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CUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
AMBIENTAL

INFORME DE LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA


AMBIENTAL

Tema: Determinación de dosis inhibitoria 50%.

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: estudiante(s) CODIGO(S): de estudiante(s)


 Evelyn López 2209
 Dayana Samaniego 2439
 Erika Erazo 2466
 Luisa Torres 2464
 Dayaneth Vallejo 2529
 Heidy Ruiz 2392
 Edwin Silva 2386
 Paulina Álvarez 2077

NIVEL: Noveno PARALELO: “A”

Docente: Ing. Andrés Beltrán

Lugar de Realización: Laboratorio de Química Analítica

Fecha de Realización: Fecha de Entrega:


23/11/2018 14/12/2018
CUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS

1. OBJETIVOS

1.1. Objetivo General:


Determinar la dosis inhibitoria del compuesto acetato de plomo a diferentes concentraciones en
la germinación de semillas de lechuga.

1.2. Objetivos Específicos:


 Analizar el índice de germinación de semillas de lechuga para determinar su viabilidad a
diferentes concentraciones de acetato de plomo.
 Medir el índice de crecimiento radicular de cada semilla una vez culminado el proceso de
germinación.
 Comparar los efectos en las diferentes concentraciones de acetato de plomo en la
germinación de semillas de lechuga y determinar su variabilidad para identificar cuáles son
las concentraciones significativas.
2. MARCO TEÓRICO Y REFERENCIAL

2.1 MARCO TEORICO

Germinación de la semilla de lechuga ( Lactuca saliva L.)


La lechuga es una hortaliza de clima frío, con cierta tolerancia a heladas débiles en sus estados
iniciales, pero cerca de la cosecha es susceptible a quemaduras de las hojas externas por
heladas, quedando muy expuestas a ataques de enfermedades. La temperatura óptima de
crecimiento está entre 15 y 18°C, prefiere temperaturas frescas para formar una cabeza más
compacta; la mínima es de 12°C, bajo esta temperatura la planta no crece; y la máxima entre 18
y 24°C, temperaturas superiores producen deterioro de la lechuga por crear cabezas más sueltas
y con tendencia a emisión de tallo floral o “subida”. (Saavedra,Gabriel, 2017). La germinación
comienza con la absorción de agua por la imbibición de la semilla seca, seguida por la
expansión del embrión. La captación de agua es trifásica con una captación inicial rápida (fase I,
es decir, imbibición) seguida de una fase de meseta (fase II). Se produce un aumento adicional
en la captación de agua (fase III) a medida que el eje del embrión se alarga y se rompe a través
de las capas de cobertura para completar la germinación. (Bewley, J. D., 1997)
Fases de la germinación
Inhibición: La primera etapa de la germinación se inicia con la entrada de agua en la semilla
desde el medio exterior (imbibición). La hidratación de los tejidos de la semilla es un proceso
físico con una duración variable según la especie considerada. Una vez que la semilla se ha
hidratado, comienzan a activarse toda una serie de procesos metabólicos que son esenciales para
que tengan lugar las siguientes etapas de la germinación. En esta fase de la germinación, si las
condiciones del medio lo determinan, la semilla puede deshidratarse retornando a su estado
inicial. La sensibilidad de las semillas a la falta de agua es variable según la especie. No
obstante, la velocidad de germinación suele ser menor cuando la semilla ha estado sometida a
déficit hídrico; igualmente se ha observado que en estas circunstancias las semillas son más
susceptibles a las infecciones por hongos. (VILLAMIL , P.J.,M. ; GARCIA, .F., P., 1998)
Germinación "sensu stricto”: Una vez que la semilla se ha hidratado adecuadamente, se entra en
una segunda etapa del proceso de germinación, la denominada fase de germinación, se
caracteriza porque se produce una disminución en la absorción de agua por las semillas, durante
esta etapa se tiene lugar una activación generalizada del metabolismo de la semilla, lo cual es
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esencial para que se desarrolle la última fase del proceso de germinación, la fase de crecimiento.
(VILLAMIL , P.J.,M. ; GARCIA, .F., P., 1998)
Fase de crecimiento: Se produce el crecimiento y emergencia de la radícula a través de las
cubiertas seminales. Las semillas que han alcanzado la fase de crecimiento no pueden volver a
etapas anteriores y en el caso de que las condiciones del medio no permitan que esta fase pueda
seguir adelante, la semilla morirá. Una vez que la radícula ha roto las cubiertas seminales, se
inicia el desarrollo de la plántula, proceso complejo y variable según las especies, que implica
un elevado gasto de energía que se obtiene mediante la movilización de las reservas nutritivas
de la semilla. (VILLAMIL , P.J.,M. ; GARCIA, .F., P., 1998)
de semillas.
Índice de toxicidad del plomo acetato en las semillas de lechuga
El acetato de plomo (II) es un compuesto químico cristalino de color blanco con un sabor
ligeramente dulce. Se obtiene tratando litargirio (óxido de plomo (II) o PbO) con ácido acético.
En la vegetación el acetato de plomo se acumula primariamente en las hojas por deposición
atmosférica. El acetato de plomo presente en la hoja rompe la cutícula y pasa al interior de la
misma" se acumula en las vesículas y puede originar efectos como: (SALUD DE NUESTRO
PLANETA, 2015)
 Anhibición de la mitosis y por tanto del crecimiento de laplanta.
 Anhibición de la síntesis del ATP y del rendimiento energético.
 Disminución de la viabilidad de las semillas
En cuanto la exposición aguda a plomo causa efectos tóxicos sobre la germinación de semillas y
el crecimiento de las plántulas de lechuga efectuando disminución en la formación y
crecimiento de nuevos tejidos en la plántula, mostrando reducción de la germinación y
crecimiento a una exposición mayor de concentración del metal. El efecto tóxico del plomo en
las semillas de lechuga reduce la biomasa vegetal, sin embargo, el crecimiento vegetal también
puede ser afectado por las propiedades fisicoquímicas del suelo como el pH, contenido de
materia orgánica entre otros, que pueden facilitar la retención y disponibilidad de cationes como
el plomo en el suelo.
2.2 MARCO REFERENCIAL
La práctica de “Determinación de dosis inhibitoria 50%.” se llevó a cabo el día 23 de noviembre
del 2018 en el Laboratorio de Química Analítica ubicada en la ESPOCH en la cuidad de
1
Riobamba, ubicada en la panamericana Sur km 1 cuyas coordenadas son 78°40ꞌ20″ y una
2
altura de 2815 msnm.

