DETERMINACIÓN 

DE LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA 
Felipe Mora Restrepo ­ ​ femorare@unal.edu.co​  ­ Biología 
Brandom Camilo Mosquera Cadena ­ ​ bcmosquera@unal.edu.co​  ­ Biología  
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA 
Bogotá ­ 14 de Septiembre del 2015 
 
1. Hipótesis   
 
Se  llevarán  a  cabo  procesos  para  determinar  la  actividad  enzimática  en  función  del  pH,  la 
concentración  de   la  enzima,  la  concentración  del  sustrato  y  respecto  a  la  presencia  de 
inhibidores,  por  tanto  se  espera  obtener  datos  que  correspondan  con  lo  esperado  según la 
literatura.  
 
2. Datos y Resultados 
 
Se trabajaron los siguientes reactivos con sus respectivas concentraciones: 
Concentración de KMnO4: ​ 0,005 M  
Concentración de H2O2: ​ 0,05 M 
Concentración de NaCN: ​ 0,05 nM 
 
Tabla #1. Efecto del pH sobre la actividad enzimática 
 
Tubo  KMnO4  H2O2  Micromoles  Micromoles  Micromoles  Micromoles  Micromoles 
gastados  mL  de KMnO4  H2O2  H2O2  H2O2  descompuestas/
(mL)  gastados  iniciales  Residuales  descompuestas  min/mL enzima 

1  5,90  2,0  30  100  75  25  10,0 

1  8,50  2,0  42  100  105  ­  ­ 

2  7,50  2,0  38  100  95  5  2,0 

2  7,40  2,0  37  100  92  8  3,2 

2  8,05  2,0  40  100  100  0  0,0 

3  7,50  2,0  38  100  95  5  2,0 

4  6,50  2,0  32  100  80  20  5,0 

6  8,10  2,0  40  100  100  0  0,0 

6  7,00  2,0  35  100  88  12  4,8 

 
Gráfica #1. Actividad enzimática en función del pH  
  
 
Tabla #2. Efecto de la concentración del sustrato 
 
Tubo  KMnO4  Micromol H2O2  Micromole Micromoles  Micromoles  Micromoles 
gastados  es de  mL  s H2O2  H2O2  H2O2  descompuesta
(mL)  KMnO4  iniciales  Residuales  descompuesta s/min/mL 
gastados  s  enzima 

1  2,10  10,50  0,5  25  26  ­  ­ 

2  4,65  23,25  1,0  50  58  ­  ­ 

3  6,70  33,50  1,5  75  84  ­  ­ 

4  7,30  36,50  2,0  100  91  9  0,9 

 
 
Tabla #3. Efecto de la concentración de la enzima (Datos tomados del grupo 12) 
 
Tubo  KMnO4  Micromoles  H2O2  Micromol Micromoles  Micromoles  Micromoles 
gastados  de KMnO4  ml  es H2O2  H2O2  H2O2  descompuesta
(mL)  gastados  iniciales  Residuales  descompues s/min/mL 
tas  enzima 

1  1,75  8,75  2,0  100  22  78  31,2 

2  1,25  6,25  2,0  100  16  84  16,8 

3  1,50  7,50  2,0  100  19  81  10,8 

4  1,25  6,25  2,0  100  16  84  8,4 

5  8,25  41,25  2,0  100  103  ­  ­ 

 
Gráfica #2. Actividad enzimática en función de la concentración de la enzima  
 

 
 
Tabla #4. Efecto de inhibidores sobre la actividad enzimática (Datos tomados del 
grupo 2) 
 
Tubo  KMnO4  Micromoles  H2O2  Micromoles  Micromoles  Micromoles  Micromoles 
gastados  de KMnO4  ml  H2O2  H2O2  H2O2  descompuestas
(mL)  gastados  iniciales  Residuales  descompuestas  /min/mL enzima 

1  1,70  8  2,0  100  20  80  8,0 

2  1,00  5  2,0  100  12  88  8,8 

3  2,70  14  2,0  100  35  65  6,5 

 
Gráfica #3. Actividad enzimática en función de la cantidad de inhibidor 
 

 
 
 
3.Cálculos 
Muestra de cálculos:  
 
● Conversión de mL de reactivo a micromoles: 
 
((Cantidad del reactivo mL) * (1L/ 1000 mL)) * (concentración de reactivo M (moles/L)) = 
moles de reactivo 
moles de reactivo*(micromol / 1*10^­6 moles) = micromoles de reactivo 
 
Ejemplo: 
 
(KMnO4 gastados (mL) * ​ (1L/ 1000mL)))​  * ​
Concentración de KMnO4 = moles de KMnO4 
moles de KMnO4 * (1 micromol/ 1*10^­6 moles) = micromoles de KMnO4 
 
