Po 04 Procedimiento de Validacion de Metodos Analiticos PDF

CODIGO PO-04
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PROCEDIMIENTO DE VALIDACIÓN DE
FECHA 21/05/2011
MÉTODOS ANALÍTICOS FISICOQUIMICOS
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DOCUMENTO CONTROLADO
RESPONSABLE DEL PROCESO:

DIRECTOR TECNICO FISICOQUIMICA
ANALISTA FISICOQUIMICA
CONTROL DE CAMBIOS EN EL DOCUMENTO
VERSION FECHA DEL

CAMBIOS REALIZADOS Y CAUSA
QUE CAMBIA CAMBIO
Se agrega en el procedimiento las consideraciones a tener en cuenta
para hacer verificaciones de las validaciones de los métodos analíticos en
el Numeral 6.6. Verificaciones de la validación. En el procedimiento se
00 unifican la terminología empleada para definir el conjunto de actividades
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descritas (se cambian términos de estandarización y normalización por
validación en todo el cuerpo del documento).
AUTORIZACIONES
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Nombre / Cargo Nombre / Cargo Nombre / Cargo
YECITH SANGUINO PUELLO NORBEY ARIAS AARON LOANA ARAUJO PUMAREJO
Director Técnico Fisicoquímica Analista Fisicoquímica Representante del Sistema de Gestión de Calidad
Firma y Fecha:26/08/2010 Firma y Fecha: 19/05/2011 Firma y Fecha: 21/05/2011

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1. OBJETIVO
Presentar las directrices para realizar la validación (Confirmación) de los métodos analíticos
utilizados en el laboratorio.
2. ALCANCE
Este procedimiento aplica a los métodos analíticos utilizados por el laboratorio Ambiental y
de Alimentos Nancy Flórez García en el área Fisicoquímica y para los cuales se solicite
acreditación.
3. DEFINICIONES
 Incertidumbre de medida: Parámetro, asociado al resultado de una medición, que

caracteriza la dispersión de los valores que podrían ser razonablemente atribuidos al
mesurando.
 Promedio Aritmético: Es la suma de los valores registrados en una serie de mediciones
divididas entre el número de las mismas.
 Desviación: Se designa con este nombre a la diferencia entre cada una de las
mediciones y el promedio aritmético.
 Desviación Promedio: Es el promedio aritmético de todas las desviaciones sin
considerar los signos.
 Exactitud: Es el grado de aproximación entre el valor obtenido experimentalmente y el
valor real o aceptado.
 Precisión: Es el grado de aproximación mutua entre resultados independientes (por
ejemplo valores de medición) de una muestra homogénea obtenidos mediante un
método analítico dado en condiciones establecidas.
 Límite de detección del método (LDM): Aquella concentración del analito que cuando
se procesa a través del método completo proporciona una señal en el instrumento
significativamente (con una probabilidad del 99%) diferente de la señal de una muestra
“blanco” o “señal de fondo”. En el límite de detección todavía no se puede cuantifica.
 Límite de cuantificación del método (LCM): La concentración por encima de la cual se
puede cuantificar un analito. El límite de cuantificación es siempre más grande que el
límite de detección.
 Linealidad: Es la característica de tener una relación proporcional entre el parámetro
analizado y el resultado deseado. La transformación matemática se lleva a cabo por
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medio de una función lineal. Esta función se puede aplicar solamente en un intervalo de
concentración limitado, en el cual existe proporcionalidad. Este intervalo (intervalo de
trabajo) debe determinarse.
 Intervalo de trabajo: Es el intervalo entre dos concentraciones de un analito en una
muestra, para la cual se podría mostrar, que el método tiene suficiente precisión y
exactitud, y muestra linealidad. No se tiene que llevar a cabo una determinación del
intervalo de trabajo si ya se mostró linealidad en un intervalo definido.
 Sensibilidad: Es una medida del factor de respuesta del instrumento como una función
de la concentración. Normalmente se mide como la pendiente de la curva de calibración.
Como valor se puede reportar el promedio para las curvas obtenidas en los ensayos de
validación y en la medición de muestras, indicando su desviación estándar.
 Blanco (BK): Es un sistema físico que no contiene muestra real y por consiguiente no
debería contener el analito de interés, pero que debe contener todos los reactivos que
se utilizan en el método de análisis, y ser sometido a las mismas condiciones y al mismo
procedimiento que las muestras reales y los estándares. En lugar de muestra, el volumen
faltante se completará con agua grado reactivo que deberá tener la calidad
recomendada por el método respectivo.
 Muestra (M): Para este propósito, el término se refiere a cada sistema físico que sea
sometido al procedimiento de análisis siguiendo el método que se está estandarizando,
ya sea un Blanco, un Estándar, una Muestra Adicionada, o una Muestra Real
propiamente dicha.
 Límites de confianza: Es un estimado de una desviación individual máxima del
promedio, dentro del cual deben caer un cierto porcentaje de las demás desviaciones.
 Límites de alarma superior e inferior: Son valores determinados para las cartas de
control y se calculan como ± 2 veces el valor de la desviación estándar más el promedio
de los datos de una sustancia o muestra de control. Cualquier dato que caiga fuera de
los límites de alarma es señal de que existe algún y se hace necesario tomar acciones
que pueden ir desde el lavado completo del material de vidrio empleado en el análisis
hasta repetir el análisis de todo el lote de muestras.
 Límite de control superior e inferior: Son valores determinados para las cartas de
control y se calculan como ± 3 veces el valor de la desviación estándar más el promedio
de los datos de una sustancia o muestra de control. Cualquier dato que caiga fuera de
los límites de control es reexaminado y se suspenden los análisis hasta que el sistema
vuelva a estar bajo control. Las acciones van desde el lavado completo del material de
vidrio empleado en el análisis hasta una nueva calibración con los estándares.
 Mensurando: Magnitud particular sometida a medición.
 Recuperación: Es la capacidad que tiene un procedimiento analítico para determinar
cuantitativamente una especie química que ha sido adicionada a una muestra.
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 Validación: Confirmación mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han

cumplido los requisitos para una utilización o aplicación específica prevista.
 Verificación: Confirmación mediante la aportación de evidencia objetiva de que se han
cumplido los requisitos especificados.
 Valor verdadero convencional (de una magnitud): Valor atribuido a una magnitud
particular, y aceptado a veces por convención, porque la representa, con una
incertidumbre apropiada, para un fin dado.
 Repetitividad (de los resultados de las mediciones): Proximidad entre los resultados
de mediciones sucesivas del mismo mesurando, realizadas bajo las mismas condiciones
de medición. (Aplicación de un mismo procedimiento, a un mismo objeto, por el mismo
operador, en intervalos cortos de tiempo, con el mismo equipamiento instrumental, en el
mismo lugar).
 Reproducibilidad: Proximidad entre los resultados de mediciones de un mismo
mensurando, realizadas bajo distintas condiciones de medición.
 Precisión intermedia: Magnitud que relaciona la variación en los resultados observados
cuando uno o más factores, tales como tiempo, equipamiento, operador, varían dentro de
un mismo laboratorio.
4. RESPONSABLES
El Director Técnico del área es el responsable de la aplicación y supervisión de las

directrices establecidas en este procedimiento.
5. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
 Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. EURACHEM- CITAC Guide QUAM:

2000. Numeral 7.7. (1) DE-339.
 American Public Health Association, American Water Work Association and Water
Environment Federation, Standard Methods For the Examination of Water and
Wastewater, 21st Edition. American Public Health Association 1015 Fifteenth Street NW.
Washington, D.C., 2005. DE-208.
 La validación de métodos analíticos. Rius, F. Xavier et al. Departamento de química
analítica y química organica. Instituto de estudios avanzados. Universidad de Rovira y
Virgili. Tarragona, España. DE-342.
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6. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO
6.1. PLANEACIÓN GENERAL DE LA VALIDACIÓN
Realizar las siguientes actividades para orientar el proceso de la validación propiamente

dicho:
- Crear un archivo físico (carpetas) para toda la documentación generada en el proceso.

