TEMA-4-BIOLOGIA.

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Biología e Introducción Al Laboratorio Biológico

1º Grado en Farmacia

Facultad de Farmacia
Universidad de Sevilla

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
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TEMA 4: CITOPLASMA Y GENOMA BACTERIANO

1. MATRIZ CITOPLASMÁTICA
El protoplasto es la mínima unidad con vida que se puede estipular. El protoplasto
viene dado por la membrana más todo el contenido interior (la matriz es parte de él).
Está formado por un 70% de agua.
Para obtener protoplastos, el cultivo bacteriano se introduce en una solución isotónica
para así evitar la lisis, y se trata el cultivo de bacterias con lisozima (enzima capaz de

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destruir los peptidoglucanos que encontramos en la pared celular).

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1.1. RIBOSOMAS
Presentes en todas las bacterias; difieren de los ribosomas de
eucariotas por la cantidad de proteínas y moléculas de ARNr que
contienen, además de ser más pequeños y menos densos. Su
función es la síntesis de proteínas. Son 70s con una subunidad
grande 50s y otra pequeña 30s. “S” significa coeficiente de
sedimentación. Estas proteínas pueden quedarse en el interior de
la célula o transportase al exterior a través de la membrana.
Estos podemos encontrarlos:
-Dispersos en la matriz citoplasmática, relacionados con la síntesis de proteínas
participantes en procesos del interior de la célula.
-Ligados a la membrana plasmática, en este caso los ribosomas llevan a cabo la
síntesis de proteínas que posteriormente son transportados al exterior para su
secreción.
Por último, destacar que las células en rápido crecimiento hay de 15000 a 20000
ribosomas, que suponen un 15% del peso de la célula.

1.2. GRÁNULOS DE RESERVA

Consisten en repertorios o cúmulos de distintas sustancias orgánicas o inorgánicas que
pueden estar envueltos o no en una semimembrana (no lipi ́dica) que se encuentra en
el citoplasma.
Tienen carácter taxonómico. No lo tienen todas las bacterias, solo algunas.

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Existen:
 GRÁNULOS DE CIANOFICINA
Son inclusiones sin membrana que podemos observar al microscopio óptico ya
que son de gran tamaño. Acumula el exceso de nitrógeno en forma de
polipéptidos, formados por aminoácidos ricos en nitrógeno como arginina (Arg)
y aspartato (Asp). Su síntesis se realiza en el exterior.
 GRÁNULOS DE POLI-β-HIDROXIBUTIRATO (PHB)
Son polímeros para el almacenamiento de carbono. Constituyen a gránulos rodeados

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de una semimembrana que los separa del citoplasma. Se pueden ver con microscopio
óptico por contraste de fases tiñéndolos con negro sudán. Algunas bacterias pueden
almacenar otros compuestos ricos en C como glucógeno (polímero de glucosa), pero
estos son mucho más pequeños.
 Otras inclusiones sin membrana:
Algunas bacterias pueden almacenar polifosfatos (como reserva de P) o gránulos de
azufre (como reserva de S).
1.3. OTRAS INCLUSIONES
Estas inclusiones no deben confundirse con los gránulos de reserva, pues en este caso

