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Revista de Física: Serie de conferencias

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Aislamiento y caracterización de bacterias de origen fluvial en

Mandailing Natal Sumatra del Norte
Para citar este artículo: Mhd. Yusuf Nasution et al 2021 J. Phys: Conf. Ser. 1819 012044

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Aislamiento y caracterización de bacterias de origen fluvial en
Mandailing Natal Sumatra del Norte

Mhd. Yusuf Nasution, Ahmad Shafwan S. Pulungan, Eko Prasetya, Salwa Rezeqi
Departamento de Biología, Universitas Negeri Medan

Yusufnasution1963@gmail.com

Resumen. El indicador de la contaminación del agua según las normas microbiológicas es la

presencia de contaminantes microbiológicos. Para ver la presencia de bacterias en las aguas, es
necesario estudiar el aislamiento y la caracterización de estas bacterias. La existencia del río en
la zona de Mandailing Natal ha experimentado un cambio de carácter debido a las actividades
de extracción de oro a lo largo del caudal del río. El objetivo de este estudio era determinar los
tipos de bacterias presentes en el río de la zona de Mandailing Natal, en Sumatra del Norte.
Esta investigación se realizó en el Laboratorio de Microbiología del Departamento de Biología
de la Facultad de Matemáticas y Ciencias Naturales de la Universidad Estatal de Medan. El
periodo de investigación fue de junio a octubre de 2020. La población en este estudio fue el
agua del río Batang Gadis Mandailing Natal, Sumatra del Norte. La muestra en este estudio es
el agua del río Batang Gadis alrededor de la mina de oro de Mandailing Natal, Sumatra del
Norte. La investigación se llevó a cabo mediante la toma de muestras y el aislamiento de las
bacterias, que incluyó la siembra de las muestras en medios de enriquecimiento, la purificación
de las colonias bacterianas y la observación de la morfología de las colonias bacterianas. Los
resultados mostraron que había 6 bacterias aisladas que vivían en las aguas del río en
Mandailing Natal, Sumatra del Norte.

1. Introducción
El sector minero, especialmente la minería del oro, necesita una atención especial por parte de la
opinión pública porque tiene un alto riesgo de daño medioambiental. Uno de los problemas que sigue
existiendo es el gran número de actividades mineras ilegales (sin permiso).El principal problema de la
minería del oro sin permiso es el uso de materiales y sustancias peligrosas en su procesamiento. Los
residuos producidos suelen seguir conteniendo mercurio [1]. El mercurio que se suele utilizar en la
extracción de oro es el mercurio elemental, que es el mercurio en su forma original [2].
En la zona de la Regencia de Mandailing Natal se almacena desde hace mucho tiempo contenido
mineral metálico (especialmente oro). Las reservas de extracción de oro en la Regencia de Mandailing
Natal (Madina), en la provincia de Sumatra del Norte, son bastante grandes y alcanzan 1,5 millones de
onzas (Au) con un contenido de 2,2 gramos de Au.
La minería de oro en Madina existe desde 2008. El aumento de la minería ilegal con materiales
peligrosos ha provocado diversas enfermedades causadas por el vertido de residuos peligrosos de
metales pesados en el medio ambiente. Una de las alternativas para tratar el medio ambiente
contaminado por el mercurio es la técnica de biorremediación, que es uno de los usos de los
microorganismos para mejorar el medio ambiente contaminado.
El papel de los microbios en el tratamiento de las aguas residuales ha proporcionado muchos
resultados alentadores [3]. Los compuestos orgánicos que se encuentran en las aguas residuales son
una fuente de nutrición para los microbios. Los microbios descomponen estos compuestos en formas
más simples y estables, de modo que los niveles de contaminantes contenidos en los residuos
disminuyen. Las reacciones enzimáticas de las bacterias son la clave para llevar a cabo una
transformación gradual

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proceso en la gestión de aguas residuales a partir de sustratos, que generalmente son materiales
orgánicos con disposiciones moleculares complejas, en elementos simples.
Se sabe que varios tipos de bacterias tienen la capacidad de reducir o absorber metales pesados. Las
bacterias que son resistentes al estrés del mercurio se denominan bacterias resistentes al mercurio
(BRM). Uno de los mecanismos que contienen las BRM para reducir el mercurio es la conversión de
Hg2 + a Hg0 con la enzima mercurio reductasa codificada por el gen merA [4].
El potencial que poseen las bacterias para reducir los metales pesados (mercurio) es una técnica
ecológica para mejorar el medio ambiente [5-6]. Como un esfuerzo inicial para determinar los tipos de
bacterias que son capaces de reducir el mercurio, es necesario realizar un estudio preliminar para
determinar los tipos de bacterias que son resistentes al contenido de mercurio en la zona de minería de
oro en Mandailing Natal, Sumatra del Norte.

