Guia2 Microscopio

GMicroscopía Básica—Una Destreza Importante para Fitopatólogos (Español)
Riley, M. 2003. Microscopía Básica - Una Destreza Importante para Fitopatólogos. Trans. José Carlos
Ureta R. 2008. The Plant Health Instructor. DOI: 10.1094/PHI-I-2008-0715-01
Melissa B. Riley, Department of Plant Pathology and Physiology, Clemson University
Traductor: José Carlos Ureta R. Departamento de Protección Vegetal – Facultad de Ciencias

Agropecuarias, Universidad de Panamá, Panamá.
OBJETIVOS:
Familiarizar al estudiante con los componentes de los microscopios comúnmente utilizados por
fitopatólogos.
Enseñar el cuidado y mantenimiento apropiado de los microscopios.
Aprender los pasos de un adecuado manejo del enfoque y observación de especimenes con los
microscopios.
Determinar la magnificación de los microscopios.
INTRODUCCIÓN:
Usted va a embarcarse en la aventura de su vida en el laboratorio de fitopatología. El microscopio es una

de las herramientas más útiles que tiene un fitopatólogo, cuando trata de identificar al agente causal de
una enfermedad en plantas. Algunas veces el microscopio le brindará información que le permitirá
conocer exactamente la causa de una enfermedad en plantas. En otros casos, pueden ser importantes
para determinar que ciertos fitopatógenos no están causando un problema fitopatológico.
El uso adecuado de un microscopio es una de las destrezas más importantes que debe aprender un
estudiante que se inicia en el estudio de la fitopatología. Los microscopios se desarrollaron a finales del
siglo XVII y hoy en día, continúan siendo importantes para la identificación de hongos y algunos otros
agentes causales de enfermedades en plantas. Aunque el estudio de los microscopios se les ha enseñado
en sus cursos introductorios de las materias científicas, frecuentemente los estudiantes no aprenden
como utilizarlos y cuidarlos adecuadamente. Es más, en ciertos cursos se les indica que los microscopios
ya están preparados e instalados en su sitio y que no se les recomienda que cambien nada de lo ya
establecido, fuera de efectuar el enfoque correspondiente. Esta publicación les proveerá con
información básica e instrucciones en como preparar, usar y cuidar de microscopios, técnicas esenciales
para estudiantes de Fitopatología.
Figura 1. Partes de un Microscopio Compuesto
Figura 1. Partes de un Microscopio Compuesto. Haga clic en imagen para una visión más detallada.
Figura 1. Partes de un Microscopio Compuesto
Figura 2. Partes de un Microscopio de Disección. Haga clic en imagen para una visión más detallada.
Dos tipos de microscopios son usados comúnmente en el curso introductorio de fitopatología. Estos
microscopios son el microscopio compuesto (Figura #1) y el microscopio de disección (Figura #2). Este
último es usado frecuentemente para la observación de objetos más grandes y generalmente presentan
magnificaciones menores a los 100X. La fuente de luz se ubica en la parte superior o puede ser
transmitida a través de la platina (traslúcida). Los microscopios compuestos son utilizados para la
observación de especimenes más pequeños, los cuales son colocados sobre portaobjetos y cubiertos con
un cubreobjetos. Los especimenes a observar deben dejar pasar la luz a través de ellos, en cierta
medida, para que la luz llegue a los lentes del microscopio. La magnificación comúnmente encontrada en
los microscopios compuestos está entre los 10X a 1000X.
Componentes de esta práctica incluyen a:
PARTES DEL MICROSCOPIO.
COMO MOVER Y TRANSPORTAR LOS MICROSCOPIOS EN FORMA APROPIADA.
DETERMINACIÓN DE LA MAGNIFICACIÓN.
AJUSTE DE LAS PIEZAS OCULARES.
COLOCACIÓN Y ENFOQUE DE ESPECÍMENES EN UN PORTAOBJETOS.
ORIENTACIÓN DE LOS ESPECÍMENES EN UNA PLACA.
HAGA CLIC AQUÍ PARA NOTAS PARA EL INSTRUCTOR.
MATERIALES:
Microscopio Compuesto.
Microscopio de Disección.
Portaobjetos y Cubreobjetos.
Tijeras.
Botella de agua con gotero.
Aceite de Inmersión.
Letras “e” escritas en un tamaño de letra #6 e impresas en papel blanco, luego se reduce a un 50% sobre
un acetato que puede ser cortado en letras “e” individuales para cada estudiante (tamaño final de la
letra “e” es 0.6 x 0.45 mm)
PROCEDIMIENTO:
PARTES DEL MICROSCOPIO.
Se debe familiarizar con las distintas partes de los microscopios antes de utilizarlos, porque se necesitará
conocer en donde se ubican las mismas en los diferentes microscopios. Algunos de estos componentes
pueden ubicarse en sitios ligeramente diferentes dependiendo del modelo de microscopio de que se
trate. Tómese algunos minutos para estudiar las figuras 1 y 2 antes de proceder. Las principales partes
del microscopio compuesto y del de disección y sus usos se encuentran establecidas en la Tabla 1. Anote
las diferencias entre estos microscopios antes de continuar.
Pregunta: ¿Qué componentes están presentes en el microscopio compuesto que no están presentes en
el microscopio de disección, tome como base las figuras 1 y 2?
Pregunta: ¿Qué componentes están presentes en el microscopio de disección que no están presentes en
el microscopio compuesto?
Tabla 1. Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos
Componente Descripción
Base
Parte de metal o plástico sobre la cual descansa el resto de las partes del microscopio.
Brazo
Columna en forma de “C” que se proyecta de la base y que sostiene a la platina y a los componentes
ópticos.
Platina
Plataforma plana unida a la parte inferior del brazo sobre la cual se colocan los portaobjetos o muestras
a observar.
Cierre del Diafragma o Condensador
Manija debajo de la abertura de la platina que consiste de un grupo de piezas de metal a manera de
obturador que regula la cantidad de luz que atraviesa al portaobjetos colocado en la platina.
Condensador
No está presente en todos los microscopios – colecta los rayos de luz del iluminador y los enfoca –
incrementa la resolución, aumenta el contraste de la muestra.
Botón de ajuste del condensador knob
Sube y baja el condensador.
Cabezal
Parte cilíndrica/vertical unida en la parte superior del brazo que sostiene el sistema óptico.
Revólver
Plato giratorio que sostiene los objetivos (lentes), unido a la parte inferior del cabezal, puede dársele la
vuelta para cambiar los lentes (objetivos).
Ajuste del macrométrico
Botón grande que mueve el cabezal hacia arriba y abajo para observar la muestra en el enfoque
macrométrico.
Ajuste del micrométrico
Botón pequeño que mueve el cabezal a distancias más cortas, de manera más lenta y es usado para
observar a la muestra con un enfoque más nítido.
Iluminador, Fuente lumínica
Controla la cantidad de luz que se transfiere a la muestra.
Oculares
Tubo de metal corto, removible que contiene lentes ubicados en la parte superior del tubo,
generalmente de 10X -15X de aumento.
Ajuste de Dioptría
Ajuste usado para compensar la diferencia de observación de los ojos.
Objetivos (lentes)
Tubos de metal pequeños, atornillados dentro del revólver que incrementan el aumento de la muestra (a
menudo se refieren sólo como objetivos).
Espejo
Usado para reflejar la luz a través de la muestra.

Eje giratorio del espejo
Usado para ajustar el espejo para que refleje la luz a través de la muestra.
Lentes auxiliares
También se les refiere como lentes suplementarios, pueden ser encontrados en microscopios de
disección en la base de la cubierta de los objetivos o cabezal.
COMO MOVER Y TRANSPORTAR LOS MICROSCOPIOS APROPIADAMENTE.
Los microscopios a menudo se almacenan en anaqueles cuando no se encuentran en uso. Para retirar los
microscopios de los anaqueles, coloque una mano alrededor del brazo y la otra mano debajo de la base
del microscopio. Siempre transporte en el laboratorio, de un sitio a otro, el microscopio en posición
vertical y frontal. Transportar al microscopio en otra forma podrá ocasionar que se caigan o desprendan
alguna de sus partes. Tenga cuidado de que el cordón eléctrico no se encuentre enredado con el de otro
microscopio. Coloque el microscopio sobre una superficie limpia sobre el escritorio o mesa de
laboratorio.
Las fuentes de luz se requieren para la mayoría de los microscopios. El cordón eléctrico de la fuente
lumínica debe ser insertado en una salida eléctrica adecuada. En algunos modelos de microscopios de
disección la fuente de luz es una unidad separada. Esta fuente de luz puede ser insertada en un espacio
que presenta el brazo para poder iluminar la muestra desde arriba, en dirección hacia la platina.
Alternativamente, la fuente de luz puede ser colocada cerca de la platina a nivel de la muestra o debajo
de la platina.
Pregunta: ¿Nota alguna diferencia entre el microscopio compuesto asignado y el ilustrado en la figura 1?
Si es el caso, anote la localización diferente de las partes y si existen partes distintas a las observadas en
dicha figura.
Pregunta: ¿Nota alguna diferencia entre el Microscopio de Disección asignado y el ilustrado en la figura
2? Si es el caso, anote la localización diferente de las partes y si existen partes distintas a las observadas
en dicha figura.
DETERMINACIÓN DEL AUMENTO.
El aumento es una medida de la capacidad del microscopio de agrandar una imagen. La resolución es
una medida de la capacidad del microscopio para separar los diferentes puntos de una imagen.
Determinar el aumento es vital cuando se comparan los tamaños de los diferentes objetos a observarse
con la ayuda de un microscopio. Anote el aumento de los lentes oculares y objetivos de su microscopio.
El aumento está impreso o grabado a un lado de los objetivos y oculares o en la parte superior en el caso
de los oculares. Este aumento se simboliza con un número seguido de una “X” (ejemplo, 15X) Los
microscopios de disección pueden presentar lentes adicionales (referidos también como lentes auxiliares
o suplementarios), en la base de la cubierta de los objetivos, para incrementar el tamaño de la
observación. Anote si su microscopio de disección presenta estos lentes auxiliares. Además pueden
tener también un botón que aumenta la imagen al moverse. Note que este botón presenta una
numeración indicando el aumento que se esta utilizando.
Algunos microscopios compuestos a menudo presentan objetivos que sólo pueden ser utilizados con
aceite de inmersión. Estos objetivos se identifican por tener grabada la palabra oil (aceite, en inglés) en
un lado, cerca del número que indica el aumento del objetivo. Estos objetivos no pueden ser utilizados
sin el aceite de inmersión. Los otros objetivos no deben ser usados con aceite de inmersión ya que se
pueden dañar si son inmersos en este aceite. El uso de lentes de inmersión es esencial cuando se
observan estructuras menores de 10 µm de tamaño. Por ejemplo, este aumento se requiere cuando se
requiere determinar la forma de una célula bacteriana. El aceite de inmersión no incrementa el aumento
de los lentes, pero mejora la resolución y la nitidez de la imagen producida por dicho objetivo. Cuando la
luz pasa a través de un material a otro, por ejemplo del vidrio al aire, la luz se refracta o distorsiona. La
luz de diferentes longitudes de onda se inclina a diferentes ángulos. Estas refracciones dan como
resultado una distorsión la cual se manifiesta más a medida que el aumento del lente es mayor. Al
colocar una gota de aceite de inmersión, el cual tiene el mismo índice de refracción que el vidrio, entre el
objetivo de 100X y el portaobjetos (placa) se reduce significativamente la dispersión de la luz que
ocurriría sino se utiliza el aceite de inmersión. Por ello, se incrementa la resolución de la imagen.
Para determinar el aumento de cualquier imagen se necesita multiplicar el aumento del ocular por el
aumento del objetivo. Si existen lentes auxiliares en un microscopio de disección, el aumento debe ser
multiplicado por el del ocular y el del objetivo. Es importante anotar los diferentes aumentos utilizados
para poder comparar el tamaño relativo de las imágenes que se observen. En muchos casos se requerirá
de usar uno o varios aumentos para observar todos los detalles de la muestra.
Pregunta: ¿Cuál es el aumento de los oculares de su microscopio compuesto y de disección?
Microscopio compuesto: _______________
Microscopio de Disección: _______________

Pregunta: ¿Cuál es el aumento de los objetivos de su microscopio compuesto? ____________,
____________, ____________, ____________
Pregunta: ¿Su microscopio compuesto tiene objetivo de inmersión? _______________
Pregunta: ¿Cuál es su aumento? ___________
Pregunta: ¿Cuál es el máximo aumento que puede obtener con su microscopio compuesto?
________________
¿Con el uso de aceite de inmersión? ____________
¿Sin el uso de aceite de inmersión? _____________
Pregunta: ¿Su microscopio de disección tiene lentes auxiliares o suplementarios en la parte inferior de la
cobertura de sus objetivos, (Figura 3)? _______. ¿Si es así, cuál es el factor de aumento? __________.
Figura 3. Localización de los lentes auxiliares (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 3. Localización de los lentes auxiliares (Cortesía de M. B. Riley)
Figure 4. Magnification knob on side of dissecting microscope used to increase/decrease the

magnification. (Courtesy M. B. Riley)
Figura 4. Botón de aumento a un costado del microscopio de disección usado para

incrementar/disminuir el aumento. (Cortesía de M. B. Riley)
Pregunta: ¿Cuál es el aumento mínimo y máximo que se puede obtener, cuando se usa el ajuste
asociado a su botón de aumento (zoom) localizado a un costado de su microscopio de disección (figura
4)?
Pregunta: ¿Cuál es el máximo aumento disponible cuando se utiliza su microscopio de disección?

Recuerde incluir el factor que representa los lentes auxiliares o suplementarios, si están presentes en su
microscopio, y el máximo para el ajuste de aumento y oculares.
Figure 5. Methods of adjusting eyepiece width. A: Knob between the eyepieces is turned to adjust
width. B: Simply push or pull on the side of area holding the eyepieces to adjust the width. (Courtesy M.
B. Riley)
Figura 5a. Métodos de ajuste del ancho de los oculares A: Botón entre los oculares, se mueve para
ajustar el ancho.
Figure 5. Methods of adjusting eyepiece width. B: Simply push or pull on the side of area holding the
eyepieces to adjust the width. (Courtesy M. B. Riley)
Figura 5b. Simplemente se empuja o hala a los lados, en donde se sostiene los oculares para ajustar el
ancho. (Cortesía de M. B. Riley)
AJUSTE DE LAS PIEZAS OCULARES.
Se requieren de varios ajustes antes de observar a los especimenes. En microscopios bioculares (con dos
oculares) la distancia entre ellos se debe ajustar acorde a su distancia interpupilar y con ambos ojos
observar una sola imagen. Existen diferentes formas de ajustar la distancia, dependiendo del
microscopio que se este utilizando. En algunos microscopios existe un botón entre los oculares que
ajusta la distancia entre éstos. (Figura 5A). Otros microscopios se ajustan moviendo los oculares (Figura
5B). Dicho ajuste es específico para cada persona, por ello se requieren de ajuste mínimos cuando una
persona ha utilizado previamente el microscopio. Haga este ajuste previo a iniciar la observación. Los
diferentes ajustes son necesarios para una mejor observación y que no se presenten incomodidades y
fatiga de sus ojos al efectuar las observaciones pertinentes. Este procedimiento de ajuste se realiza una
vez se vaya a iniciar la observación de la placa correspondiente.
COLOCACIÓN Y ENFOQUE DE ESPECÍMENES EN UN PORTAOBJETOS.
Lo primero que se debe considerar es la colocación de la placa y el enfoque. Para proceder se obtiene
una letra "e" que se proveerá al inicio. Después de enfocar la letra "e", se iniciará la ilustración respecto
al movimiento y orientación del material a observar en la placa.
Corte alrededor de 0.5 centímetros alrededor de la letra "e".
Coloque una gota de agua sobre el portaobjetos y marque uno de los dos lados largos del mismo.
Coloque la letra "e" sobre el portaobjetos de modo que la parte superior de la letra esté en dirección a la
marca en el portaobjetos.
Con un cubreobjetos sostenido con los dedos por los bordes, coloque uno de los bordes cercano a la
letra "e" y suavemente deje caer el otro extremo del cubreobjetos sobre la letra "e", de modo que le
agua de la gota se disemine debajo del cubreobjetos. Seque cualquier exceso de agua con papel toalla.
La letra "e" debe de esta manera permanecer en posición para ser observada con su microscopio.
Asegúrese de que su microcopio compuesto este en posición de poder realizar una observación
adecuada a través de los oculares, según sea necesario. Además debe estar conectada la fuente lumínica
o si la luz está incorporada en el microscopio, el mismo este conectado y encendido. Tenga cuidado de
que el cordón eléctrico esté en una posición que no interrumpa el paso ni la observación de otros.
Figura 6. Botón de ajuste del micrométrico utilizado para proporcionar un mayor acceso a la platina y el
ajuste inicial de la imagen. (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 6. Botón de ajuste del micrométrico utilizado para proporcionar un mayor acceso a la platina y el
ajuste inicial de la imagen. (Cortesía de M. B. Riley)
Levante el cabezal utilizando el tornillo macrométrico para iniciar la observación (Figura 6). En algunos
casos la platina es la que se mueve y no el cabezal.
Figura 7. Rotación del revólver para colocar en posición al objetivo deseado.
Figura 7. Rotación del revólver para colocar en posición al objetivo deseado. (Cortesía de M. B. Riley)
Rote el revólver para iniciar la observación con el objetivo de menor aumento, usualmente 4x o 10x,
según sea el caso (Figura 7).
Figura 8. Perilla del condensador para ajustar el nivel de luz que pasa a través de la muestra. (Cortesía
de M. B. Riley)
Figura 8. Perilla del condensador para ajustar el nivel de luz que pasa a través de la muestra. (Cortesía de
M. B. Riley)
Usando la manija de abertura del diafragma, abra el mismo a aproximadamente la mitad de su

capacidad de abertura. (Figura 8).
Coloque la placa sobre la platina con la marca en la placa a su lado opuesto. Coloque la letra "e"
directamente por encima del centro del condensador que se encuentra ubicado debajo de la platina y
que puede ser observado a través de la abertura que presenta la platina.
Figura 9. Botón para subir y bajar el condensador. (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 9. Botón para subir y bajar el condensador. (Cortesía de M. B. Riley)
Utilizando el botón respectivo, levante el condensador, hasta que la punta del mismo se encuentre a una
distancia de la placa de aproximadamente el grosor de una lámina de papel toalla. (Figura 9).
Figura 10. Botón del ajuste del micrométrico usado para obtener el enfoque máximo. (Cortesía de M. B.
Riley)
Figura 10. Botón del ajuste del micrométrico usado para obtener el enfoque máximo. (Cortesía de M. B.
Riley)
Rote el tornillo micrométrico a una posición aproximada de su punto medio. (Figura 10).
Rote el tornillo macrométrico hasta que la placa casi toque el objetivo. Asegúrese de observar desde
lado del microscopio mientras alcanza la distancia de observación. No se recomienda forzar el objetivo
dentro de la placa ya que la rompería o más importante aún se dañaría el objetivo.
Utilizando su ojo y ocular derecho, suavemente mueve el tornillo macrométrico hasta que este enfocada
la letra “e”. Ajuste su visión hasta observar el mejor enfoque posible.
Luego use el tornillo micrométrico hasta obtener la imagen más nítida posible. (Figura 10). Si más de un
apersona está utilizando el microscopio, cada una de ellas necesitará de efectuar este ajuste en su visión.
Sin mover el enfoque efectuado con el ojo derecho, observe la letra “e” con el ojo y ocular izquierdo. Use
el ajuste de dioptría moviendo en sentido contrario a las manecillas del reloj, del ojo izquierdo hasta que
se observe fuera de foco la letra “e”. Posterior a ello, mueve el ajuste de dioptría en sentido de las
manecillas del reloj hasta que se obtenga un enfoque nítido. Este ajuste reducirá el agotamiento del ojo.
Ahora se procederá a efectuar las observaciones de su espécimen
ORIENTACIÓN DE LOS ESPECÍMENES EN UNA PLACA.
El efectuar dibujos lo más preciso posible de sus observaciones es extremadamente importante. Estos
dibujos serán de mayor importancia, especialmente cuando se están haciendo comparaciones de dibujos
efectuados en diferentes períodos. Sería adecuado trazar un círculo que representa su área de
observación al microscopio y luego añada un rayado tenue dentro del círculo que le sirva de guía (lugar y
tamaño), anote el aumento que se está utilizando al momento de efectuar sus dibujos.
Indicación: Dibuje lo que observa. Observe la parte superior de la letra “e” vista desde el microscopio.
Pregunta: ¿Cómo es la posición de la parte superior de la letra “e”, si se le compara con la observación
efectuada cuando no se está utilizando el microscopio? ¿Son diferentes? ¿Es ésto importante?
Pregunta: ¿Si se necesita observar hacia el lado izquierdo de la muestra, hacia que dirección se necesita
mover la placa? _______________________
Pregunta: ¿Si se necesita observar la parte superior de su muestra, hacia que dirección necesita mover la
placa? ________________________
Pregunta: ¿Por qué lo anterior es importante? _________________________
Para incrementar el aumento se procede como sigue: Asegúrese de que su muestra está enfocada
correctamente con el objetivo de más bajo poder utilizado en un momento dado.
Mientras observa el objetivo, asegúrese de que su movimiento no toque la placa y se deslice

