Universidad Nacional Autónoma

de México
Facultad de Estudios Superiores
Zaragoza

Laboratorio Bioquímica Celular y de los Tejidos I

Práctica: Cinetica enzimatica

Integrantes:
Aguilar López Diana Laura
Ramirez Martinez Oscar
Vargas Plata Héctor Daniel
San Juan Tercero Luis Antonio

Laboratorio: L- 404
Grupo: 2401

Objetivo (s):
● Analizar algunos factores que modifican la velocidad de la reacción que es
catalizada por la invertasa.
 ● Demostrar la relación lineal entre la velocidad de reacción y la concentración
de la enzima presente.
● Determinar cómo influye el pH del medio sobre la velocidad de una reacción
enzimática y su efecto sobre el carácter iónico de la enzima y del sustrato.
● Demostrar que la temperatura afecta las reacciones enzimáticas.
● Observar el efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de la
reacción enzimática y determinar km, Vmáx, por los métodos conocidos.

Resultados

Curva estándar Azúcares reductores

Absorbancia Concentración

0.018 0.25 µmol

0.078 0.5 µmol

0.215 1 µmol

0.468 2 µmol

0.776 3 µmol

0.923 3.75 µmol

Curva estándar Enzima

Absorbancia Concentración Enzima Velocidad enzimática

0 0 µmol 0µmol/min

0.067 0.30 µmol 0.06 µmol/min

0.160 0.70 µmol 0.14 µmol/min

0.285 1.25 µmol 0.25 µmol/min

0.1128 1.85 µmol 0.37 µmol/min

0.538 2.41 µmol 0.482 µmol/min

Curva estándar Sustrato

Absorbancia Concentración Sustrato Velocidad enzimática

0 0 µmol 0µmol/min

1
0.084 0.49 µmol 0.098 µmol/min

0.263 1.30 µmol 0.26 µmol/min

0.404 1.75 µmol 0.35 µmol/min

0.437 1.78 µmol 0.356 µmol/min

0.539 1.90 µmol 0.38 µmol/min

0.581 2.20 µmol 0.44 µmol/min

0.467 2.40 µmol 0.48 µmol/min

0.420 2.55 µmol 0.51 µmol/min

Curva estándar pH
Absorbancia Concentración Velocidad pH
enzimática

-0.013 0 µmol 0 µmol/min 2.5

-0.003 0 µmol 0 µmol/min 3.5

0.003 0.09 µmol 0.018 µmol/min 4.5

0.076 0.47 µmol 0.094 µmol/min 5.0

0.226 0.60 µmol 0.12 µmol/min 5.5

0.266 0.97 µmol 0.194 µmol/min 6.5

0.139 1.35 µmol 0.27 µmol/min 7.5

Curva estándar Temperatura

Absorbancia Concentración Velocidad Temperatura
enzimática

0.152 0.45 µmol 0.09 µmol/min 0°C

0.464 0.68 µmol 0.136 µmol/min 25°C

0.675 2.10 µmol 0.42 µmol/min 37°C

0.939 2.80 µmol 0.56 µmol/min 50°C

0.107 4.20 µmol 0.84 µmol/min 75°C

0.019 0.08 µmol 0.016 µmol/min 92°C

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Análisis de resultados
Se logró apreciar cómo es que bajo ciertas condiciones y factores las enzimas
pueden actuar de maneras diferentes, en esta práctica se denoto la velocidad con la
que ejercen su función así como la eficacia de ellas, para adquirir estos valores se
analizaron muestras que fueron expuestas bajo ciertas condiciones como de
temperatura, pH, concentración de sustrato, la cual desencadenó principalmente
muestras cualitativas (concentración-color) las cuales cumpliendo los requisitos para
ser analizadas por espectrofotometría se utilizó esta para comprobar la eficacia de
la enzima con su respectivo factor asociado.
Uno de los principales resultados a analizar fue en el cual se muestra como a
temperaturas aproximadas a 0°C la enzima se inactiva o su efecto es sumamente
lento, por contraparte a temperaturas de ebullición se demuestra cómo la enzima al
desnaturalizarse sub eficacia es sumamente mínima, en ambos casos a causa del
leve efecto de la enzima sobre el sustrato la coloración cambia sumamente poco a
diferencia de cómo actúa esta en los otros casos de la temperatura. Por
consiguiente se logró apreciar como a temperaturas mayores a los 50°C la enzima
desarrolló un papel eficaz siendo en este estado de temperatura donde alcanzó su
punto máximo de eficacia, así mismo se demuestra cualitativamente en el color de
la muestra a poseer una tonalidad de color más concentrada que todas las demás
(coloración marrón), de igual manera se comprobó cuantitativamente por medio de
una prueba espectrofotométrica y se extrapolo y comparó con base a las demás
muestras obtenidas plasmarlas en una gráfica de curva estándar para
posteriormente observar su comportamiento en cuestión de velocidad en otras
gráficas.
De igual manera se realizó nuevamente una medición del efecto de la enzima con
base a un sustrato utilizando como principal factor el pH, durante esta prueba se
apreció cómo la enzima actúa mejor bajo ciertas condiciones de pH demostrando la
existencia de un pH óptimo al cual la enzima trabajo mejor, a pesar que la literatura
recalca que este puede oscilar entre un pH de 3.5 a 7 la prueba experimental arrojó
el resultado de que el pH óptimo bajo el cual se desempeñó mejor la enzima fue
aproximadamente 4.5 denotando como la prueba anterior condición cualitativa
presentándose como una concentración de coloración marrón y una prueba de
absorbancia la cual al ser graficada y comparada con las demás muestras se
encontró como la óptima en este caso de enzima-sustrato.

Conclusiones
Se lograron cumplir los objetivos de la práctica, además de que se logró observar
los factores que influyen en la cinética enzimática, por ejemplo la temperatura, el pH
y la concentración de la enzima y del sustrato.
Durante la temperatura a mayor grado la velocidad de la cinética enzimática
aumenta, sin embargo una vez llegado a cierta temperatura esta se llega a
desnaturalizar y provoca que la velocidad vaya disminuyendo hasta llegar a cero,
solo alcanza una temperatura ideal en la cual la enzima no se desnaturaliza y la

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velocidad aumenta, otero factor que sería es el pH en el cual a cierto pH las
enzimas actúan de mejor manera así como su cinética y mientras el pH se vaya
alejando esta irá disminuyendo su cinética.
Por último el factor de la concentración se observó que a mayor concentración de
enzima la cinética va aumentando gradualmente a diferencia que ,la concentración
del sustrato aumento pero alcanza un máximo para luego volver a disminuir

Bibliografía

● Harper HA, et al.Bioquímica de Harper. 28a ed. México: Mc Graw-Hill

Interamericana; 2010. 4.
● Henry J. B. (Tood-Sanford-Davidsohn). Diagnóstico y tratamientos clínicos
por el laboratorio. Tomo 1. 8ª ed. España: Salvat; 1988.
● Murray RK, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. Harper: Bioquímica
ilustrada. 28a ed. México DF: McGraw-Hill Interamericana; 2010.
● Quesada S. Manual de experimentos de laboratorio para Bioquímica. Costa
Rica: EUNED; 2007