QUÍMICA ANALÍTICA IV

Determinación voltamétrica catalítica selectiva de

vitamina C en preparaciones farmacéuticas y
matrices complejas de jugos de frutas frescas.
ESTHER CEBALLOS PORTILLO a & BIELKA PÉREZ MARTÍNEZ a.

Docente. Andrea Ramos Hernández.

a
Estudiantes del Programa de Química, Universidad del Atlántico.

El objetivo de este trabajo es describir un método voltamétrico simple, selectivo y

preciso para la determinación de ácido ascórbico en preparaciones farmacéuticas y
jugos de frutas frescas: se describen matrices complejas que contienen diversos
compuestos reductores. El método se basa en la oxidación electrocatalítica del ácido
ascórbico en solución homogénea utilizando ácido carboxílico ferricinio
electrogenerado como mediador. Se optimizó el pH y la concentración del mediador
que afecta el rendimiento de la oxidación electrocatalítica del analito. El método se
aplicó para determinar la vitamina C en muestras de jugo de frutas turbias, viscosas
y de colores profundos con contenidos de ácido ascórbico que van desde 15 a 45
mg por 100mL, sin dilución, concentración u otro tratamiento previo adicional de las
muestras. La cantidad de mediador utilizado varió dependiendo de la concentración
de ácido ascórbico en las muestras. El método también se utilizó para el análisis
farmacéutico utilizando un gráfico de calibración. Para las muestras de jugo de fruta,
se adoptó la técnica de adición estándar para evitar que la matriz afecte la precisión
de la determinación. La desviación estándar relativa para el análisis de vitamina C
en jugos de frutas varió de 1.5 a 5%. La fiabilidad del método se estableció por
determinación paralela frente a los métodos oficiales.

Electrodos utilizados
Los experimentos electroquímicos se llevaron a cabo utilizando un potenciostato
EG&G/galvanostato modelo 273 junto con una computadora personal IBM conectada
a una impresora Epson modelo FX-850. Se usó una celda convencional de tres
electrodos termostatizada a 25 + 0.1 °C con electrodo de calomel como electrodo
de referencia, un alambre de platino como electrodo auxiliar y un disco de carbono
vítreo como electrodo de trabajo (A = 0.126 cm 2 de EG&G).
Velocidad de barrido: 10 mV s-1

Intervalo de potencial: -0,400 a 0,600

Preparaciones farmacéuticas
(1) tabletas que contienen ácido ascórbico como un solo componente (tabletas
masticables)
(2) tabletas que contienen carbonato de sodio combinado con ácido ascórbico
(tabletas efervescentes)
(3) vitamina C en polvo
(4) ampollas que contienen ácido ascórbico como componente único
(5) cápsulas multivitamínicas que contienen vitaminas A, complejo B, D2 y E,
nicotinamida, pantotenato de calcio y ácido fólico junto con minerales (Fe2+, Ca2+,
Mg2+, Mn2+, Cu2+, Zn2+ y Mo2+)
(6) tabletas multivitamínicas que contienen vitaminas A, complejo B, D2 y E,
nicotinamida, pantotenato de calcio, ácido fólico.

Se usó un medidor de pH modelo 654 (Metrohm). El electrodo de trabajo se pulió

con polvo de alúmina (0,05 / tm) y luego se lavó con agua y acetona a su vez antes
de cada medición voltamétrica.

Para la preparación farmacéutica de las tabletas de vitamina C se realizó

el siguiente procedimiento:
Se transfirió una porción pesada de forma precisa de una muestra finamente
pulverizada equivalente a aproximadamente 100 mg de ácido ascórbico a un tubo
de ensayo de 10mL y se extrajo ácido ascórbico con dos porciones de 5mL de ácido
cítrico al 0,5% en agua bidestilada. Los extractos se combinaron en un matraz de
50 mL y se diluyeron a volumen. Una porción de 1 mL de extracto se diluyó con 10
mL de tampón de glicina a pH 4, que contenía LiClO4 0,1 M y ácido
ferrocenocarboxílico 0,1mM, en una célula voltamétrica y se registró un
voltammograma cíclico usando un electrodo de carbono vítreo (GC) bien pulido.
La cantidad de ácido ascórbico se determinó mediante un gráfico de calibración.
Para zumos de frutas.
El jugo fresco (naranja, limón dulce, lima y pomelo) se obtuvo exprimiendo la fruta
entre dos vasos de vidrio para evitar la contaminación por iones metálicos que
podrían interferir en las determinaciones. Los jugos de tomate, fresa y kiwi se
obtuvieron usando un exprimidor manual (material polimérico). Los jugos obtenidos
se filtraron en un vaso de precipitados, se transfirió una porción de 10mL del filtrado
a una celda electroquímica, se añadió la cantidad requerida de LiClO4 (0,1M) como
electrolito de soporte, la solución se tamponó por disolución directa de glicina (0,5M)
y el pH se ajustó con una solución concentrada de hidróxido de sodio.
La concentración de ácido ferrocenocarboxílico se optimizó para cada solución de
muestra con el fin de registrar un voltamograma catalítico completo. Para la
determinación del ácido ascórbico en la muestra se utilizó la técnica de adición
estándar.
Método de titulación de yodo.
Se estandarizó una solución de yodo 0.05 M de la manera usual con un estándar
primario de As2O3 o solución de tiosulfato de titrisol. Para el análisis farmacéutico se
utilizó un procedimiento yodimétrico.
Método de titulación de 2,6-diclorofenolindofenol (DCPIP)
La solución de indofenol se estandarizó mediante valoración con 2,0mL de solución
de ácido ascórbico estándar y 5mL de solución de HPO3-HOAc hasta el punto final
(un color rosado).
El consumo del blanco se determinó titulando la solución de indofenol con 7mL de
solución de HPO3-HOAc más una cantidad dada de agua equivalente al volumen de
solución de indofenol utilizada en la titulación de estandarización previa.
Para la titulación de la muestra, se mezclaron 100mL de jugo con un volumen igual
de solución de HPO3-HOAc antes de filtrar. Luego se tituló un volumen del filtrado
equivalente a aproximadamente 250 mg de ácido ascórbico con solución de
indofenol usando el mismo procedimiento descrito anteriormente, incluida la
valoración del blanco.