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están rodeadas de ciertas membranas que aportan algunas ventajas, siendo
semejantes a cualquier membrana, pero no presentan bicapa lipídica. Se diferencian:
 MAGNETOSOMAS
Son partículas cristalinas de magnetita (𝐹𝑒3 𝑂4 ), que convierten así a la célula en un
dipolo magnético a fin de orientar a la misma. Están alineados en cadenas, se suma el
momento magnético y su tamaño oscila entre 35-120 nm. Tienen valor taxonómico, ya
que su forma puede ser cuadrada, rectangular o acicular; típica de cada especie. Estos
se encuentran rodeados de una semimembrana (monocapa de lípidos: fosfolípidos,
proteínas y glucoproteínas).
 VESÍCULAS DE GAS
Estructuras pequeñas, huecas y cilíndricas. Presentan una pared rígida constituida por
proteína GvpA mayoritariamente (97%) de bajo peso molecular, que no permite el
paso del agua pero si de los gases atmosféricos; y por la proteína GvpC (3%) que
refuerza la vesícula. Estas vesículas de gas, en algunas ocasiones, se unen formando
moléculas de gran tamaño que reciben el nombre de vacuolas de gas. Las presentan
bacterias que viven en medios acuáticos, debido a que desempeñan un papel de
regulación de la flotabilidad y lograr así luz, oxígeno y nutrientes.
1.4. CHAPERONAS MOLECULARES
Son proteínas que facilitan el plegamiento a los polipéptidos recién formados; es decir,
las organizan, ya que sino lo hicieran, estas podrían “enrredarse”. Estas reconocen
zonas polipeptídicas no plegadas o proteínas parcialmente desnaturalizadas y se unen
a estos por la parte hidrofóbica para ayudar a su correcto plegamiento.
Su papel es fundamental, ya que la matriz citoplasmática está llena de cadenas de
polipéptidos y proteínas en proceso de formación, que podrían plegarse de forma

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inadecuada. Si encuentran por el citoplasma cadenas mal ligadas, se encargan de
desdoblarlas y volverlas a plegar bien. Si no se pueden plegar bien, se degradará para
volver a usar esos aminoácidos.

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2. ENDOSPORA BACTERIANA
2.1. CARACTERÍSTICAS GENERALES Y PROPIEDADES BIOLÓGICAS
Es una estructura especial inactiva metabólicamente de resistencia a condiciones
ambientales estresantes (calor, presencia de desinfectantes qui ́micos, radiación UV,

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etc.). No están presentes en todas las bacterias, ya que necesitan una serie de genes
específicos para poseerla; es propia de las gram positivas del suelo (Bacillus,
Clostridium y Sporosarcina). Son especialmente resistentes a la temperatura y no
tienen carácter reproductor. Tienen valor taxonómico y forma una décima parte del
tamaño vegetativo de la célula.
Dada la termoresistencia y el hecho de que haya bacterias que tengan endosporas que
son patógenas (sobre todo bacilos) para el hombre, es muy importante deshacerse de
ellas. Tienen mucha importancia en microbiologi ́a cli ́nica e industrial.
Solo aquellos microorganismos que tienen genes que sintetizan endosporas, pueden
formar esporas. Las esporas pueden ser eliminadas con autoclave (121 de
temperatura, 1 atm de presión durante 20 minutos), debido a su termoresistencia.
2.2. FORMA, TAMAÑO Y DISPOSICIÓN
FORMA: ovales, esféricas o cili ́ndricas.
TAMAÑ O: deformante o no deformante.
DISPOSICIÓ N: central, subterminal y terminal.
NOTA: pueden contener un cristal paraesporal.

2.3. ¿QUÉ APORTA AL MICROORGANISMO? CARACTERÍSTICAS

 Resistencia a agentes fisicos
́ como calor, desecación o radiaciones; y a agentes
́
quimicos, como desinfectantes, colorantes, lisozima, etc.
 Refringencia: tienen un i ́ndice de refracció n muy distinto al del resto de la
célula. Esto es debido a que tiene un gran número de proteínas hidrofóbicas. Se
observan muy bien en el microscopio de contraste de fases.
 Estructura muy deshidratada.

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 Criptobiosis: La criptobiosis es un estado que consiste en la suspensión de los
procesos metabó licos, en la que algunos seres vivos entran cuando las
condiciones ambientales llegan a ser extremas. Un organismo en estado
criptobiótico, puede vivir indefinidamente hasta que las condiciones vuelvan a
ser de nuevo tolerables.
 Carácter genético (valor taxonómico): algunas si van a producir esporas y otras
no dependiendo si tienen los genes.
2.4. OBSERVACIÓ N

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 En fresco: microscopi ́a ó ptica por contraste de fases.
 Tinciones: impermeable a colorantes (áreas incoloras).