Las carpetas debe estar disponibles para su consulta permanente.
- Seleccionar el método para cada analito y por cada matriz.
- Estudiar cada uno de los métodos de referencia correspondientes a los métodos a
estandarizar para establecer si se dispone de todos los insumos necesarios.
- Asegurar el conocimiento exacto del funcionamiento de los equipos de medición
involucrados.
- Definir quienes participarán en las actividades experimentales.
- Establecer el tiempo (semanas o meses) disponibles para realizar la validación.
Nota: Si al momento de la validación no se han unificados criterios para los formatos de

captura de datos, los datos primarios pueden ser registrados en un formato libre en el cual se
incluyan las variables de interés e información que permita reconstruir claramente las
condiciones de la validación (fecha, responsable, etc.).
6.2. ACTIVIDADES PRELIMINARES A LA VALIDACIÓN
Cuando aplique, programar y realizar para el método analítico a validar las actividades
experimentales necesarias que permitan obtener información básica para poder determinar
los atributos de desempeño. Entre las actividades preliminares se deben realizar las
siguientes cuando aplique:
- Determinar el intervalo de concentraciones entre las cuales se puede aplicar el método

analítico. teniendo como criterios: La información de la literatura, intereses específicos
(decretos ambientales), ensayos preliminares en el laboratorio. El intervalo de aplicación
va desde la mínima cantidad detectable (LDI) hasta la concentración que se podría leer
con la máxima dilución posible aceptable con las condiciones fisicoquímicas de la
muestra (en lo general no debe ser mayor de 1:1000).
- Determinación de las matrices de las muestras con las cuales se realizará la validación
del método.
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- Atributos del método que se pueden determinar con los recursos disponibles.
- Definir las condiciones experimentales específicas no definidas claramente en el método
de referencia, por ejemplo: tiempos de secado, tiempos de enfriamiento, velocidades de
agitación, volumen de muestra, presiones de succión, tiempo para desarrollo de color,
etc.
- Establecer el mecanismo más adecuado para calcular el límite de detección del método.
- Establecer las variables instrumentales o metodológicas particulares del laboratorio que
puedan afectar el proceso de medición en aquellos aspectos en que no se pueda seguir
estrictamente el protocolo.
- Verificación y optimización de las condiciones y de los parámetros instrumentales,
incluyendo curva de calibración.
Registrar las conclusiones obtenidas de estos estudios en un solo informe, el cual formará
parte de la validación.
6.3. METODOLOGÍA PARA LA VALIDACIÓN
6.3.1. Recomendaciones generales
- Los experimentos deben ser realizados por los analistas utilizando los mismos equipos y
los mismos reactivos químicos.
- Disponer de muestras y estándares estables, homogéneos y en la cantidad suficiente
para ser utilizados a lo largo del estudio.
- Cada grupo de muestras analizadas se debe considerar totalmente independiente el uno
del otro, aunque las soluciones estándares y las muestras se hayan preparado al inicio
del estudio.
- Analizar en orden aleatorio las muestras definidas.
- Preparar suficiente cantidad de muestras y preservarlas adecuadamente para garantizar
su integridad.
- Analizar por duplicado las muestras de cada lote para disponer de un adecuado número
de datos.
6.3.2. Diseño experimental
Para cada método analítico se recomienda preparar 6 lotes de muestras conformados cada
uno de la siguiente manera:
- Un blanco de reactivos (BK) o un patrón con una concentración baja ( C Eb ).

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- Dos estándares de concentración conocida uno de concentración baja y otro de

concentración alta (Ealto, Ebajo). La concentración se pueden estimar con base en el valor
de “C” que es el límite máximo de concentración del analito para el ámbito del método y
definido en la etapa preliminar de la validación así: Ealto ≈ 0,9*C; Ebajo ≈ 0,09*C.
- Dos muestras rutinarias, M1 de concentración baja y M2 de concentración alta, cuyas
matrices correspondan al interés de la validación.
- Dos muestras adicionadas (M1+A1 y M2+A2) preparadas para los analitos que aplique.
- Un Material de Referencia Certificado (MRC) o patrón certificado, si está disponible.
Nota 1: El número de muestras por lote puede cambiar dependiendo del número de matrices
de interés para el laboratorio y de la amplitud del rango de concentración de interés para
estandarizar.
Nota 2: Este diseño experimental no aplica para la validación de la Demanda Bioquímica de

Oxígeno, grasas y aceites, su validación se realiza con base en los lineamientos indicados en
los Anexos 1 y 2.
Nota 3: Este diseño experimental puede ser más complejo dependiendo del número de
equipos disponibles y de analistas que intervengan en el proceso.
Se sebe seguir las siguientes recomendaciones a la hora del desarrollo analítico del diseño
experimental:
- Analizar las muestras de los lotes en forma aleatoria y por duplicado cada una, este
mecanismo permite eliminar los efectos de cambios sistemáticos en factores que no
pueden ser controlados y que puedan dar lugar a falsas conclusiones.
- Antes de iniciar el análisis de los lotes y para los métodos en que aplique, determinar
primero las condiciones óptimas para obtener las mejores curvas de calibración, aplicar
estas condiciones para analizar las muestras de los lotes.
- Analizar los seis lotes de muestras en días diferentes, si es posible (de acuerdo con la
estabilidad del analito), en caso contrario analizar los seis lotes durante el tiempo de
estabilidad. Registrar los datos primarios obtenidos en el formato de captura de
información diseñado para cada método analítico.
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6.3.3. Metas de precisión y exactitud
6.3.3.1. Meta de precisión
El coeficiente de variación CV máximo aceptable para un grupo de mediciones individuales

es de 10%.
Existe el siguiente criterio alterno para establecer la meta de precisión: “La desviación
estándar máxima aceptable de un grupo de mediciones individuales es el valor
correspondiente al 25% de la concentración mínima de interés (es decir 0,25*CL, en donde
CL = C/10, siendo C la concentración máxima de interés o la concentración máxima del
rango lineal) o el 5% del valor promedio de las mediciones, el que sea mayor”. Este criterio
se puede utilizar cuando se estime conveniente.
6.3.3.2. Meta de porcentaje de recuperación de muestras adicionadas
El rango aceptable de porcentaje de recuperación de muestras adicionadas es entre el 80% y

el 120%. Este rango puede ser mayor si el estudio estadístico realizado con la Hoja de
Cálculo Validar 1.1 HC-02; así lo demuestra, este estudio se basa en el cálculo del intervalo
de confianza para una recuperación del 80% y una del 120%.
Nota: Para verificar el cumplimiento de las metas de precisión y del porcentaje de

recuperación, se utiliza la Hoja de Cálculo Validar 1.1 HC-02; desarrollado por el Instituto
Nacional de Salud-Red Nacional de Laboratorios-Grupo de Red Salud Ambiental (Ver Anexo
3). Este software permite determinar la aceptabilidad de las desviaciones estándares y del
porcentaje de recuperación para cada nivel de concentración.
6.3.3.3. Meta de exactitud
El Error relativo máximo aceptable de un grupo de mediciones debe ser inferior al 10%.
Existe el siguiente criterio alterno para establecer la meta de exactitud: “El error sistemático
máximo aceptable expresado como Error absoluto (sesgo) para un grupo de mediciones es
el valor correspondiente al 50% de la concentración mínima de interés (0,5*CL, en donde CL
= C/10, siendo C la concentración máxima de interés o la concentración máxima del rango
lineal) o el 10% del valor promedio medido, el que sea mayor”. Este criterio se puede utilizar
cuando se estime conveniente.
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Nota: Para los métodos que aplique y como un mecanismo alterno para evaluar la exactitud,
se puede utilizar el cumplimiento del criterio establecido para el porcentaje de recuperación
de muestras adicionadas o el cumplimiento de la prueba de significancia “Test de t student”.
El porcentaje de muestras adicionadas se utiliza también para verificar la trazabilidad del
método analítico.
6.3.3.4. Metas de precisión y exactitud para el análisis de DBO5
La meta de precisión expresada como desviación estándar máxima es el 15% de la media

del valor obtenido (según método 5210 B, Standard Methods). La meta de exactitud
expresada como error relativo es de 15% del valor medido.
6.3.3.5. Metas de precisión y exactitud para el análisis de pH y conductividad
La meta de precisión expresada como coeficiente de variación CV máximo aceptable para un

grupo de mediciones individuales es de 10%.
La meta de exactitud expresada como error relativo máximo aceptable es de 5%.
6.4. CÁLCULO DE LOS ATRIBUTOS DE LOS MÉTODOS
Para realizar el cálculo de los atributos de los métodos analíticos indicados en esta etapa del
procedimiento, tomar como base la Hoja de cálculo validación de métodos analíticos
Fisicoquímicos HC-01; la cual tiene protección de acceso del registro electrónico
especificado en el Listado Maestro de documentos RA-01.
Nota: Esta hoja de cálculo podrá será ajustada de acuerdo a los equipos o analistas que
participen en el proceso y se le insertarán un número de fila según sea el caso.
6.4.1. Rango de trabajo o rango lineal
Para los métodos analíticos en los cuales se utilice curva de calibración (por ejemplo
espectrofotométricos) para obtener la concentración del analito, determinar el rango lineal
utilizando la curva de Ringbom. Para obtener esta gráfica realizar los siguientes pasos:
- Abrir el archivo Excel que contiene la hoja de cálculo “Validación de métodos analíticos”
para el método de interés, abrir la pestaña “Rango lineal”.
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- Ingresar la información solicitada en la tabla de valores, columnas Concentración (Las

concentraciones de los patrones deben abarcar desde el blanco hasta el 140% del valor
de la concentración máxima conocida o estimada para el rango lineal del método) y
Absorbancia. En cada nivel de concentración realizar por lo menos tres mediciones de
absorbancia para obtener su promedio.
- La grafica de la curva de Ringbom se genera tomando los datos de concentración de
cada patrón en escala logaritmica (eje x) versus Absortividad (eje y). La Absortividad
(ABST) se calcula aplicando la siguiente ecuación:
ABST = 100 − %T, en donde %T = (1 / 10(A))*100
- Visualmente buscar el conjunto de puntos de la curva de Ringbom en donde se presenta

