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Indian Journal of Biotechnology Vol 6,

enero de 2007, págs. 35-40

Evaluación de la infección por el virus del moquillo canino en vacunados y no vacunados


perros

D Latha 1, SR Srinivasan 2, PS Thirunavukkarasu 2, L Gunaselan 2, P Ramadass 3 y RB Narayanan 1 *


1 Centro de Biotecnología, Universidad de Anna, Chennai 600 025, India

2 Clínicas de animales pequeños y 3 Departamento de Biotecnología Animal, Madras Veterinary College, Chennai 600007, India

Recibido el 14 de julio de 2005; revisado el 22 de febrero de 2006; aceptado el 7 de abril de 2006

El moquillo canino es la enfermedad viral más prevalente de los perros, que tiene una alta tasa de mortalidad. La vacunación de perros contra el moquillo
canino es la única medida para controlar la enfermedad. El objetivo del presente estudio fue conocer el efecto de las vacunas vivas atenuadas comerciales en el
control del moquillo y la importancia de la vacunación anual contra el moquillo en función de la ocurrencia de la infección. Ciento sesenta muestras conjuntivales,
recolectadas de perros con síntomas clínicos sugestivos de moquillo canino, fueron evaluadas mediante el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de punto
(DotELISA) para detectar la presencia del virus del moquillo canino. La aplicación de Dot-ELISA en el cribado de las muestras se validó utilizando el ensayo de
inmunofluorescencia indirecta como técnica estándar. De las 160 muestras analizadas por Dot-ELISA, 112 (70%) dieron positivo para moquillo canino. Los resultados
de Dot-ELISA utilizados para el estudio epidemiológico basado en el sexo, la edad y el estado de vacunación mostraron que los perros de ambos sexos y de 1 a 5
años de edad eran más susceptibles a la infección por el virus del moquillo canino y hay una falta de vacunación anual regular de perros, lo que resulta en una alta
incidencia de moquillo en perros de 1 a 5 años de edad. El presente estudio sugiere que la vacunación seguida de refuerzos anuales regulares contra el moquillo
protegería eficazmente a los perros de la enfermedad.

Palabras clave: Dot-ELISA, moquillo canino, virus del moquillo canino, vacunación

Código IPC: En t. Cl. 8 C12N15 / 11, 15/12, 15/45

Introducción enfermedad grave con o sin signos del sistema nervioso central
El moquillo canino (EC) en perros es causado por el virus del moquillo (SNC). Los signos clínicos son secreción nasal y conjuntival
canino (CDV), un miembro del género Morbillivirus de la familia mucopurulenta, fiebre bifásica, anorexia, depresión, diarrea,
Paramyxoviridae. El CDV está estrechamente relacionado con el virus del hiperqueratosis de las almohadillas de los pies y la nariz seguidas de
sarampión humano y el virus de la peste bovina de los bovinos. 1. La EC signos del SNC. No existe una terapia específica para esta
es muy infecciosa y con frecuencia una enfermedad letal en los perros y enfermedad mortal. El único enfoque eficaz es la inmunización de
tiene una alta tasa de mortalidad después de la rabia. La enfermedad se perros mediante vacunación. Las vacunas vivas atenuadas de origen
transmite por aerosol y el virus tiene una gran afinidad por los linfocitos y en huevos de aves o adaptaciones de cultivos de células caninas se
macrófagos. La duración y la gravedad de la enfermedad dependen han utilizado durante muchas décadas y han reducido la incidencia de
principalmente de la capacidad del animal infectado para generar la enfermedad. 2. Aunque existen muchos problemas asociados con
rápidamente una respuesta inmune al CDV. Si el título de anticuerpos estas vacunas vivas atenuadas 3-6, parecen ser eficaces contra el
séricos alcanza un nivel alto dentro de los 8-9 días posteriores a la moquillo. Para superar las desventajas asociadas con las vacunas
infección, el virus desaparece del tejido linfático y de otros tejidos y la vivas atenuadas, la investigación se ha centrado en vacunas
infección permanece subclínica o leve. Sin embargo, si la respuesta recombinantes y basadas en ADN que expresan las glicoproteínas de
inmune es débil o retrasada, el virus se disemina a muchos tejidos superficie del CDV, que son inmunogénicas. 7-9. Una viruela del canario
causando una enfermedad aguda o crónica con alta mortalidad. 2. Los recombinante
signos clínicos pueden variar desde ningún signo visible hasta

