ESPECTROFOTOMETRÍA – Parte I

MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS
En los métodos espectrofotométricos se mide la intensidad de luz (energía radiante o radiación
electromagnética) para determinar la concentración del analito presente en una muestra.

Podemos dividir los métodos espectrofotométricos en dos grandes grupos según qué es lo que
medimos para cuantificar al analito:

1. Espectrofotometría de absorción:
En estos casos se mide la Absorbancia (A) del analito, esto es la luz absorbida por el
analito, y esta magnitud se relaciona con la concentración (C).

A ∞ c (la absorbancia es directamente proporcional a la concentración)

2. Espectrofotometría de emisión:
En este caso se mide la luz emitida por un analito previamente excitado, la señal emitida
se relaciona con la concentración de la especie que emite luz cuando vuelve desde un estado
excitado (estado de mayor energía al que llegó absorbiendo energía) a su estado basal (estado
de menor energía posible tal como se encuentra naturalmente).

Señal emisión ∞ C (la emisión es directamente proporcional a la concentración)

CONCEPTOS PREVIOS
A) Luz o radiación electromagnética
Dado que los métodos espectrofotométricos se basan en la medición de luz, repasamos las
características de la radiación electromagnética y recordamos a que se denomina espectro
electromagnético.
La Física Clásica define a la luz como una radiación electromagnética y la describe como una onda
trasversal a la dirección de propagación (Figura 1).

Figura 1- Representación gráfica

de una onda electromagnética en
tres dimensiones. La flecha negra
representa la dirección de
propagación (dirección de avance
de la onda).

Cada onda electromagnética se caracteriza por un conjunto de parámetros que la definen:

1. Longitud de onda (λ): es la distancia que existe entre dos máximos o dos mínimos de la onda,
se mide en unidades de longitud (cm, µm, nm, etc) (Figura 2)
2. Número de onda (ν): corresponde a la recíproca (o la inversa) de la longitud de onda, se mide
en (unidades de longitud) -1: cm-1; nm-1
3. Frecuencia de la onda (ν): representa cuantas veces pasa la onda completa por un punto fijo
en la unidad de tiempo, se mide en Hercios (1 Hz= 1Hertz) que significa la inversa del segundo
siendo 1 Hz = 1/s = s-1
4. Amplitud de la onda (A): se mide desde la línea de avance hasta el máximo de la onda
(Figura 2).
 Figura 2- Representación bidimensional de una onda electromagnética. El eje vertical puede
ser el campo eléctrico o el magnético y el eje horizontal puede ser el tiempo o la distancia.

Los parámetros que caracterizan a una radiación electromagnética están relacionados entre sí de la
siguiente manera:
ν = c/λ
La unidad de medida que se usa para la longitud de onda (λ) depende de la región del espectro
electromagnético en la que se esté trabajando (Figura 3). Si estamos en la región visible y ultravioleta
(las que se usan en los métodos que vamos a estudiar) la unidad de medida es nm (nanómetros,
corresponde a 10-9 metros). La frecuencia (ν) se mide generalmente en Hertz (1/s) y c es la velocidad
de la luz en el vacío, es una constante cuyo valor es 3 x 10 8 m/s ó 3 x 1010 cm/s

Para utilizar esta relación entre frecuencia y longitud de onda, las unidades
de la constante c definirán en que unidades utilizaremos los otros parámetros.

A partir de la Física Cuántica, se agregó el concepto de “dualidad onda partícula” y se comenzó a

interpretar a la luz como una onda de “fotones” que se propagan. Dichos fotones representan
paquetes discretos de energía denominados “cuantos”. Con este nuevo concepto, se interpreta a la luz
como una onda que propaga energía y la energía de la onda (radiación electromagnética) queda
definida como:
E=hxν
h: constante de Planck, su valor es 6,63 x 10-34 J.s (J: Joules; J=kg·m2/s2)

Si recordamos que, ν = c/λ, podemos reemplazar en la expresión de energía:

E = h x c/λ
En esta expresión podemos observar claramente que cuanto mayor es la frecuencia de la luz mayor
será su energía y que cuanto mayor sea la longitud de onda menor será la energía:

A mayor ν → mayor energía

A mayor λ → menor energía

B) ¿Qué es el espectro electromagnético?

Una fuente de luz, por ejemplo, el sol y las lámparas eléctricas, emiten un amplio espectro de
radiaciones electromagnéticas, es decir que emiten luz de diferentes longitudes de onda: Espectro
electromagnético (Figura 3).
 Figura 3. Representación esquemática del espectro electromagnético.

Aquellas longitudes de onda que corresponden al rango entre 400-700 nm pertenecen a lo que se
denomina región visible del espectro ya que estas longitudes de onda afectan nuestra retina y
provocan que observemos colores. Además de la región visible existen en el espectro
electromagnético longitudes de onda a las que nuestra retina no es sensible: por encima de la región
visible se encuentra la región Infrarroja (λ mayores a 700 nm) y por debajo de la región visible se
encuentra la región Ultravioleta (λ menores que 350 nm).

Como ya hemos mencionado, la energía de una radiación electromagnética es inversamente

proporcional a su longitud de onda (E = h x c/λ), por lo tanto, los rayos visibles tienen menor energía
que los ultravioleta, pero mayor energía que los infrarrojos. Por ejemplo, pensemos el siguiente
concepto de cultura general: debemos cuidarnos de los rayos UV. Los rayos ultravioletas son
perjudiciales para nosotros en comparación con los rayos de la región visible o infrarroja. Las
longitudes de onda de la región ultravioleta son pequeñas (<350 nm), lo que significa alta frecuencia
y alta energía.

C) Interacciones de los analitos (átomos y moléculas) con la luz.