un comportamiento lineal. Establecer el rango de concentraciones correspondiente para
definirlo como el rango lineal.
- Guardar los cambios antes de cerrar el archivo.
6.4.2. Curva de calibración y linealidad
A) Curva de calibración
Para los métodos analíticos en los cuales se utilice curva de calibración (por ejemplo
espectrofotométricos) para obtener la concentración del analito, determinar la curva de
calibración. Para obtener esta gráfica realizar los siguientes pasos:
- Abrir el archivo Excel que contiene la Hoja de cálculo Validación de métodos analíticos
Fisicoquímicos HC-01, para el método de interés, abrir la pestaña “Rango lineal”.
- Ingresar la información solicitada en la tabla de valores, columnas Concentración
(Patrones definidos en la curva de Ringbom como los pertenecientes al rango lineal) y
Absorbancia correspondiente (por lo menos tres valores de absorbancia para obtener un
valor promedio, en la medida de lo posible los valores de absorbancia ingresados deben
corresponder a curvas de calibración diferentes preparadas en tiempos diferentes).
- Después de ingresados todos los datos requeridos, Excel genera la gráfica de la curva de
calibración y calcula los valores del coeficiente de correlación, de la pendiente, del
intercepto con el eje y, la ecuación de la curva de calibración.
La recta de regresión se determina por el método de mínimos cuadrados. La recta de

calibración es del tipo: Y = bx + a
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ΣX  X Y  Y 
b
 
Donde: 2
Pendiente
Σ XX
ΣY  bΣX 
a Intercepto
n
X: La concentración de los patrones

Y: Respuesta de los patrones
X : Promedio de las concentraciones de los patrones
Y : Promedio de las respuestas (áreas, absorbancias, etc.)
n: Numero de determinaciones
Calcular el coeficiente de correlación (recomendable que sea mayor a 0.996), retirar los
puntos de la curva hasta obtener el mejor coeficiente de correlación, como mínimo se deben
establecer 5 puntos para la curva de calibración.
ΣX  X Y  Y 
r Coeficient e de Correlaci ón
  
2
Σ XX Σ YY  2
Para aquellos métodos analíticos en los cuales se utilice una fórmula para obtener la
concentración del analito (métodos gravimétricos, volumétricos, etc) y para los cuales sea
necesario demostrar la existencia de relación lineal entre la concentración y las señales (por
ejemplo cuando se requieren condiciones analíticas diferentes para varios rangos de
concentración), establecer la linealidad del método para los rangos de concentraciones
definidos calculando el coeficiente de regresión lineal entre las concentraciones de patrones
analizados y la respuesta promedio del equipo de medición utilizado (por ejemplo volumen
gastado, peso de residuo, etc. y aplicando por lo menos el test de linealidad indicado en el
numeral 6.4.2. B).
B) Test de linealidad (Test del Coeficiente de Correlación (r)):
El coeficiente de correlación refleja el grado de relación entre las variables X (concentración)

y Y (respuesta).
El valor de r = 1 indica una recta perfectamente lineal, r = −1 una recta perfectamente lineal
de pendiente negativa y r = 0 la no correlación entre X y Y.
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Valores muy elevados de r no deben tomarse erróneamente como indicadores de linealidad,

la linealidad se demuestra estadísticamente por los procedimientos que se describen a
continuación.
El cuadrado del coeficiente de correlación se denomina coeficiente de determinación e indica

la proporción de la varianza total de la variable independiente Y.
Determinar la linealidad del sistema aplicando el siguiente test estadístico: Después de
ingresar los valores de Concentración y absorbancia correspondiente a la curva de
calibración en la pestaña “Linealidad sistema”, Excel calcula el valor del t de Student
experimental “t exp” con la siguiente fórmula:
r n2
t exp 
1 r 2
Comparar el valor del “t exp” con el valor del t de Student de tablas “t tablas” a dos colas para
un nivel de confianza del 95% y con n−2 grados de libertad (p = 0.05, Ver anexo 4), donde n
es el número de patrones utilizados para la curva de calibración.
Evaluar el resultado de este test con base en el siguiente criterio: La hipótesis nula es la no
correlación entre X y Y. Si el valor de t exp es mayor que el valor de t de tablas se rechaza la
hipótesis, siendo la correlación lineal significativa. La tabla de Hipótesis para r es la siguiente:
Parámetro Estadístico Valor Obtenido

r
r2
t exp
t tablas (p=0.05, n−2 gl) *
t exp > t tablas
CRITERIO: Por lo tanto, hay correlación entre la concentración y la
respuesta
* Se sugiere como mínimo 5 puntos de calibración, cada uno con tres mediciones de
absorbancia.
C) Test de varianza de la pendiente (b)
A mayor pendiente, mayor sensibilidad (repuesta del método frente a los cambios de
concentración del analito). La varianza de la pendiente Sb 2 se utiliza como expresión
matemática de la linealidad, “a menor varianza mejor linealidad”.
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Después de ingresar los valores de Concentración y absorbancia correspondiente a la curva

de calibración en la pestaña “Linealidad sistema”, Excel calcula la varianza de la pendiente
aplicando las siguientes formulas:
S 2 y,x S 2 y,x
Sb  

Σ XX 2

ΣX 2  Σ X  / N
2

Donde S 2


Σ Y  Y 1 r 2 
2

N  2 
y,x
Siendo S2y,x la varianza del error experimental total, varianza residual o varianza de regresión
de Y sobre X debida a la variación dentro de la serie mas la variación debida a la falta de
ajuste entre la recta de regresión y los datos experimentales.
Con los datos ingresados, Excel calcula también los límites de confianza de la pendiente así:
b = b  t Sb
Determinar la existencia de regresión lineal sistema aplicando el siguiente test estadístico:

de calibración en la pestaña “Curva de calibración”, Excel calcula el valor del t de Student
experimental “t exp” con la siguiente fórmula
t exp = ‫׀‬b‫ ׀‬/ Sb
Comparar el valor de “t exp” con el valor del t de Student de tablas “t tablas” a dos colas para
n – 2 grados de libertad a una probabilidad de 95 % (p= 0,05).
Evaluar el resultado de este test con base en el siguiente criterio: El valor de “t tablas” debe
ser menor que el “t exp”, indicando que la pendiente es significativamente diferente de cero y
existe regresión.
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Tabla de Hipótesis para la Pendiente

t exp
b
Sb
t tablas (p=0.05, n-2 gl) *
Limite de confianza Superior
Limite de confianza Inferior
t exp > t tablas
CONCLUSIÓN Por lo tanto, la pendiente es significativamente diferente de cero y
existe regresión
* Se sugiere como mínimo 5 puntos de calibración, cada uno con tres mediciones de absorbancia.
D) Test de la varianza de la ordenada o termino independiente (a)
El valor de a, intercepción con el eje de ordenadas u ordenadas en el origen, índica el error

sistemático del método. En el caso ideal debe ser cero.

de calibración en la pestaña “Linealidad sistema”, Excel calcula la varianza del término
independiente con base en la siguiente fórmula:
S 2 b ΣX 2
Sa 
2
N
La desviación o error estándar del término independiente es calculada por Excel con base en
la siguiente fórmula:
Sa = (Sa2)1/2
Los límites de confianza de la ordenada al origen se calculan así:
a = a  t Sa
Siendo t el valor de distribución de Student para n – 2 grados de libertad a una probabilidad

de 0.05.
Evaluar los valores para los límites obtenidos con base en el siguiente criterio: Si estos
límites incluyen el cero, se cumple la condición de proporcionalidad.
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Con los datos ingresados para la curva de calibración, Excel realiza el siguiente test
estadístico para a, el cual consiste en calcular el valor del t de Student experimental “t exp”
así:
t exp = ‫׀‬a‫ ׀‬/ Sa
Comparar ell valor de “t exp” con el valor del t de Student de tablas “t tablas” a dos colas para
n – 2 grados de libertad a una probabilidad de 95 % (p= 0,05).
Evaluar el resultado obtenido con base en el siguiente crterio: El valor de t tabulado en

las tablas “t tablas” debe ser mayor que el “t exp” indicando que el intercepto no es
significativamente diferente de cero.
Tabla de Hipótesis para a:

t exp
a
Sa
t tablas (p=0.05, n-2 gl) *
Limite de confianza Superior
Limite de confianza Inferior
t exp < t tablas
CRITERIO: Por lo tanto, el intercepto no es significativamente diferente
de cero
* Se sugiere como mínimo 5 puntos de calibración, cada uno con tres mediciones de absorbancia.
E) Limites de confianza para la recta

de calibración en la pestaña “Linealidad sistema”, Excel realiza calcula los límites de
confianza para la recta de calibración con base en la siguiente fórmula:

Y = Yi ± t * Sxy * (1/n + (Xi - X)2 /Sxx)
Donde, Yi Λ: Respuesta corregida

Xi: Concentración teórica
X: Promedio de concentraciones
t: t de Student para n–1 grados de libertad y un 95% de confianza
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Tabla Límites de confianza para la recta