La vacuna ha demostrado su eficacia en la protección de los perros


contra el moquillo y ha sido autorizada hace algunos años para su
uso rutinario. Patronek et al ( 1995) demostró que la falta de
___________
* Autor para correspondencia:
vacunación contra el moquillo se asoció con un aumento de varios
Tel: 91-44-22350772; Fax: 91-44-22350299 Correo electrónico: cientos de veces en el riesgo de la enfermedad. 10. El anual
rbn@annauniv.edu
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La vacunación de perros con estas vacunas se ha considerado Se añadió IgG anti-conejo de cabra conjugado (1: 20.000) como
la medida eficaz para controlar la enfermedad. anticuerpo secundario y la membrana se incubó de nuevo
durante 30 min a 37ºC. ° C.Después de lavar la membrana con
En la India, solo se utilizan vacunas vivas atenuadas, ya sean PBS, se desarrolló usando pag- nitro azul tetrazolio (NBT) y
importadas o de fabricación local. Desde aquí hasta la fecha no hay 5-bromo-4-cloro-3indolil fosfato (BCIP) como sustratos y la
informes sobre la vacunación de perros contra el moquillo canino y el aparición de color marrón fue indicativa de una reacción positiva.
patrón de vacunación anual. La duración de la inmunidad posvacunal La intensidad del color marrón es una medida semicuantitativa
después de la vacunación contra el moquillo y la frecuencia requerida de la concentración de virus en las muestras.
de revacunaciones siguen siendo controvertidas en todo el mundo. Sin
embargo, los fabricantes de vacunas y otros estudios sobre los títulos
de anticuerpos contra el moquillo recomiendan la vacunación anual. 11,12, se
desconoce la práctica real entre el público aquí. Por lo tanto, el presente Ensayo de inmunofluorescencia indirecta

estudio se inició para determinar la ocurrencia de la infección por CDV El ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFA) se llevó a cabo
en los perros vacunados y no vacunados y para revelar la importancia según el método de Johnson en un número limitado de muestras
de la vacunación anual basada en esta ocurrencia. Para averiguarlo, se conjuntivales. 13. Brevemente, el
comparó la incidencia de la infección por CDV en perros vacunados Los frotis conjuntivales se fijaron en portaobjetos de vidrio con acetona
menos de un año con perros vacunados más de un año. El uso de fría y los portaobjetos se mantuvieron a 4ºC. ° C durante 1 h. Se añadió
Dot-ELISA simplificado para esta investigación se validó mediante el anticuerpo policlonal contra CDV criado en conejos como anticuerpo
ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFA), una técnica primario (1: 1000) y los portaobjetos se incubaron a 37ºC. ° C durante 30
universalmente aceptada para el diagnóstico de EC. min. Después de lavar los portaobjetos con PBS, se añadió IgG
anti-conejo de cabra marcado con isocianato de flouresceína (FITC;
Sigma, EE. UU.) En una dilución de 1: 200 y los portaobjetos se
incubaron a 37ºC. ° C durante 30 min. Después de lavar los portaobjetos a
fondo con PBS, se dio el lavado final en agua MilliQ. A continuación, los
portaobjetos se secaron y se montaron usando 9: 1 de glicerol y PBS y
Materiales y métodos se observaron bajo un microscopio fluorescente con epiiluminación
Muestras (Nikon, Japón). Se tomaron como positivas las células epiteliales
Se recolectaron ciento sesenta muestras conjuntivales de perros conjuntivales que mostraban fluorescencia amarillo verdosa granular. El
llevados a las Clínicas de Animales Pequeños del Hospital Madras ensayo se llevó a cabo simultáneamente en las mismas muestras con
Veterinary College, Chennai, que mostraban síntomas sugestivos suero de conejo normal como control.
de moquillo. Las muestras se recogieron a temperatura ambiente.
Lo común
clínico síntomas observado fueron
Secreción conjuntival y nasal, diarrea, fiebre, pústulas cutáneas,
hiperqueratosis y signos del SNC. Las muestras utilizadas para el Comparación de Dot-ELISA con IFA
presente estudio fueron recolectadas desde junio de 2002 hasta La eficacia relativa de Dot-ELISA se determinó utilizando IFA
diciembre de 2002. como estándar de oro. Los resultados de ambos ensayos se
compararon para determinar la especificidad y sensibilidad de
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de puntos (Dot-ELISA)
Dot-ELISA. Los pares de muestras, que fueron positivos tanto por IFA
Las muestras conjuntivales fueron analizadas por DotELISA.
como por Dot-ELISA, se consideraron como verdaderos positivos
Brevemente, 1 µ L ( ∼ 2 µ g de proteína total) de muestras conjuntivales
(TP), los pares IFA negativos y Dot-ELISA positivos se denominaron
se recubrió con una membrana de nitrocelulosa y la membrana se
falsos positivos (FP) y los IFA positivos y Dot-ELISA negativos. los
dejó secar durante 10 min. Luego, la membrana se incubó con leche
pares se denominaron falsos negativos (FN). Los pares de muestras
desnatada en polvo al 5% en solución salina tamponada con fosfato
que fueron negativas en ambos ensayos fueron verdaderos negativos
(PBS, pag H 7,4) durante 30 min a 37 ° C. Después de cada paso de
(TN). Las fórmulas aplicadas fueron:
incubación, la membrana se lavó 5-6 veces con PBS. El anticuerpo
policlonal contra CDV (1: 1000) producido contra el virus completo en
conejos se agregó como anticuerpo primario y la membrana se incubó
durante 30 min a 37ºC. ° C.La fosfatasa alcalina (ALP)
Sensibilidad = [TP / (TP + FN)] * 100