adecuadamente, mueve el revólver al siguiente objetivo de superior aumento y que esté en la posición
correcta sobre la muestra. La mayoría de los microscopios tienen posiciones en donde el objetivo, si está
colocado adecuadamente, hace un ruido seco o chasquido. Si la luz no se observa o el círculo de luz no
está centrado, coloque el revólver en la posición correcta.
Use el tornillo micrométrico para que sea nítida su observación. No debiera tener que utilizar el tornillo
macrométrico, si el enfoque anterior fue el adecuado.
Si se necesita incrementar los aumentos se repiten los pasos 17 a 19.
Figura 11. Adición de aceite de inmersión previo al cambio al lente de inmersión. Observe que el
revólver se encuentra a media distancia entre los objetivos, siendo el lente de inmersión uno de ellos.
(Cortesía de M. B. Riley)
Figura 11. Adición de aceite de inmersión previo al cambio al lente de inmersión. Observe que el revólver
se encuentra a media distancia entre los objetivos, siendo el lente de inmersión uno de ellos. (Cortesía
de M. B. Riley)
Si se necesita usar aceite de inmersión, se requiere usar una gota del mismo en la placa, en el sito que se
desea observar. (Aceite mineral u otros aceites no deben ser utilizados). Al mover el revólver hacia la
posición del objetivo de inmersión, deténgase a media distancia entre el objetivo anterior y el de
inmersión. (Figure 11).
Añada la gota de aceite de inmersión sobre el centro de la placa en observación.
Mueve el revólver de manera que el objetivo de inmersión esté directamente sobre la placa. La gota de
aceite de inmersión debe formar un “puente” entre el objetivo y la placa.
Use el tornillo micrométrico para observar una imagen nítida de su muestra.
Tal vez se requiera de ajustar el condensador, incrementando o disminuyendo la cantidad de luz que
proviene del condensador utilizando la manija del diafragma. (Figura 8).
Nota importante: Asegúrese de que los otros objetivos no se impregnen de aceite de inmersión, ya que
se pueden dañar.
Cuando termine la observación con el lente de inmersión, levante el cabezal o baje la platina, según sea
el caso de acuerdo a su microscopio, limpie de inmediato el objetivo del aceite adherido y remueva la
placa con el aceite. Limpie el aceite de las placas si se van a volver a utilizar o si son placas permanentes
de laboratorio. Los objetivos se pueden limpiar con papel de lente u agua destilada. Solamente use papel
de lente para limpiar los objetivos ya que otros materiales como, papel toalla, toallitas, otros, pueden
dañarlos.
Cada vez que se requiera de remover una placa, siempre levante el cabezal o baje la platina, para
posteriormente remover la placa observada. Para evitar que de manera descuidada se dañe el objetivo al
rozarlo con la placa.
Pregunta: ¿Nota las diferencias en la observación de la letra “e” a medida que va pasa a un aumento
superior o diferente? _________________________
USO DEL MICROSCOPIO DE DISECCIÓN:

Existen varias diferencias entre un microscopio compuesto y un microscopio de disección (algunas veces
se le denomina estereo microscopio, debido a que es como dos juegos de microscopios para enfocar en
un punto, proveyendo una observación tridimensional o vista estereoscópica del espécimen).
Generalmente la mayoría de los microscopios de disección no poseen un botón de ajuste micrométrico.
La fuente de luz (iluminador) puede estar separada del microscopio y puede ser colocada en el brazo,
debajo de la platina o a nivel de la platina. Se le harán recomendaciones específicas para el tipo de
microscopio que se maneja en el laboratorio. Muchos microscopios de disección no tienen objetivos
separados para incrementar el aumento, pero tienen un botón de aumento (zoom) que puede aumentar
o disminuir dicho aumento. Nota: Algunos microscopios de disección tienen además lentes auxiliares o
suplementarios en la parte inferior de la cubierta de los objetivos o del cabezal. Si estos lentes se
encuentran presentes deben ser incluidos en la determinación del aumento.
Las muestras son colocadas sobre la platina y se les mueve a mano. La luz puede ser transmitida a través
de la placa, ajustando el espejo debajo de la muestra o la muestra puede observarse con luz proveniente
de la parte superior. Use los pasos que se indican a continuación, ignorando a aquellos que no aplican
para su microscopio.
Microscopio de disección con la fuente de luz posicionada de manera tal que es transmitida hacia arriba
desde la parte inferior a través de la muestra. A – Eje giratorio del espejo usado para ajustar el ángulo
del espejo para reflejar la luz. (Cortesía de M. B. Riley)
Figura 12. Microscopio de disección con la fuente de luz posicionada de manera tal que es transmitida
hacia arriba desde la parte inferior a través de la muestra. A – Eje giratorio del espejo usado para ajustar
el ángulo del espejo para reflejar la luz. (Cortesía de M. B. Riley)
Para observar la letra “e” es mejor usar la luz proveniente de la parte inferior de la muestra .
Corte alrededor de 0.5 centímetros alrededor de la letra "e".
Coloque una gota de agua sobre el portaobjetos y marque uno de los dos lados largos del mismo.
Coloque la letra "e" sobre el portaobjetos de modo que la parte superior de la letra esté en dirección a la
marca en el portaobjetos.
Con un cubreobjetos sostenido con los dedos por los bordes, coloque uno de los bordes cercano a la
letra "e" y suavemente deje caer el otro extremo del cubreobjetos sobre la letra "e", de modo que le
agua de la gota se disemine debajo del cubreobjetos. Seque cualquier exceso de agua con papel toalla.
La letra "e" debe de esta manera permanecer en posición para ser observado con su microscopio.
Coloque la placa con la letra “e” sobre la platina con la parte superior de la letra del lado opuesto al suyo,
la marca en la placa también debe estar colocada en el sentido contrario al suyo.
Ajuste el eje giratorio del espejo para que la luz se transmita a través de la muestra, luego utilice el botón
de enfoque para la observación adecuada de la letra “e”.
Dibuje la orientación de la letra "e" dentro del círculo.
Pregunta: ¿Existe alguna diferencia entre lo que se observó anteriormente con el microscopio
compuesto? ¿Si es así, cuál/es son las diferencias? __________________________
determine el aumento de su muestra usando la fórmula siguiente:
Aumento Total = Ocular X Lente Auxiliar X Graduación en el Botón de Ajuste de Aumento (zoom).
________ = ________ X ________ X __________
¿Cuando se mueve la muestra de derecha a izquierda o de arriba hacia abajo y viceversa, en que
dirección se mueve la imagen observada a través del microscopio de disección? ________________
Pregunta: ¿Es esta observación distinta o igual a la observación registrada con el microscopio
compuesto?
Pregunta: ¿Cuándo utilizaría la fuente de luz que provenga de la parte superior del microscopio? Y, ¿Cuál
es la ventaja de esta posición? ________________________
Después de que ha terminado esta práctica, recuerde el almacenamiento adecuado de su microscopio

dentro del anaquel o mueble. Asegúrese de que los objetivos estén limpios y que se hayan removido de
la platina la placa en observación. Apague la fuente lumínica. Desconecte el cordón eléctrico y enróllelo
adecuadamente. Remueva la fuente de luz asociada a los microscopios de disección. Coloque todos los
microscopios y luces dentro de los lugares de almacenamiento adecuados. Se le pueden proveer otras
instrucciones según sea la necesidad.
Obtenga las respuestas a las preguntas del ejercicio (en inglés)
REFERENCIA ÚTIL Y COMPLEMENTARIA:
http://www.microscopyu.com - Este es el sitio de la red (página web ) para los microscopios marca Nikon
– contiene artículos relevantes y tutoriales (en inglés), al igual que imágenes de microscopios. También
incluye el desarrollo técnico relacionado a nuevas técnicas de microscopia y microscopios.
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1. FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA ALIDA MARCELA GÓMEZ RODRÍGUEZ BIOLOGÍA

GENERAL GUÍA DE LABORATORIO BIOLOGÍA GENERAL FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA

GENERAL NORMAS DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIONORMAS DENTRO DEL LABORATORIOSiga las
siguientes recomendaciones que son generales a tener en cuenta en unlaboratorio 1. GENERALES
Mantenga las luces apagadas si no hay necesidad de su utilización. Los grifos de agua se deben manejar
con cuidado a fin de no romperlos y cerciorarse que no se está perdiendo agua inútilmente. Las llaves de
gas que abastecen los mecheros deben estar cerradas, en caso de fugas informar al Monitor o al
profesor directamente. Si hay fuerte olor a gas cohíbase de encender fuego hasta tanto no desaparezca
el olor a gas. Terminada la práctica cierre correctamente las llaves de paso. Estar puntual a la hora de
entrar al laboratorio, recuerde ese adagio que dice “Uno llega tarde porque se sabe que lo esperan, si
sabe que no lo esperan uno no llega tarde”. Se da un margen máximo de 5 minutos para su llegada Está
prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio, esto genera indisposición general y no ayuda al
desarrollo armónico de las prácticas No se permite juegos ni indisciplina dentro del laboratorio, éste es
un sitio donde el respeto y la academia nos debe ayudar a formar integralmente. No pierda tiempo,
trabaje rápido y con cuidado, sea diligente dentro del proceso de las distintas prácticas. Evite el
deambular por el espacio físico del laboratorio sin motivo aparente, céntrese en su trabajo con el grupo
de compañeros el cual le correspondió. De esta manera el trabajo rinde y se hace más armónico.
Finalizada la práctica la mesa de trabajo debe quedar en buen estado y aseada. Entregue el material de
laboratorio asignado en perfecto estado y de manera limpia. En caso que por accidente se haya
fraccionado algunos de los materiales dados, debe hablar con el profesor de la materia o en su defecto
con el monitor. Es claro que debe reponer el material que averió.

GENERAL 2. MATERIAL DEL LABORATORIO Dentro del laboratorio siempre utilizar bata de manga larga,
blanca, preferiblemente de algodón. Cuide los lentes del microscopio para que no se manchen con
colorantes. Una vez dentro el laboratorio lave y seque correctamente el material que previamente le han
entregado procurando no ocasionar fracturas del mismo. Todo el material, especialmente los aparatos
delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus
mecanismos. Jamás pipetee ácidos o Bases fuertes, sustancias toxicas o volátiles Nunca arroje materiales
sólidos (papeles, fósforos, vidrios, etc) en los sumideros o vertederos, utilice los implementos adecuados
para ello. Evite instalaciones o montajes inestables de aparatos durante las distintas prácticas. No
pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga
en el Centro. Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo superior
para regular la caída de líquido. Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada
debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la
visual al enrase sea horizontal. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos
debe evitarse la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo
se acercará a la llama inclinada y procurando que ésta actúe sobre la mitad superior del contenido y,
cuando se observe que se inicia la ebullición rápida, se retirará, acercándolo nuevamente a los pocos
segundos y retirándolo otra vez al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento
intermitente. En cualquier caso, se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona.
Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el
fin de evitar roturas. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se
engrasen.

GENERAL

GENERAL 3. EVITAR ACCIDENTES Sofoque cualquier principio de incendio con un trapo mojado Evite
inhalar vapores de manera directa de cualquier material. Si es absolutamente necesario porque la
practica así lo requiere, opere arrastrando los vapores con la mano hacia la nariz Lea con atención las
etiquetas que están adosadas a los envases de las sustancias químicas, evite accidentes por consumo de
sustancias químicas del laboratorio. Cerciórese antes de coger cualquier material de vidrio, hierro y
porcelana, que estos se encuentran a la temperatura ambiente para evitar posibles quemaduras En caso
de quemaduras con sustancias químicas o materiales expuestos a altas temperaturas, vaya directamente
con el docente a fin de utilizar algún paliativo para la quemadura. Evite por si solo hacer combinaciones
de sustancias. Hable con el docente si es procedente hacer algo al margen de lo manifestado en la guía
de laboratorio. Evite cortarse con vidrio cumpliendo las siguientes instrucciones: a. Nunca trate de
insertar tubos de vidrio, termómetros, embudos o cualquier otro objeto de vidrio en tapones de caucho,
o cualquier otro objeto sin humedecer el tapón y el objeto de vidrio. b. Proteja sus manos con una toalla
c. Para reducir el palanqueo que se ejerce sobre el vidrio, mantenga una mano en el tapón y con la otra
tome el material de vidrio muy cerca del extremo que se va a insertar, haga presión y el objeto de vidrio
se ira introduciendo lentamente. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse
alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará
al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho
cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos,
álcalis, etc.) deberá hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se
verterán bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarán resbalar suavemente por su pared.
Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: ácido sobre
agua.

GENERAL Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma que la
etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se deteriore dicha etiqueta y no se
pueda identificar el contenido del frasco. RECOMENDACIONES PARA EL ÉXITO DE LAS PRÁCTICAS DE
LABORATORIO Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de
su objetivo, fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas
se conozcan. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material . Llevar
el material solicitado en las distintas prácticas Trabajar con diligencia y de manera armónica de tal forma
que no se malgaste el tiempo y pueda terminar la practica en el tiempo estipulado Conformar grupos de
trabajo de acuerdo a las indicaciones del Docente o Monitor y presento los informes de laboratorio con
el grupo de trabajo con quien realizo la practica PREGUNTAS PREGUNTAS PRELABORATORIO
COMPLEMENTARIAS (Se entregan ocho días después de hacer este laboratorio) 1. Defina: Residuo solido
Residuo peligroso Residuo combustible De acuerdo con la clasificación Residuo corrosivo de residuos
diseñe una tabla Residuo reactivo que incluya: clase de residuo Residuo explosivo (NO PELIGROSOS,
Inflamabilidad reciclables, vidrio); contenido básico (toda case de vidrio no Residuo patógeno
contaminado), color (blanco) y Residuo volátil etiqueta. Residuo cortopunzante Biodegradable
Biosanitario Metales pesados Recalcitrante

GENERAL PRESENTACIÓN GENERAL DEL INFORME DE LABORATORIO El desarrollo práctico de la
asignatura Biología General se realiza a través de cuatro laboratorios. Todas las prácticas requieren del
manejo del microscopio para observar diferentes tipos de sistemas biológicos unicelulares,
pluricelulares, bacterianas, protista, hongo, animales y vegetales. Las guías de biología inician con un
conocimiento sobre microscopía, resaltando la importancia del microscopio como instrumento
fundamental para la observación y estudio de la diversidad celular y otros campos importantes de la
Biología microscópica; continúa con el estudio de la célula como entidad estructural y funcional de todos
los sistemas vivos, destacando la variabilidad que se presenta en cuanto a forma, tamaño y tipos
celulares. Las actividades de laboratorio están diseñadas con el objetivo de llevar a la práctica los
conceptos fundamentales que se imparten en teoría y de esta manera involucrarse experimentalmente
con la ciencia. En los instructivos de cada práctica encontrará una introducción, objetivos, procedimiento
y cuestionario, los cuales deben ser resueltos antes de ingresar al laboratorio ya que contienen aspectos
indispensables para comprender la práctica. Todas las prácticas indican qué material, equipo o reactivo
se utilizará y el procedimiento a seguir, para llevar a cabo los experimentos.Forma de presentar el
laboratorio: El estudiante deberá presentar en un cuaderno de laboratorio cada una de las prácticas
desarrolladas (no se reciben laboratorios en computador). El laboratorio se presenta en tipo artículo
científico: Título, resumen, abstract, introducción, metodología (materiales y métodos), resultados
(gráficas, figuras, gráficos), discusión de resultados, conclusiones y bibliografía. Las personas que no
asistan a las prácticas no podrán entregar informe de laboratorio.

GENERAL MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO PRÁCTICA No 1INTRODUCCIÓNEl
microscopio óptico es el instrumento principal en el laboratorio de biología, ya que estenos ayuda a
observar cosas que no podemos ver a simple vista.Existen tres tipos de microscopios en el laboratorio de
biología1. - Microscopio estereoscópico: este nos sirve para observar muestras vegetales ymuestras
animales, y consta de 2 objetivo, uno de 2 “x” y otro de 4 “x”, por lo tanto suaumento será de 20 y 40
veces.2. - Microscopio de luz polarizada: este se utiliza para observar metales, tiene 5 objetivosy un solo
ocular.3. - Microscopio óptico: este es el que se utiliza de manera más común en las prácticasde
laboratorio de biología, este microscopio consta de tres sistemas.a)Sistema mecánico: son todas las
partes que sirven de soporte al microscopio: el brazo,el pie o soporte, el carro o la platinab) Sistema de
iluminación: las fuentes de luz, el condensador y el espejoCLASES DE MICROSCOPIOS:Existen dos tipos
de microscopios: simples y compuestos Microscopios simples : Consta de un solo sistema de lente
Microscopios compuestos:Constan de dos (2) sistemas de lentes: el objetivo y el ocular.El microscopio
compuesto es un instrumento que aumenta considerablemente la imagende los objetivos que en él se
observan. Entre las variedades de éste microscopioencontramos el electrónico y el fotónico u óptico.
Este último tipo de microscopio estáformado por una parte mecánica y una parte óptica.

