiento microbiano:
“1) los macronutrientes, que son compuestos que son agregados en cantidades de gramos o
2) los micronutrientes o elementos traza representados por sales de Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co,
3) los factores de crecimiento, que están constituidos generalmente por componentes orgánicos
suministrados en baja concentración y que no son sintetizados ni metabolizados por las células,
microscopio, método del número más probable, dilución en placa, turbidimetría, peso seco
tipo:
rx =µx donde, cuanto más biomasa hay, más rápido crece. x: biomasa
Ecuación de Monod.
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Jacques Monod, determina que la velocidad específica (μ) depende del sustrato
Curva de Crecimiento
Existen dos tipos de curvas de crecimiento microbiano, según el tipo de estudio que se
realice.
• Fase Estacionaria
El cultivo está limitado por nutrientes y/o acumulación de productos. Entra en un estado
de equilibrio donde la tasa de crecimiento es igual a la tasa de muerte, por lo que la misma
• Fase de Muerte
Hidroponía
“La hidroponía es una técnica de producción agrícola que utiliza soluciones minerales que
contienen los elementos nutritivos en vez de suelo. Las raíces reciben esta solución nutritiva
que se debe disolver en agua con todos los elementos químicos esenciales para el desarrollo de
las plantas. Las plantas pueden crecer en la solución mineral únicamente, o en un medio inerte,
Los diferentes sistemas hidropónicos se pueden dividir en dos: los de raíces en sustrato
y los de raíces directamente en agua o sin sustrato. Dentro de los de raíces en sustrato, se
encuentran aquellos que ocupan un material sólido distinto del suelo común, puede ser obtenido
(Gimenez, 2015)
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5. Metodología
plásticos de 3,5 onzas y 7 onzas, el algodón se humedece con un poco de agua, y se colocaron
las semillas sobre el algodón. Se sembraron diferentes tipos de semilla: limón, arveja, frijol,
zapallo, garbanzo, zanahoria y tomate. Los frijoles y arvejas se germinaron en algodón, para
luego ser trasplantados al suelo; las semillas utilizadas fueron las de los frijoles Frescampo,
frijol rayado y frijol bola. Las semillas de arvejas también eran de marca Frescampo. Para el
limón, zapallo y el tomate, se utilizaron las semillas extraídas de los frutos comprados en el
súper mercado, las cuales se dejaron secar para luego ser sembradas directamente en el suelo,
colocando entre cuatro y cinco semillas por hoyo, para aumentar la probabilidad de que
germinaron. Una vez las semillas de limón estaban secas, se les removió una parte de la cáscara
que protege la semilla y quedaron de color verde, después de esto se sembraron en el suelo. En
el caso de las zanahorias, se utilizaron semillas para huertos en casa de la marca Fercon,
sembrando 6 semillas por hoyo directamente en el suelo. El suelo utilizado en una de las
viviendas fue compost propio, en otra vivienda fue comprado en Homecenter y en la última
El suelo comprado en la galería fue puesto sobre una bolsa negra, esparcido sobre esta,
para que recibiera radiación solar, durante el día, fue mojado en la noche, al día siguiente se
Para el montaje del biorreactor se utilizaron los siguientes materiales: tubo falcón de
50 mL, tubo falcón de 15 mL, botella de vidrio de 500 mL, guantes, jeringa de 3 cm3 sin
aguja, martillo, colador, embudo, gramera, bomba de aire, medio de cultivo concentrado 25
profundidad, se utilizó una bolsa ziploc y con ayuda del palustre se colocó el suelo dentro de
la bolsa. Posteriormente, con el martillo se maceró el suelo y con el colador se removieron las
partículas más grandes y se puso dentro de la bolsa ziploc el suelo triturado fino.