Concentración Límite Inferior Límite Superior yˆ (Xi-X)2
t tabla, n–1 gl
Sxy
Sxx
n
6.4.3. Sensibilidad
La sensibilidad indica la capacidad de respuesta de un método analítico a pequeñas

variaciones en la concentración del analito. La sensibilidad entre la señal medida y la
concentración de analito es igual al valor de la pendiente de la curva de calibración a una
concentración determinada.
Nota: El cálculo de este atributo solo aplica para métodos analíticos en los cuales se utilice
curva de calibración para determinar la concentración del analito.
Para determinar la sensibilidad del método analítico, realizar las siguientes acciones:
Fisicoquímicos HC-01, para el método de interés, abrir la pestaña “Rango lineal”.
- Ingresar en la “Tabla 3, Intervalo de aceptación para verificación de curva de
calibración-Pendiente de curvas” la información correspondiente al estudio de curvas
de calibración: número de la curva de calibración, la fecha de realización, el coeficiente
de correlación correspondiente a cada curva y la pendiente respectiva de las curvas de
calibración elaboradas.
- Después de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor de la pendiente
promedio de las curvas de calibración (Sensibilidad), la desviación estándar de las
pendientes y los límites de control máximo y mínimo para los valores de pendiente.
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6.4.4. Límite de detección y de cuantificación
Límite de Detección: Es la concentración de analito mas baja que puede ser detectada por
un procedimiento analítico dado pero no necesariamente cuantificada con precisión y
exactitud razonable.
Límite de Cuantificación: Es la concentración de analito más baja que puede ser medida
con una aceptable precisión (repetibilidad) y exactitud por un procedimiento analítico dado.
Existen diversas maneras de determinar el límite de detección, estas pueden ser:
A) Análisis de blancos de reactivos utilizando los valores de sus señales
Esta metodología aplica para métodos analíticos que utilizan curva de calibración, en los
cuales la lectura de la muestra se obtiene por comparación con un blanco.
Determinar el valor del Límite de Detección del Método con base en las siguientes acciones:
Fisicoquímicos HC-01, para el método de interés, abrir la pestaña “Blancos LD LC”.
- ingresar la información solicitada en la tabla de valores identificada como “Tabla 5.1
Análisis de blancos”: En la columna llamada “Absorbancia” ingresar los valores de las
Absorbancias obtenidas para el blanco de reactivos, ingresar los 12 valores obtenidos
según el diseño experimental de la validación (ver numeral 6.3.2).
- Después de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor de la desviación
estándar de las absorbancias de los blancos.
- Ingresar el valor de la pendiente de la curva de calibración utilizada para medir las
absorbancias de los blancos.
- Excel calcula el valor del Límite de detección del método LDM y del Límite de
cuantificación del método LCM, utilizando las siguientes fórmulas:
LDM = 3 * Sbl / b
Donde: LDM: Límite de Detección del Método

Sbl: Desviación estándar de las respuestas de los 10 blancos
b: Pendiente de la recta de calibración utilizada.
LCM = 10 * Sbl / b
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Donde: LDM: Límite de Detección del Método

Sbl: Desviación estándar de las respuestas de los 10 blancos
b: Pendiente de la recta de calibración utilizada.
Si el valor del coeficiente de variación para las señales de los blancos es mayor de 20%,
realizar el cálculo del límite de detección como se indica en el inciso c) de este numeral.
Si el valor del coeficiente de variación para las señales de los blancos está entre 10% y 20%,
verificar experimentalmente los valores calculados para el LDM y para el LCM, preparando
patrones con concentraciones iguales o aproximadas a los valores calculados, analizar por lo
menos 10 fracciones de cada patrón aplicando el método analítico completo.
El valor de concentración determinado para el LDM se acepta si los resultados

experimentales presentan un coeficiente de variación CV superior al 10% pero inferior al
20% y un error relativo entre 10% y 20%.
El valor de concentración determinado para el LCM se acepta si los resultados

experimentales presentan un coeficiente de variación CV igual o menor al 10% y un error
relativo igual o menor de 10%.
Cuando los resultados experimentales del patrón preparado con una concentración
equivalente al valor del LDM calculado presentan un coeficiente de variación mayor del 20%,
calcular el límite de detección como se indica en el inciso C) de este numeral.
B) Análisis de blancos de reactivos utilizando los valores de sus concentraciones
Esta metodología aplica para métodos analíticos en los cuales se pueden obtener valores de
concentración para blancos de reactivos con un nivel de precisión adecuada. Se considera
nivel de precisión adecuada cuando el coeficiente de variación CV de los datos está entre 10
% y 20 %. Las acciones a realizar para obtener los límites son las siguientes:
Análisis de blancos de reactivos utilizando los valores de sus concentraciones”:
En la columna llamada “Concentración” ingresar los valores de las concentraciones
obtenidas para el blanco de reactivos, ingresar los 12 valores obtenidos según el diseño
experimental de la validación (ver numeral 6.3.2).
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- Después de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor de la desviación
estándar de las concentraciones de los blancos Scb.
- Excel calcula el valor del Límite Inferior de Detección LID así:
Límite Inferior de Detección (LID) = 3,290 x Scb
- Excel también calcula el valor del Límite Detección Instrumental LDI, del Límite de
Detección del Método LDM y del límite de cuantificación del método LCM con base en la
siguiente relación:
LDI : LID : LDM : LCM = 1 : 2 : 4 : 10.
Es decir: LDI = LID / 2

LDM = 2 * LID
LCM = 2,5 * LDM
Verificar experimentalmente los valores calculados para el LDM y para el LCM, preparando
patrones con concentraciones iguales o aproximadas a los valores calculados, analizar por lo
menos 10 fracciones de cada patrón aplicando el método analítico completo.
El valor de concentración determinado para el LDM se acepta si los resultados

experimentales presentan un coeficiente de variación CV superior al 10% pero inferior al
20% y con un error relativo entre 10% y 20%.
El valor de concentración determinado para el LCM se acepta si los resultados

experimentales presentan un coeficiente de variación CV igual o menor al 10%y un error
relativo igual o menor de 10%.
Cuando los resultados experimentales del patrón preparado con una concentración
equivalente al valor del LDM calculado presentan un coeficiente de variación mayor del 20%,
calcular el límite de detección como se indica en el inciso C) de este numeral.
C) Estudio de la menor cantidad detectable
Esta metodología aplica para aquellos métodos analíticos en los cuales el análisis de blancos
de reactivos (incisos A y B) presenta coeficientes de variación CV mayores de 20%. La
metodología se fundamenta en el análisis de blancos dopados con el analito de interés y
preparados a la concentración más baja que sea posible preparar (puede ser la que
recomiende el método analítico de referencia o la de interés según normatividad). Las
acciones a realizar para obtener los límites son las siguientes:
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Estudio de la menor cantidad detectable”: En la columna llamada “Concentración”
ingresar los valores de las concentraciones obtenidas para el blanco dopado, ingresar la
fecha de realización de cada medición. Ingresar por lo menos 10 valores. Además
ingresar el valor de la “Concentración estimada del blanco dopado” en el título de la tabla.
- Después de ingresar los datos, Excel calcula el valor promedio de las concentraciones
(Ceb), la desviación estándar de los datos “s” y el coeficiente de variación CV.
- En este punto se pueden presentar las siguientes situaciones:
Si el CV es menor del 10%, preparar un nuevo blanco dopado pero con una concentración
inferior, realizar su análisis y evaluar el CV. Realizar disminución en la concentración hasta
cuando la evaluación del CV de los resultados obtenidos se encuentre entre 10% y 20%.
Nota: (El archivo Excel proporciona suficientes tablas de datos para realizar las evaluaciones
del valor de CV)
Si el CV es está entre 10% y 20%, calcular el Límite de Detección del Método como se indica
más adelante.
Si el CV es mayor del 20%, preparar una nueva solución de blanco dopado pero
incrementado levemente la concentración del analito (el incremento se debe poder preparar
fácilmente), analizarlo y nuevamente calcular y evaluar el coeficiente de variación CV de los
resultados obtenidos. Realizar incrementos en la concentración hasta cuando la evaluación
del CV de los resultados obtenidos se encuentre entre 10% y 20%.
- Con la información ingresada y una vez definido el valor de CV adecuado, Excel calcula el
Límite de Detección del Método con base en la siguiente fórmula:
LDM = Ceb + tn-1 * s
Donde: LDM: Limite de Detección Del Método

tn−1: t student al 99% de confianza para n−1 grado de libertad
s: Desviación estándar de las concentraciones de los 10 blancos dopados
Ceb: Promedio de las concentraciones del blanco dopado
Nota: El LDM debe ser recalculado cuando se produzca un cambio significativo en el método
analítico o en el equipo utilizado.
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En el Anexo 5 se presentan algunos valores de referencia para realizar el cálculo del límite
de detección del método utilizando blancos dopados, también se presenta la tabla con los
valores de t student al 99% de confianza.
- Excel también calcula el Límite de Cuantificación del Método aplicando las siguientes
fórmulas:
LCM = 2,5 * LDM o LCM = Ceb + 10 * s
De los dos valores seleccionar el que sea menor.
Verificar experimentalmente el valor calculado para el LCM, preparando un patrón con