3. MATERIALES, REACTIVOS, EQUIPOS:

3.1 Materiales y Equipos: 3.2 Reactivos:


 Cajas Petri.
 Probeta de 50ml.  Agua destilada.
 Balanza analítica.  Plomo acetato.
 Semillas de lechuga.
 Pipeta de 10ml.
 Frascos vacíos.
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4. PROCEDIMIENTO:

Se preparo las 4 diluciones luego se procedio a tomar


de acetato de plomo 100, 6 cajas en la cual fueron
Se peso 4 cajas para luego
50 , 200 y 400 las mismas colocadas 10 semillas de
colocar las miligramos de
que fueron guardadas en 4 rabano y rotulado como
la dilucion
botellas con su respectiva concentracion 0 , 100, 50 ,
rotulacion 200 y 400

luego de haber colocada


las 10 semillas en las 120
Finalmente , luego de
cajas , se procedio a
todo eso se dejo en la
colocar papel filtro , agua
encubadora durante 72
destilada 10 ml y las
horas
concentraciones antes
preparadas
5. DATOS Y RESULTADOS:

Tabla 1. Índice de germinación

Repeticione
s Blanco C50 C100 C200 C400
1 10 10 10 10 6
2 9 10 9 9 5
3 8 9 10 7 4
4 9 9 9 9 4
5 9 10 10 9 3
6 10 8 10 9 6
Media 9,2 9,3 9,7 8,8 4,7
 los valores de la tabla se encuentran en función de las semillas germinadas
FUENTE: SAMANIEGO. D., Laboratorio de Química Analitica,2018.

Tabla 2. Efectos de la concentración Tabla 3. Logaritmo de los efectos


en las semillas

Concentració Efecto negativo sobre Concentració Logaritmo de los efectos


n la germinación n negativos sobre la germinación
1 1 0 0
Tabla 4. Analisis Provit
50 2 50 0,30103
100 1 100 0
200
CONCENTRACION 3
EFECTOS
200 0,47712125
40094,747 6 1 400 0,77815125