Existe una tinción especial para endosporas, ya que estas son muy impermeables y no
permiten la coloración con determinados colorantes: tinció n de Schaeffer-Fulton. Se
realiza la extensión, la desecación, la fijación y la tinción consiste que con el
cristalizador, las paralelas y nuestro portaobjetos; añadir verde malaquita 1 minuto.
Después, vamos a dejar 10 minutos a emisión de vapor y vamos a fabricar un hisopo,
una varilla de vidrio en la que arriba colocamos una toruda de algodón y la mojamos

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en alcohol y la pasamos por el mechero (es como una miniantorcha). El hisopo lo
colocas por debajo del porta para que el colorante penetre bien, hasta que este verde
malaquita eche vapor y se apaga el hisopo. En este momento, se ha teñido la
endospora de verde y el cuerpo vegetativo está transparente. Lavar abundantemente
con agua y contrastar con safranina. La safranina tiñe de color rosa el cuerpo
vegetativo. Las esporas se ven de color verde y las células de color rosa-rojo.

 Microscopio eléctrico de transmisió n o barrido.

2.5. ESTRUCTURA Y COMPOSICIÓ N QUI ́MICA

Consta de al menos cinco capas. Desde la más externa a la más interna son:

 Exosporio: capa más externa y fina de proteínas.

 Cubierta: formada por varias capas de proteínas especificas de la espora,
hidrofóbicas en su mayoría. Aporta un alto grado de refrigencia a la bacteria.
 Có rtex: formado por peptidoglucano con uniones muy laxas.

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 Pared celular: no tan gruesa como la de la bacteria y sin ácido teicoico.
 Membrana plasmática: similar a la de célula.

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 Protoplasto: es la capa más interna. Su contenido está muy deshidratado (tiene
un 20-30% menos de agua que a célula vegetativa); que su componente
mayoritario es el ácido dipicoli ́mico que se encuentra como dipicolinato
cálcico, y es el responsable de la termoresistencia. Forma el 10- 15% del peso
en seco. No presenta ARNm, ni aminoácidos, ni poli ́meros de reserva; debido a
su inactividad metabólica. No obstante, presenta un número reducido de
enzimas, escasos ribosomas, ADN reducido al mínimo y polímeros de proteínas
de bajo peso molecular. También, posee pequeñas proteínas ácido solubles
que se unen al ADN para estabilizarlo y protegerlo de condiciones adversas.

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2.6. ESPORULACIÓ N O ESPOROGÉNESIS

Hay más de 200 genes implicados en el proceso de esporulación. Empieza cuando la

célula recibe una serie de estímulos y ve que las condiciones no van a ser favorables
para su crecimiento; es decir, cuando cesa el crecimiento por falta de nutrientes. Paso
de la célula vegetativa a endospora. Es un ejemplo de diferenciación celular, en el que
ocurren muchos cambios que viene determinados en el genoma de bacteria.
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2.7. GERMINACIÓ N
Consiste en la transformació n de esporas inactivas en células vegetativas activas,
cuando encuentra condiciones favorables. Consta de tres fases: activación,
germinació n y crecimiento.

1. Activació n: es un proceso reversible. Consiste en el calentamiento de la espora

hasta temperatura subletal o se almacenan las esporas semanas o meses a
temperatura ambiente. La endospora puede empezar a activarse y volver a

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desactivarse.
2. Germinació n: es un proceso irreversible. Como consecuencia de la activación,
se produce la hidratación del protoplasma lo que provoca la hinchazó n de la
espora y su rotura o su absorción de la cubierta. Se produce la pérdida de la
termoresistencia y resistencia a otros factores como componentes qui ́micos y
la pérdida de la refringencia. Se produce la liberación de los componentes y un
aumento del metabolismo (por la captación de metabolitos del exterior).
3. Crecimiento: es un proceso irreversible. Aumenta de tamañ o sintetizando de
nuevo todos los componentes: ARN, protei ́nas, ADN empieza a transcribirse…
(metabolismo muy activo). Se produce una hinchazón por la captación de agua.

