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UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA


INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
BIOTECNOLOGÍA HUMANA

Nombre: Omar Arias, Yadira Guasumba NRC: 6335 Fecha de entrega: 05-06-2020
Sofía Taday, Juan Pablo Vaca

1. TEMA: Genómica como herramienta para el desarrollo de productos biotecnológicos – Técnica


Phage Display.
2. INTRODUCCIÓN
El desarrollo de tecnologías de genotipado junto al mapeo de genes han permitido que los es

3. OBJETIVO GENERAL
Ensamblar los fragmentos de DNA a partir de secuencias obtenidas con el método Sanger

Objetivos específicos

● Realizar una búsqueda de BLAST para la identificación molecular de microorganismos


● Determinar si una secuencia es apropiada para barcoding

4. JUSTIFICACIÓN
5. RESULTADOS
La biblioteca de presentación de fagos de anticuerpos dirigida a HS muestra el porcentaje de clones
elegidos al azar y clones seleccionados conta HS, que codifican a las secuencias de aminoácidos
Tabla _ Diversidad de la biblioteca de anticuerpos XBBXBX CDR3

a:"B" codifica los residuos básicos H, R o K, y "X" codifica cualquier aminoácido


b: Valor teórico: 24,4%
c: "Z" codifica H, R, K, N, Q o S
d: Valor teórico: 0.2%

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En el análisis de grupos sulfato en el epítopo HS de anticuerpos scFv se obtuvo que la
reactividad de los anticuerpos anti-HS se estudió utilizando preparaciones de heparina modificadas
(heparina N-desulfatada / N-acetilada, 2- O desulfatada y 6-O desulfatada), los resultados de
reactividad de cada anti-HS scFv se describen en la Tabla _.
Tabla _ Reactividad de anticuerpos scFv anti-HS seleccionados contra preparaciones de heparina
modificada, según lo evaluado por ELISA. Adaptada de:

Reactividad: +++: muy fuerte, ++: fuerte, +: moderado, ±: débil, - ausente.

Para la localización de epítopos de HS en secciones de riñón de rata, se analizó en criosecciones


de riñón de rata y se comparó con el anticuerpo HS4C3 original. Se obtuvo que MP3C1,
MP3B2’20.b.k. y MP3A5 tiñeron principalmente el glomérulo y los capilares peritubulares, mientras
que MP4A11'10.b.k. y MP3G7 reconocieron principalmente la cápsula de Bowman. Tanto la cápsula
de Bowman como el glomérulo fueron reconocidos por MP4F11, MP4G5 y MP4F11. El anticuerpo
MPB49 (seleccionado al azar) no fue reactivo con secciones de riñón.
6. DISCUSIÓN
Por lo tanto en el diseño de Anti-HS scFvs, las modificaciones específicas, dirigidas a la
secuencia de codificación que permite producir anti-HS scFv, son una potencial herramienta para el
diseño de anticuerpos que tengan una alta especificidad para el reconocimiento de diferentes
patrones de sulfatación de HS (Damen et al, 2020)
7. CRÍTICA
Por otro lado, el artículo adecua correctamente la técnica de phage display en la creación de una
biblioteca de anticuerpos anti-HS basándose en la modificación de la secuencia que los codifica que
para nosotros determina una perspectiva en el estudio de la manipulación genética, y la evaluación
de los efectos y los productos, principalmente anticuerpos para vacunas, que se pueden obtener por

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las modificaciones de una secuencia de interés de manera individualizada por la relación genotipo-
fenotipo.
Shipp, E. & Hsieh, L. (2007) establecen que las variaciones de los patrones de sulfatación en HS
dependen del rol que estén cumpliendo ya que pueden estar involucrados en procesos fisiológicos y
patológicos. Con base en ello, consideramos que una vez caracterizada la afinidad de cada uno de
los anticuerpos contra los patrones de sulfatación se debería estudiar, a través de la misma técnica,
los componentes genéticos que dan origen a dichos patrones de sulfatación involucrados en
procesos patológicos permitiendo no solo seleccionar los anticuerpos más competentes en una
aplicación terapeútica sin también evitar los efectos secundarios y aumentar la efectividad del
tratamiento además de detectar la influencia de dichos componentes genéticos y su incidencia en el
cuadro clínico.

8. REFERENCIAS

Damen, A., Van de Westerlo, E., Versteeg, E., Van Wessel, T., Daamen, W., & Van Kuppevelt, H.
(2020). Construction and evaluation of an antibody phage display library targeting heparan
sulfate. doi:10.1007/s10719-020-09925-z
Shipp, E., & Hsieh-Wilson, L. (2007). Profiling the Sulfation Specificities of Glycosaminoglycan
Interactions with Growth Factors and Chemotactic Proteins Using Microarrays.
doi:10.1016/j.chembiol.2006.12.009

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