111,307 2
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123,284 3
133,137 4
141,728 5
149,477 6
156,618 7
163,302 8
169,628 9
V175,667 10
203,046 15
227,818 20
251,466 25
274,787 30
298,323 35
322,519 40
347,795 45
374,603 50
403,477 55
435,098 60
470,386 65
510,677 70
558,037 75
615,962 80
691,111 85
798,826 90
827,266 91
859,311 92
895,982 93
938,789 94
990,114 95
1054,010 96
1138,240 97
1260,721 98
Curva de dispersión
1481,069 99
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Interpretación: muestra los valores comparativos entre los efectos del acetato de plomo sobre el
crecimiento radicular de las semillas de lechuga, a concentraciones mayores a 100 PPM,
observando que los efectos van aumentando a medida que la concentración es mayor. Por otra
parte, es posible visualizar el Nivel sin efecto adverso observable (NOAEL), entre las
concentraciones de 0 a 100 PPM, mientras que el Nivel de mínimo efecto tóxico observable
(LOAEL), es notorio a partir de 100 PPM.
Con respecto a los efectos se puede evidenciar que a partir del 50% las semillas, presentan
respuestas inhibitorias de crecimiento al encontrarse en concentraciones entre 300 y 400 PPM,
específicamente a partir de 374.60 PPM; según el artículo científico realizado por José
Iannacone y Lorena Alvariño, sobre el “Efecto Ecotoxicológico de tres Metales Pesados Sobre
el Crecimiento Radicular de Cuatro Plantas Vasculares”, se evidencian efectos del 27% sobre
el crecimiento radicular de semillas de lechuga a partir de concentraciones de 200 PPM, valores
que varían con una concentración de 370.37 PPM para obtener un efecto del 50% en la
investigación, con respecto a los 374.60 PPM que se necesitaron en la práctica para lograr
obtener dicho porcentaje, existiendo una diferencia de 4.23 PPM entre los dos métodos.

Análisis en el SPSS

Pruebas de normalidad

COMPILATORIO Shapiro-Wilka

Sig.

BLANCO ,052

CONCENTRACION 50 PPM ,000

RESUMEN CONCENTRACIÓN 100 PPM ,001

CONCENTRACION 200 PPM ,000

CONCENTRACIÓN 400 PPM ,000

Pruebas robustas de igualdad de las medias

RESUMEN

Estadística gl1 gl2 Sig.

Welch 83,239 4 127,342 ,000

Brown-Forsythe 54,134 4 150,453 ,000

Prueba de homogeneidad de
varianzas

RESUMEN

Estadístico de gl1 gl2 Sig.


Levene

39,105 4 295 ,000


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ANOVA de un factor

RESUMEN

Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig.

Inter-grupos 399,435 4 99,859 54,134 ,000

Intra-grupos 544,175 295 1,845

Total 943,610 299

RESUMEN

HSD de Tukey

COMPILATORIO N Subconjunto para alfa = 0.05

1 2 3
Descriptivos
CONCENTRACIÓN 400 PPM 60 ,1633
RESUMEN
CONCENTRACION 200 PPM 60 ,6900
N Media Desviación típica Error típico
CONCENTRACIÓN 100 PPM 60 1,7233

BLANCO CONCENTRACION 50 PPM 60 60 3,4650 2,1267


2,25830 ,29155

BLANCO
CONCENTRACION 50 PPM 60 60 2,1267 1,48517 3,4650
,19173

Sig. 100 PPM


CONCENTRACIÓN 1,7233,213
60 COMPILATORIO ,482
1,24129 1,000
,16025
GRAFICO

CONCENTRACION 200 PPM 60 ,6900 ,57452 ,07417

CONCENTRACIÓN 400 PPM 60 ,1633 ,21626 ,02792


6. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Total 300 1,6337 1,77648 ,10257