aséptico, creado por velas encendidas, con ayuda del embudo se llenó de suelo el tubo falcón
de 15 mL hasta la marca de los 7 mL. Luego, con ayuda de una gramera se taró el peso del tubo
falcón de 50 mL, para llenarlo de azúcar hasta que indicara los 7 gramos. Al mismo tiempo, se
hirvió el agua destilada para esterilizarla, y se dejó enfriar en el mismo recipiente en el que se
Para diluir el medio de cultivo a una concentración de una vez, utilizando como
volumen efectivo del biorreactor 350 mL, es decir, para saber cuánto medio de cultivo
100 𝑚𝐿
𝑥 = 350 𝑚𝐿 ∗ = 14 𝑚𝐿
2400 𝑚𝐿
20 𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑧ú𝑐𝑎𝑟 → 1000 𝑚𝐿
𝑥 → 350 𝑚𝐿
20 𝑔
𝑥 = 350 𝑚𝐿 ∗ = 7𝑔
1000 𝑚𝐿
Y la cantidad del suelo se determinó hallando el 2% de, volumen efectivo, que para el
Para verter los ingredientes en la botella de vidrio de 500 mL, es decir, para realizar el
montaje del biorreactor, se mantuvo un espacio aséptico con las velas. Con ayuda del
embudo, primero se agregó el suelo o inóculo, luego el azúcar, seguido por el medio de
cultivo. Por último, se adiciona el agua destilada hasta completar el volumen de 350 mL del
biorreactor. Se agitó para mezclar los componentes, insertar la manguera de la bomba de aire,
Cada tres días se alimentó al biorreactor con azúcar, medio de cultivo, y agua
desconectada la bomba de aire, con el objetivo de dejar sedimentar las sustancia y/o
medio aséptico para prevenir contaminaciones cruzadas; sacar, un tercio del sobrenadante y
completar nuevamente con azúcar, medio de cultivo concentrado una vez y agua destilada;
agitar fuertemente; finalmente se colocaba la manguera y se tapaba con algodón nuevo. Para
obtener estas nuevas cantidades agregadas se realizaron nuevos cálculos matemáticos, como
oasis o espuma, bisturí o tijeras y envases plásticos. Primero se marcó la espuma con un
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marcador y para hacer cuadros de 3cm, luego se cortaron estos con ayuda del bisturí. Se
montaron 2 semilleros hidropónicos, uno con botellas plásticas y otro con cajas de helado de
plástico. Las botellas se lavan y se les quita, una de las partes laterales, para poder ubicar la
espuma dentro de las mismas. Posteriormente se pintan las botellas plásticas con témpera
negra. A cada cuadro de espuma se le abre un pequeño hueco en la parte superior para poder
ubicar las semillas dentro. Las semillas elegidas fueron frijoles, ya que se observó que son las
proceso en 3 recipientes más, es decir cada semillero tiene 4 repeticiones. En cada una de las
Para obtener una mayor claridad acerca del funcionamiento de cada variable en el
semillero de botellas plásticas, las semillas se enumeraron desde la más cercana la tapa hacia
6. Resultados Y Observaciones
6.1. Plantas:
En general los frijoles demoraron 2 días en germinar, las arvejas un día, el limón 8
días, los garbanzos no germinaron, los zapallos 6 días, las zanahorias 7 días, y los tomates 6
días. A menos del mes de haber germinado, los frijoles, los zapallos, y algunos tomates,
superaron la altura apta para ser trasplantados al cultivo hidropónico. Por lo tanto, fueron
descartados para el resto del experimento, Sin embargo, las observaciones realizadas
sirvieron para determinar qué semilla era la más adecuada para hacer una nueva siembra en
Durante todo el proceso, se procuró regar las plantas todos los días, a excepción de los días
fríos y lluviosos.