GENERALParte Mecánica:a. Pie o Base: Generalmente en forma de herradura o rectangular, es el apoyo
de lasdemás piezas del microscopio. El pie debe ser sólido y pesado para asegurar suestabilidad.b.
Columna o Brazo: Este elemento relaciona el tubo del microscopio con el pie; sostienela platina y el
condensador y de ella se agarrará el microscopio cuando se trasladadurante los trabajos. En algunos c.
Tubo del Ocular: Está colocado en la parte superiordel microscopio, donde están acoplados los oculares,
que pueden tener movimientovertical, con ayuda de una cremallera sobre la columna. En algunos
microscopios el tubodel ocular es inclinado y se mantiene fijo, en este caso se mueve la platina.d.
Revólver o Disco Giratorio: Está debajo del tubo ocular donde están acoplados losobjetivos, presenta
movimiento giratorio para facilitar el cambio de un objetivo a otro.e. Platina: Es una placa que puede ser
cuadrada, circular o rectangular, con un orificiocentral que permite el paso de la luz a través de ella. Su
función es sostener las placascon los preparados biológicos que se van observarf. Carro: es un dispositivo
ubicado sobre la platina, cuya función es sujetar y mover laplaca que se va a estudiar. Posee dos tornillos
que permiten movimientos horizontales(hacia adelante, hacia atrás, hacia la derecha y hacia la
izquierda) del portaobjeto.Cuando la platina carece del anterior dispositivo, lleva dos soportes para fijar
las placasllamadas ganchos o uñas.g. Mecanismos de Movimiento: Está integrado por el tornillo
macrométrico y elmicrométrico Tornillo Macrométrico: Acerca o aleja rápidamente el objetivo del
preparado aobservar; su función es lograr un enfoque más o menos claro o aproximado del objeto.
Tornillo Micrométrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente,
casiimperceptiblemente, permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo delocular. Durante
la observación y enfoque este tornillo debe estarse moviendopermanentemente; su función es darle
nitidez al enfoque.Parte óptica:Esta integrada por los objetivos, oculares y el aparato de iluminación
(espejo, diafragma,condensador y filtros). Estos elementos son los que permiten la iluminación,
ampliación yla visión aumentada del objetivo.a. Objetivo: Es la pieza más importante del microscopio.
Ellos se acoplan medianteroscas estándar al revólver y pueden ser cambiados de posición con sólo
rotarlos.Reciben el nombre de objetivos porque son los lentes que están más cerca del objeto.
Lamayoría de los microscopios tienen tres o cuatro objetivos. Las lentes de los objetivosson de aumentos
diversos, los más usados son:Objetivos de pequeños aumentos 3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de
grandes
GENERALaumentos 40x, 45x, 50x y objetivos de inmersión 90x, 95x y 100x.Las lentes de inmersión se
emplean con aceite de inmersión para conectar la lente frontal(lente inferior del objetivo) al porta-
objeto. Entre el objetivo y el objeto se produce unapérdida de luz por reflexión que se corrige
adicionando al preparado unas gotas de aceitede cedro (aceite de inmersión) cuyo índice de refracción
1.515, es próximo al cristal. Esteaceite también reduce o suprime por completo la refracción de los rayos
de luzprovenientes de la fuente luminosa. b. Ocular: Están colocados en la parte superior deltubo ocular.
Está formado por dos sistemas de lentes dispuestos de un cilindro. Sufinalidad es aumentar la imagen
dada por el objetivo y eventualmente corregir algunosdefectos de la misma. Reciben dicho nombre
porque son las lentes que se encuentranmás cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; 5x; 6,3x; 10x; 12.5x;
15x; 20x y 25x.El aumento de la imagen de un objeto observado a través de un microscopio, se
calculamultiplicando el número de aumento del objetivo con el cual se está trabajando por elnúmero de
aumento del ocular que se está utilizando.c. Aparato de iluminación: Está conformado por la fuente de
luz, el diafragma, elcondensador y los filtros.d. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial, cuando es
natural (solar) o procede de unfoco luminoso situado fuera del microscopio, un espejo recoge la luz del
medio y la reflejaa través del objeto y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente
unbombillo ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje.e. Diafragma:
Está ubicado entre la fuente de luz y el condensador, inmediatamentedebajo de la platina, su función es
regular la intensidad de luz que atraviesa el objeto. Eldiafragma tiene una palanquita que al moverla
hacia delante o hacia atrás agranda oachica el orificio central, dejando pasar mayor o menor cantidad de
luz respectivamente.f. Condensador: Es un elemento cónico que posee un sistema de dos
lentesconvergentes que recogen o concretan los rayos luminosos para enviarlos al objetivo porel agujero
de la platina.Existe un tornillo manual que permite guardar la altura del condensador. Esta graduaciónes
importante cuando se trabaja con objetivos de gran aumento (40x, 100x), ya que en lamedida que se
trabaja con éstos objetivos el condensador debe subirse. Lo contrariosucede cuando se trabaja con
objetivos de menor aumento (4x, 10x).g. Filtros: Entre la fuente de luz y el condensador de algunos
microscopios existe unportafiltros en el cual se puede colocar filtros a voluntad del observador. Los filtros
sonelementos de cuarzo o de vidrio, pueden ser de color azul, amarillo o verde. Ellosinterceptan el haz
de rayos luminosos antes de entrar al condensador, esto se hace conel objeto de seleccionar un tipo de
luz determinada para una experiencia dada.
GENERALLENTES:Las lentes son el componente más importante del microscopio; se fabrican de vidrio
uotros materiales transparentes.Pueden ser convexas o cóncavas en ambas superficies, planas en una
cara o tenercualquier combinación de éstas dos formas en su superficie.Las lentes son de dos tipos:
positivas y negativas. Lentes Positivas: Hacen converger los rayos de luz, es decir, los concentra para
formaruna imagen real. Lentes Negativas: Hacen divergir los rayos de luz, sin formar ninguna imagen
real.PREPARACIONES MICROSCÓPICAS:Debemos tener en cuenta que a través del microscopio
solamente se pueden observarobjetos que dejan pasar rayos de luz, por esta razón el preparado debe
ser lo másdelgado y transparente posible, pues un preparado grueso solo nos permite observar
unamancha negra. Los detalles solo se observan si la preparación es lo suficientementedelgada para que
sea transparente con la luz que recibe. Para realizar preparacionesmicroscópicas los porta y cubre-
objetos deben limpiarse antes de usarse. Un buenmétodo es guardarlos en alcohol y antes de utilizarlos
secarlos con un paño limpio y librede grasa. Los cubre-objetos deben limpiarse con mucho cuidado
porque son frágiles.Las preparaciones microscópicas pueden ser acuosas o en seco.Las preparaciones
acuosas son las más simples y fáciles usadas para examinarcualquier objeto fluido, como agua de
estanque o sangre. Se deposita una gotita dellíquido que se desea observar en el centro del porta-
objeto, se coloca el cubreobjetosobre el porta, forme con las dos láminas un ángulo de 45 grados y luego
deje caersuavemente la laminilla cubre-objeto sobre el preparado, evitando la formación deburbujas.El
líquido no debe rebosar los bordes del cubre-objeto, en caso de que suceda sequecuidadosamente el
líquido sobrante usando papel absorbente o papel toalla. Lapreparación queda así lista para la
observación. Estas preparaciones son de cortaduración porque se secan rápidamente; para hacerlas más
duraderas debe cerrarseherméticamente los bordes del cubre objeto; la duración de ésta preparación no
esindefinida. Los bordes se pueden cerrar con vaselina o esmalte.COLORANTES :Los colorantes son sales
compuestas por un ácido y una base. Se clasifican en ácidos,básicos y neutros, según la parte de los
mismos que imparta el color. En los colorantesácidos el grupo cromóforo, el que imparte el color, es el
componente ácido, elcomponente básico es incoloro. Lo contrario sucede con los colorantes básicos. Los
GENERALcolorantes neutros tienen coloreado el componente ácido y el básico.La mayoría de los
colorantes son sintéticos, aunque se emplean todavía algunosnaturales. La hematoxilina y el carmín son
los colorantes naturales más importantes parala tinción de tejidos. El carmín es producido por la
conchinilla (Coccus cacti). Lahematoxilina se extrae de la madera de un árbol de México, el palo
Campeche.Otro colorante es la orceína que se extrae de líquenes. Existen tres técnicas de tinción deuso
general: la coloración seca o de tejidos muertos, la coloración vital o de tejidos vivosy la histoquímica, en
la cual se utilizan las reacciones de los colores para hacer visible loselementos estructurales de las
células y de los tejidos. Partes de un microscopio ópticoRESUMEN PARTES DE UN MICROSCOPIO
ÓPTICOSISTEMA ÓPTICOOCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del
objetivo.OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.CONDENSADOR:
Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz
que entra en el condensador.FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
GENERALSISTEMA MECÁNICOSOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes
oculares. Puede ser monocular, binocular.REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite,
al girar, cambiar losobjetivos.TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y
micrométrico queconsigue el enfoque correcto. I. MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO1. Colocar el
objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio
se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.2. Colocar la
preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.3. Comenzar la observación con el
objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.4.
Para realizar el enfoque: a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el
tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre
el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. b.
Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el
macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un
enfoque fino.5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al
GENERAL cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia
de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si
se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.6. Empleo del objetivo de inmersión: a. Bajar
totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. c. Girar el revólver hacia el
objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. d. Colocar una gota mínima de
aceite de inmersión sobre el círculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición
del objetivo de inmersión. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y
la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el
objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay
que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observación de la
preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este
momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersión en posición de observación. j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un
papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. II.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor
aumentoen posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina nosobresale del
borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay
que mantenerlocubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usarde
forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo
GENERALdel polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlasmuy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto
sobre la platina si no se está utilizando elmicroscopio. 5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay
que limpiar el aceite quequeda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro
(menosrecomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido ycon
suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlocon una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo delimpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes ysu sujeción. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios
del microscopio (macrométrico,micrométrico, platina, revólver y condensador). 7. El cambio de objetivo
se hace girando el revólver y dirigiendo siempre lamirada a la preparación para prevenir el roce de la
lente con la muestra. No cambiarnunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo
mientras se estáobservando a través del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si
se derrama sobreella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un
pañohumedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar
lasesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión generalde los mismos.EL
DIBUJO EN BIOLOGIA, debe tener las siguientes características: Objetividad y claridad. Deben
representarse los objetos tal como son y con nitidez. Exactitud. Proporcionalidad entre el objeto y su
representación gráfica en toda su estructura. Trazos nítidos y firmes. Con ausencia de sombras y colores.
Nombres. Todas las estructuras que aparecen deberán llevar su nombre por fuera del dibujo en forma
ordenadaRECORDEMOS: Usar eficientemente el microscopio y los elementos y equipos a su disposición.
Estudiar e interpretar críticamente el material biológico para el estudio microscópico. Registrar las
imágenes microscópicas para ilustrar y discutir los resultados
GENERAL obtenidos. El examen microscópico proporciona información fundamental en investigación.
Mucha de esta información sólo puede ser obtenida a través de esta herramienta, por lo tanto, se debe
poner el máximo interés en la adquisición de una información lo más amplia y profunda posible sobre la
estructura microscópica y los métodos de trabajo utilizados para su observación y estudio.Objetivos
Identificar cada una de las partes que conforman el microscopio óptico y conocer los cuidados que se
deben tener para su manejo. Manejar los mecanismos de enfoque del microscopio Comprender la
importancia del microscopio como herramienta fundamental en biología celularMateriales (descripción
de equipos, reactivos, materiales de vidrio, plástico y acero,especificar los materiales que deben llevar
los estudiantes)Microscopio¼ hoja de papel periódicoPortaobjetosCubreobjetosTijerasPapel seda
bancoGoteroXilolFibras de lana o algodón de diferentes coloresGranos de polenMetodología –
Procedimiento 1. Cortar un pedazo de papel periódico de 1 cm2 de área y colocarlo sobre un cubre
limpio y seco 2. Adicionar con el gotero un poco de agua sobre el papel hasta humedecer y poner el
cubre objeto sobre el evitando que se formen burbujas. 3. Observar la muestra en el microscopio para
ello se debe colocar la muestra e la platina asegurándola con las pinzas. 4. Realizar las observaciones con
los objetivos de 10x, 40x, 100x
GENERAL 5. Ajustar las observaciones con los tornillos macrométrico y micromético. 6. Realizar los
esquemas de cada una de las observaciones. 7. Realizar el mismo procedimiento con fibras de lana o
algodón de diferentes colores y con Granos de polen. 8. Después de utilizar el microscopio limpiar
suavemente el microscopio y las lentes con xilol y papel seda 9. Cubrir y guardar debidamente el
microscopioCuestionario ¿Cómo se puede definir un microscopio? ¿Cuáles son las diferencias entre un
microscopio simple y uno compuesto? ¿Cuáles son las diferencias al observar la muestra con diferentes
tipos de lentes de aumento? ¿Que dificultades tendrías si al iniciar un trabajo lo hicieras con la lente de
mayor aumento? Cuando utilizas el objetivo de inmersión ¿por que es necesario utilizar un aceite con
este nombre? Por que el objetivo necesita un índice? Cuáles son los poderes del microscopia. Cuál es el
índice de refracción del agua y del aceite. Cuáles pueden ser las causas de las rupturas de los
micropreparados ¿Qué importancia tiene el microscopio en la biología celular? Investiga si es lo mismo
amplificación y resolución ¿y de que factores depende cada una de ellas?
GENERAL CÉLULAS VEGETALES Y CÉLULAS ANIMALES PRÁCTICA No 2 INTRODUCCIÓNLas células son la
porción más pequeña de materia viva capaz de realizar todas lasfunciones de los seres vivos, es decir,
reproducirse, respirar, crecer, producir energía,etc. Existen dos tipos de células con respecto a su origen,
células animales y célulasvegetales:En ambos casos presentan un alto grado de organización con
numerosas estructurasinternas delimitadas por membranas. La membrana nuclear establece una barrera
entreel material genético y el citoplasma. Las mitocondrias, de interior sinuoso, convierten losnutrientes
en energía que utiliza la planta.Tanto la célula vegetal como la animal poseen membrana celular, pero la
célula vegetalcuenta, además, con una pared celular de celulosa, que le da rigidez. La célula
vegetalcontiene cloroplastos: organelos capaces de sintetizar azúcares a partir de dióxido decarbono,
agua y luz solar (fotosínteis) lo cual los hace autótrofos (producen su propioalimento) y la célula animal
no los posee por lo tanto no puede realizar el proceso defotosíntesis. Pared celular: la célula vegetal
presenta esta pared que está formada porcelulosa rígida, en cambio la célula animal no la posee, sólo
tiene la membranacitoplasmática que la separa del medio. Una vacuola única llena de líquido que
ocupacasi todo el interior de la célula vegetal, en cambio, la célula animal, tiene varias vacuolasy son
más pequeñas.Las células vegetales pueden reproducirse mediante un proceso que da por
resultadocélulas iguales a las progenitoras, este tipo de reproducción se llama reproducciónasexual. Las
células animales pueden realizar un tipo de reproducción llamadoreproducción sexual, en el cual, los
descendientes presentan características de losprogenitores pero no son idénticos a él.CÉLULAS
VEGETALESMATERIALES: Una cebolla cabezona. Viruta de madera Semillas de durazno y cereza. Un
tomate, Una arracacha, yuca, papa y banano. Una hoja de lirio, elodea Láminas porta y cubres. Cuchilla o
bisturí. Papel absorbente. Aguja de disección. Pincel.
GENERALPROCEDIMIENTO.MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE CEBOLLA (Allium cepa)En un porta
objetos coloque dos muestras de epidermis de cebolla. Uno con agua y otrocon lugol. Observe la forma
de la célula y su disposición en el tejido. Identifique Paredcelular, membrana celular, citoplasma, vacuola,
núcleo, nucleolos. Cuántos núcleos ynucleolos presenta la célula. Diferencie entre las dos preparaciones.
Cuáles son lasventajas de utilizar colorantes. Qué organelos celulares se colorean con lugol.MONTAJE
HUMEDO DE EPIDERMIS DE LIRIO- ElodeaColoque un segmento de hoja de lirio en el porta objetos,
coloree con azul de metileno.Observe al microscopio y diga: cuántos tipos de células observa y qué
forma tienen,identifique y esquematice en las células epidérmicas las siguientes estructuras:
paredcelular, membrana celular, citoplasma, vacuolas y núcleo. Identifique un estoma, señaleel ostiolo y
diga su función. De cada una de las estructuras anteriores diga su función.MONTAJE HUMEDO DE
EPIDERMIS DE TOMATE (Lycopersicum esculentumMillar)Raspe la epidermis de tomate sobre la lámina
porta objetos, lavando con agua hasta quela epidermis esté translucida. Agregue tionina y observe: La
forma de las células, sucoloración, pared celular, la lámina media y los plasmodesmos que fraccionan
oseccionan la pared celular. Diga qué son y cuál es su función.OBSERVACIÓN DE CLOROPLASTOS.Tome
una hoja de elodea (Egeria densa) y ubique el ápice foliar. Pase a 40X y diga cómose llaman los organelos
de color verde que se observan, dónde se localizan y cuál es sufunción. Describa el tipo de movimiento
de los organelos y cómo se llama este tipo demovimiento?. Dibuje lo observado.OBSERVACIÓN DE
AMILOPLASTOS.Tome un trozo de papa (Solanum tuberosum L) y con el bisturí o cuchilla haga unraspado
y deposítelo sobre el portaobjetos; agregue una gota de lugol, cubra y lleve almicroscopio. Observe la
forma de los amiloplastos. Repita la misma operación conbanano (Musa sapientum L.).OBSERVACIÓN DE
CROMOPLASTOS.Tome una muestra de pulpa roja (mesocarpo) de tomate, extienda sobre la lámina
portaobjetos, agregue una gota de agua y lleve al microscopio. Observe las células grandes
ytransparentes con una pared delgada, dentro se encuentran unas granulaciones de colorrojo que
pueden agruparse alrededor del núcleo o estar dispersos en el citoplasma.
GENERALCÉLULAS ANIMALES METODOLOGÍA Muestra de sangre: Con la lanceta estéril realizar una
punción en un pulgar. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. Colocar un
portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se
pueda obtener una fina película de sangre. El porta absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca
por encima de ella para no dañar los gota de sangre hematíes. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta
de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la
preparación. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la
desecación del colorante agregando más líquido. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina
dejándola actuar 1 minuto. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. Dejar secar aireando
el porta. Observar al microscopio. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Al microscopio se verán con un
dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No
tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes.
GENERAL Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, teñido
de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos: de tamaño aproximado al de
los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. Monolitos: son los leucocitos
mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo grande, redondo, son los más móviles y su función
principal es la fagocitosis. Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser
eosinófilos, con abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos. Las
plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción. Muestra de protozoarios:
-Agregar una gota de muestra de agua estancada (con gotero) en el portaobjeto, poner el cubreobjeto
con la precaución de que no se formen burbujas, observar en los objetivos de 10x y 40x.Actividad
ComplementariaEn el siguiente cuadro marca las estructuras que pudiste observarMuestras/ Células
Vegetales Células Animalesorganelos Cebolla Tomate Elodea Sangre Protozoarios 10 X 40X 10 X 40X 10 X
40X 10 X 40X 10 X 40XNúcleoMembranacelularParedcelularCitoplasmaVacuolasOtrosPOST
LABORATORIO 1. Indique las principales diferencias entre células vegetales y células animales (realice un
cuadro comparativo). 2. Porque los organelos celulares son de diferente formas y color 3. Describa los
organelos celulares que diferencias los dos tipos de células de estudio. 4. Revise diferentes tipos de
técnicas que se utilizan para estudia células vegetales y animales.
GENERAL OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS PRÁCTICA 3INTRODUCCIÓNLos hongos
constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descritoaproximadamente 500.000, pero se
estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones deespecies) que presentan una amplia distribución en la
naturaleza, contribuyendo a ladescomposición de la materia orgánica (Figura 1) y participando en los
ciclos biológicos.Un pequeño número son patógenos de animales y plantas.Figura 1. Estructura de
Hongos estructuras para la degradación de materia orgánica.Inicialmente, los hongos fueron clasificados
dentro del Reino Plantae ya que fueronconsiderados organismos inmóviles presentando estructuras que
se asientan firmementeen el sustrato sobre el que crecían. Sin embargo, cuando se ha aplicado la
biologíamolecular en los estudios taxonómicos se ha observado que los hongos están máspróximos al
Reino Animalia que al Plantae. En el sistema de clasificación de los seresvivos en cinco reinos, los hongos
se encuentran clasificados en el Reino Fungi, que sedivide en cuatro Phyla denominados Ascomycota (el
más extenso que comprende el 50%de los hongos conocidos y aproximadamente el 80% de los hongos
patógenos,Basidiomycota, Zygomycota, y Chytridiomycota, encontrándose en los tres primeros
loshongos patógenos humanos. Los hongos en los que no se conoce su reproducciónsexual, constituyen
un grupo heterogéneo denominado Deuteromicetos, hongosimperfectos o mitospóricos, que representa
el segundo grupo más numeroso y quetambién incluye patógenos humanos.Los hongos son organismos
eucariotas típicos (Figura 2) y poseen un núcleo quecontiene varios cromosomas (siete en Candida
albicans, ocho en Aspergillus nidulans ydieciséis en Saccharomyces cerevisiae) delimitado por una
membrana nuclear, connucléolo rico en ARN y orgánulos citoplásmicos, como mitocondrias, vacuolas,
retículoendoplásmico, aparato de Golgi y ribosomas 80 S. El citoplasma se encuentra limitadopor la
membrana citoplásmica, que es una doble capa de lípidos que contiene proteínas yesteroles y que
controla la permeabilidad celular y participa en la síntesis de la paredcelular. La estructura de las células
de los hongos es muy diferente de la de las bacteriasque son organismos procariotas. Aunque comparten
muchas estructuras, las células delos hongos se diferencian de las de las plantas en la composición de la
pared celular y enque carecen de cloroplastos y clorofila, y de las humanas en que tienen pared celular
yen la presencia de ergosterol en la membrana citoplásmica. Por el exterior de lamembrana
citoplásmica, presentan una pared celular que está compuestafundamentalmente por polisacáridos y
por diversas proteínas. Los polisacáridos másimportantes son la quitina (polímero de n-acetil
glucosamina), el manano (polímero demanosa) y el glucano (polímero de glucosa).Los hongos presentan
básicamente dos tipos de morfologías: una multicelulardenominada filamentosa y otra unicelular
denominada levaduriforme. Los hongosfilamentosos (miceliares o mohos), representan el crecimiento
más típico de los hongos
GENERALmicroscópicos. En medios de cultivo sólidos y también sobre cualquier superficie en laque se
desarrollen, por ejemplo frutas u otros alimentos, producen colonias algodonosaso pulverulentas que
son muy características. Al microscopio óptico, los hongosfilamentosos presentan unas estructuras
tubulares, formadas por múltiples células, quese denominan hifas.Los hongos obtienen los nutrientes
por absorción y tienen un metabolismoquimioheterótrofo, ya que obtienen la energía y el carbono de
compuestos orgánicossintetizados por otros organismos. Este hecho condiciona su modo de vida, ya que
en lanaturaleza se encuentran asociados a la materia orgánica en descomposición,participando en los
ciclos naturales de reciclado del carbono y otros elementos naturaleso Bial - Arístegui 3 4 Rev Iberoam
Micol 2002 como patógenos oportunistas de losanimales y plantas. Los hongos pueden degradar una
gran cantidad de componentes,para lo que disponen de potentes exoenzimas que en algunos casos
pueden servirlescomo factores de virulencia en el hospedador.En el laboratorio, los hongos crecen
fácilmente en la mayoría de los medios de cultivo,necesitando una fuente de carbono orgánica e iones
amonio o nitrato como fuentes denitrógeno. Esta facilidad para crecer en cualquier medio de cultivo y la
presencia deconidios en el aire hace que sean contaminantes habituales en el laboratorio. Los
hongosfilamentosos son aerobios y los levaduriformes anaerobios facultativos. Susrequerimientos de
temperatura y de pH son poco exigentes y la mayoría crecen en unrango de pH de 2 a 9 y a temperaturas
entre 10 y 40 °C.La mayoría de los hongos presentan reproducción sexual y asexual. El estado sexual
sedenomina teleomorfo o meiospórico y el asexual anamorfo o mitospórico. Esrelativamente común que
un mismo hongo tenga dos nombres, el del estado anamorfo yel del estado teleomorfo, ya que suelen
haberse descubierto y nombrado de formaindependiente. En un grupo importante de hongos solamente
se conoce la reproducciónasexual, bien porque no se conocen las condiciones adecuadas para que se
desarrolle laforma sexual o porque ésta se ha perdido a lo largo de la evolución. Aunque lareproducción
asexual puede lograrse por fragmentación de las hifas, ya que cadafragmento puede producir una nueva
colonia, normalmente los hongos se reproducen,tanto sexual como asexualmente, por medio de
esporas. Los hongos producen millonesde esporas, cada una con la capacidad para desarrollar una nueva
colonia. Las esporassexuales se producen tras la fusión de los núcleos de dos hifas sexualmente
compatibleso de dos levaduras y posterior meiosis. La morfología de las esporas sexuales es muyvariada
y tiene gran interés para la identificación fúngica, ya que presentan diferenciascaracterísticas. OBJETIVOS
1. Conocer procesos de preparación en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de hongos 2.
Observar la morfología de los hongos y distinguir las diferentes estructuras que presenta. 3. Diferenciar
los diferentes tipos de hongos según su origen y materia
GENERAL orgánica que pueden degradar Una semana antes de realizar el laboratorio se deberán cultivar
hongos, los cuales serán observados en el laboratorio. En diferentes frascos de vidrio de plástico o vidrio
de boca ancha, colocar los siguientes materiales: a) un trozo de pan de marca o de panadería, b), un
trozo de tomate, papaya u otros alimentos en descomposición. Dejar la caja a la intemperie un día en un
lugar sombreado y después taparla. Colocar los frascos de preferencia en un lugar fresco por cinco días y
llevarla posteriormente al laboratorio. Materiales Microscopio Agujas de disección Solución salina al 1%
Gotero Pinza de punta roma Lugol Cajas de Petri Azul de metileno Portaobjetos Cubreobjetos Cuchilla-
bisturí Muestras de hongos Cinta transparente Champiñón Procedimiento en el laboratorio -Abrir los
frascos y separa los diferentes productos colocándolos en una caja de Petri. -Empleando el
estereoscópico, observa cada uno de los productos y describe la apariencia que tienen los mohos o
pelusas que se observan sobre ellos, así como las manchas que aprecies sobre los mismos. -En el cuadro
que se presenta en la sección de resultados deberás indicar que olor despiden los diferentes productos:
si es azucarado, picante como vinagre, rancio, fétido, etc. Estas observaciones son subjetivas. Igualmente
deberás indicar el color de los mohos, manchas o pelusas, si se ve como polvo o como gelatina.
GENERAL -Una vez descritos los productos observados con el estereoscópico, realizar una serie de
preparaciones temporales y observar con el microscopio compuesto la estructura microscópica que
presentan, añadir una gota de colorante y describir la estructura que logra identificar. Elaborar los
esquemas representativos de las observaciones y anéxala a este reporte. En caso de no observar hifas,
conidióforos o esporangióforos señala las características de forma y color que presentan conidiósporas y
esporangiósporas. -Respecto al champiñón, realizar con un bisturí un corte lo más fino posible tanto en
la cabeza del hongo como de su talo o estípite, colocarlo en el porta objeto, añadir una gota de azul de
metileno, describir a través de un esquema las estructuras que observa. -Técnica cinta adhesiva: colocar
sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el
cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. Cortar un trozo de cinta adhesiva
transparente de aproximadamente 2cm. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o
el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia
puede haber una excesiva concentración de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del
portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro. Una vez concluidas las observaciones
trata de agrupar a los hongos observados de acuerdo a las características comunes. Completar en el
siguiente cuadro y guía. Sustrato o Olor que Apariencia de Estructuras alimento despide las colonias
observadas Cuestionario 1. ¿En qué consisten las diferencias que presentan los hongos encontrados o
desarrollados en los distintos materiales? 2. ¿Qué origen tienen olores que despiden los diferentes
alimentos? Señalar si éstos pueden indicar cuál sustancia o compuesto degradan los hongos 3. Tras
realizar las observaciones con el microscopio compuesto, qué
GENERAL estructuras se pueden identificar en los organismos observados. 4. Con base en las
características observadas en los diferentes organismos, ¿Cómo se clasifican los organismos observados?
5. Realizar un esquema con las divisiones del reino hongo o fungi. PREPARACIÓN DE UN FROTIS
BACTERIANO PRÁCTICA No 4 INTRODUCCIÓNPara realizar el estudio microbiológico, ya sea humana o
animal, vegetal, industrial o delmedio ambiente, se debe someter a una serie de procesos
estandarizados de laboratorio,que permitan reconocer los microorganismos. Las coloraciones permiten
diferenciarformas, agrupaciones, características tintoriales y estructuras de los
diferentesmicroorganismos en las muestras.COLORACIONESLos colorantes biológicos tienen varias
aplicaciones en microbiología, se usan paraclasificar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas,
también para observar lasdiferentes estructuras microbianas como pared, capsula, espora, flagelo,
núcleo ygránulos, tienen utilidad para la observación de levaduras y estructuras, en medios decultivo se
emplean como indicadores o inhibidores selectivos.La morfología bacteriana se puede observar
claramente por medio de coloración de lascélulas. En las técnicas de coloración, las bacterias están
muertas por el hecho de fijarcon calor la muestra a la lámina y por el mismo proceso de coloración.Al
aplicar un colorante a la preparación microbiana, las bacterias se tiñen haciéndolasresaltar con claridad,
debido a la composición química tan diferente con respecto almedio que las rodea, además permite
estudiar las características morfológicas y emplearmayores amplificaciones microscópicas.Al poner en
contacto una célula bacteriana con un colorante, ocurre un intercambio deiones entre el colorante y los
sitios activos de la superficie o del interior de la célula. Losiones tenidos del colorante reemplazan a los
iones de los componentes celulares, porejemplo, el catión azul de metileno, reemplaza el catión de
sodio, dándoles el color.Según la estructura que el colorante tiñe en la bacteria, las coloraciones se
hanclasificado en:
GENERAL-Coloraciones simples: En las que se emplea un solo colorante para el proceso, porejemplo:
azul de metileno, cristal violeta, fucsina básica y safranina.-Coloraciones compuestas y diferenciales: En
estas se usa más de un colorante, ycon la misma coloración las células se tiñen de manera
diferente.Ejemplo: Tinción de Gram, Ziehl Neelsen.-Coloraciones especiales: permiten la observación de
estructuras especiales de labacteria como esporas, glicocálix, cápsulas, flagelos, etc. Ejemplo: Wayson
(esporo),Leifson (flagelo), rojo congo (coloración ácida) (glicocalix, cápsula), Van Stoltemberg(gránulos
metacromáticos).-Coloración de Gram:La coloración de Gram fue descrita en 1884, por el citólogo
Christian Gram, para teñirbacterias presentes en los tejidos. Actualmente continúa siendo la más
empleada enmicrobiología, esta clasificada como una coloración compuesta y diferencial, debido aque
en el proceso se utilizan dos colorantes: el cristal violeta y la fuscina básica, ydependiendo del colorante
que toma la pared bacteriana y dos grandes categoríasdenominadas: Gram positivas (se tiñen de cristal
violeta) y las Gram negativas (toman elcolor de la fuscina básica).Esta diferenciación es fundamental para
establecer específicamente el tratamiento conantibióticos. La reacción tintorial que presentan las
bacterias al ser coloreadas con Gramdemuestra una composición química y estructural de la paredes,
pues se evidenciatambién el comportamiento bacteriano específico frente a agentes físicos y
químicos.Reacción de las células frente a los componentes de la coloración de Gram. COMPONENTES
GRAM POSITIVAS (más GRAM NEGATIVAS concentración de (menos concentración de peptidoglicano)
peptidoglicano, doble capa lipídica) Cristal violeta (colorante Bacteria de color violeta. Bacterias de color
violeta básico) Lugol (fijador) Se forma complejo CV-I Se forma complejo CV-I. Bacteria de color violeta
Bacterias de color violeta Alcohol acetona Deshidratación de paredes Extracción de lípidos de la
(decolorante) celulares, retracción de pared, mayor porosidad, poros, disminución de la liberación del
complejo permeabilidad. colorante-fijador (CV-I). Presencia del complejo Bacteria incolora CV-I. Bacteria
de color violeta. Fucsina básica Bacteria de color violeta Bacteria de color rosadoLa pared celular es
responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la tinción deGram (1884). Las propiedad de
teñirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram
GENERALnegativas) por esta coloración es un criterio de clasificación importante correlacionablecon
otras propiedades bacterianas. Unos pocos organismos son Gram variables.Tanto las Gram positivas
como las Gram negativas captan la misma cantidad de cristalvioleta e yodo. El complejo CV-I sin embargo
es atrapado dentro de la célula Grampositiva por la deshidratación y la reducción del tamaño de los
poros de la paredresultante del proceso de lavado con solvente. En contraste en las Gram negativas la
fina(y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la extracción por elsolvente del
complejo.Avala lo antedicho el hecho que, si después de su tinción se tratan con lisosomabacterias Gram
positivas, se ve que los protoplastos siguen teñidos, pero pierden elcolorante si se los trata con alcohol.
Esto indica que el colorante es fijado a nivel delprotoplasto, y que la pared celular de las bacterias Gram
positivas es la que impide laextracción del colorante. Corroborando esta suposición se observa que
cuando B.subtilis emerge de su espora su pared celular está inmadura y se comporta como
Gramnegativas. Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva.La pared
bacteriana está compuesta por elementos comunes para la mayoría deespecies como son
peptidoglucano, ácido diaminopimélico, y componentes especialesque están presentes solo en algunas
especies como ácido teicoico – teicurónico en Grampositivas, lipopolisacaridos en Gram negativas, ácido
micólico – arabinogalactano enmycobacterias, formas meso – levo de ácido diaminopimélico o carencia
de ellas comosucede en Actinomices, Streptomyces y Nocardias, ausencia de peptidoglucano
enMicoplasma y Ureaplasma.Dichos componentes son aprovechados por la coloración de Gram que
clasifica lasbacterias en 4 grandes grupos: Cocos Gram positivos, Cocos Gram negativos, BacilosGram
positivos, Bacilos Gram negativos. Sin embargo algunos géneros bacterianos nopueden ser incluidos
dentro de la clasificación por la coloración de Gram porque notoman el colorante por su baja afinidad
(Ricketsias), ausencia de pared (micoplasmas),diferente composición química de la pared (mycobacteias,
Nocardias, Actinomices),carcterísticas especiales o no visibles al microscopio óptico común por su
reducidotamaño (Espiroquetas, Mycobacterias entre otras), formas diferentes a las
clásicas(Haemophilus, fusoespirilos). Como coloraciones alternas para estos microorganismosesta Ziehl
Neelsen, Giemsa, Wright, fluorocromos e incluso microsocopía electrónica.-Coloración de Wayson:
especial para endosporas, está clasificada como una coloraciónespecial, por demostrar la presencia de
una estructura especial, que caracteriza a labacteria. Que se pueda observar dicha estructura es de gran
importancia, paradeterminar el proceso de estudio que se va a seguir, realizar el diagnóstico exacto y
darun tratamiento adecuado al agente infeccioso.Las endosporas son cuerpos ovales de pared gruesa,
que se forman dentro de la célulavegetativa, donde se recoge el material celular y la célula se deshidrata
(se sintetizadipicolinato de calcio y el endosporo se recubre de una serie de capas protectoras comoel
oxosporium), dentro de la cual se encuentra la cubierta de la espora, que estácompuesta de una capa
parecida a la de la pared celular, por debajo de la cubierta de la
GENERALespora se encuentra la corteza, y dentro de ella, el núcleo o corazón, que contiene a lapared
celular usual. Así, la espora difiere de la estructura de la célula vegetativa.Las endosporas dan a la
bacteria alta resistencia a factores físicos y químicosdesfavorables, son características del género Bacillus
y Clostridium.-Coloración de rojo congo y tinta china (cápsula y glicocálix), los glicocálix son
sustanciasdensas o pegajosas, constituidas por glucanos solubles e insolubles que secretan lamayoría de
procariotas, sobre su pared: algunos forman una capa de poco espesollamada microcápsula, otros
forman capas de mayor diámetro que constituyen unaverdadera cápsula.El glicocálix cumple la función
de fijar los microorganismos patógenos a sus huéspedes,los cuales son difíciles de reconocer y destruir
por fagocitosis.Esta sustancia tiene especial importancia en la patogenicidad bacteriana y les daespecial
resistencia a la desecación.Las coloraciones utilizadas para la observación de estas estructuras son
denominadasnegativas (rojo congo, nigrosina y tinta china). También se pueden utilizar
colorantesbásicos, como en la coloración de Hiss, en la que la cápsula se colorea de azul pálido,
labacteria de color púrpura y el fondo de color claro.Estas coloraciones, por tener el ión colorante
cargado negativamente, son rechazadaspor la cápsula y el glicocálix, por eso la estructura queda
incolora, pero si se colorea elmedio que a envuelve, el resultado es un fondo coloreado sobre el cual se
observanpequeños agujeros incoloros que corresponden a la cápsula cuando es de escasodiámetro y al
glicocálix cuando el diámetro es más amplio. Si en el proceso de coloraciónse incluye un colorante
básico, este tiñe la pared de la bacteria, que se observacoloreada dentro de la cápsula o del glicocálix.Si
se desea incrementar el contraste de las células para la microscopía son suficientesprocedimientos
simples de tinción. El azul de metileno es un buen colorante simple queactúa sobre todas las células
bacterianas rápidamente y que no produce un color tanintenso que oscurezca los detalles celulares. Es
especialmente útil para detectar lapresencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor
parte del material nocelular no se tiñe.ELABORACION DEL FROTIS: Si el frotis se va a realizar a partir de
una muestra sólida,se debe poner sobre una lámina limpia y desengrasada una pequeña gota de agua
con elasa recta esterilizada, y con la punta del asa recta se toma ya sea una colonia bacterianaempleadas
en este laboratorio, se emulsiona con la gota de agua y luego se extiendesobre la lámina en un área no
mayor de 0.5 cm de diámetro, de manera que sobre unamisma lámina se pueden realizar hasta 3 frotis
diferentes. El frotis se deja secar atemperatura ambiente y nunca con calor, debido a que se facilita la
formación deabundantes aerosoles, precipitados de colorantes y alteraciones de la forma de
losmicroorganismos. Si la muestra es líquida se emplea el asa con argolla y no se requiereemulsionar la
muestra con agua, sino que directamente se extiende en un área de 0.5
GENERALcm, se deja secar a temperatura ambiente.FIJACION: en el proceso de fijación del frotis consiste
en pasar la lámina por el ladocontrario de donde se hizo el frotis sobre la llama del mechero tres veces
consecutivas,evitando que se caliente la lámina para que no se dañen las estructuras celulares, estose
hace debido a que tiene como fundamento matar y fijar a la lámina losmicroorganismos presentes en el
frotis.MATERALESOBLIGATORIO USO DE BATA DE MANGA LARGA-Por grupos llevar una toalla y jabón en
polvo para lavar el material Microscopio Frasco lavador Portaobjetos Mechero de alcohol Cubreobjetos
Papel de filtro Asa de siembra Cristal violeta Cubeta de tinción Lugol Pinzas Alcohol-acetona Yogur
Safranina Vinagre PalillosBacterias del Yogur.1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un
portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de
siembra.2. Tomar una muestra (gota) de yogur y expandirla en el porta, mezclarla bien col el agua.3.
Dejar secar y fijar con metanol.4. Teñir 2 o 3 minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.5. Esperar
hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En
este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden
deformarse o romperse.6. Observar en microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100 x. Para el
objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión, colocar cubre objetos y observar.
GENERALBacterias del Vinagre7. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos
limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra.8. Tomar
una muestra (gota) de vinagre y expandirla en el porta.9. Dejar secar y fijar al calor10. Teñir 2 o 3
minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.11. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar
su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución
de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.12. Observar en
microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100 x. Para el objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión,
colocar cubre objetos y observar.Bacterias del Sarro Dental13. Colocar una pequeña gota de agua en el
centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el
asa de siembra.14. Tomar con una aguja enmanglada una porción del sarro dental y expandirla en el
porta.15. Dejar secar y fijar al calor16. Teñir 2 o 3 minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.17.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del
mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las
células pueden deformarse o romperse.18. Observar en microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100
x. Para el objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión, colocar cubre objetos y observar.FIJACIÓN DE LAS
BACTERIAS AL PORTAOBJETOS Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos
segundos. Dejar enfriar el porta entre los pases. Con metanol (para bacterias procedentes de medio
líquido). Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Golpear el portaobjetos
por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol.
Esperar a que el metanol se evapore completamente.
GENERALUna vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden serobservadas al
microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con elproceso de tinción.RESUMEN 1.
Preparar los frotis bacterianos. 2. Teñir con cristal violeta 1min. 3. Lavar con abundante agua el exceso de
colorante. 4. Cubrir con Lugol 1min. 5. Lavar con agua el exceso de Lugol. 6. Decolorar con alcohol-
acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg) 7. Lavar con
abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teñir con safranina 1min. 9. Lavar con agua para
eliminar el colorante de contraste. 10. Secar la preparación. 11. Examinar al microscopio fijándose sobre
todo en el color de cada preparación.Los tiempos de exposición a los colorantes son orientativos. Cada
vez que se prepara labatería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas
diferenciasrespecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser necesario ajustar
lostiempos.POST LABORATORIO Describa las características más importantes de las bacterias, realizar
esquemas de las formas que presentan y los tipos de agrupaciones que presentan. Realizar una revisión
de las aplicaciones de células bacterianas más importantes a nivel ambiental e industrial. Busque en
esquemas (dibujos) las formas y agrupaciones bacterianas y dibujelas De 3 razones por las que a una
muestra se le debe realizar la coloración de Gram De acuerdo a la localización y tamaño de las esporas
como se clasifican. Mencione 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram negativas. PREPARACION Y
ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO. PRÁCTICA No 5INTRODUCCIONLos medios de cultivo son un
sistema artificial que permite las condiciones óptimas ynecesarias (de cantidad de nutrientes,
temperatura) para el desarrollo de determinados
GENERALmicroorganismos. De acuerdo con esto encontramos diferentes requerimientosnutricionales,
distintos tipos de medios en cuanto a consistencia: líquidos, sólidos)alrededor de 1.6% de agar),
semisólidos (0.8% de agar), que como se observa, laconsistencia depende de cantidad de agar o de su
ausencia, el agar es componenteesencial que proviene de las algas rojas, además que es resistente a la
acción dedegradación que realizan las bacterias. El conocimiento de la nutrición microbianapermite el
cultivo de los microorganismos en el laboratorio. Todos los microorganismostienen parecidos
requerimientos de macro y micronutrientes, aunque ha quedado caroque la forma en que cada
nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacteriasy otras, así como la cantidad relativa de
cada nutriente.TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO:Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como
tal, o bien incorporada a uncoloide en estado de gel) en la que están presentes todas las sustancias
necesarias parael crecimiento de un(os) determinados microorganismos. Los medios de cultivo
sepueden clasificar en primera instancia en tres grandes tipos:1. Medios complejos o indefinidos: su
composición química exacta se desconoce, yaque son el producto de realizar infusiones y extractos de
materiales naturales complejos:Ejemplos: Digeridos crudos de extracto de carne, extracto de levadura,
peptona de carne,extracto de levadura y caseína (de la leche).Con ellos se logra un tipo de medio rico
nutricionalmente, aunque indefinidoquímicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un
buen crecimientobacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confección es fácil y rápida
(bastapesar cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales,disolverlo en agua
y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con laque queramos trabajar). Estos
medios contienen fuentes variadas de C y N orgánicos,sales minerales y micronutrientes. Sin embargo
con ellos no podemos tener un controlnutricional preciso, ya que desconocemos la composición química
y proporción exacta delos distintos nutrientes.2. Medios sintéticos o definidos: se obtienen disolviendo
en agua destiladacantidades concretas de distintas sustancias químicas puras, orgánicas y/o orgánicas.
Lacomposición concreta de un medio sintético dependerá de la bacteria que queramoscultivar:
lógicamente un medio definido para una bacteria con grandes capacidadesbiosintéticas será más sencillo
que el medio definido de otra bacteria con menoresposibilidades biosintéticas.3. En tercer lugar,
podemos fabricar un tipo de medio “mezcla” de los anteriores,denominado medio semisintético: llevan
algunas sustancias químicas cuya naturaleza ycantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y
composición indefinidas.Cualquiera que sea el tipo de medio, de los 3 que acabamos de citar, podemos
elaborardos tipos de versiones, según su estado aparente:-Medios líquidos.
GENERAL-Medios sólidos: derivan de los líquidos simplemente añadiendo a la solución nutritivaun
coloide en estado gel, que solidifica (da consistencia) a esta solución.En los primeros tiempos de la
microbiología solo se conocía como sustancia gelificante,la gelatina. Sin embargo, presenta muchos
inconvenientes, ya que funde a 25C (porencima de esta temperatura el medio se licúa), y además,
muchas bacterias presentangelatinasas que hidrolizan la gelatina.El gelificante más usado es el agar-agar,
extraído de algas rojas (p.ej. Gelidium), del cualexisten versiones más o menos purificadas (las más puras
están más enriquecidas en elpolisacárido agarosa, son las que se emplean para los medios definidos, con
el objeto deevitar la introducción de sustancias contaminantes, inadvertidas que falseen
lasinterpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria).El agar presenta la ventaja de
que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100C,lo que permite su uso para la inmensa mayoría
de las bacterias, que son mesófilas.Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautótrofos) se
suele recurrir a ungelificante inorgánico, el silicagel o gel de sílice.Medios selectivos son aquellos que
permiten seleccionar un tipo (unos pocos tipos) demicroorganismos. En el laboratorio se emplean
mucho medios selectivos sólidos queincorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas
bacterias, peropermite el crecimiento de otras (p. ej. Medios que llevan violeta cristal inhiben
elcrecimiento de bacterias gran positivas).Medios diferenciales son aquellos que permite distinguir a
simple vista dos o más tiposde bacterias en función de su distinto comportamiento respecto de algún
nutriente delmedio. Este comportamiento diferencial se traduce normalmente en viraje de color deuna
sustancia indicadora presente en el medio.Ejemplos:En el medio EMB (eosina azul de metileno) ciertos
tipos de metabólicos de bacteriasproducen ácidos por fermentación de ciertas fuentes de carbono.El
medio agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual revela lacapacidad (y el tipo) de
hemólisis de ciertas bacterias.CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOSAntes de utilizar un
medio de cultivo se debe realizar el control de calidad paracomprobar si las características del medio
están dentro de las especificaciones dadas porla casa comercial y si la metodología de preparación es
satisfactoria. Cada lote de mediopreparado debe someterse a un programa mínimo de ensayo que
asegure su aceptacióny demuestre su actividad bacteriana típica.Valor de pH: compruebe el pH del
medio, cuando este, tenga la temperatura ambiente, el
GENERALcual debe coincidir con el señalado en la etiqueta.Esterilidad: Tome al azar una muestra del 3 al
5% del lote preparado e incúbelo a 37Cdurante 2 a 5 días, para observar si hay crecimiento microbiano.
Si hay presencia esindicativa de mala esterilización y debe repetirse toda la preparación.La esterilización
es el proceso mediante el cual se destruyen los microorganismos seacual sean sus características (células
viables, esporas etc.) patógenos o no, sobre elmaterial o dentro de él.Efectividad: Que en el medio
preparado efectivamente hay un desarrollo demicroorganismos, se pone el medio de cultivo al ambiente
o sirviendo una muestra.Estabilidad: con cierta periodicidad compruebe los datos mencionados en el
mediopreparado y conservado, para determinar si las condiciones de conservación
sonsatisfactoriasMATERIALESAutoclaveBalanzaEspátulaErlenmeyerCajas de petriGradillasAgua
destiladaPapel kraftProbetasErlenmeyerTaponesMedios de cultivo (agar y caldo)METODOLOGIAEn la
práctica, se realizará la preparación de medios de cultivo tales como: agar nutritivoy caldo
nutritivo.Realizar los cálculos correspondientes para la preparación de los medios, teniendo encuenta el
recipiente en el que se va a ensayar el medio, ya que los tubos de ensayo13X100 tapón algodón se
ponen 3 ml y en las cajas de petri se envasan 20 ml.Agregar en un erlenmeyer el medio (gramos) y
agregue la cantidad de agua calculada(ml). Agite el medio y póngalo a calentar con un tapón algodón
ligeramente puesto, dejehervir. En el caso de los caldos no se calientan.Posteriormente esterilice en
autoclave (calor húmedo). Es importante saber que haycondiciones que garantizan una verdadera
esterilización: tiempo: 15-30 minutos, presiónde vapor 15 libras/pulgadas cuadradas o 1.2 atmósfera y
temperatura de 121C.Deje enfriar a temperatura cachete y sirva en cajas de petri, en el caso de los tubos
sirva5 o 6 mililitros con la pipeta.
GENERALPara conservar los medios de cultivo, se colocarán en el refrigerador para evitar que sedañen y
se contaminen. Se recomienda guardar los medios dentro de bolsas de plásticoselladas.Realizar la
prueba de esterilidad para 2 cajas, una como control sin esterilizar y unaprueba de efectividad
exponiendo la caja al ambiente.PREGUNTAS PRELABORATORIO Qué efecto tiene el calor sobre los
microorganismos?. Qué efecto tiene el método de calor seco en la célula (microorganismos)?. Qué
efecto tiene la luz ultravioleta sobre la célula (microorganismos)?. Defina desinfectante, antiséptico,
bactericida.PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS Haga un esquema del autoclave con sus partes y su función
Esquematice etapas de esterilización en autoclave (en clase). Mencione los dos tipos principales de
esterilización y explique cada uno de ellos. PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR. FENÓMENOS
DE DIFUSIÓN, OSMOSIS Y PRESION OSMÓTICA LABORATORIO No. 6Toda célula posee un sistema
complejo de membranas, cuya función general es elintercambio de materiales entre la célula y el medio
acuoso externo o fluido extracelular yentre los organelos y el citoplasma de las células. Las membranas
sirven igualmentepara compartimentar enzimas y metabolitos celulares. Estas poseen la
propiedadfuncional de PERMEABILIDAD SELECTIVA, por ser permeables a las moléculas deagua, pero
más o menos impermeables a los solutos. Sin embargo, esta permeabilidadpuede verse afectada por
cambios de temperatura, tóxicos, solventes orgánicas y lacomposición química del medio que rodea la
célula.OBJETIVO: Observar el efecto de la concentración del medio sobre las células ycomprobar el
proceso de ósmosis en un osmómetro.PRIMERA PARTEMATERIALES:Azul de metilenoSolución rojo
neutroSolución salina (NaCl) al 2%, 0.6%
GENERALAgua destiladaHieloTermómetroTubos de ensayoGradillasPipetasVasos de precipitadoPinzas,
porta y cubreobjetos.PROCEDIMIENTO:DIFUSIÓN ESPONTÁNEA:Ponga 2 ml de agua destilada en 5 tubos
de ensayo marcados respectivamente del 1 al5. Tome la temperatura. Agregue azúl de metileno a cada
uno de los tubos así: Tubo 1:Una gota, Tubo 2: Dos gotas, Tubo 3: Tres gotas, Tubo 4: Cuatro gotas, Tubo
5: Cincogotas. Mida el tiempo de difusión en cada uno de los tubos, para ello registre el tiempo enel que
colocó las gotas de azúl de metileno y el momento en que la distribución de éstees uniforme. Registre el
tiempo de difusión en una gráfica (papel milimetrado) y diga quéefecto tiene la concentración sobre la
velocidad de difusión.Tome cuatro tubos de ensayo marcados del 1 al 4. En el tubo 1 adicione 2 ml de
agua a0°C, al tubo 2 adicione 2 ml de agua a temperatura ambiente, al tubo 3 adicione 2 ml deagua a
45°C y en cuarto tubo 2 ml de agua a 75°C. Inmediatamente después deadicionar el agua en los tubos
coloque dos gotas de azul de metileno en cada uno deellos y mida el tiempo de difusión. Registre
gráficamente los resultados y diga el efectoque tiene la temperatura sobre la velocidad de difusión
(realice una tabla y una gráfica).OSMOSIS A TRAVES DE LA MEMBRANA CELULARUtilizando los eritrocitos
como osmómetros, marque 3 tubos del 1 al 3 tresrespectivamente y deposite en cada uno de ellos 2 ml
de solución así: tubo 1: soluciónsalina al 2%, tubo 2: agua destilada, tubo 3: solución salina al 0.6%.
Luego adicione 1gota de sangre en los tres tubos de ensayo. Transcurridos 2 minutos transfiera con
unapipeta limpia a un portaobjetos previamente marcado (1 a 3) una gota de cada tubo ycúbrala con
una laminilla. Observe la muestra al microscopio y describa la forma quepresentan los eritrocitos o
glóbulos rojos. Con el ocular micrométrico indique el tamañode los eritrocitos en cada caso y compare.
El tamaño promedio de un eritrocito humanoes de 7.5 um. Haga sus esquemas.PREGUNTAS: Qué
procesos se desarrollaron durante la práctica, hubo hemólisis o normalidad en cada caso? La solución
era isotónica, hipotónica o hipertónica en cada caso. Qué le sucedería a una persona si se le inyectara
agua destilada en el torrente
GENERAL sanguíneo.SEGUNDA PARTEDETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN OSMÓTICA CELULAR Y
CÁLCULO DELA PRESIÓN OSMÓTICA MEDIANTE EL MÉTODO PLASMOLÍTICO.Coloque al lado izquierdo de
una lámina dos gota de solución de sacarosa al 0.1M ysobre ésta una hoja de elodea. Luego cubra el
montaje con una laminilla. Al lado derechode la misma lámina coloque en una gota de agua de acuario
otra hoja de tamañosemejante. No permita que se seque el líquido en los montajes. Observe al
microscopio20 células de la hoja y determine si se presenta plasmólisis en algunas de ellas. Paraefectos
prácticos se considera que una solución de determinada concentración produceplasmólisis cuando el
50% están plasmolizadas. Compare su observación con el montajede control. Repita el procedimiento
con las soluciones restantes de sacarosa (0.2, 0.3,0.4 y 0.5M) y registre sus resultados en una gráfica.
Indique la (s) concentración (es)hipo-osmótica, iso-osmótica e hiper-osmótica. Determine la
concentración osmótica de lacélula y calcule la Presión Osmótica (PO).Preguntas: § Qué factores
determinan el paso de sustancias a través de las membranas celulares. § Explique por qué las heladas
afectan a los cultivos. § Indique algunos procesos biológicos en plantas y animales relacionados con la
ósmosis. § Qué es transporte activo. De un ejemplo de este proceso. § Qué es diálisis y de un ejemplo. §
En que consiste la electrodiálisis. § Dé un ejemplo de una aplicación práctica de la diálisis en el campo de
la salud.
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GENERAL GUÍA DE LABORATORIO BIOLOGÍA GENERAL FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERÍA

GENERAL NORMAS DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIONORMAS DENTRO DEL LABORATORIOSiga las
siguientes recomendaciones que son generales a tener en cuenta en unlaboratorio 1. GENERALES
Mantenga las luces apagadas si no hay necesidad de su utilización. Los grifos de agua se deben manejar
con cuidado a fin de no romperlos y cerciorarse que no se está perdiendo agua inútilmente. Las llaves de
gas que abastecen los mecheros deben estar cerradas, en caso de fugas informar al Monitor o al
profesor directamente. Si hay fuerte olor a gas cohíbase de encender fuego hasta tanto no desaparezca
el olor a gas. Terminada la práctica cierre correctamente las llaves de paso. Estar puntual a la hora de
entrar al laboratorio, recuerde ese adagio que dice “Uno llega tarde porque se sabe que lo esperan, si
sabe que no lo esperan uno no llega tarde”. Se da un margen máximo de 5 minutos para su llegada Está
prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio, esto genera indisposición general y no ayuda al
desarrollo armónico de las prácticas No se permite juegos ni indisciplina dentro del laboratorio, éste es
un sitio donde el respeto y la academia nos debe ayudar a formar integralmente. No pierda tiempo,
trabaje rápido y con cuidado, sea diligente dentro del proceso de las distintas prácticas. Evite el
deambular por el espacio físico del laboratorio sin motivo aparente, céntrese en su trabajo con el grupo
de compañeros el cual le correspondió. De esta manera el trabajo rinde y se hace más armónico.
Finalizada la práctica la mesa de trabajo debe quedar en buen estado y aseada. Entregue el material de
laboratorio asignado en perfecto estado y de manera limpia. En caso que por accidente se haya
fraccionado algunos de los materiales dados, debe hablar con el profesor de la materia o en su defecto
con el monitor. Es claro que debe reponer el material que averió.