concentración igual o aproximada al valor calculado, analizar por lo menos 10 fracciones de
este patrón aplicando el método analítico completo. El valor de concentración determinado
para el LCM se acepta si los resultados experimentales presentan un coeficiente de variación
CV igual o menor al 10% y un error relativo igual o menor a 10%.
Nota 1: Cuando para un método analítico sea posible determinar los límites de detección y
cuantificación por varios mecanismos, seleccionar los valores más bajos como límites
representativos del método.
Nota 2: Para los métodos de pH y conductividad, no es posible obtener un blanco de

reactivos, por esta razón para el pH no se calcula el LDM. Para la conductividad se realiza la
estimación del LDM utilizando un agua desionizada preferiblemente con una conductividad
menor de 1 μS/cm.
6.4.5. Exactitud
La exactitud del método indica la capacidad del método analítico para dar resultados lo más
próximos posibles al valor verdadero.
Calcular la exactitud del método utilizando estándares preparados en el laboratorio o

utilizando Material de Referencia Certificado como se indica a continuación.
La exactitud se puede calcular aplicando alguno de los siguientes mecanismos:

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A) Utilizando patrones preparados en el laboratorio:
- Abrir el archivo Excel “Hoja de cálculo Validación de métodos analíticos Fisicoquímicos

HC-01, correspondiente al método de interés y abrir la pestaña “Exactitud”.
- Ingresar la información solicitada en la tabla de valores identificada como “Tabla 9.
Exactitud con estándares preparados en el laboratorio” la siguiente información:
Fecha de análisis, pendiente y coeficiente de correlación (si el método involucra curva de
calibración), resultados del análisis por duplicado de los Estándares bajo y alto definidos
en el diseño experimental (en las filas llamadas Patrón 1, Patrón 2 respectivamente, si se
utilizan más patrones se puede utilizar ora fila).
- Después de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula para cada Estándar el
error relativo y el sesgo con las siguientes fórmulas:
Error relativo = (Cexp – CTeórica) * 100 / CTeórica
Sesgo = Cexp – CTeórica
Cexp = Concentración promedio de los resultados obtenidos experimentalmente

para cada solución patrón.
CTeórica = Concentración teórica de cada solución patrón preparada.
- Verificar si los errores calculados cumplen con la meta de exactitud establecida en el

numeral 6.3.3.3. de este procedimiento. Si la meta se cumple en el análisis de las dos
soluciones patrón, seleccionar como exactitud del método el valor de Error relativo más
alto obtenido. Si la meta no se cumple en alguna de las soluciones patrón, revisar
cálculos y si es necesario repetir los análisis.
B) Utilizando materiales de referencia certificados
- Abrir el archivo Excel, Hoja de cálculo Validación de métodos analíticos Fisicoquímicos

Datos con Materiales de Referencia Certificados”: El valor certificado para el Material
y el valor promedio de los análisis del Material Certificado realizados en el laboratorio.
Excel calcula el porcentaje de Error Relativo y el Sesgo como se indica en el inciso A) de
este numeral.
Nota: Preparar el Material de Referencia Certificado MRC siguiendo las instrucciones del
fabricante o proveedor.
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- Verificar si el error calculado cumple con la meta de 3establecida en el numeral 6.3.3.3.

de este procedimiento. Si la meta se cumple, definir como Exactitud del método el valor
del Error relativo calculado; si la meta no se cumple, revisar cálculos y si es necesario
repetir el análisis del MRC.
C) Utilizando muestras de ejercicios Interlaboratorio
Este mecanismo solo aplica para aquellos resultados de ejercicios Interlaboratorio para los
cuales se hayan obtenido resultados satisfactorios. El mecanismo es el siguiente:
- Abrir el archivo Excel Hoja de cálculo Validación de métodos analíticos Fisicoquímicos

Datos con patrones certificados”: Valor de referencia para cada muestra, el valor
reportado por el laboratorio para cada una de ellas. Excel calcula el porcentaje de Error
Relativo y el Sesgo como se indica en el inciso A) de este numeral.
- Verificar si el error calculado cumple con la meta de exactitud establecida en el numeral
6.6.3.3. de este procedimiento. Si la meta se cumple, definir como Exactitud del método
el valor del Error relativo calculado; si la meta no se cumple, evaluar los resultados
emitidos o evaluar los límites de aceptación definidos.
Nota: Cuando para un método analítico sea posible determinar la exactitud por varios
mecanismos, seleccionar como exactitud del método el valor más alto que cumpla con las
metas establecidas.
D) Utilizando los resultados del porcentaje de recuperación en muestras adicionadas
En el inciso E) de este numeral se presenta la aplicación de la prueba estadística “t de

Student” para los resultados de porcentaje de recuperación en muestras adicionadas, con
este mecanismo se establece si la exactitud del método es adecuada o no.
E) Utilizando los resultados del porcentaje de recuperación de patrones
Verificar el cumplimiento de las metas de aceptación (error relativo y sesgo) Utilizando los
resultados obtenidos en el análisis de los patrones preparados en el laboratorio. Seleccionar
el valor relativo mas lato que cumpla las metas establecidas. Los resultados que se utilizan
que se utilizan para tal fin corresponden el resultado promedio, el más alto y el más bajo de
los datos repostados.
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Utilizar el Test G de Cochran (test para establecer si existe igualdad de varianza de varios
grupos muéstrales del mismo tamaño) para determinar si la concentración de los patrones
tiene alguna influencia en los resultados y en su precisión. Aplicar las siguientes directrices:

HC-01, correspondiente al método de interés, abrir la pestaña ““Rec patrón Cochran”.
- Con los datos ingresados en la tabla “Recuperación de patrones”, en la “Tabla 2. Datos
para el Test de Cochran” aparecen los datos básicos para calcular el test: desviación
estándar y la varianza de los resultados de cada grupo de datos.
- Excel calcula el estadístico Gexp como se indica a continuación:
S2 max
G exp = 2
S 1 + S2 2 + S2 3 + ....S2 n
Donde: S2max :Varianza máxima obtenida entre los grupos de datos de patrones analizados.
S21: Varianza obtenida para los resultados del primer grupo de datos.
S22: Varianza obtenida para los resultados del segundo grupo de datos.
S23: Varianza obtenida para los resultados del tercer grupo de datos.
S2n: Varianza obtenida para los resultados del grupo n de datos.
- Comparar el valor del “Gexp” con el valor del G de tablas “Gtabla” y aplicar el siguiente
criterio: Si Gexp. < Gtablas la concentración del patrón no influye en la variabilidad de los
resultados.
Nota: En el Anexo 6 se presenta la tabla con los valores de G tabla para un nivel de
confianza del 95% (P = 0.05), tener en cuenta los valores de K (número de patrones
analizados) y n (número de análisis por cada patrón) para establecer el valor de G tabla.
Tabla de Test de Cochran.

Valor Máximo de Varianza
Sumatoria de las Varianzas
Gexp
G tabla p=0.05, para n, k
Cumple, la concentración no tiene influencia sobre la
CRITERIO G exp < G tabla
precisión de los resultados, las varianzas son comparables
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6.4.6 Precisión
A) Coeficiente de variación del método CV
Establecer el coeficiente de variación del método de interés a través de las siguientes

acciones:

HC-01, correspondiente al método de interés, abrir la pestaña “CV”.
- Para cada lote de muestras analizadas, ingresar la siguiente información en la “Tabla 6.
Coeficiente de variación”: Fecha de análisis, pendiente y coeficiente de correlación (si el
método tiene curva de calibración), en las filas correspondientes los resultados del
análisis por duplicado de las muestras M1, M2, de las muestras adicionadas M1+A1, M2
+ A2, de los resultados de los estándares E1 y E2, incluir los resultados del MRC si están
disponibles o los de otro estándar si se analizó.
- Verificar la existencia de datos atípicos (Ver metodología en el Anexo 7) en la parte
derecha de la Tabla 1. Si existe algún dato atípico eliminarlo para que Excel recalcule (no
olvidar cambiar el valor del estadístico T de referencia para el nuevo número de datos).
Registrar los valores determinados como atípicos. Realizar como máximo dos rechazos.
Si existen más de dos rechazos, es necesario repetir todos los análisis correspondientes
a la muestra en cuestión.
- Después de ingresados todos los datos requeridos y haber verificado si existen datos
atípicos, Excel calcula el coeficiente de variación para cada nivel de concentración de
muestras y estándares. Comparar los valores obtenidos con los criterios de aceptación
indicados en el numeral 6.3.3.1 (seleccionar como criterio de aceptación aquel cuyo valor
sea mayor). Entre los valores de desviación estándar y/o coeficiente de variación que
cumplan con el criterio de aceptación definido, escoger como Coeficiente de variación del
método el valor correspondiente al coeficiente de variación más alto obtenido.
Nota: Antes de hacer oficiales los resultados de coeficiente de variación, evaluar la

aceptabilidad de las desviaciones estándar en diferentes niveles de concentración utilizando
la Hoja de Cálculo Validar 1.1 HC-02, elaborada por el Doctor SAUL ANTONIO
PEÑARANDA CANOSA químico del Instituto Nacional de Salud – INS. La cual tiene
protección de acceso del registro electrónico especificado en el Listado Maestro de
documentos RA-01.
Los pasos a seguir son los siguientes:
- Abrir la Hoja de Cálculo Validar 1.1 HC-02, y a través de los menús Archivo - Guardar
como crear un archivo para el método analítico de interés.
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- En la Hoja de Cálculo Validar 1.1 HC-02, correspondiente al método, abrir la pestaña