Método de calibración empleado: Para el desarrollo de este trabajo se utilizó

una curva de calibración y la técnica de adición estándar.
Gráfico de calibración y precisión.
En presencia de ácido ferrocenocarboxílico 0,1 mM en solución tamponada con
glicina a pH 4, la corriente pico anódica para voltammogramas cíclicos con una
velocidad de exploración de 10mV s-1 fue proporcional a la concentración de ácido
ascórbico dentro del rango 5 x 10-5 -1 x 10-3 M con solo una pequeña intersección.
La ecuación de regresión fue: i (mA) = - 1.28 + 9757C (M); r = 0.999, n = 6. La
media de tres análisis repetidos de una solución de ácido ascórbico a una
concentración de 5 x 10-4 M ensayada a su valor preparado dio una desviación
estándar relativa de 2.5%. Este nivel de precisión es adecuado para el análisis de
control de calidad de preparaciones farmacéuticas y productos naturales.
 Tabla 1. Resultados basados en tres determinaciones replicadas por muestra.
El método propuesto se aplicó al análisis de varias formas de dosificación
farmacéuticas que contienen ácido ascórbico (tabletas, polvo, ampollas o cápsulas)
adquiridas de fuentes locales sin interferencia de los excipientes y otras drogas
encontradas. Se encontró que la evaluación de la concentración de ácido ascórbico
era más adecuada con la ayuda de un gráfico de calibración. Los resultados para el
análisis de estas preparaciones con el método voltamperométrico se compararon
favorablemente con los obtenidos por el método estándar de la USP (Tabla 1).

Fig. 1. Voltamogramas cíclicos de (a) ácido ferrocenocarboxílico 2mM en tampón de glicina 0,5M + LiClO4
0,1M a pH 4, (b) como para (a) pero con adición de ácido ascórbico 5mM, (c) ascórbico 5mM ácido en
solución tampón pH 4. Velocidad de exploración: 5mV s -t.
El rango de concentración normal de ácido ascórbico se informó para varios jugos de frutas en
un rango de 10 a 40mg por 100mL. Experimentos preliminares mostraron que para obtener un
voltammograma cíclico catalítico completo "aumentando la corriente anódica de la pareja redox
mediadora y la eliminación sustancial del pico catódico correspondiente en la exploración de
voltaje inverso, en presencia de ácido ascórbico" para cada muestra de jugo de fruta (ver Fig.
1, curva b), es deseable una concentración óptima del mediador que depende del contenido de
vitamina C de las muestras.
Por lo tanto, la cantidad óptima de ácido ferrocenocarboxílico que debe agregarse a la solución
de prueba se obtuvo agregando el mediador en cantidades crecientes hasta que el pico de
oxidación original del ácido ascórbico encontrado con un potencial más positivo desapareció y
un ciclo catalítico completo
Se obtuvo voltammograma. Este procedimiento puede realizarse rápida y fácilmente mediante
la preestimación del contenido de ácido ascórbico de la muestra con la ayuda de la señal no
catalítica del ácido ascórbico y luego agregando el mediador en la célula voltamétrica en dos
momentos diferentes.

Conclusión
El método voltamétrico propuesto es rápido (el tiempo empleado en manipulaciones y
mediciones es inferior a 15 minutos), simple, preciso, adecuado para el control de rutina y puede
llevarse a cabo directamente sin ningún tratamiento previo para una gran cantidad de muestras
de jugo de frutas. El presente método tiene un alto grado de especificación para la determinación
de ácido ascórbico en jugos de frutas debido a la oxidación selectiva electrocatalítica del ácido
ascórbico con ácido ferrocenocarboxílico y podría usarse como un ensayo de control de calidad
y de indicador de estabilidad para la vitamina C. El método tiene un claro ventaja sobre los
métodos espectrofotométricos para el análisis de muestras que contienen partículas finas o de
color profundo y alta viscosidad.

Referencia

Pournaghi-Azar, M. H., and R. Ojani. 1997. “A Selective Catalytic Voltammetric Determination of

Vitamin C in Pharmaceutical Preparations and Complex Matrices of Fresh Fruit Juices.” Talanta
44(2): 297–303.