2. Materiales y método
Esta investigación se llevó a cabo en el laboratorio de microbiología, Departamento de Biología,
Facultad de Matemáticas y Ciencias Naturales, Universidad Estatal de Medan. El tiempo de esta
investigación está previsto que comience de junio a octubre de 2020. La población de este estudio son
todas las bacterias obtenidas del suelo y el agua de la mina de oro de Mandailing Natal, Sumatra del
Norte. La muestra de este estudio fue una muestra total, es decir, todas las bacterias resistentes al
mercurio obtenidas de la mina de oro de Mandailing Natal, Sumatra del Norte.
Los principales materiales utilizados en este estudio fueron muestras de suelo y aguas residuales
obtenidas de la mina de oro de Mandailing Natal, en Sumatra del Norte, tejidos, papel de paraguas,
caucho, algodón, envoltura de plástico, papel de aluminio, máscaras, guantes, rotuladores, soluciones
estándar. mercurio, agua destilada, licores, alcohol al 70%, plástico adhesivo grueso, HCl, NaOH,
HNO3. Además, los medios necesarios son BHI (Brain Heart Infusion) Media, LDS (Lactose Double
Streng), EMBA (Eosin Methylen Blue Agar), Cled Agar, MSA (Manitol Salt Agar), MCA (Mac
Conkey Agar), Blood Agar , NaCl, HgCl2 producidos por Merck Alemania, así como reactivos para
las pruebas Gram positivas y negativas.
Los instrumentos utilizados en la investigación fueron: flujo de aire laminar con una marca local,
autoclave con la marca Hirayama HVE50, un horno con la marca Memmert, placas de Petri con la
marca pyrex, tubos de ensayo con la marca pyrex, incubadoras con la marca Memmert Churt, pipetas
de medición con la marca pyrex, armarios de hielo con la marca LG, aguja ose, balanza digital con la
marca sartorius, vaso de precipitados con la marca pyrex, espátula, Erlenmeyer con la marca pyrex,
vaso medidor con la marca pyrex, frasco medidor con la marca pyrex, micropipeta con la marca
Accumax pro.

2.1. Muestreo
Las muestras se tomaron en la mina de oro de Mandailing Natal, en el norte de Sumatra. Se
introdujeron 250 ml de muestras de cada refugio en frascos oscuros de reactivos y se transportaron con
medios de transporte. A continuación, se tomaron 50 ml de muestras de cada frasco y se mezclaron en
frascos, cada uno de los cuales contenía 450 ml de caldo nutritivo. A continuación, la mezcla se
propaga a temperatura ambiente durante 5 días. La propagación tiene como objetivo aumentar el
cultivo bacteriano.

2.2. Aislamiento de bacterias

- Plantar muestras en medios enriquecidos
Las muestras se sembraron en medios
enriquecidos BHI y LDS.
- Muestras de plantación en diversos medios de cultivo
Las muestras se cultivaron en los medios EMBA, Blood Agar, Cled Agar, MCA y MSA.
- Purificación de las colonias bacterianas
Se observaron las colonias bacterianas que crecieron en los medios de cultivo de Agar Sangre,
EMBA, Agar Cled y MCA para determinar las diferencias en las características de las colonias
bacterianas en crecimiento. Además, cada colonia con características diferentes se replantó en el medio
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de cultivo apropiado para obtener una colonia pura, y luego se incubó a 37oC durante 24 horas.

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2.3. Observación de la morfología de las colonias bacterianas

La observación de la morfología de las colonias bacterianas puras se llevó a cabo observando la forma
de la colonia, la forma del borde de la colonia y el color de la colonia.

2.4. Caracterización morfológica de las colonias bacterianas

Todos los aislamientos puros se observaron maxroscópicamente mediante la observación de la forma,
los bordes y el color de las colonias. A continuación, se realizaron observaciones microscópicas
mediante la tinción de Gram. La tinción de Gram se realiza haciendo preparaciones de muestras de
varios medios de cultivo en un portaobjetos que se fija al fuego, añadiendo una solución de cristal
violeta durante 1 minuto, haciendo fluir agua destilada sobre el portaobjetos, añadiendo una solución
de lugol durante 1 minuto, añadiendo una solución blanqueadora (solución de alcohol de acetona)
durante 10-20 segundos, haciendo fluir agua destilada sobre el portaobjetos, añadiendo solución de
safranina durante 15 segundos, haciendo fluir agua destilada sobre el portaobjetos, secándolo después
con papel de filtro y examinando el objeto con un microscopio [7].

3. Resultados y discusión
Los medios BHI y LDS se utilizan como medios de apoyo al crecimiento de los microorganismos para
que puedan crecer bien antes de plantarlos en medios específicos. Los resultados del crecimiento
bacteriano en los medios enriquecidos con LDS y BHI se plantaron 1 ose en medios generales, a saber,
Agar Sangre y Agar Cled, medios selectivos gramnegativos, concretamente EMBA y MCA, y medios
selectivos grampositivos, concretamente MSA. Los resultados del crecimiento de las colonias
bacterianas después de ser incubadas durante 24 horas a 37 0C mostraron el crecimiento de las
colonias con diversas características.
La siembra de muestras en varios medios como MCA, Agar Sangre, Agar Cled, EMBA y MSA
muestra los resultados en la Tabla 1 a continuación.

