SEMINARIO

Determinación de metales pesados en los suelos de las

plantaciones de té en hojas frescas y hojas de té procesadas: una
evaluación de seis métodos de digestión
Objetivos:

 Determinar los niveles de cadmio (Cd), cromo (Cr), plomo (Pb),arsénico

(As) y selenio (Se) en hojas de té frescas, hojas de té procesadas (negras)
y suelos de plantaciones de té originarias de Bangladesh.
 Informar el grado de contaminación e ingesta diaria de metales pesados a
través del té
 Medir las interacciones en las concentraciones en hojas de té frescas, té
procesado y suelos de plantaciones de té mediante el análisis del factor de
transferencia (TF).
 Evaluar seis métodos de digestión utilizando diferentes combinaciones de
ácidos y recomendar el más adecuado método de digestión para determinar
los niveles de cinco pesados metales en muestras de té.

Métodos:

Se utilizó espectrometría de absorción atómica de horno de grafito (GF-AAS) para

evaluar seis métodos de digestión:

 ácido nítrico
 ácido nítrico durante la noche
 ácido nítrico-peróxido de hidrógeno
 ácido nítrico-perclórico
 ácido sulfúrico,
 cenizas secas

El té (Camellia sinensis L.) es una de los más populares, bebidas sin alcohol,
consumidas pormás de dos tercios de la población mundial por sus efectos
refrescante y estimulantes leves.Las hojas de té contienen poli- fenoles como
epigalocatequina 3-galato, que tiene muchas propiedades medicinales, incluyendo
antioxidante, reductor del colesterol, hepatoprotector y anti-neoplasico. Además,
sus propiedades desintoxicantes, son esenciales en la eliminación de alcohol y
toxinas. se estima que 18 mil millones de tazas de té se consumen diariamente en
todo el mundo, al ser económico y poseer una importancia social que no tiene
precedentes. De hecho, el té ha sido reportado ser valioso en el tratamiento y
prevención de muchas enfermedades.
Idealmente, el té debe estar libre de contaminantes como metales pesados, que
son tóxicos ynocivos para el cuerpo humano, debido a su naturaleza no
biodegradable, largas semividas biológicas y acumulación persistente en
diferentes partes del cuerpo.

Bangladesh es uno de los principales países productores y exportadores de té en

el mundo. El procesamiento y envasado del té en Bangladesh depende del tipo de
té, sin embargo, los pasos comunes implican:

 Desplume manual de hojas de té por los agricultores locales

 el pesaje de hojas de té
 transporte a fábricas.

Recién arrancadas las hojas de té son frágiles, y como primer paso en el

procesamiento, las hojas se dejan secar durante varias horas para permitirles
"marchitarse" según su contenido de humedad, que disminuye y las hojas se
enrollan y se oxidan, lo que altera su sabor y le da al té procesado su apariencia y
color final. El siguiente paso consiste en “disparar” (proceso de secado final), un
proceso que se inicia una vez que las hojas de té se han secado. Seguido por una
clasificación visual en varios lotes de tamaños y colores similares antes de ser
empaquetado y comercializado tanto a nivel nacional como internacionalmente.

Los efectos genéticos y epigenéticos de los metales pesados en la dieta, tales

como cadmio(Cd), cromo (Cr), plomo (Pb), arsénico(As) y selenio (Se) en el
cuerpo humano están asociados con un mayor riesgo de diferentes tipos de
cáncer. El consumo prolongado de metales pesados de los alimentos puede
conducir a su acumulación en el riñón y el hígado, causando interrupción de
numerosos procesos bioquímicos y potencialmente causales enfermedades
cardiovasculares, nerviosas, renales y óseas.

El análisis elemental de una muestra de té requiere la destrucción de la fracción

orgánica de la muestra, dejando los metales pesados en solución o en una forma
que se encuentre disuelto. Desafortunadamente, debido a un gran número de
analitos y una variedad de tipos de muestra, no hay técnica de preparación de
muestra universal que cumple con todos los diversos requisitos.