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La espora desaparece y sale una nueva bacteria, que ante condiciones
adversas, volverá a formar la endospora.

2.8. ASPECTOS APLICADOS DE LAS ENDOSPORAS BACTERIANAS

Podemos aplicar las caracteri ́sticas de las endosporas según nuestro beneficio, por
ejemplo como indicador biológico, bioinsecticida, alimentación, etc.
Alimentación: las latas de conserva, por ejemplo, se mantienen mucho tiempo en
condiciones buenas para la creación de esporas. Como hemos dicho antes, estas son
causantes de enfermedades por lo que es importante la vigilancia de este proceso.
Indicador bioló gico: para comprobar si funciona un autoclave (esterilizador; es decir,
matar todas formas vivientes, de alta presió n (1 atm) y alta temperatura (121oC)
durante 20 minutos). Hay indicadores biológicos, que es un vial flexible de plástico con
tapón que permite el paso de vapor, dentro tiene una ampolla de vidrio con un medio
de cultivo con indicador de pH y una tira de endosporas; se mete en el autoclave, lo
sacamos, rompemos la ampolla y se mete en una estufa. Si está de color amarillo,
significa cuando el autoclave no ha funcionado bien, ya que la endospora es viable
(bacteria produce ácido). Si permanece rojo, significa que las esporas han sido
destruidas. Si un cultivo de esporas se esteriliza en el autoclave y después al añ adirlas
a un medio rico no germinan, es que el esterilizador funciona.
Bioinsecticidas: (se conocen como insecticidas Bt). El Bacillus thurigensis durante la
esporulación produce una protei ́na cristalina intracelular tóxica (cuerpo paraesporal
que se forma cuando se forma la endospora). Cuando esta espora es ingerida por
algún insecto sobre todo por gusanos y larvas, los cristales se disuelven con el pH

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alcalino del intestino y se desarrollan las prototoxinas y después toxinas gracias a la
proteasa. La toxina activada se une a los receptores epiteliales del intestino y comienza
una perforació n de la membrana lo que da lugar a la lisis celular (muerte del
microorganismo). El mai ́z Bt tiene incluido este gen para defenderse del ataque de
insectos que pretendan comérselo.

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3. EL NUCLEOIDE

Región irregular del citoplasma en la que se sitúa el material genético procariótico.

Contiene ADN (60%), ARN transcribié ndose y proteínas en pequeñ a cantidad.
En algún punto del nucleoide, hay una conexió n con la membrana que ayudará a la
separación de los cromosomas en la divisió n. Según la complejidad del ADN, tendrá un

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genoma de mayor o menor tamañ o (por ejemplo las que forman esporas tendrán un
ADN más complejo). El ADN debe estar perfectamente empaquetado y esto se
consigue mediante el superenrollamiento del ADN. La bacteria presenta una longitud
pequeña (2-6m) pero el ADN es de 1400m, por lo que sufrirá un empaquetamiento
y superenrrollamiento para disminuir su tamaño.

4. GENOMA BACTERIANO

Es el conjunto de la información genética que posee una bacteria. Todas van a tener
cromosomas y algunas plásmidos. En las bacterias que no poseen plásmidos, el
concepto de genoma y cromosoma coincide.

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5. HAPLOIDI ́A

Las células procariotas son haploides. La haploidía que presenta la bacteria quiere
decir que solo hay un único cromosoma en forma de molécula de ADN bacteriano
circular (aunque hay excepciones); es decir, no hay fases estables diploides en su ciclo.
Excepciones: el género Borrelia, tiene un cromosoma lineal. El género Vibrio, tiene dos
cromosomas. El género Agrobacterium tiene una molécula de ADN lineal y otra
circular.

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6. CROMOSOMA BACTERIANO
6.1. TAMAÑO

Se expresa en función del peso molecular: Daltons (Da) o Kilodaltons (kDa) o en

función del número de pares de bases (pb) o megaparesdebases (mgb). 1 pb = 650 Da.
Además, el tamaño es proporcional a la complejidad metabólica y morfológica del
microorganismo:

 0.6 Mb: no existen bacterias con genoma menor a este tamaño

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 1,5 Mb: propio de parásitos intracelulares o que crecen mal debido al medio
de cultivo
 1,6 Mb: bacterias de vida libre.
 4,9 Mb: bacteria esporuladas.

