FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

PROGRAMA DE BIOLOGIA
LABORATORIO DE TÉCNICAS EN BIOTECNOLOGÍA
CÓDIGO: 20119
CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES: EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA

INTRODUCCIÓN
El cultivo in vitro, micropropagación o propagación vegetal in vitro, es el cultivo de
células, tejidos u órganos de plantas en un medio aséptico que le aporta los nutrientes
necesarios para su desarrollo. En este medio y con algunas condiciones físicas y químicas
apropiadas, las células tienen la habilidad de desarrollarse, desdiferenciarse, producir
metabolitos, multiplicarse y hasta regenerar un organismo entero (Dodds & Roberts, 1985),
en cuyo caso, la nueva planta será genéticamente idéntica a la planta madre, y su desarrollo
se dará en un periodo de tiempo mucho más corto. Así pues, para lograr cualquiera de estos
propósitos se debe iniciar con la utilización de pequeñas muestras de tejidos vegetales
(explante) que tras una adecuada desinfección superficial, son transferidos asépticamente a
medios nutritivos líquidos o semisólidos y almacenados bajo condiciones ideales de
temperatura y fotoperíodicidad que garanticen un rápido desarrollo.

OBJETIVO GENERAL:

Esta práctica pretende que el estudiante conozca e implemente algunas técnicas

básicas del cultivo de tejidos vegetales.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
⎯ Comprender la metodología de preparación de medio de cultivo utilizada
h abitualmente en los laboratorios de cultivo in Vitro.
⎯ Inducir desdiferenciación tisular en explantes provenientes de diferentes tejidos
vegetales.
⎯ Inducir el proceso de embriogénesis somática a partir de explantes de zanahoria
⎯ Conocer la utilidad y el manejo del equipo básico, instrumentos y herramientas de
un laboratorio de cultivo vegetal.

PROCEDIMIENTO

1. Preparación de los medios de cultivo para la inducción de tallos:

Para esta práctica se deben preparar y esterilizar (15 psi/ 121 ºC/ 15 minutos) los siguientes
medios de cultivo: - Preparar 50 ml de ½ MS (pH: 5.7-5.8), suplementado con sacarosa
(3%), vitaminas, agar (0.8%) y sin reguladores de crecimiento (medio control) y 50
ml de medio control enriquecido con las siguientes condiciones hormonales:
 Medio MS Medio MS
Tejido Medio MS Medio MS Medio MS
2,4 D 0.1 mg/L 6-BAP 0.25
Planta 2,4 D 1 6-BAP 0.5
vegetal (Control) + 6- BAP 0.25 mg/L + ANA
mg/L mg/L
mg/L 5 mg/L
Zanahoria Floema X X
Forestal Hojas - yemas X X
cítricos Hoja joven X X
semillas
Papa Brotes X X X X
Flores hojas X X

2. Proceso de desinfección del material vegetal:

Se lava el material vegetal con agua y jabón, se sumerge inicialmente en etanol (70%, 2
min) y posteriormente en 50 ml hipoclorito de sodio (2%, 15 min.) conteniendo algunas
gotas de Tween 80 (2 gotas x cada 100 mL). Posteriormente, se elimina el desinfectante y
se hacen tres lavados consecutivos (5 min. cada uno), y se transfiere en condiciones
estériles para la obtención de los explantes y siembra en los medios de cultivo.

3. Explantes:
En condiciones de asepsia se realiza la obtención de los explantes de acuerdo al tejido
vegetal seleccionado.

4. Incubación:
Debe realizarse bajo condiciones controladas de temperatura (25 – 27 ˚C) y
fotoperiodicidad (12 h x 12 h).

5. Evaluación:
Revisar los cultivos de tejidos vegetales una vez por semana y anotar los avances que estos
presenten, incluyendo aparición de callos, contaminaciones, organogénesis y aumento en
longitud o tamaño.

Pesos Moleculares:

2,4 D: 221,04 g/mol

6-BAP: 225,25 g/mol

ANA: 186,21 g/mol