Entre las estrategias para la preparación completa, dilución, digestión ácida y

extracción, los métodos más comúnmente considerados son La digestión por
Microonda, la digestión húmeda y la ceniza seca son comúnmente utilizadas para
la descomposición total de materia orgánica en muestras.

 La incineración en seco: consiste en la ignición de compuestos orgánicos

por aire a presión atmosférica y temperaturas relativamente elevadas (450-
 550 ° C) en un horno de mufla. Los residuos de cenizas resultantes se
disuelven en un apropiado ácido.
 La digestión húmeda: se utiliza para oxidar la porción orgánica de
muestras o para extraer elementos de productos inorgánicos por medio de
ácidos concentrados o mezclas de ellos. En comparación con la ceniza
seca, la digestión húmeda puede realizarse con una amplia variedad de
reactivos potenciales.

Aunque muchos tipos de ácidos, incluido el clorhídrico ácido (HCl), ácido nítrico
(HNO3), ácido sulfúrico (H2SO4), ácido perclórico (HClO4) y peróxido de
hidrógeno (H2O2), se utilizan para digerir muestras orgánicas y suelos permanece
indeterminado qué tipo de ácido o mezcla de ácido es el más adecuado. Además,
se sabe poco sobre la recuperación relativa de metales pesados de las hojas de
té, y no hay soporte de métodos oficiales en Bangladesh para la digestión de
muestras de té para determinar metales pesados.

Descripción del área de estudio:

Las muestras fueron recolectadas de dos cultivos principales de té Moulvibazar y

Sylhet, estas áreas tienen más de 150 jardines de té, incluyendo tres de los
jardines de té más grandes del mundo tanto en superficie como en producción.

Recolección y conservación de muestras:

Las hojas de té frescas fueron recolectadas al azar de cinco jardines de té

diferentes en el distrito de Sylhet , y el resto del distrito de Moulvibazar. Cada
colección constaba de 500 g de hojas de té y fue autenticado por un botánico.
Para el té negro, cinco muestras de té procesadas fueron compradas al azar del
mercado local en Moulvibazar, con otros cinco del mercado local en Sylhet. Las
muestras fueron suministradas por los jardines de té locales de las mismas áreas.

Las muestras fueron procesadas por desplume, marchitamiento, laminado,

oxidación y cocción. El paso final en el proceso de producción es "disparar" o
calentar las hojas rápidamente para que se sequen a menos del 3% de contenido
de humedad, detener el proceso de oxidación y para asegurar que las muestras
de té se mantuvieron bien, ya que, durante el paso de laminado y marchitamiento
del procesamiento del té, se puede considerar que el té está contaminado.

Los suelos de las plantaciones de té fueron recogidos aletoriamente de lugares

similares a donde se recolectaron los 10 muestras frescas de hojas de té (tanto de
Sylhet como del Distrito de Moulvibazar, Bangladesh). Las muestras de suelo
(tierra arcillosa y arenosa) se recogieron (500 g cada vez y 1–10 cm de perímetro)
cerca de la planta del té cavando en suelo 1–5 cm de profundidad. Se ubicaron
algunos de los jardines de té, cerca de una autopista (la más cercana estaba a
menos de 100 metros) y otros estaban situados muy lejos de la autopista. Las
muestras recogidas se almacenaron en un lugar limpio, estéril en bolsas de
polietileno y fueron debidamente etiquetados.

Digestión de muestras:

Digestión de muestras de té.

Antes de la digestión de la muestra, las hojas de té se liofilizaron. a -50 ° C a 100

durante 24 h. Luego fueron aplastadas utilizando un mortero y un pistilo, luego
fueron tamizadas (tamaño de partícula <100 µm) a temperatura ambiente.
Finalmente, 1 g de hojas de té se usó para la digestión.

Digestión de muestras de suelo.