Efectos fijos 1,35818 ,07841


Modelo
Efectos aleatorios ,57694
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Dentro del análisis de resultados se puede evidenciar que en el blanco existen semillas que no
germinaron por lo cual puede ser un factor importante en los porcentajes obtenidos por cada uno
del tratamiento a los que se sometieron las semillas. A través de las pruebas robustas de Welch
y Brown Forsythe se puede corroborar que el valor de la significancia en las anteriores pruebas
sigue siendo la misma, al igual que comprobamos la presencia de una distribución normal
debido a que los resultados obtenidos no sobrepasan de 0.05 que fue establecido para el nivel de
confianza del 95 %, el cual genera mayor confiabilidad para poder concluir la hipótesis. Con el
análisis de Tukey logramos identificar que las pruebas a 400 y 200 ppm no existe mayor
diferencia en el efecto negativo que puede producir en la germinación de las semillas, de la
misma manera en las pruebas de 100 y 50 ppm, presentando una clara diferencia entre el blanco
y las diferentes concentraciones a las cuales fueron sometidas las semillas, indicándonos una
afectación por parte del xenobiótico utilizado que en este caso fue el plomo de acetato, por
ende, con la finalidad de optimizar recursos y tiempo en la investigación los rangos de
concentración podrían ampliarse aún más. Como podemos ver existe una intersección entre los
gráficos correspondiente a las concentraciones de 100 y 50 ppm por lo que al utilizar el uno se
podría prescindir del otro. De la misma manera en el la tabla de resultados descriptivos
encontramos el crecimiento radicular medio el cual en el blanco presenta un crecimiento medio
de 3,4650 con un error típico de +/- 0.29155, en la concentración de 50 ppm el crecimiento de
2.1267 con un error típico de +/- 0.19173 , en la concentración de 100 ppm el crecimiento fue
de 1.7233 con un error típico de 0.16025, en la concentración de 200 ppm el crecimiento fue de
0,6900 con un error típico de 0,07417, y por último en la concentración de 400 ppm presenta un
crecimiento de 0.1633 con un erros típico de 0.02792, dándonos como resultado un
decrecimiento por aumento de la concentración del contaminante usado, así como también se
puso observar en el análisis probit en el cual a través de los datos establecidos nos menciona que
en un 50 % de efectos el valor de la concentración letal del contaminante usado (plomo de
acetato) estaría alrededor de los 374,603, por ende podemos reducir la concentración de 400
para tener resultados más precisos. Según investigaciones realizadas en las cuales usaron el
plomo de acetato como sustancia contaminante mencionan que: “La sensibilidad al plomo en
diferentes plantas fue demostrada igualmente en los trabajos de Geebelen et al. (2002) quienes
sugirieron que el efecto de la concentración de plomo indujo un estrés oxidativo tanto en las
raíces como en las hojas. Otros autores como Lamhamdi et al (2011), refirieron que los efectos
del plomo dependen de la concentración, el tipo de sal y las propiedades del suelo, y el proceso
que se afecta en gran medida es la germinación tomando como modelo de estudio el trigo
(Triticum aestivum)”, lo que nos permite identificar que las características del suelo son
importantes para el porcentaje de germinación para las semillas es que a una concentración muy
elevada de nuestro contaminante ocasionaría un efecto negativo sobre los procesos de
imbibición, germinación y crecimiento de la planta de interés, permitiendo una decisión cuando
se desee sembrar estos cultivos en suelos agrícolas contaminados con este metal pesado.

7. CONCLUSIONES:
 Se determinó la dosis inhibitoria del compuesto acetato de plomo a diferentes
concentraciones en la germinación de semillas de lechuga mediante el análisis de Tukey
donde se identificó que a 400 y 200 ppm no existió una diferencia mayor en el efecto
negativo que se pueda producir en dicha germinación, mientras que en la prueba de 100
y 50 ppm presentó una gran diferencia entre el blanco y las diferentes concentraciones a
las cuales fueron sometidas las semillas, indicándonos una afectación por parte del
contaminante.
 Se analizó el índice de germinación de semillas de lechuga en cada una de sus
concentraciones de acetato de plomo donde se evidenció que en el blanco existió
semillas que no germinaron por lo que se concluyó que puede ser un factor importante
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en los porcentajes obtenidos por cada uno del tratamiento a los que se sometieron dichas
semillas.
 Se midió el índice de crecimiento radicular de cada semilla una vez culminado el
proceso de germinación mediante el cual el blanco presenta un crecimiento medio de
3,4650, en la concentración de 50 ppm el crecimiento de 2.1267, en la concentración de
100 ppm el crecimiento fue de 1.7233, en la concentración de 200 ppm el crecimiento
fue de 0,6900, y por último en la concentración de 400 ppm presenta un crecimiento de
0.1633.
 Se comparó los efectos de acetato de plomo en la germinación donde dependió de la
concentración, mediante el análisis probit a través de los datos establecidos un 50% de
efectos el valor de la concentración letal de plomo de acetato fue alrededor de los
374,603 por lo cual en la concentración de 400 ppm se dio los resultados más exactos.

8. RECOMENDACIONES:
 Al momento de colocar las diferentes concentraciones de acetato de plomo usar los
implementos de laboratorio como mandil, guantes y mascarilla para evitar el contacto de
las diluciones con la piel.
 Leer con anterioridad la guía del procedimiento a realizar como que se realice con mayor
eficiencia la práctica de laboratorio.
 Colocar las semillas en el papel filtro lo más separadas posibles para tener un mejor
resultado al momento de medir las raíces.
 Al momento de colocar las cajas Petri con las semillas en la incubadora verificar que la
temperatura se la óptima para que esta no influya en el resultado final.