MENU DE INICIO.
- Con la ayuda del “puntero del mouse” (con un solo clic), abrir el hipervínculo llamado 1.
PARAMETROS ESTABLES.
- En la tabla de datos que aparece, ingresar la siguiente información: Resultados del
análisis por duplicado del blanco (filas BK1 y BK2), resultados promedio de los análisis de
los estándares (filas E 0,9C y E 0,09C), resultados promedio de los análisis de las
muestras (filas M1 y M2) y de las muestras adicionadas (filas M1 + A1 y M2 + A2)
correspondientes a cada lote analizado; el valor “C” de la concentración madre del patrón
utilizado para el adicionado en cada muestra, el valor del volumen “v” de solución patrón
adicionado a cada muestra para preparar la muestra adicionada y el valor del volumen “V”
tomado de cada muestra para preparar cada muestra adicionada (Filas llamadas
“Constantes M1” y “Constantes M2” ubicadas en la parte superior e inferior de la tabla de
datos). Después de ingresada la información Excel calcula el valor de “U” (Concentración
promedio de cada muestra sin adicionar).
- Volver a la pestaña MENU DE INICIO y con el “puntero del mouse” hacer clic sobre el
hipervínculo llamado 6. ACEPTABILIDAD DE LAS DESVIACIONES ESTANDAR (St < W)
para abrir la hoja de cálculo en donde se puede verificar si la meta de precisión definida
en la hoja de cálculo se logra para cada muestra (Aparece SI o NO en la fila llamada
St < W). En el caso de que la desviación estándar de alguna de las muestras aparezca
con un NO, es necesario revisar la metodología analítica y repetir los ensayos
respectivos.
Utilizar el Test G de Cochran (test para establecer si existe igualdad de varianza de varios
grupos muéstrales del mismo tamaño) para determinar si la concentración tiene alguna
influencia en los resultados y en su precisión. Aplicar las siguientes directrices:

HC-01, correspondiente al método de interés, abrir la pestaña “CV”.
- Con los datos ingresados en la Tabla 6 de la pestaña “Cv”, Excel calcula el estadístico
Gexp y lo presenta en la Tabla “Test de Cochran”, allí también aparecen los datos
básicos para calcular el test: Sumatoria de varianzas y valor máximo de varianza.
- Excel calcula el estadístico Gexp como se indica a continuación:
S2 max
G exp =
S21 + S2 2 + S2 3 + ....S2 n
Donde: S2max :Varianza máxima obtenida entre las muestras analizadas.

S21: Varianza obtenida para los resultados de la primera muestra.
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S22: Varianza obtenida para los resultados de la segunda muestra.

S23: Varianza obtenida para los resultados de la tercera muestra.
S2n: Varianza obtenida para los resultados de la muestra n.
- Comparar el valor del “Gexp” con el valor del G de tablas “Gtabla” y aplicar el siguiente
criterio: Si Gexp. < Gtablas el factor de concentración no influye en la variabilidad de los
resultados.
Nota: En el Anexo 6 se presenta la tabla con los valores de G tabla para un nivel de
confianza del 95% (P = 0.05), tener en cuenta los valores de K (número de muestras
analizadas) y n (número de análisis por muestra) para establecer el valor de G tabla. Para el
diseño experimental indicado en el numeral 6.3.2., el valor de K es 7 y el valor de n es 6 sin
considerar el MRC, considerando MRC el valor de K es 8 y el de n es 6.
Tabla de Test de Cochran.

PARÁMETRO ESTADÍSTICO Valor Obtenido
Valor Máximo de Varianza
Sumatoria de las Varianzas
Gexp
G tabla p=0.05, para n, k
Cumple, la concentración no tiene influencia sobre la
CRITERIO G exp < G tabla precisión de los resultados, las varianzas son
comparables
B) Rango relativo entre duplicados RRD
Este atributo permite establecer un mecanismo de control para las mediciones por duplicado
realizadas sobre una muestra. En los análisis de rutina el valor del RRD calculado no debe
exceder el valor del límite máximo del RRD determinado durante la validación del método,
para determinar el valor de este límite seguir las siguientes instrucciones:

HC-01, correspondiente al método de interés.
- Ubicarse en la pestaña “Muestras RRD,ADIC”.
- Para cada lote de muestras analizadas, ingresar la siguiente información en la “Tabla 7
Cálculo límite superior RRD”: Fecha de análisis, pendiente y coeficiente de correlación
(si el método tiene curva de calibración), en las filas correspondientes los resultados del
análisis por duplicado de los blancos BK, de las muestras M1, M2, de las muestras
adicionadas M1+A1, M2 + A2, de los resultados de los estándares E1 y E2 (Si se analiza
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un tercer estándar, incluirlo). No incluir las parejas de muestras que involucren un valor
como atípico.
- Después de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula el valor relativo del
rango entre duplicados para cada pareja de muestras. Además calcula el Rango relativo
promedio para cada nivel de concentración y el Límite de control alto (LCA) para el Rango
Relativo entre Duplicados RRD. Para realizar estos cálculos se utilizan las siguientes
fórmulas:
X1 - X 2
RRD =
X1  X 2  / 2
Donde I X1 - X2 I significa valor absoluto de la resta entre X1 y X2.
RRD1  RRD 2  ...RRD n

Rp =
n
Donde Rp es el valor promedio de RRD y n es el número de valores.
LCA = 3,27 * (Rp)
Donde LCA es el límite de control para el rango relativo entre duplicados.
- Seleccionar como límite máximo para el Rango Relativo entre Duplicados del método el
mayor valor obtenido de dicho límite calculado para cada nivel de concentración de
muestras.
6.4.7. Recuperación de muestras adicionadas
A) Preparación de las muestras adicionadas
- Para cada nivel de concentración de muestra, adicionar v mL de una solución madre de

un estándar de concentración conocida SM a un volumen V mL de la muestra de una
concentración CM, de manera que la concentración del analito de interés en dicha
muestra se incremente a un valor prefijado no mayor de 0,9C (C es la concentración
máxima dentro del rango de aplicación del método establecido en las actividades
preliminares de la validación). El volumen v no debe ser mayor de 0,05*V.
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Nota: Preparar suficiente volumen de muestra adicionada (V + v) para todo el proceso de

validación.
Nota: Los valores de v, V y de SM deben ser tales que la concentración del analito en la
solución de muestra adicionada CMA (Muestra + Adición) debe ser equivalente a la
concentración de la muestra CM más un incremento del 20% al 40% de su valor, es decir
CMA = CM + 0,2* CM hasta CMA = CM + 0,4* CM.
Nota: Para cada nivel de concentración de las muestras, se sugiere adicionarla de la

siguiente manera:
CMAbaja = CMbaja + (0,2 a 0,3)* CMbaja = CMbaja + A1
CMAalta = CMalta + (0,3 a 0,4)* CMalta = CMalta + A2
Las siguientes relaciones pueden ser de utilidad para estimar el valor de alguna variable de
interés (normalmente la variable desconocida es SM):
v*SM + V* CMbaja = (v + V) * [ CMbaja + (0,2 a 0,3) * CMbaja ]
v*SM + V* CMalta = (v + V) * [ CMalta + (0,3 a 0,4) * CMalta ]
- Analizar las muestras adicionadas por duplicado teniendo en cuenta el diseño

experimental (Ver numeral 6.3.2.).
B) Cálculos con los resultados de las muestras adicionadas

- Ubicarse en la pestaña “Muestras RRD, ADIC”.
- Para cada lote de muestras adicionadas analizadas, ingresar la siguiente información en
la “Tabla 8. Datos experimentales con muestras adicionadas”: Fecha de análisis,
pendiente y coeficiente de correlación (si el método involucra curva de calibración),
resultados del análisis por duplicado de las muestras M1 y M2 adicionadas (en las filas
llamadas Muestra M1 + A1 (CMA) y Muestra M2 + A2 (CMA) respectivamente). No incluir
las parejas de muestras que involucren un valor como atípico.
- Ingresar los valores requeridos en las tablas “Adición muestra M1” y “Adición muestra
M2”.
- Después de ingresados todos los datos requeridos, Excel calcula para cada nivel de
concentración de muestra el porcentaje de recuperación promedio, el rango del
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porcentaje de recuperación y la desviación estándar de los porcentajes de recuperación.