Las muestras de suelo se secaron al horno a 60 ° C durante 24 h antes ser molido

en un polvo fino usando un mortero estéril y pistilo. Las muestras (2,5 g) se
transfirieron a un crisolantes de mezclarlo con 10 ml de agua regia, que consistía
en HCl: HNO3 (3: 1). La mezcla se digirió en una placa caliente a 95 ° C durante 1
hora y se dejó enfriar a temperatura ambiente. La muestra fue luego diluida en 50
ml usando agua destilada desionizada y se dejó reposar durante la noche. El
sobrenadante se filtró a través del papel de filtro antes del análisis por
espectrometría de absorción de horno de grafito atómico (GF-AAS).

Método 1 (digestión con HNO3)

la muestra (1 g) fue colocada en un crisol de 50 ml antes de la adición de 10 ml

de HNO3 concentrado. La muestra se calentó en una placa caliente hasta que la
solución se volvió semiseca. Esto fue seguido por la adición de 10 ml de HNO3
concentrado. La solución se mantuvo en una placa caliente durante 1 h para
permitir la formación de una suspensión clara. Después de que la muestra se
semiseco, se enfrió y se filtró a través de un papel de filtro Whatman No. 42.
Luego se transfirió a un matraz umétrico de volumen 50 ml, mediante la adición de
agua destilada desionizada a la muestra antes del análisis GF-AAS.

Método 2 (digestión nocturna de HNO3)

Se añadió HNO3 concentrado (10 ml) a la muestra (1 g) y se dejó reposar toda la

noche a temperatura ambiente. La muestra se calentó luego en una placa caliente
hasta que la solución se volvió transparente y seca. La solución luego se enfrió y
se filtró a través papel de filtro Whatman No. 42 Luego se transfirió
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 50 ml mediante la adición de agua
destilada desionizada [30]. Finalmente, la solución se analizó usandoGF-AAS.
Método 3 (digestión HNO3 – H2O2)

En este método, la muestra (1 g) se pesó en un crisol de 50 ml y se trato con 10

ml de concentrado HNO3. La solución se colocó en una placa caliente durante
30–45 min para permitirla oxidación. Después de enfriar, se añadió 4 ml de H2O2
(20%) y la solución se volvió a calentar, en un plato caliente hasta que la digestión
se aclaro y se seco. Después de enfriar, lasuspensión se filtró en matraz
volumétrico de 50 ml y se diluyo con agua destilada desionizada hasta la marca
[30] antes del análisis GF-AAS.

Método 4 (digestión HNO3 – HClO4)

Se colocó aproximadamente 1 g de muestra en un recipiente de 50ml antes de la

adición de 10 ml de HNO3 concentrado. La mezcla se colocó en una placa
caliente durante 30 a 45 minutos para permitir la oxidación Después de enfriar, se
añadió 5 ml de HClO4 (70%) y la mezcla se volvió a calentar en un plato caliente
hasta que la digestión se volvió clara y seca. Entonces la muestra se enfrió y se
filtró a través de papel de filtro Whatman No. 42 antes de ser transferido
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 50 ml agregando agua destilada
desionizada. Finalmente, la solución se analizó usando GF-AAS.

Método 5 (digestión con H2SO4)

La muestra (1 g) se colocó en un crisol de 50 ml. Diluido mediante la adición de 7

ml de H2SO4 concentrado. La mezcla se dejó reposar durante 30 minutos a
temperatura ambiente. Aproximadamente 7 ml de H2O2 (30%) fueron añadidos al
crisol, y la muestra se volvió a calentar en una la placa caliente por 40 min.
Posteriormente, 1 ml de H2O2 (30%) se añadió hasta que el residuo se torno claro
al enfriarse. Luego, se añadió agua destilada desionizada parallevar elvolumen de
muestra final a 50 ml. La solución fue filtrada usando un papel de filtro Whatman
No. 42 y después fue analizada por la GF-AAS.