(5,90 mL KMnO4 * 1L/ 1000mL) * 0,005 M = 3*10^­5 mol 
3*10^­5 mol KMnO4 * (1/ 1*10^­6) = 30 micromol KMnO4 
 
● Hallar la cantidad de H2O2 residual 
Teniendo en cuenta que la reacción que se lleva a cabo en la titulación es: 
 

 
Por lo cual para calcular cuántas micromoles de H2O2 se descompusieron, se realiza el 
siguiente cálculo 
 
Micromoles de KMnO4 gastados * (5*10^­6 micromoles de H2O2 / 2*10^­6 micromoles de 
KMno4) = Micromoles de H2O2  
 
Ejemplo: 
 
30 micromol KMnO4 *(​ 5*10^­6 micromoles de H2O2 / 2*10^­6 micromoles de KMno4) = 75 
 
● Hallar la cantidad de H2O2 descompuesto  
 
Cantidad inicial de H2O2 ­ Cantidad residual de H2O2 = cantidad de H2O2 decompuesto  
 
Ejemplo: 
 
100 micromol KMnO4 ­ 75 micromol KMnO4 = 25 micromol KMnO4 
 
● Hallar ​ Micromoles descompuestas/min/mL enzima 
 
(Micromoles descompuestas/tiempo transcurrido) / mL de enzima = ​ Micromoles 
descompuestas/min/mL 
 
Ejemplo: 
 
(25 micromol H2O2/ 5 minutos) / 0,5 mL enzima = 10 micromol / (min mL) 
 
4. Discusión de resultados  
 
Según  la  gráfica  de  la  actividad  enzimática  en  función  del   pH,  se  observa  como  a  un  ph  
cercano  a  4,   trabaja  con  más  eficiencia  la  enzima.  Sin  embargo  la  gráfica  correspondiente 
debería  poseer   forma  de  una  campana,  en  la  cual  se  debería  observar  claramente  el  pH 
óptimo,  que   no  necesariamente  debe  ser  igual  al  pH  intracelular.  En  nuestro  caso  la 
actividad  enzimática  de  la  catalasa  no  presenta   un  patrón  claro,  ya que su su pH óptimo es 
el  mismo  en  el  cual  se  comenzó  la  prueba  y  no  nos  permite  ver  que  pasa  con  la  enzima  a 
pH inferiores.​  ​
[1]​[3]  
 
En  la  prueba  de  efecto de la concentración del sustrato en la actividad enzimática,  los datos 
no  permitieron  elaborar  una  gráfica  para  ver   el  comportamiento  de  la  enzima,  ya   que  al 
momento  de  realizar  los  cálculos,  los  resultados  mostraron   incoherencias  al  dar  más 
micromoles  de  sustrato  que  lo  que  se  tenía  inicialmente.  De  todas  formas,  según  la 
literatura,  las  enzimas  en  función  de  la  concentración  del  sustrato  deben  presentar  una 
gráfica con comportamiento hiperbólico, donde la velocidad aumenta a medida que aumenta 
el  sustrato   y  luego la velocidad se  mantiene estable  a pesar de que se aumente el sustrato. 
[1] 
 
En  la  gráfica  correspondiente  a  la  actividad  enzimática  en función de la concentración de la 
enzima, se ve un comportamiento inversamente proporcional, sin embargo este resultado es 
ilógico,  ya  que  a  mayor  cantidad  de  enzima,  debería  aumentar  su  velocidad  enzimática,  lo 
cual  debe  verse  representado  como   una  función  lineal,   es decir, directamente proporcional. 
[1] 
 
La  actividad  enzimática  en  función  de  la  cantidad  de  inhibidor  presenta  un comportamiento 
ligeramente  inverso,  por  lo  cual  a   mayor  cantidad  de  inhibidor,  menor  actividad enzimática. 
Sin  embargo  el  comportamiento   debería  ser  mucho  más  marcado  y no una pequeña curva, 
sino una línea recta con pendiente negativa ​ [1] 
 
 
5. Cuestionario 
 
● En  la  práctica  usted  estudió  algunos   factores  que  afectan  la  actividad  de  la 
enzima,  ¿qué  otros  factores  tendría  que  evaluar  para  completar  el  estudio 
cinético de la catalasa? 
 