Especificidad = [TN / (TN + FP)] * 100


LATHA et al: INFECCIÓN POR DISTEMPER EN PERROS 39

perros 15. Dado que el porcentaje de positividad de las muestras


conjuntivales por Dot-ELISA (64%) estaba cerca de IFA (68%) y
se pudo cribar un mayor número de muestras en un corto período
de tiempo, se utilizó Dot-ELISA para el cribado general de los
muestras conjuntivales.

En el análisis epidemiológico, los perros de 1 a 5 años de edad


fueron susceptibles a la infección por CDV. Este hallazgo es diferente
de otros informes donde los perros de 3-6 meses de edad fueron más
susceptibles. dieciséis.
La presencia de anticuerpos contra el moquillo de origen
materno en las crías jóvenes podría ser un problema en el
momento de la vacunación primaria. Se había calculado la
vida media promedio de los anticuerpos maternos y se
encontró que la edad de 3-6 meses era el momento
adecuado para vacunar a las crías, ya que a esta edad habría
una desaparición completa de los anticuerpos maternos, que
de otro modo interferirían con la vacunación. desarrollo de
anticuerpos vacunales. La práctica regular de la vacunación
primaria en los cachorros jóvenes puede ser la razón del
presente hallazgo de que los perros de 3 a 6 meses de edad
no son tan susceptibles en comparación con los de 1 a 5
años de edad.

Fig. 5 (a y b) —a. Positividad de CDV en perros de diferentes grupos de edad;


segundo. Porcentaje de diferente estado de vacunación en perros de 1 a 5 años de edad [En la
figura, tanto el 28% como el 41% representan la categoría de no vacunados. El 28% de los
perros no vacunados carecen de la vacunación anual regular y el 41% de los perros nunca
habían sido vacunados].