Método 6 (cenizas secas)

Inicialmente, se colocó 1 g de muestra en un crisol en una placa caliente a 100-

150 ° C durante 1 h. Fue transferido a un horno tipo mufla ajustado a 480 ° C.
Después de 4 h, se retiró la muestra del horno y se procedió a enfriarlo. Luego, 2
ml de HNO3 5 M, se añadió y la muestra se evaporó a sequedad en un plato
caliente. La muestra se colocó en un horno frío y se recalento a 400 ° C durante
15 minutos antes de retirarlo, enfriarla y humedecerlo con cuatro gotas de agua
destilada desionizada. Luego, se añadieron 2 ml de HCl concentrado, y la muestra
se evaporó a sequedad antes de
añadirle HCl 2 M (2 ml). La solución fue filtrada a través del papel de filtro
Whatman No. 42 y papel de filtro Millipore <0.45 μm, para luego transferirlo
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 25 ml agregando agua destilada
desionizada.

ESPECTROMETRÍA CON HORNO DE GRAFITO:

 La tecnología de horno de grafito fue el resultado de la necesidad de contar con

una técnica que empleara volúmenes mínimos de la muestra.

El espectrómetro de absorción atómica con cámara de grafito(gfaas) permite

trabajar con muestras de volumen muy reducido (inferior a 100 µl) o directamente
sobre muestras orgánicas líquidas. Por su elevada sensibilidad (niveles de ppb), la
técnica se aplica en la detección de metales en productos de alta pureza, como
por ejemplo fármacos, alimentos (peces y carne) y productos industriales, y
también en aguas de bebida y de acuíferos (determinación de la presencia de Cu,
Cd, Pb, As, Hg, etc.).

HORNO DE GRAFITO Se utiliza un tubo de grafito en vez de una llama como

medio de atomización. La muestra es colocada en este tubo y por calentamiento
por el paso de una corriente eléctrica por el horno, la temperatura aumenta para
realizar el proceso en un tiempo mayor que el de llama. Los átomos son formados
por una sola vez y en corto tiempo. Es posible suprimir el paso de gas, por lo que
los átomos formados permanecen más tiempo en el haz. Se dispone de más
tiempo y de una forma más eficiente de transferir energía térmica a la muestra, lo
que permite la formación de átomos de manera completa. Los rangos de detección
son del orden de de ppm. Los rangos de detección son de ppb, lo que hace que el
equipo sea más sensible.

DESCRIPCIÓN GENERAL DEL HORNO DE GRAFITO. Consiste en un cuerpo de

acero con ciertos sensores eléctricos y que acomoda en su parte central una
cavidad para que sea colocado un tubo de grafito. Este tubo de grafito consiste en
un tubo cilíndrico hueco de aproximadamente 4 cm de altura y 1 cm de diámetro,
con un orificio en el centro para poder inyectar la muestra liquida que se desea
analizar

A través del cuerpo del horno de grafito, fluye agua para enfriamiento del sistema
cuando así requiera, además de un gas inerte (Argón o Nitrógeno) que sirve como
gas de protección del sistema. El gas inerte fluye exteriormente al tubo de grafito
para evitar la oxidación provocada a altas temperaturas; e interiormente para
desalojar los componentes volátiles que se produzcan.
El calentamiento del horno y del tubo se hace por medio de una fuente de poder
eléctrica controlada por un microprocesador. El microprocesador abre y cierra el
gas inerte, sube la temperatura indicada, sostienen la temperatura el tiempo
deseado, abre el flujo de agua para enfriamiento del horno después de la
secuencia del programa completo, etc.

Análisis GF-AAS

Un espectrofotómetro de absorción atómica, horno de grafito, fue

utilizado para determinar los metales pesados. El tubo de Grafito pirolítico, se

utilizó para la detección de As, Cr y Se, mientras que en el caso de Pb y Cd, se
utilizó un tubo de grafito de alta densidad.

Curvas de calibración

Se prepararon curvas de calibración para Cd, Cr, Pb, As y Se; a siete

concentraciones diferentes (0.0, 0.1, 1.0, 5.0, 10.0, 20.0 y 40.0 μg / L).

Análisis de recuperación

Para calcular el porcentaje de recuperación, las muestras fueron enriquecidas, con

cantidades conocidas de los estándares analíticos de Cd, Cr, Pb, As y Se. El
porcentaje medio de recuperaciones para los diversos los metales, se calcularon
usando la siguiente ecuación:

Porcentaje de recuperacion = (CE/CM) × 100

donde CE es la concentración experimental determinada de la curva de

calibración,

CM es el claveteado concentración.