Tabla 1. Observaciones de las colonias bacterianas en diversos

medios de cultivo
No Medio Medio Morfología bacteriana
selectivo Formulario Elevación Color
1 BHI MCA CircularFlatred
2 BHI Agar de Circularumbonatesilver
sangre
3 BHI Cled Agar CircularumbonateBlanco y amarillo
4 BHI EMBA CircularFlatred
5 BHI MSA ---
6 LDS MCA CircularFlatred
7 LDS Agar de CircularFlat plata
sangre
8 LDS EMBA CircularVerde plano
9 LDS CledAgar Circularumbonateyellow
10 LDS MSA ---

La caracterización morfológica macroscópica se llevó a cabo observando directamente la

morfología de los aislados bacterianos que crecieron en el medio [8]. Visualmente, las características
que se pueden observar de la colonia incluyen la forma de la colonia, la forma del borde y el color de
la colonia [9- 10].
Según los resultados de las observaciones de las características macroscópicas de las colonias
bacterianas en los medios MCA, Agar Sangre, EMBA y Agar Cled, que habían sido plantadas
previamente en medios enriquecidos con BHI y LDS, había 6 colonias bacterianas con características
diferentes. De las seis colonias, todas las características de las colonias que se plantaron con éxito en
varios medios pueden verse en la tabla 3 como sigue.

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Tabla 2. Características de las colonias bacterianas en varios medios.

No. Colonia CaracterísticaImagen
1. Circular, plana y
plateada

2. Circular, plano y verde

3. Circular, plana y
morada

4. Circular, plano y
rojo

5. Circular, plano y
rojo

6. Circular, plano y
rojo

El crecimiento bacteriano en medios comunes, concretamente en Agar Sangre, muestra colonias con
formas redondas, planas
bordes, y color gris seco. Medios sanguíneos Para poder distinguir las bacterias hemolíticas y no
hemolíticas en función de su capacidad de lisar los glóbulos rojos. Las colonias bacterianas en
crecimiento muestran la formación de hemólisis alfa, es decir, la lisis de algunos glóbulos rojos y de la
hemoglobina en el medio Agar Sangre. Luego, en el medio Agar Cled, se obtuvieron colonias
bacterianas con formas redondas, bordes ondulados y de color blanco amarillento. La presencia de
lactosa y de indicadores de pH, concretamente el azul de bromtimol en el medio Agar Cled, es
fermentada por las bacterias para formar colonias amarillas.
Además, en los medios selectivos para gramnegativos, concretamente el EMBA, se obtuvieron
colonias con formas redondas, bordes planos y de color rojo oscuro. El medio EMBA contiene lactosa,
peptona, eosina y azul de metileno. El crecimiento de las colonias es de color rojo oscuro debido a la
capacidad de los microbios para fermentar laksota. La eosina y el azul de metileno sirven para
acentuar las diferencias de color de las colonias. Mientras que en el medio MCA, las colonias
bacterianas son redondas, de bordes planos y de color rosa. El medio MCA contiene peptona, NaCl,
sales biliares, indicador de pH rojo neutro y violeta de cristal. El crecimiento de las colonias rojas
indica la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa.
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Después, en el medio selectivo para gramíneas positivas, MSA, no hubo crecimiento de colonias
bacterianas. El medio MSA contiene NaCl, manitol y un indicador de pH rojo fenol. Las colonias
bacterianas en crecimiento son capaces de fermentar el manitol hasta convertirlo en ácido, de modo
que cambia el color del indicador rojo de fenol de rojo a amarillo. Mientras que en esta muestra, no
hubo crecimiento bacteriano.
A continuación, los resultados de las observaciones de caracterización bacteriana al microscopio
mediante tinción de Gram indicaron que los seis aislados eran bacterias Gram negativas. En la tinción
de Gram, la carga positiva del violeta de cristal atraviesa la pared celular y la membrana celular y
luego se une a los componentes de la célula que están cargados negativamente. La adición de yodo
para mejorar la coloración violeta de cristal mediante la formación de un complejo violeta de cristal-
lugol. Luego, en las bacterias Gram negativas, el alcohol puede aumentar la porosidad de la pared
celular disolviendo los lípidos de la capa de la membrana externa y disolviendo el complejo violeta
cristalino-lugol de la célula, lo que provoca la decoloración. Cuando se deja caer la safranina, las
células de las bacterias Gram negativas absorben un contratinte que hace que las bacterias Gram
negativas muestren un color rojo [11-12].

4. Conclusión:
Según los resultados de la investigación, se encontraron 6 aislamientos bacterianos puros en el agua del
río Batang Gadis. Según la caracterización microscópica, todos los aislados puros eran bacterias
gramnegativas.

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