Discusión
El análisis del historial de vacunación de los perros mostró que la tasa
El virus del moquillo canino es resistente al frío y podría sobrevivir
de infección es mayor en los perros no vacunados que en los vacunados
durante un largo período de tiempo en condiciones de frío 14. Entonces, la
si el período posterior a la vacunación es inferior a un año. Si el período
enfermedad se propaga principalmente en invierno. Este fue el motivo de
posterior a la vacunación supera el año, los perros vacunados también
la recolección de muestras conjuntivales durante los meses de junio a
tendrán el mismo riesgo que los perros no vacunados de contraer la
diciembre, cuando serán más los casos reportados de moquillo. La
infección. Esto muestra claramente que existe una necesidad de
recolección de muestras se detuvo hasta diciembre después de obtener
vacunación anual de perros. Estudios anteriores sobre vacunación
una cantidad suficiente de muestras. Los perros sospechosos de
demostraron que el título de anticuerpos protectores disminuyó a niveles
moquillo mostraron varios signos clínicos de moquillo. Los trastornos
bajos en el 33% de los perros 1 año después de la vacunación. 17. Cuando
neurológicos estuvieron presentes tanto en la etapa inicial como en la
se analizó el historial de vacunación de los perros infectados con el VCD
manifestación posterior después de los síntomas generalizados.
de 1 a 5 años, el porcentaje de perros no vacunados que incluían perros
Convulsiones
vacunados más de un año fue del 69% y el 28% de los perros carecían de
vacunación anual, lo que podría ser la razón de la alta incidencia. de
parálisis y ciclismo (sin objetivo
moquillo en esa categoría.
deambular) fueron los signos neurológicos comunes observados.
La secreción conjuntival fue el síntoma clínico más común en los
perros infectados (63%). El Dot-ELISA utilizado para cribar las
muestras conjuntivales es un método simple, rápido y sensible
para el diagnóstico de rutina de la infección por CDV en Ambos sexos se ven igualmente afectados por la infección por CDV en
este estudio y el porcentaje de CDV infectados
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casos fue alto en Spitz, una raza dolicocefálica. Aunque los perros de todas 7 Pardo MC, Bauman JE & Mackowiak M, Protección de perros contra el moquillo
canino mediante vacunación con un virus de la viruela del canario recombinante
las razas son susceptibles a la infección por CDV, las razas dolicocefálicas
que expresa la fusión del virus del moquillo canino y glicoproteínas de
tienen una alta incidencia en comparación con los perros braquiocefálicos. 2.
hemaglutinina, Soy J Vet Res,
58 (1997) 833-836.
En conclusión, la prevalencia de la infección por CDV según la 8 Cherpillod P, Tiplod A, Griot-Wenk M, Cardozo C, Schmid I
et al, La vacuna de ADN que codifica la nucleocápside y las proteínas de superficie
edad y el estado de vacunación sugiere que la vacunación anual
del virus del moquillo canino de tipo salvaje protege a su huésped natural contra el
regular sería eficaz para proteger a los perros contra la infección
moquillo, Vacuna, 18 (2000) 2927-
por moquillo y la vacunación reduce significativamente el riesgo de 2936.
la enfermedad. 9 Fischer L, Tronel JP, Minke J, Barzu S, Baudu P et al,
La vacunación de cachorros con una vacuna plasmídica formulada con lípidos
protege contra un virus del moquillo canino severo
Reconocimiento desafío,. Vacuna, 21 (2003) 1099-1102.
10 Patronek GJ, Glickman LT, Johnson R & Emerick TJ, Infección por moquillo canino en
D Latha ha recibido el premio Senior Research Fellowship
perros domésticos: un estudio de casos y controles de factores de riesgo durante un
Award del Consejo de Investigaciones Científicas e Industriales presunto brote en Indiana, Mermelada
(CSIR), Nueva Delhi, India. Se agradece la ayuda prestada por el Anim Hosp Assoc, 31 (1995) 230-235.
Dr. Andrew Chandra Mohan en la documentación del ensayo de 11 McCaw DL, Thompson M, Tate D, Bonderer A & Chen YJ, títulos de anticuerpos contra el
virus del moquillo en suero y el virus parvo entre los perros llevados a un hospital
inmunofluorescencia.
veterinario para revacunación, Mermelada
Vet Med Assoc, 213 (1998) 72-75. Jarrett O & Ramsey I, Vacunación, en Manual de
Referencias 12 enfermedades infecciosas caninas y felinas, editado por I Ramsey & B Tennant
1 Appel MJG & Gillespie JH, virus del moquillo canino, en (Asociación Británica de Veterinaria de Pequeños Animales, Gloucester)
Monografías de virología, editado por S Gard, C Hallauer & KF Meyer
(Springer-Verlag, Nueva York) 1972, 1-96. 2001, 41-51.
2 Greene CE y Appel MJ, moquillo canino, en Infeccioso 13 Johnson GD, Técnicas de inmunofluorescencia en clínica
enfermedades del perro y el gato, editado por CE Greene (WB Saunders inmunología, editado por RD Thompson (Blackwell Scientific Publications,
Company, Filadelfia) 1998, 9-22. Oxford) 1977, 85.
3 Paja B, Disminución del recuento de plaquetas después de la vacunación con la vacuna 14 Ho CK & Babiuk LA, un nuevo sistema de placa para el moquillo canino:
contra el moquillo y la hepatitis (DH), Veterinario Med Small Anim Clin, característica de la cepa verde del virus del moquillo canino, ¿Puede J
73 (1978) 725-726. Microbiol, 25 (1979) 680-685. Ramadass P & Latha D, inmunoensayo
4 Appel MJG, Reversión a la virulencia del virus del moquillo canino 15 enzimático Dot para la detección del virus del moquillo canino, Veterinario indio
atenuado en vivo y in vitro, J Gen Virol, 41 (1978) 385-393. J, 78 (2001) 981-983.

5 Cornwell HJ, Thompson H, Mccandlish IA, McCartney L & Nash AS, Encefalitis dieciséisJozwik A & Frymus T, Moquillo natural en perros vacunados y no
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