Determinación del factor de transferencia (TF)

Se calculó el factor de transferencia o coeficiente de transferencia, dividiendo la

concentración del metal pesado en el presente té, por la concentración total de
metales pesados

en el suelo:

FT= concentración de las hojas de te/ concentración en suelo

La concentración media de Cd en el té negro (0.08 ± 0.04 μg / g) fue menor que el

límite recomendado por la Organización Mundial de la Salud (OMS) de 0,10 μg / g.
Es decir que no representa un riesgo considerable para sus consumidores.
Se detectó Cr en cantidades bastante altas en el Té negro (3.581 ± 3.941 μg / g),
pero no se detectó en hojas de té frescas o suelos de plantaciones de té. Su nivel
es superior al límite recomendado para Cr por el OMS de 0,05 μg / ml. Es
plausible que la contaminación por Cr ocurrió durante el proceso de fermentación,
que es uno de los importantes pasos de procesamiento del té negro en
Bangladesh. En particular, puede ocurrir durante el rodamiento de CTC, pasos
involucrados en la producción de té negro.

La concentración de Pb en el té negro fue 0.438 ± 0.328 μg / g que es más alto

que el límite recomendado por la OMS de 0,30 μg / g. Además, nuestros hallazgos
también son similares a las concentraciones previamente reportadas de Pb, en
muestras de té de Bangladesh pero es más alto que los reportados para Nigeria,
Egipto y Tailandia, pero inferior a la de Turquía, Irán, Arabia Saudita, China,
Pakistán e India

La concentración media de As en el té negro fue de 1.162 ± 0.524 μg / g (Fig. 4),

que fue mayor que el límite recomendado por la OMS, Solo Nigeria, reporto
valores inferiores a los encontrados; china e india se encuentran por encima

Contenido de metales pesados en suelos de plantaciones de té.

En esta parte del estudio, el contenido de metales pesados en los suelos de las
plantaciones de té en Bangladesh han sido reportado. Este análisis es importante
debido a la potencial toxicidad y transporte a través de la raíz sistema en los
brotes y hojas de té, de los metales pesados. Los rangos de concentración de Cd,
Pb, As y Se en suelos de plantaciones de té fueron 0.11–0.45, 2.80–66.54, 0.78–
4.49 y 0.03–0.99 μg / g, respectivamente.

Similar a los hallazgos para las hojas de té frescas, Cr no fue detectado en las
muestras de suelo del jardín de té Sin embargo, Cr ha sido reportado en suelos
agrícolas en los Estados Unidos.

Debido a la importancia toxicológica de Pb, muchos estudios han investigado los

niveles de este elemento en suelo de varios países. Entre todas los muestras de
suelo investigadas, STP-1 tuvo el Pb la más alta concentración (66.54 ± 0.520 μg /
g) potencialmente quizas porque su ubicación, era adyacente a una carretera. En
general, el nivel medio de Pb en las muestras de suelo de plantaciones de té fue
de 19,43 ± 24,25 μg / g
Las concentraciones de As y Se, resultan ser mayores en plantaciones de hojas y
frutos blandos, y pueden atribuirse al uso de fertilizantes con altos niveles de
metales pesados como Se y As en plantaciones de té; que pueden potencialmente
ser transportado fácilmente a las hojas de té a través de las raíces de la planta de
suelos contaminados. Además, la naturaleza ácida de los suelos del jardín de té
puede aumentar la extracción de As y, por lo tanto, la concentración de As
detectada.

Transferencia de metales pesados de los suelos a las hojas de té en

Bangladesh

La transferencia del suelo a la planta es uno de los componentes clave de

exposición humana a metales a través de la cadena alimentaria. Los factores de
transferencia (TF) describen la transferencia de metales pesados desde los suelos
hasta el cuerpo de la planta. En el presente estudio, los TF para Cd, Pb, As y Se
fueron 0.47845, 0.03122, 0.45524 y 0.18272, respectivamente. Los factores de
transferencia para los metales pesados en las muestras de té investigadas
disminuyeron a medida que sigue: Cd> As> Se> Pb. En general, los TF
aumentaron con disminución de las concentraciones de metales en los suelos. De
este modo,los TF más bajos en las plantas de té podrían explicarse por la
saturación de absorción

Validación del método:

Los resultados analíticos para la recuperación de metales pesados en té usando

los seis métodos de digestión y LOD para cada método se presenta en la Tabla 8.