9. BIBLIOGRAFÍA:
 Aurora Lara-Núñez y David Manuel Díaz-Pontones. (2011). MOVILIZACIÓN DE
MANANOS DE RESERVA EN SEMILLAS DURANTE LA GERMINACIÓN Y
POST-GERMINACIÓN. Retrieved diciembre 10, 2018 from MOVILIZACIÓN DE
MANANOS DE RESERVA EN SEMILLAS DURANTE LA GERMINACIÓN Y
POST-GERMINACIÓN: http://www.medigraphic.com/pdfs/revedubio/reb-
2011/reb113c.pdf
 Bewley, J. D. (1997). Seed Germination and Dormancy. Retrieved dieciembre 10, 2018
from Seed Germination and Dormancy: https://doi.org/10.1105/tpc.9.7.1055
 Cepeda,B.A. (2013). Germinacion de lechuga al ser cultiva por metodo in vitrio a base
de banano y sius posibles efectos del acetato de plomo en su medio de cultivo . From
Germinacion de lechuga al ser cultiva por metodo in vitrio a base de banano y sius
posibles efectos del acetato de plomo en su medio de cultivo :
https://es.calameo.com/read/001883834f1e98523dabf
 Duran,J.M ; Bruno,G.B. ; Alcantara, L.R. (1994). Es posible aumentar la eficiencia de la
temperatura en la germinacion de semillas. Retrieved diciembre 10, 2018 from Es
posible aumentar la eficiencia de la temperatura en la germinacion de semillas:
https://www.mapa.gob.es/ministerio/pags/Biblioteca/Revistas/pdf_Agri
%2FAgri_1994_747_892_895.pdf
 Quilon, I. ; Gilles ,A. (2008). Ensayos de germinación y análisis de viabilidad y vigor en
semillas. Retrieved diciembre 10, 2018 from Ensayos de germinación y análisis de
viabilidad y vigor en semillas:
https://www.researchgate.net/publication/275328970_Ensayos_de_germinacion_y_anali
sis_de_viabilidad_y_vigor_en_semillas/download
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 Saavedra,Gabriel. (2017). Manual de producción de Lechuga . Retrieved diciembre 10,


2018 from Manual de producción de Lechuga : http://www.inia.cl/wp-
content/uploads/ManualesdeProduccion/09%20Manual%20Lechuga.pdf
 SALUD DE NUESTRO PLANETA. (2015). Efectio de toxicidad del Plomo. Retrieved
diciembre 10, 2018 from Efectio de toxicidad del Plomo:
https://saluddelplanetatierra.weebly.com/efectos-ambientales-del-plomo.html
 VILLAMIL , P.J.,M. ; GARCIA, .F., P. (1998). GERMINACION DE SEMILLAS.
Retrieved diciembre 10, 2018 from GERMINACION DE SEMILLAS:
https://www.mapa.gob.es/ministerio/pags/biblioteca/hojas/hd_1998_2090.pdf
1. 10. ANEXOS:

ANEXO 1

a) b) c)

TEMA: Determinación de dosis inhibitoria


ETAPA 1 CATEGORIA DEL DIAGRAMA
Escuela Superior Politécnica De 50%.
a) Semillas de lechuga expuestas a LAMINA ESCALA FECHA
Chimborazo
400 ppm de acetato de plomo.
b) Semillas de lechuga expuestas a □ Aprobado □ Preliminar Facultad de Ciencias
200 ppm de acetato de plomo. □ Certificado □ Por aprobar
Escuela de Ciencias Químicas
□ Información ■ Por calificar 1 1:1 14/12/2018
c) Semillas de lechuga expuestas a
Ingeniería en Biotecnología Ambiental
100 ppm de acetato de plomo.
ANEXO 2

a) b)

Escuela Superior Politécnica De TEMA: Determinación de dosis inhibitoria


ETAPA 1 CATEGORIA DEL DIAGRAMA
50%.
Chimborazo
LAMINA ESCALA FECHA
a) Semillas de lechuga expuestas a Facultad de Ciencias
50 ppm de acetato de plomo. □ Aprobado □ Preliminar
□ Certificado □ Por aprobar Escuela de Ciencias Químicas
b) Semillas de lechuga tomadas □ Información ■ Por calificar 2 1:1 14/12/2018
Ingeniería en Biotecnología Ambiental
como blanco del experimento.

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