6.2. NÚMERO DE GENES

Gen: fragmento de ADN compuesto de una secuencia reguladora que hace posible la
transcripción de una regió n que se transcribe y que codifica un polipé ptido (vía ARN
mensajero) o una secuencia de ARN ribosómico o de ARN de transferencia.
El tamañ o de un gen procariótico suele ser entre 1000 y 1200 nucleótidos.
Especies estrechamente relacionadas, van a tener un número de genes y una
disposición de estos en el genoma muy parecidas.

6.3. CONTENIDO EN GUANINA + CITOSINA

Es una caracteri ́stica taxonómica de cada especie. Fue utilizada como el primer criterio
taxonómico pero ya ha sido superado por los análisis de hibridación de los ácidos
nucleicos (genomas). Una especie puede contener desde el 24-25% hasta el 75% de
guanina y citosina, debido a que la unión es más estable al estar unidas por tres
puentes de hidrógeno. La adenina y timina está unida por 2 puentes de hidrógeno

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Métodos para calcular el contenido de guanina + citosina: método de la temperatura
media de desnaturalización o a través de la secuencia del genoma. Hoy en día, ya se

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hacen por programas informáticos.

6.4. ESTRUCTURA

Generalmente se dice que, el cromosoma bacteriano adquiera la forma CCC (Circular

Covalentemente Cerrada), pero en muchos casos adquiere otro nivel de retorcimiento
que es el superenrollamiento. Con el superenrollamiento, conseguimos que la
molécula de ADN esté más compactada, lo que permite que toda la cantidad de ADN
quepa en la célula y permite la separación de las cadenas (crucial para muchas
actividades del ADN).

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Para que el cromosoma pase de su forma CCC a su forma superenrrollada es necesaria
la actuación de topoisomerasa II. Por otra parte, para pasar del superenrrollamiento a
forma CCC, es necesaria la intevención de la topoisomesara I. La actuación de estas dos
enzimas suele estar compensada. Es importante saber, que la estructura cambia en
respuesta a alteraciones medioambientales y que un cromosoma es aproximadamente
de 500 a 1000 veces más largo que la célula.
El ADN se organiza en el nucleoide en forma de lazos, uniéndose a
proteínas básicas que en algunos casos, se parecen algo las histonas de los eucariotas:
proteínas HL (“histona like”), aunque se encuentran en mucha menor cantidad.
La función de las proteínas básicas HL es estabilizar el ADN cuando está
superenrollado, ya que el ADN es ácido (tiene muchas caras negativas que se
repeleri ́an). Las proteínas básicas tienen cargas positivas que ayudan al plegamiento
del ADN estabilizándolo en la conformación superenrollada.

7. PLÁSMIDOS

Los plásmidos son moléculas de ADN de cadena doble que pueden estar integrados en
el cromosoma o libres en el citoplasma e integrarse después en el cromosoma. Es un
tipo de episoma. El episoma es un factor genético bacteriano que puede existir libre o
integrado.
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Los plásmidos se heredan al dividirse la bacteria. Son casi exclusivos de las mismas,
aunque tambié n se localizan en mohos y levaduras, en los cuales se piensan que han
sido transmitidos a través de las bacterias.
Todos los plásmidos tienen que tener un origen de replicación (OriC) para poder
replicarse. Hay plásmidos que contienen 1 o varios genes de resistencia a antibióticos y
otros compuestos. También pueden tener 1 o varios puntos de corte para enzimas de
restricción.
Al ser los plásmidos portadores de una informació n genética adicional, su presencia

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proporciona una ventaja selectiva. No son necesarios en el crecimiento, reproducción
y viabilidad del organismo. Además, debemos destacar que los plásmidos son unas
herramientas útiles para la ingenieri ́a genética: constituyen vectores o vehículos de
clonación.
7.1. CLASIFICACIÓN DE LOS PLÁSMIDOS

 Según el tamañ o: tienen un tamaño que puede comprenderse entre 1,5-

1000kb.
o Pequeñ os: 1,5 - 15 kb.
o Medianos: 15 - 60 kb.