Estos cálculos se realizan con base en las siguientes fórmulas:
C MA  C M
%R   100
CA
Donde: %R = Porcentaje de recuperación

CM = Concentración promedio de la muestra no adicionada
CMA = Medida de la concentración del analito en la muestra adicionada
CA = Recuperación esperada, la cual se calcula así:
v * (SM  C M )
CA 
V v
Donde: CA = Concentración esperada

v = Volumen tomado del patrón para adicionar
V = Volumen tomado de muestra a ser adicionada
SM = Concentración de la solución madre del patrón
CM = Concentración promedio de la muestra que va a ser adicionada
%R1  %R2  ... %Ri

% Rm 
n
Donde: % Rm = Porcentaje de recuperación promedio
Para establecer si el % Rm cumple con las metas propuestas (Ver numeral 6.3.3.2 y el
Anexo 3), utilizar la Hoja de Cálculo Validar 1.1 HC-02 elaborada por el Doctor SAUL
ANTONIO PEÑARANDA CANOSA químico del Instituto Nacional de Salud – INS, la Hoja de
Cálculo Validar 1.1 HC-02, (La cual tiene protección de acceso del registro electrónico
especificado en el Listado Maestro de documentos RA-01), aplicando las siguientes
instrucciones:
- Abrir la Hoja de Cálculo Validar 1.1 HC-02 y a través de los menús Archivo - Guardar
como crear un archivo para el método analítico de interés.
- En la Hoja de Cálculo Validar 1.1 HC-02 correspondiente al método, abrir la pestaña
MENU DE INICIO.
- Con la ayuda del “puntero del mouse” (con un solo clic), abrir el hipervínculo llamado 1.
PARAMETROS ESTABLES.
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- En la tabla de datos que aparece, ingresar la siguiente información: Resultados promedio

de los análisis de las muestras (filas M1 y M2) y de las muestras adicionadas (filas M1 +
A1 y M2 + A2) correspondientes a cada lote analizado; el valor “C” de la concentración
madre del patrón utilizado para el adicionado en cada muestra, el valor del volumen “v” de
solución patrón adicionado a cada muestra y el valor del volumen “V” tomado de cada
muestra para ser adicionado (filas llamadas “Constantes M1” y “Constantes M2” ubicadas
en la parte superior e inferior de la tabla de datos). Después de ingresada la información
Excel calcula el valor de “U” (Concentración promedio de cada muestra sin adicionar).
- Volver a la pestaña MENU DE INICIO y con el “puntero del mouse” hacer clic sobre los
botones llamados R1/d1 y R2/d2 para establecer si las recuperaciones fueron
satisfactoria o no. Si los resultados no son satisfactorios, revisar los cálculos y si es
necesario repetir los análisis de las muestras adicionadas.
- Si para las dos muestras adicionadas se obtiene RECUPERACIÓN SATISFACTORIA,
expresar el porcentaje de recuperación del método analítico como el promedio de los
dos porcentajes de recuperación.
Con la información obtenida en la “Tabla 8. Datos experimentales con muestras

adicionadas” Incluida en la pestaña “Muestras adicionadas” de la hoja de cálculo “Validación
de métodos analíticos”, establecer con los resultados de las dos muestras adicionadas el
rango de valores de porcentaje de recuperación (es decir establecer el valor máximo y el
valor mínimo de porcentaje de recuperación) que cumple con el criterio de aceptación
indicado en el Anexo 3.
Nota 1: El cálculo del porcentaje de recuperación de muestras adicionadas no aplica para

aquellos métodos en los cuales el mensurando es un conjunto de sustancias, su medición
depende de varios factores simultáneos y obtener un patrón que represente una
concentración específica es complejo o imposible, por ejemplo pH, conductividad, DBO 5, etc.
6.4.8. Estándar de control del método y límites iniciales para su carta de control
Con los resultados de análisis de patrones (Ebajo y Ealto) preparados en el laboratorio (ver
numeral 6.4.2) o con estándar definido como estándar de control, realizar las siguientes
acciones:

- Ubicarse en la pestaña “Límites CC”.
- En la “Tabla 1. Datos de patrones analizados”, ingresar la siguiente información:
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 Frente a las celdas llamadas “Conc. teórica Ct” ingresar las concentraciones
teóricas de los patrones de concentración baja y alta respectivamente.
 En la columna “Fecha” ingresar las fechas en que se realizaron los análisis.
 En las columnas “Valor 1” y “Valor 2” ingresar los resultados correspondientes al
análisis de los duplicados de los estándares de concentración baja y alta.
- Después de ingresados todos los resultados, Excel calcula los atributos definidos en las
Tabla 2. Límites iniciales para la carta de control, Tabla 3. Coeficiente de variación y
Tabla 4. Porcentaje de recuperación promedio de patrones. Los valores de la Tabla 4 se
pueden utilizar como criterios para una gráfica de control de calidad. Desplegar el menú
Archivo y seleccionar el menú Guardar.
- Seleccionar convenientemente como Estándar de control del método, el estándar cuya

concentración represente mejor el rango de concentraciones que se manejan
rutinariamente en el laboratorio o aquel cuyos resultados presenten un mayor coeficiente
de variación. Los límites determinados para el estándar seleccionado serán los Límites
iniciales para la carta de control del método.
Nota: Si el método de referencia propone un estándar de control, este se debe analizar

dentro del proceso de validación para establecer los límites iniciales para su carta de control.
6.5. REGISTRO DE LOS RESULTADOS DE LA VALIDACIÓN
Registrar los resultados de la validación de los métodos en el Formato atributos de los

métodos validados RO-09.
6.6. VERIFICACIONES DE LA VALIDACIÓN
Cuando se presente un cambio que pueda afectar la idoneidad del método analítico
establecido por la validación se procederá hacer una verificación de la validación, con el fin
de establecer si se mantienen los atributos iníciales del método (con respecto a propiedad
medida, matriz, rango, equipos utilizados, repetibilidad, etc.). Este estudio será
fundamentado en un diseño experimental el cual se planteara cuando esta situación se
presente. Si se comprueba que las variaciones con respecto a los atributos iníciales son
significativos será necesario volver a validar el método para considerar las condiciones
actuales de trabajo. Lo anterior se aplicara si existen cambios reales o posibles en su
ejecución, de acuerdo a los siguientes casos:
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 Con Cambios esperados como la sustitución de lotes de reactivos, la modificación del

tamaño de la muestra (por sólo citar algunos ejemplos) y no se puede demostrar que
sistema analítico permanece bajo control tras los cambios a través de gráficos de
control o herramientas equivalentes.
 Si un método deja de utilizarse durante un período prolongado (mayor a un año) se

requerirá una demostración del desempeño del método antes de utilizarlo nuevamente
con fines rutinarios.
 Si existen cambios significativos como la sustitución de equipos, cambios de personal,

cambios de formulas, cambios de las condiciones ambientales de trabajo o cambios
en el alcance (aplicación a matrices que no se especifican o rangos de muestras
ensayadas no contempladas en la validación inicial).
7. FORMATOS RELACIONADOS
 Formato atributos de los métodos validados RO-09.

 Hoja de cálculo validación de métodos fisicoquímicos, HC-01.
 Hoja de cálculo validar 1.1. HC-02.
 Listado Maestro de documentos RA-01.
8. ANEXOS
ANEXO 1.Directrices especificas para la validación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno.