GENERAL 2. MATERIAL DEL LABORATORIO Dentro del laboratorio siempre utilizar bata de manga larga,
blanca, preferiblemente de algodón. Cuide los lentes del microscopio para que no se manchen con
colorantes. Una vez dentro el laboratorio lave y seque correctamente el material que previamente le han
entregado procurando no ocasionar fracturas del mismo. Todo el material, especialmente los aparatos
delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus
mecanismos. Jamás pipetee ácidos o Bases fuertes, sustancias toxicas o volátiles Nunca arroje materiales
sólidos (papeles, fósforos, vidrios, etc) en los sumideros o vertederos, utilice los implementos adecuados
para ello. Evite instalaciones o montajes inestables de aparatos durante las distintas prácticas. No
pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga
en el Centro. Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo superior
para regular la caída de líquido. Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada
debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la
visual al enrase sea horizontal. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos
debe evitarse la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo
se acercará a la llama inclinada y procurando que ésta actúe sobre la mitad superior del contenido y,
cuando se observe que se inicia la ebullición rápida, se retirará, acercándolo nuevamente a los pocos
segundos y retirándolo otra vez al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento
intermitente. En cualquier caso, se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona.
Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el
fin de evitar roturas. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se
engrasen.

GENERAL

GENERAL 3. EVITAR ACCIDENTES Sofoque cualquier principio de incendio con un trapo mojado Evite
inhalar vapores de manera directa de cualquier material. Si es absolutamente necesario porque la
practica así lo requiere, opere arrastrando los vapores con la mano hacia la nariz Lea con atención las
etiquetas que están adosadas a los envases de las sustancias químicas, evite accidentes por consumo de
sustancias químicas del laboratorio. Cerciórese antes de coger cualquier material de vidrio, hierro y
porcelana, que estos se encuentran a la temperatura ambiente para evitar posibles quemaduras En caso
de quemaduras con sustancias químicas o materiales expuestos a altas temperaturas, vaya directamente
con el docente a fin de utilizar algún paliativo para la quemadura. Evite por si solo hacer combinaciones
de sustancias. Hable con el docente si es procedente hacer algo al margen de lo manifestado en la guía
de laboratorio. Evite cortarse con vidrio cumpliendo las siguientes instrucciones: a. Nunca trate de
insertar tubos de vidrio, termómetros, embudos o cualquier otro objeto de vidrio en tapones de caucho,
o cualquier otro objeto sin humedecer el tapón y el objeto de vidrio. b. Proteja sus manos con una toalla
c. Para reducir el palanqueo que se ejerce sobre el vidrio, mantenga una mano en el tapón y con la otra
tome el material de vidrio muy cerca del extremo que se va a insertar, haga presión y el objeto de vidrio
se ira introduciendo lentamente. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse
alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará
al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho
cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos,
álcalis, etc.) deberá hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se
verterán bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarán resbalar suavemente por su pared.
Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: ácido sobre
agua.

GENERAL Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma que la
etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se deteriore dicha etiqueta y no se
pueda identificar el contenido del frasco. RECOMENDACIONES PARA EL ÉXITO DE LAS PRÁCTICAS DE
LABORATORIO Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de
su objetivo, fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas
se conozcan. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material . Llevar
el material solicitado en las distintas prácticas Trabajar con diligencia y de manera armónica de tal forma
que no se malgaste el tiempo y pueda terminar la practica en el tiempo estipulado Conformar grupos de
trabajo de acuerdo a las indicaciones del Docente o Monitor y presento los informes de laboratorio con
el grupo de trabajo con quien realizo la practica PREGUNTAS PREGUNTAS PRELABORATORIO
COMPLEMENTARIAS (Se entregan ocho días después de hacer este laboratorio) 1. Defina: Residuo solido
Residuo peligroso Residuo combustible De acuerdo con la clasificación Residuo corrosivo de residuos
diseñe una tabla Residuo reactivo que incluya: clase de residuo Residuo explosivo (NO PELIGROSOS,
Inflamabilidad reciclables, vidrio); contenido básico (toda case de vidrio no Residuo patógeno
contaminado), color (blanco) y Residuo volátil etiqueta. Residuo cortopunzante Biodegradable
Biosanitario Metales pesados Recalcitrante

GENERAL PRESENTACIÓN GENERAL DEL INFORME DE LABORATORIO El desarrollo práctico de la
asignatura Biología General se realiza a través de cuatro laboratorios. Todas las prácticas requieren del
manejo del microscopio para observar diferentes tipos de sistemas biológicos unicelulares,
pluricelulares, bacterianas, protista, hongo, animales y vegetales. Las guías de biología inician con un
conocimiento sobre microscopía, resaltando la importancia del microscopio como instrumento
fundamental para la observación y estudio de la diversidad celular y otros campos importantes de la
Biología microscópica; continúa con el estudio de la célula como entidad estructural y funcional de todos
los sistemas vivos, destacando la variabilidad que se presenta en cuanto a forma, tamaño y tipos
celulares. Las actividades de laboratorio están diseñadas con el objetivo de llevar a la práctica los
conceptos fundamentales que se imparten en teoría y de esta manera involucrarse experimentalmente
con la ciencia. En los instructivos de cada práctica encontrará una introducción, objetivos, procedimiento
y cuestionario, los cuales deben ser resueltos antes de ingresar al laboratorio ya que contienen aspectos
indispensables para comprender la práctica. Todas las prácticas indican qué material, equipo o reactivo
se utilizará y el procedimiento a seguir, para llevar a cabo los experimentos.Forma de presentar el
laboratorio: El estudiante deberá presentar en un cuaderno de laboratorio cada una de las prácticas
desarrolladas (no se reciben laboratorios en computador). El laboratorio se presenta en tipo artículo
científico: Título, resumen, abstract, introducción, metodología (materiales y métodos), resultados
(gráficas, figuras, gráficos), discusión de resultados, conclusiones y bibliografía. Las personas que no
asistan a las prácticas no podrán entregar informe de laboratorio.