Método 2 (digestión durante la noche con HNO3) fue la más eficiente para
recuperación de Cd, Cr, Pb, As y Se con porcentaje medio de recuperaciones de
99.50, 97.30, 100.00, 89.30 y 100.03%, respectivamente. Por esta razón, todas las
muestras de té fueron posteriormente digeridas usando este método, que se
recomienda como el mejor método para la destrucción del té.

El método probablemente proporcionó tiempo suficiente para HNO 3 para digerir la

matriz del té. Por otro lado, el Método 5 (H 2SO4) produjo las recuperaciones más
bajas, posiblemente debido a la digestión incompleta de muestras de té o la
pérdida de elementos a través de la volatilización. Recuperaciones de Cd, Cr, Pb,
As y Se fueron 80.60, 56.00, 65.00, 58.80 y 71.20%, respectivamente, todos los
cuales estaban por debajo de los límites aceptables (75–125%), excepto para Cd
(80.60%). Por lo tanto, no se recomienda el método de digestión con H2SO4 para
muestras de té. Sin embargo, en un estudio anterior, las muestras de té digeridas
con tres ácidos diferentes en una proporción similar [HNO3 / H2SO4 / H2O2 (2: 2:
2)] mostró una digestión con un tiempo más corto, mejor recuperación y precisión
que otras mezclas de ácido.

Método 1 (destrucción con HNO3) y Método 3 (digestión con HNO 3 y H2O2) arrojó
recuperaciones aceptables de Cd, Cr, Pb, As y Se. Sin embargo, solo el 70.70%
de Pb se recuperó por el Método 1, que se encuentra por debajo del límite
aceptable. Por lo tanto, los métodos 1 y 3 también podrían usarse como
relativamente sustitutos económicos, simple y rápidos.

No se recomienda el método 6 (cenizas secas) debido al alto costo incurrido

debido al requisito de un horno de mufla. Método 4 (HNO 3–Procedimiento HClO4)
tampoco se recomienda , porque el HClO4 es potencialmente peligroso durante la
digestión. Este método también arrojó recuperaciones pobres. Para todos los
procedimientos, la recuperación de Cd fue significativamente mayor, mientras que
la recuperación de Pb fue relativamente menor. La razón probable de la menor
recuperación de Pb es el efecto del pH ácido utilizado durante la digestión de la
muestra, lo que no favorece la extracción de la muestra.

Conclusiones

Lo seis métodos de digestión seguidos por GF-AAS han sido optimizados con
éxito en el presente estudio. La digestión de noche con ácido nítrico (método no.
2) ofreció un adecuado tiempo, para digerir la matriz de té y fue el más eficiente
método para recuperar Cd, Cr, Pb, As y Se. Además, los métodos 1 y 3 también
fueron satisfactorios, relativamente baratos, sencillos y rápidos. El Método no. 5 no
se recomienda para la digestión de muestras de té mientras que el método no. 6
era costoso.

Se detectaron concentraciones de Cd, Pb, As y Se en hojas de té frescas, pero no

se detectó Cr. Las concentraciones de As fueron altas en té fresco y negro,
mientras que la concentración de Pb y Cr en el té negro fue superior a la
recomendada nivel establecido por la OMS. El suelo de las plantaciones de té.
Estaba contaminado con As y Se, cuyos niveles fueron a veces superiores a la
recomendación de la OMS.

Los altos niveles de metales pesados pueden transportarse fácilmente a hojas de

té a través de las raíces de las plantas de té.

La tendencia de los TF de metales pesados, en las muestras de té investigadas

fueron Cd> As> Se> Pb.