6.2. Biorreactor:
Iniciando el mes de noviembre, se montaron los biorreactores con un volumen
consistencia era un poco más espesa. Después de 3 semanas de haber montado el biorreactor
Para mayor claridad sobre lo que había en el biorreactor, se llevó una muestra de mezcla
tomar fotos y videos con ayuda de un microscopio. Estas imágenes son presentadas a
tomada con un aumento de 10x y la segunda con 100x. En ellas se observa materia orgánica,
cocos, estreptococos y bacilos, por lo tanto, se llevó un proceso adecuado dentro del
biorreactor.
siembra en cajas de Petri para cuantificar los microorganismos dentro del biorreactor. Se
utilizaron diluciones de 10^-5 hasta 10^-8. Al realizar el recuento en placa, se pudo observar
que había puntos en forma de gota de agua, según el análisis bibliográfico, esta es la forma de
las bacterias fijadoras de nitrógeno. Los resultados fueron los siguientes: Los resultados
𝑈𝐹𝐶
= 2,72 × 1011
𝑚𝐿
Los resultados del semillero con botellas plásticas de 1.5 L, fueron muy positivos. Al
resultados de la Variable Lombrisol fueron positivos debido a que germinaron todas las
semillas de frijol, las plantas tienen entre 4 y 5 hojas; para la variable mezcla completa el
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resultado fue positivo, pues las plantas alcanzaron un buen tamaño comparándolo con la
variable lombrisol, sin embargo en esta variable una semilla germinó, pero en las dos
semanas de monitoreo, no pasó de una altura de 5 cm, también se observó que una de las
plantas alcanzó una altura de 41 cm, siendo esta la más alta entre todas las plantas de cada
variable, en esta variable las plantas tienen entre 2 y 3 hojas. Para la variable sobrenadante,
los resultados no son tan favorables, debido a que dos de las semillas germinadas
los tallos son delgados y las plantas se doblan, estas plantas tienen entre 2 y 3 hojas.
Finalmente, para la variable agua, una semilla no germinó; el crecimiento fue menor
comparado con las otras variables, los tallos no son tan erguidos, la raíz no está muy fija a las
1 - - - -
2 Germinación de - - -
una semilla
3 Germinación de germinación de - -
dos semillas dos semillas
La espuma
absorbió la
tempera negra
de la botella y
las espumas
huelen como a
suelo húmedo.
comercial Lombrisol, seguido por la mezcla completa y el agua, y la menos eficiente fue la
variable del sobrenadante. Se observa que incluso en un punto la mezcla completa tiene un
rendimiento superior al del producto comercial, lo cual es muy buen indicador de que las
Por otro lado, el semillero realizado con oasis no fue tan efectivo. Cuatro días después
de haber sido montado, dos semillas alimentadas con producto comercial empezaron a
mostrar raíces, al igual que dos frijoles del sobrenadante y un frijol de mezcla completa. Sin
esto, el crecimiento fue suficiente para demostrar la eficiencia de cada variable, ya que fue
evidente que las semillas a las que se les aplicó el producto comercial fueron las que más
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y la mezcla completa, respectivamente, y la variable con la que menos crecieron fue el agua,
A partir de estos resultados se puede concluir que el biorreactor, a pesar de no ser tan
eficiente como un producto comercial, presenta mayor rendimiento que un cultivo con solo
agua. Esto quiere decir que hay una probabilidad alta de que las bacterias fijadoras de
cumplieron su función de introducir el nitrógeno en las plantas del cultivo. Por lo tanto, las
7. Conclusiones
funcionamiento del biorreactor casero, teniendo en cuenta que, al aplicar las variables de
sobrenadante y mezcla completa del biorreactor, se observó mayor crecimiento en las plantas
que cuando se les suministra únicamente agua. Incluso se vio un acercamiento de la variable
germinación tradicional.
cuáles eran las de crecimiento más rápido y las de crecimiento más lento, siendo estas la
planta del frijol y la del limón, respectivamente. Este dato es útil, ya que se conoce cual
planta puede ser más ventajosa en el momento de montar un cultivo hidropónico, y también
hidropónico.
De acuerdo con esto, se puede afirmar que la elaboración del biorreactor casero fue un éxito,
dado que en él se brindaron las condiciones óptimas para el crecimiento de las bacterias. Este
cumplieron su función en el crecimiento de las plantas, también por las imágenes tomadas
con el microscopio, y por el recuento realizado en las cajas de Petri, donde se observaron
Por último, se concluye que es posible llevar a cabo todo un laboratorio en casa, a
pesar de las dificultades ocasionadas por la pandemia y de no contar con todas las
8. Referencias