GENERAL MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO PRÁCTICA No 1INTRODUCCIÓNEl
microscopio óptico es el instrumento principal en el laboratorio de biología, ya que estenos ayuda a
observar cosas que no podemos ver a simple vista.Existen tres tipos de microscopios en el laboratorio de
biología1. - Microscopio estereoscópico: este nos sirve para observar muestras vegetales ymuestras
animales, y consta de 2 objetivo, uno de 2 “x” y otro de 4 “x”, por lo tanto suaumento será de 20 y 40
veces.2. - Microscopio de luz polarizada: este se utiliza para observar metales, tiene 5 objetivosy un solo
ocular.3. - Microscopio óptico: este es el que se utiliza de manera más común en las prácticasde
laboratorio de biología, este microscopio consta de tres sistemas.a)Sistema mecánico: son todas las
partes que sirven de soporte al microscopio: el brazo,el pie o soporte, el carro o la platinab) Sistema de
iluminación: las fuentes de luz, el condensador y el espejoCLASES DE MICROSCOPIOS:Existen dos tipos
de microscopios: simples y compuestos� Microscopios simples : Consta de un solo sistema de lente �
Microscopios compuestos:Constan de dos (2) sistemas de lentes: el objetivo y el ocular.El microscopio
compuesto es un instrumento que aumenta considerablemente la imagende los objetivos que en él se
observan. Entre las variedades de éste microscopioencontramos el electrónico y el fotónico u óptico.
Este último tipo de microscopio estáformado por una parte mecánica y una parte óptica.