¿Qué sucede cuando un átomo absorbe energía lumínica?: ÁTOMO EXCITADO.
Cuando un átomo absorbe energía lumínica en una cantidad adecuada se producen transiciones
electrónicas, esto quiere decir que los electrones que están en su condición de menor energía posible
(estado fundamental) pasan a un estado de mayor energía (estado excitado) que resulta inestable y
rápidamente buscarán la manera de volver al estado fundamental.

REPASO
Para comprender estos conceptos es necesario realizar un repaso de la estructura atómica estudiada
en Química General e Inorgánica. Dentro de un átomo, los electrones ocupan niveles discretos de
energía (concepto que deriva de la teoría cuántica) y para pasar de un estado a otro de mayor energía
deben absorber cantidades determinadas de energía denominadas cuantos. Podemos recordar que
los electrones ocupan orbitales (s, p d, etc) y que en cada orbital podemos ubicar como máximo
dos electrones apareados. Los niveles de energía dentro del átomo los denominábamos 1,2, 3, etc
y a medida que aumenta el nivel de energía, mayor es el número de orbitales presentes en cada
nivel así, el primer nivel sólo tiene 1 orbital (1s) el segundo nivel posee 4 orbitales (2s; 2p; 2p; 2p)
y así sucesivamente. También podemos recordar que de acuerdo a la posición de un átomo en la
tabla periódica podíamos deducir la estructura electrónica del mismo. Por ejemplo, pensemos en el
átomo de Na, que tiene número atómico 11, es del período 3 y del grupo I. Esto quiere decir que
tiene 11 electrones en total, los que ocupan hasta el tercer nivel de energía electrónica y que tiene
1 sólo electrón en el último nivel: 1s2; 2s2 y 2p6; 3s1.
Una vez que hemos recordado la estructura interna del átomo y donde se ubican los electrones, ahora
podemos comprender que cuando los electrones dentro del átomo absorben una cantidad de energía
adecuada pueden pasar de un nivel energético a otro de mayor energía (Figura 4). El resultado de esta
transición es un átomo excitado que resulta inestable y rápidamente buscará la manera de regresar
al nivel de menor energía eliminando el exceso de energía de alguna manera (liberando calor o
emitiendo luz) (Figura 4): PROCESO DE RELAJACIÓN.

Figura 4- Representación esquemática de los niveles de energía en un átomo. E0, E1

y E2 representan los niveles electrónicos, E0 corresponde al nivel fundamental y los
otros niveles son de mayor energía. Para simplificar el esquema no se dibujaron los
niveles energéticos de cada uno de los orbitales (s, p, etc) dentro de cada nivel
energético. La flecha negra representa un salto electrónico entre el nivel fundamental
y el primer nivel excitado. La flecha gris indica el regreso al estado fundamental. La
diferencia de energía entre los niveles son cantidades discretas de energía
(determinados valores de hν).

¿Qué sucede cuando una molécula absorbe energía lumínica?: MOLÉCULA EXCITADA
Una molécula está formada por la unión entre átomos, estas uniones no son estáticas ya que
permanentemente vibran y rotan. Las uniones entre átomos se deben a enlaces entre sus electrones
externos. Por lo tanto, cuando hablamos de la energía interna (E) de una molécula estamos hablando
de tres componentes: E rotacional, E vibracional y E electrónica.

Tomando en cuenta esta estructura interna de una molécula tenemos que pensar que los electrones
dentro de la molécula tendrán determinado nivel energético de vibración y de rotación además de su
nivel electrónico (Figura 5).

Figura 5- Representación esquemática de los niveles de energía

en una molécula: electrónicos (E0, E1); vibracionales (0, 1, 2, 3)
y rotacionales (0, 1, 2). Para simplificar el esquema los niveles
rotacionales se dibujaron sólo en el nivel electrónico E0, pero
este esquema se repite en todos los niveles energéticos. Los
niveles de energía rotacional están separados entre sí por baja
energía, los niveles de energía vibracional están separados entre
sí por energía media y niveles electrónicos están separados entre
sí por mayor energía. La excitación en la molécula puede ser
sólo rotacional (flecha gris clara) vibracional (flecha gris más
oscura) o electrónica (flecha negra).

La separación entre los niveles de energía estará dada por cantidades discretas de energía, es decir
“cuantos” de energía (E = h x ν). Esto quiere decir que para que un electrón pase de un nivel energético
a otro dentro de la molécula debe absorber cantidades discretas de energía. La transición electrónica
será la que alcance según la energía absorbida, pero es un hecho que, si la energía fue suficiente para
hacer un salto electrónico, fue más que suficiente para hacer saltos vibracionales y rotacionales ya
que son de menor energía.

Las moléculas excitadas son inestables al igual que los átomos, por lo tanto, también buscarán la
manera de regresar a su nivel de menor energía posible liberando calor o emitiendo luz:
PROCESO DE RELAJACIÓN.

La energía de la radiación de microondas alcanza sólo para transiciones rotacionales.

La energía de la radiación infrarroja alcanza para las transiciones vibracionales y
rotacionales. La energía de las radiaciones visible y UV alcanza para producir transiciones
electrónicas, vibracionales y rotacionales.
PREGUNTAS Y PROBLEMAS SOBRE LOS CONCEPTOS PREVIOS

1. ¿Qué es una radiación electromagnética?

2. Definir los parámetros ondulatorios de la radiación electromagnética.
3. ¿Cómo están relacionados la energía y la longitud de onda?
4. ¿A qué se llama radiación monocromática?
5. Ordene las regiones visible, infrarrojo y ultravioleta del espectroelectromagnético según la Energía
que poseen y justifique.
6. ¿Qué sucede cuando una molécula absorbe energía? ¿Qué sucede cuando un átomo absorbe
energía?
7. ¿Qué significa excitación y relajación de los analitos?