La temperatura y la presencia de cofactores enzimáticos.  
Las  temperaturas  extremas afectan la velocidad de la reacción debido a la naturaleza de las 
proteínas,  aunque  se  puede  hablar  de  temperaturas  donde  la  actividad  de  la  enzima  es 
máxima.  
La  presencia  adecuada  de   cofactores  enzimáticos   ayuda  también  a  que  se  lleve  a  cabo  la 
reacción, pues la enzima sin estos no puede funcionar. ​ [2] 
 
● Realice  una  comparación  entre  la  acción  de  la  catalasa  con  la  acción  de  la 
peroxidasa 
 
Tanto  la catalasa como la peroxidasa tienen un comportamiento similar en cuanto a  la forma 
del  crecimiento  de  actividad  enzimática.  Cuando  la  concentración  del  sustrato  es  variable, 
ambas  presentan  un  crecimiento  aparentemente  parabólico  y  llegan  a  un   máximo  de 
actividad  enzimática,  pero  hay  una  diferencia  significativa  y  es  que  el  máximo  de  actividad 
enzimática de la catalasa (40 mM) es superior al de la peroxidasa (10mM). ​ [3] 
 
 
● ¿Cúal  es  el  papel   del  H2SO4  en  esta  práctica?¿Por  qué  no  se  aplica al tiempo 
con los demás reactivos? 
 
­  ​El  H2SO4  se  utiliza  para  desnaturalizar  la  enzima  alterando  el  sitio  activo  de  la   enzima. 
Esto se logra bajando el pH por acción del ácido sulfúrico. ​ [4] 
 
● ¿Se  podría  sustituir  el  ácido  sulfúrico  por  otro  reactivo  como  el  hidróxido  de 
sodio (NaOH)? Justifique su respuesta 
 
­  ​
Si  se  podría  sustituir  ya  que  generalmente  las  enzimas  se  desnaturalizan  a  pH  extremos, 
por  lo  cual  al  agregar  NaOH,  el  pH  aumentaría  drásticamente   logrando  desnaturalizar  la 
enzima haciendo que detenga su actividad enzimática.​  [5] 
 
● ¿Qué  pruebas  adicionales  tendría  que  realizar   para  determinar  si  esta  es  una 
enzima michaeliana o alostérica? Justifique su respuesta 
●  
No  se  requieren  de  más  pruebas  además  de   la  de  actividad  enzimática  en  función  de  la 
concentración  del  sustrato.  Esto  se  debe  a  que  las  enzimas  michaelianas  siguen  un 
crecimiento  hiperbólico  en  el   cual  las  moléculas  se  modifican  en  mayor  o   menor  medida 
según  sea  la  concentración  del  sustrato,  mientras que las alostéricas siguen un crecimiento 
sigmoidal  (en  forma  de  S)   a  causa  de  sus  interacciones  con  sus  múltiples  subunidades  y 
sitios activos. ​  [6] 
 
6. Conclusiones 
 
● Desafortunadamente  los  resultados  no   fueron  los  esperados  en  ninguna  prueba, 
esto  pudo  ser  resultado  de  errores  experimentales  ya   que  tocaba  tener  mucho 
cuidado  con las condiciones en las que se debía mantener la enzima (principalmente  
en  frio),  ademas  de  que  en  la  prueba  para  ver   la  velocidad  de  la  enzima  en función 
del  pH,  cada grupo manejó una muestra de catalasa diferente, lo  que significaba que 
cada  parte  de  la  prueba   presentaba  condiciones  diferentes  para  cada  tubo  y  no 
permitió realizar comparaciones precisas.  
 
7. Bibliografía 
  
1. Academia,  Efecto  del  pH  y  la  temperatura  sobre   la  actividad  de  la  catalasa, 
consultado a través de:  
http://www.academia.edu/7135676/EFECTO_DEL_PH_Y_TEMPERATURA_SOBRE_LA_A
CTIVIDAD_DE_LA_CATALASA 
2. Universidad  Nacional  Abierta  y  a  Distancia,  Factores  que  afectan  la  actividad 
enzimática, consultado a través de:  
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/200002/MODULO%20SISTEMAS%20METABOLIC
OS%20NUTRICIONALES/leccin_8_factores_que_afectan_la_cintica_enzimtica.html 
3. Castro  JA,  Baquero  LE,  Narváez  CE,  Catalasa,  Peroxidasa  y  Polifenoloxidasa  de 
pitaya amarilla (Acanthocereus pitajaya), consultado a través de:  
http://www.redalyc.org/pdf/3090/309026667004.pdf 
4. Portafolio electronico Biología, Catálisis de Enzimas, consultado a través de:   
https://sites.google.com/site/portafolioelectronicobiologia/home/laboratorio­2­catalisis­de­enz
imas 
5. Curso  de  Biomoléculas,  Regulación  de  la  actividad   enzimática,  consultado   a  través 
de: 
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm#ph 
6. Curso de Biomoléculas, Actividad enzimática, consultado a través de:  
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#e