GENERALParte Mecánica:a. Pie o Base: Generalmente en forma de herradura o rectangular, es el apoyo
de lasdemás piezas del microscopio. El pie debe ser sólido y pesado para asegurar suestabilidad.b.
Columna o Brazo: Este elemento relaciona el tubo del microscopio con el pie; sostienela platina y el
condensador y de ella se agarrará el microscopio cuando se trasladadurante los trabajos. En algunos c.
Tubo del Ocular: Está colocado en la parte superiordel microscopio, donde están acoplados los oculares,
que pueden tener movimientovertical, con ayuda de una cremallera sobre la columna. En algunos
microscopios el tubodel ocular es inclinado y se mantiene fijo, en este caso se mueve la platina.d.
Revólver o Disco Giratorio: Está debajo del tubo ocular donde están acoplados losobjetivos, presenta
movimiento giratorio para facilitar el cambio de un objetivo a otro.e. Platina: Es una placa que puede ser
cuadrada, circular o rectangular, con un orificiocentral que permite el paso de la luz a través de ella. Su
función es sostener las placascon los preparados biológicos que se van observarf. Carro: es un dispositivo
ubicado sobre la platina, cuya función es sujetar y mover laplaca que se va a estudiar. Posee dos tornillos
que permiten movimientos horizontales(hacia adelante, hacia atrás, hacia la derecha y hacia la
izquierda) del portaobjeto.Cuando la platina carece del anterior dispositivo, lleva dos soportes para fijar
las placasllamadas ganchos o uñas.g. Mecanismos de Movimiento: Está integrado por el tornillo
macrométrico y elmicrométrico� Tornillo Macrométrico: Acerca o aleja rápidamente el objetivo del
preparado aobservar; su función es lograr un enfoque más o menos claro o aproximado del objeto. �
Tornillo Micrométrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente,
casiimperceptiblemente, permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo delocular. Durante
la observación y enfoque este tornillo debe estarse moviendopermanentemente; su función es darle
nitidez al enfoque.Parte óptica:Esta integrada por los objetivos, oculares y el aparato de iluminación
(espejo, diafragma,condensador y filtros). Estos elementos son los que permiten la iluminación,
ampliación yla visión aumentada del objetivo.a. Objetivo: Es la pieza más importante del microscopio.
Ellos se acoplan medianteroscas estándar al revólver y pueden ser cambiados de posición con sólo
rotarlos.Reciben el nombre de objetivos porque son los lentes que están más cerca del objeto.
Lamayoría de los microscopios tienen tres o cuatro objetivos. Las lentes de los objetivosson de aumentos
diversos, los más usados son:Objetivos de pequeños aumentos 3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de
grandes
GENERALaumentos 40x, 45x, 50x y objetivos de inmersión 90x, 95x y 100x.Las lentes de inmersión se
emplean con aceite de inmersión para conectar la lente frontal(lente inferior del objetivo) al porta-
objeto. Entre el objetivo y el objeto se produce unapérdida de luz por reflexión que se corrige
adicionando al preparado unas gotas de aceitede cedro (aceite de inmersión) cuyo índice de refracción
1.515, es próximo al cristal. Esteaceite también reduce o suprime por completo la refracción de los rayos
de luzprovenientes de la fuente luminosa. b. Ocular: Están colocados en la parte superior deltubo ocular.
Está formado por dos sistemas de lentes dispuestos de un cilindro. Sufinalidad es aumentar la imagen
dada por el objetivo y eventualmente corregir algunosdefectos de la misma. Reciben dicho nombre
porque son las lentes que se encuentranmás cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; 5x; 6,3x; 10x; 12.5x;
15x; 20x y 25x.El aumento de la imagen de un objeto observado a través de un microscopio, se
calculamultiplicando el número de aumento del objetivo con el cual se está trabajando por elnúmero de
aumento del ocular que se está utilizando.c. Aparato de iluminación: Está conformado por la fuente de
luz, el diafragma, elcondensador y los filtros.d. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial, cuando es
natural (solar) o procede de unfoco luminoso situado fuera del microscopio, un espejo recoge la luz del
medio y la reflejaa través del objeto y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente
unbombillo ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje.e. Diafragma:
Está ubicado entre la fuente de luz y el condensador, inmediatamentedebajo de la platina, su función es
regular la intensidad de luz que atraviesa el objeto. Eldiafragma tiene una palanquita que al moverla
hacia delante o hacia atrás agranda oachica el orificio central, dejando pasar mayor o menor cantidad de
luz respectivamente.f. Condensador: Es un elemento cónico que posee un sistema de dos
lentesconvergentes que recogen o concretan los rayos luminosos para enviarlos al objetivo porel agujero
de la platina.Existe un tornillo manual que permite guardar la altura del condensador. Esta graduaciónes
importante cuando se trabaja con objetivos de gran aumento (40x, 100x), ya que en lamedida que se
trabaja con éstos objetivos el condensador debe subirse. Lo contrariosucede cuando se trabaja con
objetivos de menor aumento (4x, 10x).g. Filtros: Entre la fuente de luz y el condensador de algunos
microscopios existe unportafiltros en el cual se puede colocar filtros a voluntad del observador. Los filtros
sonelementos de cuarzo o de vidrio, pueden ser de color azul, amarillo o verde. Ellosinterceptan el haz
de rayos luminosos antes de entrar al condensador, esto se hace conel objeto de seleccionar un tipo de
luz determinada para una experiencia dada.
GENERALLENTES:Las lentes son el componente más importante del microscopio; se fabrican de vidrio
uotros materiales transparentes.Pueden ser convexas o cóncavas en ambas superficies, planas en una
cara o tenercualquier combinación de éstas dos formas en su superficie.Las lentes son de dos tipos:
positivas y negativas.� Lentes Positivas: Hacen converger los rayos de luz, es decir, los concentra para
formaruna imagen real.� Lentes Negativas: Hacen divergir los rayos de luz, sin formar ninguna imagen
real.PREPARACIONES MICROSCÓPICAS:Debemos tener en cuenta que a través del microscopio
solamente se pueden observarobjetos que dejan pasar rayos de luz, por esta razón el preparado debe
ser lo másdelgado y transparente posible, pues un preparado grueso solo nos permite observar
unamancha negra. Los detalles solo se observan si la preparación es lo suficientementedelgada para que
sea transparente con la luz que recibe. Para realizar preparacionesmicroscópicas los porta y cubre-
objetos deben limpiarse antes de usarse. Un buenmétodo es guardarlos en alcohol y antes de utilizarlos
secarlos con un paño limpio y librede grasa. Los cubre-objetos deben limpiarse con mucho cuidado
porque son frágiles.Las preparaciones microscópicas pueden ser acuosas o en seco.Las preparaciones
acuosas son las más simples y fáciles usadas para examinarcualquier objeto fluido, como agua de
estanque o sangre. Se deposita una gotita dellíquido que se desea observar en el centro del porta-
objeto, se coloca el cubreobjetosobre el porta, forme con las dos láminas un ángulo de 45 grados y luego
deje caersuavemente la laminilla cubre-objeto sobre el preparado, evitando la formación deburbujas.El
líquido no debe rebosar los bordes del cubre-objeto, en caso de que suceda sequecuidadosamente el
líquido sobrante usando papel absorbente o papel toalla. Lapreparación queda así lista para la
observación. Estas preparaciones son de cortaduración porque se secan rápidamente; para hacerlas más
duraderas debe cerrarseherméticamente los bordes del cubre objeto; la duración de ésta preparación no
esindefinida. Los bordes se pueden cerrar con vaselina o esmalte.COLORANTES :Los colorantes son sales
compuestas por un ácido y una base. Se clasifican en ácidos,básicos y neutros, según la parte de los
mismos que imparta el color. En los colorantesácidos el grupo cromóforo, el que imparte el color, es el
componente ácido, elcomponente básico es incoloro. Lo contrario sucede con los colorantes básicos. Los
GENERALcolorantes neutros tienen coloreado el componente ácido y el básico.La mayoría de los
colorantes son sintéticos, aunque se emplean todavía algunosnaturales. La hematoxilina y el carmín son
los colorantes naturales más importantes parala tinción de tejidos. El carmín es producido por la
conchinilla (Coccus cacti). Lahematoxilina se extrae de la madera de un árbol de México, el palo
Campeche.Otro colorante es la orceína que se extrae de líquenes. Existen tres técnicas de tinción deuso
general: la coloración seca o de tejidos muertos, la coloración vital o de tejidos vivosy la histoquímica, en
la cual se utilizan las reacciones de los colores para hacer visible loselementos estructurales de las
células y de los tejidos. Partes de un microscopio ópticoRESUMEN PARTES DE UN MICROSCOPIO
ÓPTICOSISTEMA ÓPTICOOCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del
objetivo.OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.CONDENSADOR:
Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz
que entra en el condensador.FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
GENERALSISTEMA MECÁNICOSOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes
oculares. Puede ser monocular, binocular.REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite,
al girar, cambiar losobjetivos.TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y
micrométrico queconsigue el enfoque correcto. I. MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO1. Colocar el
objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio
se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.2. Colocar la
preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.3. Comenzar la observación con el
objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.4.
Para realizar el enfoque: a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el
tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre
el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. b.
Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el
macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un
enfoque fino.5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al
GENERAL cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia
de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si
se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.6. Empleo del objetivo de inmersión: a. Bajar
totalmente la platina. b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. c. Girar el revólver hacia el
objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. d. Colocar una gota mínima de
aceite de inmersión sobre el círculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición
del objetivo de inmersión. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y
la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el
objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay
que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observación de la
preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este
momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersión en posición de observación. j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un
papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. II.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor
aumentoen posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina nosobresale del
borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay
que mantenerlocubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usarde
forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo
GENERALdel polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlasmuy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto
sobre la platina si no se está utilizando elmicroscopio. 5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay
que limpiar el aceite quequeda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro
(menosrecomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido ycon
suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlocon una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo delimpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes ysu sujeción. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios
del microscopio (macrométrico,micrométrico, platina, revólver y condensador). 7. El cambio de objetivo
se hace girando el revólver y dirigiendo siempre lamirada a la preparación para prevenir el roce de la
lente con la muestra. No cambiarnunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo
mientras se estáobservando a través del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si
se derrama sobreella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un
pañohumedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar
lasesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión generalde los mismos.EL
DIBUJO EN BIOLOGIA, debe tener las siguientes características: Objetividad y claridad. Deben
representarse los objetos tal como son y con nitidez. Exactitud. Proporcionalidad entre el objeto y su
representación gráfica en toda su estructura. Trazos nítidos y firmes. Con ausencia de sombras y colores.
Nombres. Todas las estructuras que aparecen deberán llevar su nombre por fuera del dibujo en forma
ordenadaRECORDEMOS: Usar eficientemente el microscopio y los elementos y equipos a su disposición.
Estudiar e interpretar críticamente el material biológico para el estudio microscópico. Registrar las
imágenes microscópicas para ilustrar y discutir los resultados
GENERAL obtenidos. El examen microscópico proporciona información fundamental en investigación.
Mucha de esta información sólo puede ser obtenida a través de esta herramienta, por lo tanto, se debe
poner el máximo interés en la adquisición de una información lo más amplia y profunda posible sobre la
estructura microscópica y los métodos de trabajo utilizados para su observación y estudio.Objetivos
Identificar cada una de las partes que conforman el microscopio óptico y conocer los cuidados que se
deben tener para su manejo. Manejar los mecanismos de enfoque del microscopio Comprender la
importancia del microscopio como herramienta fundamental en biología celularMateriales (descripción
de equipos, reactivos, materiales de vidrio, plástico y acero,especificar los materiales que deben llevar
los estudiantes)Microscopio¼ hoja de papel periódicoPortaobjetosCubreobjetosTijerasPapel seda
bancoGoteroXilolFibras de lana o algodón de diferentes coloresGranos de polenMetodología –
Procedimiento 1. Cortar un pedazo de papel periódico de 1 cm2 de área y colocarlo sobre un cubre
limpio y seco 2. Adicionar con el gotero un poco de agua sobre el papel hasta humedecer y poner el
cubre objeto sobre el evitando que se formen burbujas. 3. Observar la muestra en el microscopio para
ello se debe colocar la muestra e la platina asegurándola con las pinzas. 4. Realizar las observaciones con
los objetivos de 10x, 40x, 100x
GENERAL 5. Ajustar las observaciones con los tornillos macrométrico y micromético. 6. Realizar los
esquemas de cada una de las observaciones. 7. Realizar el mismo procedimiento con fibras de lana o
algodón de diferentes colores y con Granos de polen. 8. Después de utilizar el microscopio limpiar
suavemente el microscopio y las lentes con xilol y papel seda 9. Cubrir y guardar debidamente el
microscopioCuestionario ¿Cómo se puede definir un microscopio? ¿Cuáles son las diferencias entre un
microscopio simple y uno compuesto? ¿Cuáles son las diferencias al observar la muestra con diferentes
tipos de lentes de aumento? ¿Que dificultades tendrías si al iniciar un trabajo lo hicieras con la lente de
mayor aumento? Cuando utilizas el objetivo de inmersión ¿por que es necesario utilizar un aceite con
este nombre? Por que el objetivo necesita un índice? Cuáles son los poderes del microscopia. Cuál es el
índice de refracción del agua y del aceite. Cuáles pueden ser las causas de las rupturas de los
micropreparados ¿Qué importancia tiene el microscopio en la biología celular? Investiga si es lo mismo
amplificación y resolución ¿y de que factores depende cada una de ellas?
GENERAL CÉLULAS VEGETALES Y CÉLULAS ANIMALES PRÁCTICA No 2 INTRODUCCIÓNLas células son la
porción más pequeña de materia viva capaz de realizar todas lasfunciones de los seres vivos, es decir,
reproducirse, respirar, crecer, producir energía,etc. Existen dos tipos de células con respecto a su origen,
células animales y célulasvegetales:En ambos casos presentan un alto grado de organización con
numerosas estructurasinternas delimitadas por membranas. La membrana nuclear establece una barrera
entreel material genético y el citoplasma. Las mitocondrias, de interior sinuoso, convierten losnutrientes
en energía que utiliza la planta.Tanto la célula vegetal como la animal poseen membrana celular, pero la
célula vegetalcuenta, además, con una pared celular de celulosa, que le da rigidez. La célula
vegetalcontiene cloroplastos: organelos capaces de sintetizar azúcares a partir de dióxido decarbono,
agua y luz solar (fotosínteis) lo cual los hace autótrofos (producen su propioalimento) y la célula animal
no los posee por lo tanto no puede realizar el proceso defotosíntesis. Pared celular: la célula vegetal
presenta esta pared que está formada porcelulosa rígida, en cambio la célula animal no la posee, sólo
tiene la membranacitoplasmática que la separa del medio. Una vacuola única llena de líquido que
ocupacasi todo el interior de la célula vegetal, en cambio, la célula animal, tiene varias vacuolasy son
más pequeñas.Las células vegetales pueden reproducirse mediante un proceso que da por
resultadocélulas iguales a las progenitoras, este tipo de reproducción se llama reproducciónasexual. Las
células animales pueden realizar un tipo de reproducción llamadoreproducción sexual, en el cual, los
descendientes presentan características de losprogenitores pero no son idénticos a él.CÉLULAS
VEGETALESMATERIALES: Una cebolla cabezona. Viruta de madera Semillas de durazno y cereza. Un
tomate, Una arracacha, yuca, papa y banano. Una hoja de lirio, elodea Láminas porta y cubres. Cuchilla o
bisturí. Papel absorbente. Aguja de disección. Pincel.
GENERALPROCEDIMIENTO.MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE CEBOLLA (Allium cepa)En un porta
objetos coloque dos muestras de epidermis de cebolla. Uno con agua y otrocon lugol. Observe la forma
de la célula y su disposición en el tejido. Identifique Paredcelular, membrana celular, citoplasma, vacuola,
núcleo, nucleolos. Cuántos núcleos ynucleolos presenta la célula. Diferencie entre las dos preparaciones.
Cuáles son lasventajas de utilizar colorantes. Qué organelos celulares se colorean con lugol.MONTAJE
HUMEDO DE EPIDERMIS DE LIRIO- ElodeaColoque un segmento de hoja de lirio en el porta objetos,
coloree con azul de metileno.Observe al microscopio y diga: cuántos tipos de células observa y qué
forma tienen,identifique y esquematice en las células epidérmicas las siguientes estructuras:
paredcelular, membrana celular, citoplasma, vacuolas y núcleo. Identifique un estoma, señaleel ostiolo y
diga su función. De cada una de las estructuras anteriores diga su función.MONTAJE HUMEDO DE
EPIDERMIS DE TOMATE (Lycopersicum esculentumMillar)Raspe la epidermis de tomate sobre la lámina
porta objetos, lavando con agua hasta quela epidermis esté translucida. Agregue tionina y observe: La
forma de las células, sucoloración, pared celular, la lámina media y los plasmodesmos que fraccionan
oseccionan la pared celular. Diga qué son y cuál es su función.OBSERVACIÓN DE CLOROPLASTOS.Tome
una hoja de elodea (Egeria densa) y ubique el ápice foliar. Pase a 40X y diga cómose llaman los organelos
de color verde que se observan, dónde se localizan y cuál es sufunción. Describa el tipo de movimiento
de los organelos y cómo se llama este tipo demovimiento?. Dibuje lo observado.OBSERVACIÓN DE
AMILOPLASTOS.Tome un trozo de papa (Solanum tuberosum L) y con el bisturí o cuchilla haga unraspado
y deposítelo sobre el portaobjetos; agregue una gota de lugol, cubra y lleve almicroscopio. Observe la
forma de los amiloplastos. Repita la misma operación conbanano (Musa sapientum L.).OBSERVACIÓN DE
CROMOPLASTOS.Tome una muestra de pulpa roja (mesocarpo) de tomate, extienda sobre la lámina
portaobjetos, agregue una gota de agua y lleve al microscopio. Observe las células grandes
ytransparentes con una pared delgada, dentro se encuentran unas granulaciones de colorrojo que
pueden agruparse alrededor del núcleo o estar dispersos en el citoplasma.
GENERALCÉLULAS ANIMALES METODOLOGÍA Muestra de sangre: Con la lanceta estéril realizar una
punción en un pulgar. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. Colocar un
portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se
pueda obtener una fina película de sangre. El porta absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar nunca
por encima de ella para no dañar los gota de sangre hematíes. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta
de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la
preparación. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la
desecación del colorante agregando más líquido. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina
dejándola actuar 1 minuto. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. Dejar secar aireando
el porta. Observar al microscopio. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Al microscopio se verán con un
dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No
tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes.
GENERAL Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, teñido
de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos: de tamaño aproximado al de
los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. Monolitos: son los leucocitos
mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo grande, redondo, son los más móviles y su función
principal es la fagocitosis. Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser
eosinófilos, con abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos. Las
plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción. Muestra de protozoarios:
-Agregar una gota de muestra de agua estancada (con gotero) en el portaobjeto, poner el cubreobjeto
con la precaución de que no se formen burbujas, observar en los objetivos de 10x y 40x.Actividad
ComplementariaEn el siguiente cuadro marca las estructuras que pudiste observarMuestras/ Células
Vegetales Células Animalesorganelos Cebolla Tomate Elodea Sangre Protozoarios 10 X 40X 10 X 40X 10 X
40X 10 X 40X 10 X 40XNúcleoMembranacelularParedcelularCitoplasmaVacuolasOtrosPOST
LABORATORIO 1. Indique las principales diferencias entre células vegetales y células animales (realice un
cuadro comparativo). 2. Porque los organelos celulares son de diferente formas y color 3. Describa los
organelos celulares que diferencias los dos tipos de células de estudio. 4. Revise diferentes tipos de
técnicas que se utilizan para estudia células vegetales y animales.
GENERAL OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS PRÁCTICA 3INTRODUCCIÓNLos hongos
constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descritoaproximadamente 500.000, pero se
estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones deespecies) que presentan una amplia distribución en la
naturaleza, contribuyendo a ladescomposición de la materia orgánica (Figura 1) y participando en los
ciclos biológicos.Un pequeño número son patógenos de animales y plantas.Figura 1. Estructura de
Hongos estructuras para la degradación de materia orgánica.Inicialmente, los hongos fueron clasificados
dentro del Reino Plantae ya que fueronconsiderados organismos inmóviles presentando estructuras que
se asientan firmementeen el sustrato sobre el que crecían. Sin embargo, cuando se ha aplicado la
biologíamolecular en los estudios taxonómicos se ha observado que los hongos están máspróximos al
Reino Animalia que al Plantae. En el sistema de clasificación de los seresvivos en cinco reinos, los hongos
se encuentran clasificados en el Reino Fungi, que sedivide en cuatro Phyla denominados Ascomycota (el
más extenso que comprende el 50%de los hongos conocidos y aproximadamente el 80% de los hongos
patógenos,Basidiomycota, Zygomycota, y Chytridiomycota, encontrándose en los tres primeros
loshongos patógenos humanos. Los hongos en los que no se conoce su reproducciónsexual, constituyen
un grupo heterogéneo denominado Deuteromicetos, hongosimperfectos o mitospóricos, que representa
el segundo grupo más numeroso y quetambién incluye patógenos humanos.Los hongos son organismos
eucariotas típicos (Figura 2) y poseen un núcleo quecontiene varios cromosomas (siete en Candida
albicans, ocho en Aspergillus nidulans ydieciséis en Saccharomyces cerevisiae) delimitado por una
membrana nuclear, connucléolo rico en ARN y orgánulos citoplásmicos, como mitocondrias, vacuolas,
retículoendoplásmico, aparato de Golgi y ribosomas 80 S. El citoplasma se encuentra limitadopor la
membrana citoplásmica, que es una doble capa de lípidos que contiene proteínas yesteroles y que
controla la permeabilidad celular y participa en la síntesis de la paredcelular. La estructura de las células
de los hongos es muy diferente de la de las bacteriasque son organismos procariotas. Aunque comparten
muchas estructuras, las células delos hongos se diferencian de las de las plantas en la composición de la
pared celular y enque carecen de cloroplastos y clorofila, y de las humanas en que tienen pared celular
yen la presencia de ergosterol en la membrana citoplásmica. Por el exterior de lamembrana
citoplásmica, presentan una pared celular que está compuestafundamentalmente por polisacáridos y
por diversas proteínas. Los polisacáridos másimportantes son la quitina (polímero de n-acetil
glucosamina), el manano (polímero demanosa) y el glucano (polímero de glucosa).Los hongos presentan
básicamente dos tipos de morfologías: una multicelulardenominada filamentosa y otra unicelular
denominada levaduriforme. Los hongosfilamentosos (miceliares o mohos), representan el crecimiento
más típico de los hongos
GENERALmicroscópicos. En medios de cultivo sólidos y también sobre cualquier superficie en laque se
desarrollen, por ejemplo frutas u otros alimentos, producen colonias algodonosaso pulverulentas que
son muy características. Al microscopio óptico, los hongosfilamentosos presentan unas estructuras
tubulares, formadas por múltiples células, quese denominan hifas.Los hongos obtienen los nutrientes
por absorción y tienen un metabolismoquimioheterótrofo, ya que obtienen la energía y el carbono de
compuestos orgánicossintetizados por otros organismos. Este hecho condiciona su modo de vida, ya que
en lanaturaleza se encuentran asociados a la materia orgánica en descomposición,participando en los
ciclos naturales de reciclado del carbono y otros elementos naturaleso Bial - Arístegui 3 4 Rev Iberoam
Micol 2002 como patógenos oportunistas de losanimales y plantas. Los hongos pueden degradar una
gran cantidad de componentes,para lo que disponen de potentes exoenzimas que en algunos casos
pueden servirlescomo factores de virulencia en el hospedador.En el laboratorio, los hongos crecen
fácilmente en la mayoría de los medios de cultivo,necesitando una fuente de carbono orgánica e iones
amonio o nitrato como fuentes denitrógeno. Esta facilidad para crecer en cualquier medio de cultivo y la
presencia deconidios en el aire hace que sean contaminantes habituales en el laboratorio. Los
hongosfilamentosos son aerobios y los levaduriformes anaerobios facultativos. Susrequerimientos de
temperatura y de pH son poco exigentes y la mayoría crecen en unrango de pH de 2 a 9 y a temperaturas
entre 10 y 40 °C.La mayoría de los hongos presentan reproducción sexual y asexual. El estado sexual
sedenomina teleomorfo o meiospórico y el asexual anamorfo o mitospórico. Esrelativamente común que
un mismo hongo tenga dos nombres, el del estado anamorfo yel del estado teleomorfo, ya que suelen
haberse descubierto y nombrado de formaindependiente. En un grupo importante de hongos solamente
se conoce la reproducciónasexual, bien porque no se conocen las condiciones adecuadas para que se
desarrolle laforma sexual o porque ésta se ha perdido a lo largo de la evolución. Aunque lareproducción
asexual puede lograrse por fragmentación de las hifas, ya que cadafragmento puede producir una nueva
colonia, normalmente los hongos se reproducen,tanto sexual como asexualmente, por medio de
esporas. Los hongos producen millonesde esporas, cada una con la capacidad para desarrollar una nueva
colonia. Las esporassexuales se producen tras la fusión de los núcleos de dos hifas sexualmente
compatibleso de dos levaduras y posterior meiosis. La morfología de las esporas sexuales es muyvariada
y tiene gran interés para la identificación fúngica, ya que presentan diferenciascaracterísticas. OBJETIVOS
1. Conocer procesos de preparación en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de hongos 2.
Observar la morfología de los hongos y distinguir las diferentes estructuras que presenta. 3. Diferenciar
los diferentes tipos de hongos según su origen y materia
GENERAL orgánica que pueden degradar Una semana antes de realizar el laboratorio se deberán cultivar
hongos, los cuales serán observados en el laboratorio. En diferentes frascos de vidrio de plástico o vidrio
de boca ancha, colocar los siguientes materiales: a) un trozo de pan de marca o de panadería, b), un
trozo de tomate, papaya u otros alimentos en descomposición. Dejar la caja a la intemperie un día en un
lugar sombreado y después taparla. Colocar los frascos de preferencia en un lugar fresco por cinco días y
llevarla posteriormente al laboratorio. Materiales Microscopio Agujas de disección Solución salina al 1%
Gotero Pinza de punta roma Lugol Cajas de Petri Azul de metileno Portaobjetos Cubreobjetos Cuchilla-
bisturí Muestras de hongos Cinta transparente Champiñón Procedimiento en el laboratorio -Abrir los
frascos y separa los diferentes productos colocándolos en una caja de Petri. -Empleando el
estereoscópico, observa cada uno de los productos y describe la apariencia que tienen los mohos o
pelusas que se observan sobre ellos, así como las manchas que aprecies sobre los mismos. -En el cuadro
que se presenta en la sección de resultados deberás indicar que olor despiden los diferentes productos:
si es azucarado, picante como vinagre, rancio, fétido, etc. Estas observaciones son subjetivas. Igualmente
deberás indicar el color de los mohos, manchas o pelusas, si se ve como polvo o como gelatina.
GENERAL -Una vez descritos los productos observados con el estereoscópico, realizar una serie de
preparaciones temporales y observar con el microscopio compuesto la estructura microscópica que
presentan, añadir una gota de colorante y describir la estructura que logra identificar. Elaborar los
esquemas representativos de las observaciones y anéxala a este reporte. En caso de no observar hifas,
conidióforos o esporangióforos señala las características de forma y color que presentan conidiósporas y
esporangiósporas. -Respecto al champiñón, realizar con un bisturí un corte lo más fino posible tanto en
la cabeza del hongo como de su talo o estípite, colocarlo en el porta objeto, añadir una gota de azul de
metileno, describir a través de un esquema las estructuras que observa. -Técnica cinta adhesiva: colocar
sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el
cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. Cortar un trozo de cinta adhesiva
transparente de aproximadamente 2cm. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o
el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia
puede haber una excesiva concentración de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del
portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro. Una vez concluidas las observaciones
trata de agrupar a los hongos observados de acuerdo a las características comunes. Completar en el
siguiente cuadro y guía. Sustrato o Olor que Apariencia de Estructuras alimento despide las colonias
observadas Cuestionario 1. ¿En qué consisten las diferencias que presentan los hongos encontrados o
desarrollados en los distintos materiales? 2. ¿Qué origen tienen olores que despiden los diferentes
alimentos? Señalar si éstos pueden indicar cuál sustancia o compuesto degradan los hongos 3. Tras
realizar las observaciones con el microscopio compuesto, qué
GENERAL estructuras se pueden identificar en los organismos observados. 4. Con base en las
características observadas en los diferentes organismos, ¿Cómo se clasifican los organismos observados?
5. Realizar un esquema con las divisiones del reino hongo o fungi. PREPARACIÓN DE UN FROTIS
BACTERIANO PRÁCTICA No 4 INTRODUCCIÓNPara realizar el estudio microbiológico, ya sea humana o
animal, vegetal, industrial o delmedio ambiente, se debe someter a una serie de procesos
estandarizados de laboratorio,que permitan reconocer los microorganismos. Las coloraciones permiten
diferenciarformas, agrupaciones, características tintoriales y estructuras de los
diferentesmicroorganismos en las muestras.COLORACIONESLos colorantes biológicos tienen varias
aplicaciones en microbiología, se usan paraclasificar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas,
también para observar lasdiferentes estructuras microbianas como pared, capsula, espora, flagelo,
núcleo ygránulos, tienen utilidad para la observación de levaduras y estructuras, en medios decultivo se
emplean como indicadores o inhibidores selectivos.La morfología bacteriana se puede observar
claramente por medio de coloración de lascélulas. En las técnicas de coloración, las bacterias están
muertas por el hecho de fijarcon calor la muestra a la lámina y por el mismo proceso de coloración.Al
aplicar un colorante a la preparación microbiana, las bacterias se tiñen haciéndolasresaltar con claridad,
debido a la composición química tan diferente con respecto almedio que las rodea, además permite
estudiar las características morfológicas y emplearmayores amplificaciones microscópicas.Al poner en
contacto una célula bacteriana con un colorante, ocurre un intercambio deiones entre el colorante y los
sitios activos de la superficie o del interior de la célula. Losiones tenidos del colorante reemplazan a los
iones de los componentes celulares, porejemplo, el catión azul de metileno, reemplaza el catión de
sodio, dándoles el color.Según la estructura que el colorante tiñe en la bacteria, las coloraciones se
hanclasificado en:
GENERAL-Coloraciones simples: En las que se emplea un solo colorante para el proceso, porejemplo:
azul de metileno, cristal violeta, fucsina básica y safranina.-Coloraciones compuestas y diferenciales: En
estas se usa más de un colorante, ycon la misma coloración las células se tiñen de manera
diferente.Ejemplo: Tinción de Gram, Ziehl Neelsen.-Coloraciones especiales: permiten la observación de
estructuras especiales de labacteria como esporas, glicocálix, cápsulas, flagelos, etc. Ejemplo: Wayson
(esporo),Leifson (flagelo), rojo congo (coloración ácida) (glicocalix, cápsula), Van Stoltemberg(gránulos
metacromáticos).-Coloración de Gram:La coloración de Gram fue descrita en 1884, por el citólogo
Christian Gram, para teñirbacterias presentes en los tejidos. Actualmente continúa siendo la más
empleada enmicrobiología, esta clasificada como una coloración compuesta y diferencial, debido aque
en el proceso se utilizan dos colorantes: el cristal violeta y la fuscina básica, ydependiendo del colorante
que toma la pared bacteriana y dos grandes categoríasdenominadas: Gram positivas (se tiñen de cristal
violeta) y las Gram negativas (toman elcolor de la fuscina básica).Esta diferenciación es fundamental para
establecer específicamente el tratamiento conantibióticos. La reacción tintorial que presentan las
bacterias al ser coloreadas con Gramdemuestra una composición química y estructural de la paredes,
pues se evidenciatambién el comportamiento bacteriano específico frente a agentes físicos y
químicos.Reacción de las células frente a los componentes de la coloración de Gram. COMPONENTES
GRAM POSITIVAS (más GRAM NEGATIVAS concentración de (menos concentración de peptidoglicano)
peptidoglicano, doble capa lipídica) Cristal violeta (colorante Bacteria de color violeta. Bacterias de color
violeta básico) Lugol (fijador) Se forma complejo CV-I Se forma complejo CV-I. Bacteria de color violeta
Bacterias de color violeta Alcohol acetona Deshidratación de paredes Extracción de lípidos de la
(decolorante) celulares, retracción de pared, mayor porosidad, poros, disminución de la liberación del
complejo permeabilidad. colorante-fijador (CV-I). Presencia del complejo Bacteria incolora CV-I. Bacteria
de color violeta. Fucsina básica Bacteria de color violeta Bacteria de color rosadoLa pared celular es
responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la tinción deGram (1884). Las propiedad de
teñirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram
GENERALnegativas) por esta coloración es un criterio de clasificación importante correlacionablecon
otras propiedades bacterianas. Unos pocos organismos son Gram variables.Tanto las Gram positivas
como las Gram negativas captan la misma cantidad de cristalvioleta e yodo. El complejo CV-I sin embargo
es atrapado dentro de la célula Grampositiva por la deshidratación y la reducción del tamaño de los
poros de la paredresultante del proceso de lavado con solvente. En contraste en las Gram negativas la
fina(y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la extracción por elsolvente del
complejo.Avala lo antedicho el hecho que, si después de su tinción se tratan con lisosomabacterias Gram
positivas, se ve que los protoplastos siguen teñidos, pero pierden elcolorante si se los trata con alcohol.
Esto indica que el colorante es fijado a nivel delprotoplasto, y que la pared celular de las bacterias Gram
positivas es la que impide laextracción del colorante. Corroborando esta suposición se observa que
cuando B.subtilis emerge de su espora su pared celular está inmadura y se comporta como
Gramnegativas. Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva.La pared
bacteriana está compuesta por elementos comunes para la mayoría deespecies como son
peptidoglucano, ácido diaminopimélico, y componentes especialesque están presentes solo en algunas
especies como ácido teicoico – teicurónico en Grampositivas, lipopolisacaridos en Gram negativas, ácido
micólico – arabinogalactano enmycobacterias, formas meso – levo de ácido diaminopimélico o carencia
de ellas comosucede en Actinomices, Streptomyces y Nocardias, ausencia de peptidoglucano
enMicoplasma y Ureaplasma.Dichos componentes son aprovechados por la coloración de Gram que
clasifica lasbacterias en 4 grandes grupos: Cocos Gram positivos, Cocos Gram negativos, BacilosGram
positivos, Bacilos Gram negativos. Sin embargo algunos géneros bacterianos nopueden ser incluidos
dentro de la clasificación por la coloración de Gram porque notoman el colorante por su baja afinidad
(Ricketsias), ausencia de pared (micoplasmas),diferente composición química de la pared (mycobacteias,
Nocardias, Actinomices),carcterísticas especiales o no visibles al microscopio óptico común por su
reducidotamaño (Espiroquetas, Mycobacterias entre otras), formas diferentes a las
clásicas(Haemophilus, fusoespirilos). Como coloraciones alternas para estos microorganismosesta Ziehl
Neelsen, Giemsa, Wright, fluorocromos e incluso microsocopía electrónica.-Coloración de Wayson:
especial para endosporas, está clasificada como una coloraciónespecial, por demostrar la presencia de
una estructura especial, que caracteriza a labacteria. Que se pueda observar dicha estructura es de gran
importancia, paradeterminar el proceso de estudio que se va a seguir, realizar el diagnóstico exacto y
darun tratamiento adecuado al agente infeccioso.Las endosporas son cuerpos ovales de pared gruesa,
que se forman dentro de la célulavegetativa, donde se recoge el material celular y la célula se deshidrata
(se sintetizadipicolinato de calcio y el endosporo se recubre de una serie de capas protectoras comoel
oxosporium), dentro de la cual se encuentra la cubierta de la espora, que estácompuesta de una capa
parecida a la de la pared celular, por debajo de la cubierta de la
GENERALespora se encuentra la corteza, y dentro de ella, el núcleo o corazón, que contiene a lapared
celular usual. Así, la espora difiere de la estructura de la célula vegetativa.Las endosporas dan a la
bacteria alta resistencia a factores físicos y químicosdesfavorables, son características del género Bacillus
y Clostridium.-Coloración de rojo congo y tinta china (cápsula y glicocálix), los glicocálix son
sustanciasdensas o pegajosas, constituidas por glucanos solubles e insolubles que secretan lamayoría de
procariotas, sobre su pared: algunos forman una capa de poco espesollamada microcápsula, otros
forman capas de mayor diámetro que constituyen unaverdadera cápsula.El glicocálix cumple la función
de fijar los microorganismos patógenos a sus huéspedes,los cuales son difíciles de reconocer y destruir
por fagocitosis.Esta sustancia tiene especial importancia en la patogenicidad bacteriana y les daespecial
resistencia a la desecación.Las coloraciones utilizadas para la observación de estas estructuras son
denominadasnegativas (rojo congo, nigrosina y tinta china). También se pueden utilizar
colorantesbásicos, como en la coloración de Hiss, en la que la cápsula se colorea de azul pálido,
labacteria de color púrpura y el fondo de color claro.Estas coloraciones, por tener el ión colorante
cargado negativamente, son rechazadaspor la cápsula y el glicocálix, por eso la estructura queda
incolora, pero si se colorea elmedio que a envuelve, el resultado es un fondo coloreado sobre el cual se
observanpequeños agujeros incoloros que corresponden a la cápsula cuando es de escasodiámetro y al
glicocálix cuando el diámetro es más amplio. Si en el proceso de coloraciónse incluye un colorante
básico, este tiñe la pared de la bacteria, que se observacoloreada dentro de la cápsula o del glicocálix.Si
se desea incrementar el contraste de las células para la microscopía son suficientesprocedimientos
simples de tinción. El azul de metileno es un buen colorante simple queactúa sobre todas las células
bacterianas rápidamente y que no produce un color tanintenso que oscurezca los detalles celulares. Es
especialmente útil para detectar lapresencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor
parte del material nocelular no se tiñe.ELABORACION DEL FROTIS: Si el frotis se va a realizar a partir de
una muestra sólida,se debe poner sobre una lámina limpia y desengrasada una pequeña gota de agua
con elasa recta esterilizada, y con la punta del asa recta se toma ya sea una colonia bacterianaempleadas
en este laboratorio, se emulsiona con la gota de agua y luego se extiendesobre la lámina en un área no
mayor de 0.5 cm de diámetro, de manera que sobre unamisma lámina se pueden realizar hasta 3 frotis
diferentes. El frotis se deja secar atemperatura ambiente y nunca con calor, debido a que se facilita la
formación deabundantes aerosoles, precipitados de colorantes y alteraciones de la forma de
losmicroorganismos. Si la muestra es líquida se emplea el asa con argolla y no se requiereemulsionar la
muestra con agua, sino que directamente se extiende en un área de 0.5
GENERALcm, se deja secar a temperatura ambiente.FIJACION: en el proceso de fijación del frotis consiste
en pasar la lámina por el ladocontrario de donde se hizo el frotis sobre la llama del mechero tres veces
consecutivas,evitando que se caliente la lámina para que no se dañen las estructuras celulares, estose
hace debido a que tiene como fundamento matar y fijar a la lámina losmicroorganismos presentes en el
frotis.MATERALESOBLIGATORIO USO DE BATA DE MANGA LARGA-Por grupos llevar una toalla y jabón en
polvo para lavar el material Microscopio Frasco lavador Portaobjetos Mechero de alcohol Cubreobjetos
Papel de filtro Asa de siembra Cristal violeta Cubeta de tinción Lugol Pinzas Alcohol-acetona Yogur
Safranina Vinagre PalillosBacterias del Yogur.1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un
portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de
siembra.2. Tomar una muestra (gota) de yogur y expandirla en el porta, mezclarla bien col el agua.3.
Dejar secar y fijar con metanol.4. Teñir 2 o 3 minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.5. Esperar
hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En
este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden
deformarse o romperse.6. Observar en microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100 x. Para el
objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión, colocar cubre objetos y observar.
GENERALBacterias del Vinagre7. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos
limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra.8. Tomar
una muestra (gota) de vinagre y expandirla en el porta.9. Dejar secar y fijar al calor10. Teñir 2 o 3
minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.11. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar
su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución
de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.12. Observar en
microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100 x. Para el objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión,
colocar cubre objetos y observar.Bacterias del Sarro Dental13. Colocar una pequeña gota de agua en el
centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el
asa de siembra.14. Tomar con una aguja enmanglada una porción del sarro dental y expandirla en el
porta.15. Dejar secar y fijar al calor16. Teñir 2 o 3 minutos, lavar el exceso de colorante y dejar secar.17.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del
mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las
células pueden deformarse o romperse.18. Observar en microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100
x. Para el objetivo de 100x aplicar aceite de inmersión, colocar cubre objetos y observar.FIJACIÓN DE LAS
BACTERIAS AL PORTAOBJETOS Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos
segundos. Dejar enfriar el porta entre los pases. Con metanol (para bacterias procedentes de medio
líquido). Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Golpear el portaobjetos
por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol.
Esperar a que el metanol se evapore completamente.
GENERALUna vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden serobservadas al
microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con elproceso de tinción.RESUMEN 1.
Preparar los frotis bacterianos. 2. Teñir con cristal violeta 1min. 3. Lavar con abundante agua el exceso de
colorante. 4. Cubrir con Lugol 1min. 5. Lavar con agua el exceso de Lugol. 6. Decolorar con alcohol-
acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg) 7. Lavar con
abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teñir con safranina 1min. 9. Lavar con agua para
eliminar el colorante de contraste. 10. Secar la preparación. 11. Examinar al microscopio fijándose sobre
todo en el color de cada preparación.Los tiempos de exposición a los colorantes son orientativos. Cada
vez que se prepara labatería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas
diferenciasrespecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser necesario ajustar
lostiempos.POST LABORATORIO Describa las características más importantes de las bacterias, realizar
esquemas de las formas que presentan y los tipos de agrupaciones que presentan. Realizar una revisión
de las aplicaciones de células bacterianas más importantes a nivel ambiental e industrial. Busque en
esquemas (dibujos) las formas y agrupaciones bacterianas y dibujelas De 3 razones por las que a una
muestra se le debe realizar la coloración de Gram De acuerdo a la localización y tamaño de las esporas
como se clasifican. Mencione 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram negativas. PREPARACION Y
ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO. PRÁCTICA No 5INTRODUCCIONLos medios de cultivo son un
sistema artificial que permite las condiciones óptimas ynecesarias (de cantidad de nutrientes,
temperatura) para el desarrollo de determinados
GENERALmicroorganismos. De acuerdo con esto encontramos diferentes requerimientosnutricionales,
distintos tipos de medios en cuanto a consistencia: líquidos, sólidos)alrededor de 1.6% de agar),
semisólidos (0.8% de agar), que como se observa, laconsistencia depende de cantidad de agar o de su
ausencia, el agar es componenteesencial que proviene de las algas rojas, además que es resistente a la
acción dedegradación que realizan las bacterias. El conocimiento de la nutrición microbianapermite el
cultivo de los microorganismos en el laboratorio. Todos los microorganismostienen parecidos
requerimientos de macro y micronutrientes, aunque ha quedado caroque la forma en que cada
nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacteriasy otras, así como la cantidad relativa de
cada nutriente.TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO:Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como
tal, o bien incorporada a uncoloide en estado de gel) en la que están presentes todas las sustancias
necesarias parael crecimiento de un(os) determinados microorganismos. Los medios de cultivo
sepueden clasificar en primera instancia en tres grandes tipos:1. Medios complejos o indefinidos: su
composición química exacta se desconoce, yaque son el producto de realizar infusiones y extractos de
materiales naturales complejos:Ejemplos: Digeridos crudos de extracto de carne, extracto de levadura,
peptona de carne,extracto de levadura y caseína (de la leche).Con ellos se logra un tipo de medio rico
nutricionalmente, aunque indefinidoquímicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un
buen crecimientobacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confección es fácil y rápida
(bastapesar cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales,disolverlo en agua
y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con laque queramos trabajar). Estos
medios contienen fuentes variadas de C y N orgánicos,sales minerales y micronutrientes. Sin embargo
con ellos no podemos tener un controlnutricional preciso, ya que desconocemos la composición química
y proporción exacta delos distintos nutrientes.2. Medios sintéticos o definidos: se obtienen disolviendo
en agua destiladacantidades concretas de distintas sustancias químicas puras, orgánicas y/o orgánicas.
Lacomposición concreta de un medio sintético dependerá de la bacteria que queramoscultivar:
lógicamente un medio definido para una bacteria con grandes capacidadesbiosintéticas será más sencillo
que el medio definido de otra bacteria con menoresposibilidades biosintéticas.3. En tercer lugar,
podemos fabricar un tipo de medio “mezcla” de los anteriores,denominado medio semisintético: llevan
algunas sustancias químicas cuya naturaleza ycantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y
composición indefinidas.Cualquiera que sea el tipo de medio, de los 3 que acabamos de citar, podemos
elaborardos tipos de versiones, según su estado aparente:-Medios líquidos.
GENERAL-Medios sólidos: derivan de los líquidos simplemente añadiendo a la solución nutritivaun
coloide en estado gel, que solidifica (da consistencia) a esta solución.En los primeros tiempos de la
microbiología solo se conocía como sustancia gelificante,la gelatina. Sin embargo, presenta muchos
inconvenientes, ya que funde a 25C (porencima de esta temperatura el medio se licúa), y además,
muchas bacterias presentangelatinasas que hidrolizan la gelatina.El gelificante más usado es el agar-agar,
extraído de algas rojas (p.ej. Gelidium), del cualexisten versiones más o menos purificadas (las más puras
están más enriquecidas en elpolisacárido agarosa, son las que se emplean para los medios definidos, con
el objeto deevitar la introducción de sustancias contaminantes, inadvertidas que falseen
lasinterpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria).El agar presenta la ventaja de
que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los 100C,lo que permite su uso para la inmensa mayoría
de las bacterias, que son mesófilas.Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautótrofos) se
suele recurrir a ungelificante inorgánico, el silicagel o gel de sílice.Medios selectivos son aquellos que
permiten seleccionar un tipo (unos pocos tipos) demicroorganismos. En el laboratorio se emplean
mucho medios selectivos sólidos queincorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas
bacterias, peropermite el crecimiento de otras (p. ej. Medios que llevan violeta cristal inhiben
elcrecimiento de bacterias gran positivas).Medios diferenciales son aquellos que permite distinguir a
simple vista dos o más tiposde bacterias en función de su distinto comportamiento respecto de algún
nutriente delmedio. Este comportamiento diferencial se traduce normalmente en viraje de color deuna
sustancia indicadora presente en el medio.Ejemplos:En el medio EMB (eosina azul de metileno) ciertos
tipos de metabólicos de bacteriasproducen ácidos por fermentación de ciertas fuentes de carbono.El
medio agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual revela lacapacidad (y el tipo) de
hemólisis de ciertas bacterias.CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOSAntes de utilizar un
medio de cultivo se debe realizar el control de calidad paracomprobar si las características del medio
están dentro de las especificaciones dadas porla casa comercial y si la metodología de preparación es
satisfactoria. Cada lote de mediopreparado debe someterse a un programa mínimo de ensayo que
asegure su aceptacióny demuestre su actividad bacteriana típica.Valor de pH: compruebe el pH del
medio, cuando este, tenga la temperatura ambiente, el
GENERALcual debe coincidir con el señalado en la etiqueta.Esterilidad: Tome al azar una muestra del 3 al
5% del lote preparado e incúbelo a 37Cdurante 2 a 5 días, para observar si hay crecimiento microbiano.
Si hay presencia esindicativa de mala esterilización y debe repetirse toda la preparación.La esterilización
es el proceso mediante el cual se destruyen los microorganismos seacual sean sus características (células
viables, esporas etc.) patógenos o no, sobre elmaterial o dentro de él.Efectividad: Que en el medio
preparado efectivamente hay un desarrollo demicroorganismos, se pone el medio de cultivo al ambiente
o sirviendo una muestra.Estabilidad: con cierta periodicidad compruebe los datos mencionados en el
mediopreparado y conservado, para determinar si las condiciones de conservación
sonsatisfactoriasMATERIALESAutoclaveBalanzaEspátulaErlenmeyerCajas de petriGradillasAgua
destiladaPapel kraftProbetasErlenmeyerTaponesMedios de cultivo (agar y caldo)METODOLOGIAEn la
práctica, se realizará la preparación de medios de cultivo tales como: agar nutritivoy caldo
nutritivo.Realizar los cálculos correspondientes para la preparación de los medios, teniendo encuenta el
recipiente en el que se va a ensayar el medio, ya que los tubos de ensayo13X100 tapón algodón se
ponen 3 ml y en las cajas de petri se envasan 20 ml.Agregar en un erlenmeyer el medio (gramos) y
agregue la cantidad de agua calculada(ml). Agite el medio y póngalo a calentar con un tapón algodón
ligeramente puesto, dejehervir. En el caso de los caldos no se calientan.Posteriormente esterilice en
autoclave (calor húmedo). Es importante saber que haycondiciones que garantizan una verdadera
esterilización: tiempo: 15-30 minutos, presiónde vapor 15 libras/pulgadas cuadradas o 1.2 atmósfera y
temperatura de 121C.Deje enfriar a temperatura cachete y sirva en cajas de petri, en el caso de los tubos
sirva5 o 6 mililitros con la pipeta.
GENERALPara conservar los medios de cultivo, se colocarán en el refrigerador para evitar que sedañen y
se contaminen. Se recomienda guardar los medios dentro de bolsas de plásticoselladas.Realizar la
prueba de esterilidad para 2 cajas, una como control sin esterilizar y unaprueba de efectividad
exponiendo la caja al ambiente.PREGUNTAS PRELABORATORIO Qué efecto tiene el calor sobre los
microorganismos?. Qué efecto tiene el método de calor seco en la célula (microorganismos)?. Qué
efecto tiene la luz ultravioleta sobre la célula (microorganismos)?. Defina desinfectante, antiséptico,
bactericida.PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS Haga un esquema del autoclave con sus partes y su función
Esquematice etapas de esterilización en autoclave (en clase). Mencione los dos tipos principales de
esterilización y explique cada uno de ellos. PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR. FENÓMENOS
DE DIFUSIÓN, OSMOSIS Y PRESION OSMÓTICA LABORATORIO No. 6Toda célula posee un sistema
complejo de membranas, cuya función general es elintercambio de materiales entre la célula y el medio
acuoso externo o fluido extracelular yentre los organelos y el citoplasma de las células. Las membranas
sirven igualmentepara compartimentar enzimas y metabolitos celulares. Estas poseen la
propiedadfuncional de PERMEABILIDAD SELECTIVA, por ser permeables a las moléculas deagua, pero
más o menos impermeables a los solutos. Sin embargo, esta permeabilidadpuede verse afectada por
cambios de temperatura, tóxicos, solventes orgánicas y lacomposición química del medio que rodea la
célula.OBJETIVO: Observar el efecto de la concentración del medio sobre las células ycomprobar el
proceso de ósmosis en un osmómetro.PRIMERA PARTEMATERIALES:Azul de metilenoSolución rojo
neutroSolución salina (NaCl) al 2%, 0.6%
GENERALAgua destiladaHieloTermómetroTubos de ensayoGradillasPipetasVasos de precipitadoPinzas,
porta y cubreobjetos.PROCEDIMIENTO:DIFUSIÓN ESPONTÁNEA:Ponga 2 ml de agua destilada en 5 tubos
de ensayo marcados respectivamente del 1 al5. Tome la temperatura. Agregue azúl de metileno a cada
uno de los tubos así: Tubo 1:Una gota, Tubo 2: Dos gotas, Tubo 3: Tres gotas, Tubo 4: Cuatro gotas, Tubo
5: Cincogotas. Mida el tiempo de difusión en cada uno de los tubos, para ello registre el tiempo enel que
colocó las gotas de azúl de metileno y el momento en que la distribución de éstees uniforme. Registre el
tiempo de difusión en una gráfica (papel milimetrado) y diga quéefecto tiene la concentración sobre la
velocidad de difusión.Tome cuatro tubos de ensayo marcados del 1 al 4. En el tubo 1 adicione 2 ml de
agua a0°C, al tubo 2 adicione 2 ml de agua a temperatura ambiente, al tubo 3 adicione 2 ml deagua a
45°C y en cuarto tubo 2 ml de agua a 75°C. Inmediatamente después deadicionar el agua en los tubos
coloque dos gotas de azul de metileno en cada uno deellos y mida el tiempo de difusión. Registre
gráficamente los resultados y diga el efectoque tiene la temperatura sobre la velocidad de difusión
(realice una tabla y una gráfica).OSMOSIS A TRAVES DE LA MEMBRANA CELULARUtilizando los eritrocitos
como osmómetros, marque 3 tubos del 1 al 3 tresrespectivamente y deposite en cada uno de ellos 2 ml
de solución así: tubo 1: soluciónsalina al 2%, tubo 2: agua destilada, tubo 3: solución salina al 0.6%.
Luego adicione 1gota de sangre en los tres tubos de ensayo. Transcurridos 2 minutos transfiera con
unapipeta limpia a un portaobjetos previamente marcado (1 a 3) una gota de cada tubo ycúbrala con
una laminilla. Observe la muestra al microscopio y describa la forma quepresentan los eritrocitos o
glóbulos rojos. Con el ocular micrométrico indique el tamañode los eritrocitos en cada caso y compare.
El tamaño promedio de un eritrocito humanoes de 7.5 um. Haga sus esquemas.PREGUNTAS: Qué
procesos se desarrollaron durante la práctica, hubo hemólisis o normalidad en cada caso? La solución
era isotónica, hipotónica o hipertónica en cada caso. Qué le sucedería a una persona si se le inyectara
agua destilada en el torrente
GENERAL sanguíneo.SEGUNDA PARTEDETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN OSMÓTICA CELULAR Y
CÁLCULO DELA PRESIÓN OSMÓTICA MEDIANTE EL MÉTODO PLASMOLÍTICO.Coloque al lado izquierdo de
una lámina dos gota de solución de sacarosa al 0.1M ysobre ésta una hoja de elodea. Luego cubra el
montaje con una laminilla. Al lado derechode la misma lámina coloque en una gota de agua de acuario
otra hoja de tamañosemejante. No permita que se seque el líquido en los montajes. Observe al
microscopio20 células de la hoja y determine si se presenta plasmólisis en algunas de ellas. Paraefectos
prácticos se considera que una solución de determinada concentración produceplasmólisis cuando el
50% están plasmolizadas. Compare su observación con el montajede control. Repita el procedimiento
con las soluciones restantes de sacarosa (0.2, 0.3,0.4 y 0.5M) y registre sus resultados en una gráfica.
Indique la (s) concentración (es)hipo-osmótica, iso-osmótica e hiper-osmótica. Determine la
concentración osmótica de lacélula y calcule la Presión Osmótica (PO).Preguntas:  Qué factores
determinan el paso de sustancias a través de las membranas celulares.  Explique por qué las heladas
afectan a los cultivos.  Indique algunos procesos biológicos en plantas y animales relacionados con la
ósmosis.  Qué es transporte activo. De un ejemplo de este proceso.  Qué es diálisis y de un ejemplo. 
En que consiste la electrodiálisis.  Dé un ejemplo de una aplicación práctica de la diálisis en el campo de
la salud.
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GMicroscopía Básica—Una Destreza Importante para Fitopatólogos (Español)