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o Grandes o megaplásmidos: de 60 a cientos de kb.
 Según la forma el plásmido puede estar bajo la forma CCC y superenrollado o
de manera lineal en el género Borrelia.
 Según el número de copias: teniendo un mínimo de 1-3 y 100 como máximo.
o Bajo número de copias: 1-10
o Alto número de copias: +10 (más importantes).
7.2. AUTOTRASMISIÓ N Y MOVILIZACIÓ N

TRADUCCIÓN: mediada por virus.

TRANSFORMACIÓN: ocurre con un choque eléctrico, que se mete el material genético
de golpe.
CONJUGACIÓN: contacto íntimo entre la célula donadora y la célula receptora. La
realizan las bacterias que contiene plásmidos autotransmisibles o conjugativos.
Plásmidos autotransmisibles o conjuntivos: plásmidos que permiten la conjugación
bacteriana (paso del ADN de una célula donadora a una receptora). Estos plásmidos
tienen genes tra (dentro hay genes que permiten la síntesis de pelos sexuales gracias a
los cuales se produce la conjugación) y origen oriT (región donde se inicia la
trasferencia).
También, pueden existir plásmidos movilizables (plásmidos no conjugativos), que son
aquellos que no pueden conjugarse por sí solos, pero pueden moverse si se ayudan de
plásmidos conjugativos. No tienen genes tra pero si tienen región oriT. Al no tener
genes tra, los plásmidos conjuntivos les ayudan y les permiten utilizar los genes tra.
Muchos plásmidos no son conjugativos ni movilizables.

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7.3. PROCESO DE LA CONJUGACIÓ N BACTERIANA

La conjugación bacteriana es el proceso de transferencia de información genética

desde una célula donadora a otra receptora, promovido por determinados tipos de
plásmidos, y que requiere contactos directos entre ambas, con intervención de
estructuras superficiales especializadas y de funciones especificas. Es una replicación
semiconservativa, ya que el donador y el receptor van a tener una copia original para

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formar la cadena complementaria.

MODELO DEL CI ́RCULO RODANTE:

1. La célula donadora sintetiza el pili. Los

responsables son los genes tra.
2. El pili conecta la cé lula donadora con la célula
receptora y aproxima una cé lula a la otra; ya
que éste se encoje aproximando las dos células
hasta unir sus citoplasmas a través de un canal.

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3. El plásmido se transfiere de la célula donadora
a la cé lula receptora pero solo se transfiere
una hebra ayudado por el relaxoma y transferosomas (complejos). La ADN
polimerasa sintetiza la hebra complementaria (los plásmidos son de doble
cadena). La enzima tra1 (que se encuentra en la célula donadora) corta el ADN
y lo desenrolla.
4. La célula donadora y la célula receptora finalmente tendrán pili y plásmido.

7.4. ALGUNAS CARACTERI ́STICAS GENÉTICAS TRASMITIDAS EN PLÁ SMIDOS

1. Resistencia a metales pesados y compuestos tóxicos como el mercurio.

2. Resistencia a antibióticos (uno o varios) y otros antimicrobianos.
3. Capacidad de transferir genes cromosómicos.
4. Producción de antibióticos y bacteriocinas (proteínas toxicas que eliminan
bacterias). Un ejemplo es la E. coli que produce en el intestino bacteriocina,
capaz de eliminar a patógenos.
5. Adquisición de funciones fisiológicas. Por ejemplo la degradación de
compuestos tóxicos, crecimiento en otras fuentes de carbono, etc.
6. Producción de toxinas y otros factores de virulencia.

Existen plásmidos crípticos cuya función no es conocida, o no se han detectado, o no

se conocen sus efectos fenotípicos.

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