Melissa B. Riley, Department of Plant Pathology and Physiology, Clemson University

Traductor: José Carlos Ureta R. Departamento de Protección Vegetal – Facultad de Ciencias

Enseñar el cuidado y mantenimiento apropiado de los microscopios.

Determinar la magnificación de los microscopios.

Usted va a embarcarse en la aventura de su vida en el laboratorio de fitopatología. El microscopio es una

Figura 1. Partes de un Microscopio Compuesto

Componentes de esta práctica incluyen a:

PARTES DEL MICROSCOPIO.

COMO MOVER Y TRANSPORTAR LOS MICROSCOPIOS EN FORMA APROPIADA.

AJUSTE DE LAS PIEZAS OCULARES.

COLOCACIÓN Y ENFOQUE DE ESPECÍMENES EN UN PORTAOBJETOS.

ORIENTACIÓN DE LOS ESPECÍMENES EN UNA PLACA.

HAGA CLIC AQUÍ PARA NOTAS PARA EL INSTRUCTOR.

Botella de agua con gotero.

PARTES DEL MICROSCOPIO.

Tabla 1. Principales componentes de los microscopios, descripción general y usos

Cierre del Diafragma o Condensador

Botón de ajuste del condensador knob

Sube y baja el condensador.

Ajuste del macrométrico

Ajuste del micrométrico

Iluminador, Fuente lumínica

Controla la cantidad de luz que se transfiere a la muestra.

Ajuste usado para compensar la diferencia de observación de los ojos.

Usado para reflejar la luz a través de la muestra.

COMO MOVER Y TRANSPORTAR LOS MICROSCOPIOS APROPIADAMENTE.

Pregunta: ¿Cuál es el aumento de los oculares de su microscopio compuesto y de disección?

Microscopio compuesto: _______________

Microscopio de Disección: _______________

Pregunta: ¿Su microscopio compuesto tiene objetivo de inmersión? _______________

Pregunta: ¿Cuál es su aumento? ___________

¿Con el uso de aceite de inmersión? ____________

¿Sin el uso de aceite de inmersión? _____________

Figura 3. Localización de los lentes auxiliares (Cortesía de M. B. Riley)

Figura 3. Localización de los lentes auxiliares (Cortesía de M. B. Riley)

Figure 4. Magnification knob on side of dissecting microscope used to increase/decrease the

Figura 4. Botón de aumento a un costado del microscopio de disección usado para

Pregunta: ¿Cuál es el máximo aumento disponible cuando se utiliza su microscopio de disección?

AJUSTE DE LAS PIEZAS OCULARES.

COLOCACIÓN Y ENFOQUE DE ESPECÍMENES EN UN PORTAOBJETOS.

Corte alrededor de 0.5 centímetros alrededor de la letra "e".

Figura 7. Rotación del revólver para colocar en posición al objetivo deseado.

Usando la manija de abertura del diafragma, abra el mismo a aproximadamente la mitad de su

Figura 9. Botón para subir y bajar el condensador. (Cortesía de M. B. Riley)

Figura 9. Botón para subir y bajar el condensador. (Cortesía de M. B. Riley)

Ahora se procederá a efectuar las observaciones de su espécimen

ORIENTACIÓN DE LOS ESPECÍMENES EN UNA PLACA.

Pregunta: ¿Por qué lo anterior es importante? _________________________

Mientras observa el objetivo, asegúrese de que su movimiento no toque la placa y se deslice

Si se necesita incrementar los aumentos se repiten los pasos 17 a 19.

Añada la gota de aceite de inmersión sobre el centro de la placa en observación.

Use el tornillo micrométrico para observar una imagen nítida de su muestra.

USO DEL MICROSCOPIO DE DISECCIÓN:

Corte alrededor de 0.5 centímetros alrededor de la letra "e".

determine el aumento de su muestra usando la fórmula siguiente:

________ = ________ X ________ X __________

Después de que ha terminado esta práctica, recuerde el almacenamiento adecuado de su microscopio

Obtenga las respuestas a las preguntas del ejercicio (en inglés)

REFERENCIA ÚTIL Y COMPLEMENTARIA:

The American Phytopathological Society (APS)

3352 Sherman Ct.

St. Paul, MN 55121 USA

= X X __