ANEXO 2.Directrices especificas para la validación de grasas y aceites.
ANEXO 3.Descripción de la hoja de cálculo VALIDAR 1.1 del Instituto Nacional de Salud.
ANEXO 4. Valores de la distribución t para un nivel de confianza del 95 %.
ANEXO 5. Cálculo del límite de detección del método con blancos dopados.
ANEXO 6. Tabla de datos para el estadístico G (Test de Cochran).
ANEXO 7. Rechazo de datos atípicos.
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ANEXO 1.
DIRECTRICES ESPECÍFICAS PARA LA ESTANDARIZACIÓN DE LA DEMANDA BIOQUÍMICA DE
OXÍGENO.
- Preparar blancos con el agua de dilución aireada sin inóculo y con inóculo.
- Analizar 10 fracciones de cada blanco en un mismo día.
- Calcular la desviación estándar, el coeficiente de variación, el LDM y el LCM.
- Analizar 10 fracciones del patrón de 1 mg O2/L (Estándar E1) sin inóculo y con 2 ml de
inóculo en un mismo día, obtenido por dilución de una solución madre. Se prepara
tomando 10 mL del estándar de control y aforar a 2000 mL con agua destilada.
- Analizar 10 fracciones del patrón de 50 mg O2/L (Estándar E2) sin inóculo y con 2 ml de
inóculo en un mismo día, Se prepara pesando 37,5 mg de Ácido glutámico y 37,5 de
Glucosa, disolver en agua destilada y aforar a 1 Litro (balón volumétrico clase A) con
agua destilada.
- Calcular la desviación estándar el coeficiente de variación y el porcentaje (%) de error
relativo.
- Teniendo en cuenta que las muestras cambian durante el tiempo de su almacenamiento,
la estandarización de la DBO5 no se puede realizar durante un periodo de 6 días, por lo
tanto se deben analizar dos muestras naturales con valores de DBO 5 frecuentes en el
laboratorio. Analizar mínimo 10 fracciones de cada muestra seleccionada sin inóculo y
con inóculo (2 mL) en un mismo día y determinar los siguientes atributos del método:
Promedio de la DBO5, desviación estándar y el coeficiente de variación de los resultados.
- Preparar en el laboratorio el estándar de control así: Disolver 150 mg de glucosa y 150
mg de Acido Glutámico en agua destilada y diluir a 1L. Analizar mínimo 10 fracciones del
patrón preparado sin inóculo y con inóculo en un mismo día, determinar los siguientes
atributos del método: Promedio de la DBO5, desviación estándar y el coeficiente de
variación de los resultados.
- Analizar mínimo 10 fracciones de un material de referencia certificado (si está disponible)
sin inóculo y con inóculo en un mismo día y determinar los siguientes atributos del
método: Promedio de la DBO5, desviación estándar, exactitud y el coeficiente de variación
de los resultados.
- A través del análisis de agua de dilución y del patrón de 1 mg O 2/L establecer como LDM
y LCM del método el valor más bajo obtenido para estos atributos y para los cuales se
cumple el criterio de precisión establecido para el método.
- A través del análisis de las dos muestras de agua natural establecer como Coeficiente de
variación del método el valor más alto obtenido para este atributo y que sea menor que el
criterio establecido (Ver Standard Methods), el criterio establecido está expresado como
desviación estándar, por lo tanto los resultados experimentales primero se calculan en
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desviación estándar, se comparan con el criterio y los que cumplan se convierten a

coeficiente de variación para expresar la precisión del método.
- A través del análisis de los estándares preparados en el laboratorio, establecer como
exactitud estimada del método el valor más alto obtenido para el porcentaje (%) de error
relativo y que sea menor que el criterio establecido (Ver Standard Methods).
- A través del análisis del Material de Referencia Certificado establecer como exactitud del
método el valor más alto obtenido para el porcentaje (%) de error relativo y que sea
menor que el criterio establecido (Ver Standard Methods). También se puede determinar
el porcentaje (%) error relativo del método a partir del porcentaje (%) de error relativo
obtenido en el ejercicio Interlaboratorio más reciente y para el cual se hayan obtenido
resultados satisfactorios.
Nota: Antes de realizar los cálculos estadísticos para obtener los atributos del método,
realizar una prueba de datos atípicos; realizar como máximo dos rechazos.
Preparación de las muestras naturales:
Preparar 500 ml de las muestras naturales con valores de DBO dentro del rango normal de
trabajo en el laboratorio, una baja y otra alta. Mantener refrigeradas las muestras a 4 ºC y
sembrar antes de 24 horas.
Preparación de los patrones:
Prepararlos el mismo día que se va a realizar la siembra. Volumen de siembra: 6 ml de la

solución de Glucosa – Acido Glutámico.
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ANEXO 2. DIRECTRICES ESPECÍFICAS PARA LA ESTANDARIZACIÓN DE GRASAS Y ACEITES
- Preparar en recipientes volumétricos diferentes 12 soluciones de concentración baja

(aproximadamente de 1 mg ácido esteárico/L) disolviendo el ácido esteárico en un volumen
pequeño de Hexano o Éter de petróleo y aforar con agua destilada.
- Analizar las 12 soluciones en un mismo día.
- Preparar en recipientes volumétricos diferentes 12 soluciones patrón con una concentración
aproximada a 0,09*C mg ácido esteárico/L.
- Analizar las 12 soluciones del patrón en un mismo día.
- Calcular la desviación estándar, el coeficiente de variación y el % error relativo.
- Preparar en recipientes volumétricos diferentes 12 soluciones patrón con una concentración
aproximada a 0,9*C mg ácido esteárico/L.
- Analizar las 12 soluciones del patrón en un mismo día.
- Calcular la desviación estándar, el coeficiente de variación y el % error relativo.
- Recolectar, homogenizar y generar 12 fracciones de una muestra rutinaria M1 de
concentración baja y 12 fracciones de una muestra rutinaria M2 de concentración alta.
- Analizar las 12 fracciones de cada una de las muestras en un mismo día.
- Calcular la desviación estándar, el coeficiente de variación.
- A través del análisis del patrón de 1 mg/L establecer como LDM y LCM del método
considerando si se cumple el criterio de precisión establecido para el método. Si no se
cumple el criterio, incrementar la concentración del patrón hasta cuando se cumpla el criterio
de precisión.
- A través del análisis de las dos muestras rutinarias establecer como Coeficiente de variación
del método el valor más alto obtenido para este atributo y que sea menor que el criterio
establecido para error aleatorio, el criterio establecido está expresado como desviación
estándar, por lo tanto para los resultados experimentales la precisión primero se calcula como
desviación estándar luego se compara con el criterio y los valores de precisión que cumplan
se convierten a coeficiente de variación para expresar la precisión del método.
- A través del análisis de los estándares preparados en el laboratorio, establecer como
exactitud estimada del método el valor más alto obtenido para el % de error relativo y que sea
menor que el criterio establecido para el error sistemático.
- A través del análisis del Material de Referencia Certificado establecer como exactitud del
método el valor más alto obtenido para el % de error relativo y que sea menor que el criterio
establecido para el error sistemático. También se puede determinar el % error relativo del
método a partir del % error relativo obtenido en el ejercicio Interlaboratorio más reciente y
para el cual se hayan obtenido resultados satisfactorios.
Nota: Antes de realizar los cálculos estadísticos para obtener los atributos del método, realizar
una prueba de datos atípicos; realizar como máximo dos rechazos.
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ANEXO 3
DESCRIPCIÓN DE LA HOJA DE CÁLCULO VALIDACIÓN 1.1 DEL INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
Desarrollo GRUPO DE SALUD AMBIENTAL-INS (Colombia)

Fundamento estadístico: Análisis de varianza (ANOVA).
Técnica estadística usada para separar y calcular la variación
debida a los errores aleatorios de la medición de la variación
Fundamento
causada por cualquier otro factor que podría introducir cambios en la
medida de la concentración de la muestra.
Normas nacionales e NTC-ISO 5725, parte 2;

internacionales en que se NTC-ISO 3534
apoyan. Otras: IEC,OIML,IUPAP
Equipo humano que intervino

Saul Antonio Peñaranda Canosa - GRSA-INS
en el desarrollo.
Software utilizado como

plataforma para el desarrollo MS-WINDOWS
y para la ejecución de la Hoja electrónica EXCEL
aplicación.
El validar 1.1 asume: St2 = Sd2 + Se2 , se cumple para Sd2 = 0, y, Se2 Por lo tanto en el
validar 1.1 se puede ver que el error entre los lotes es mayor que el error dentro del lote,
para todos los niveles de concentración exceptuando el blanco estadísticamente esto
significa:
Varianza dentro del lote < Varianza entre los lotes
Para que se cumpla en el validar 1.1: St2 = Sd2 + Se2 , en todos los niveles de concentración
se debe cumplir: Sd2  0 y Sd2 sea un mínimo.
Con este requerimiento matemático se empieza a buscar un valor critico (W): a una cola,
a un nivel de confianza de 95% con un error tipo I de 0.05
El validar calcula el número de replicas necesarias para detectar alguna diferencia

predeterminada entre dos medias basadas en el estadístico de prueba F y se cumple:
S t2
F0.05 
W2
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El validar 1.1 asume F0.05  1 para todos los niveles de concentración a excepción del
blanco (ver TABLA DE DATOS), por lo tanto:
S t2 S t2
1  2 que es lo mismo que 1
W W2
Despejando tenemos: S t2  W 2 es decir: S t  W
Esto implica que en la práctica analítica todos los valores de St son menores que los valores
fijados como meta (W). Si los valores de St no son mayores que el valor fijado como meta,
entonces se ha obtenido la precisión requerida, designada como W y no se necesitan más
cálculos. Si los valores de St son mayores que los valores fijados como meta, antes de
comprobar si las desviaciones estándares totales son aceptables, es necesario obtener el
valor de la prueba F (para v1, v2 grados de libertad y 0.05 de error tipo I).
Para evaluar el porcentaje de recuperación de muestras adicionadas, es necesario demostrar

que el promedio de recuperación R, no difiere significativamente (con un nivel de
probabilidad de ± 0.05) del 95-105 % de la recuperación esperada d. La recuperación
promedio R es aceptable sí:
0.95  R/d  1.05
La recuperación también es aceptable si R se encuentra dentro del siguiente intervalo:
R = 0.95 * d – s * tm-1 / m1/2 (para valores de R/d < 0.95)
R = 1.05 * d + s * tm-1 / m1/2 (para valores de R/d > 1.05)
tm-1 es la t estadística de doble cola (bilateral) a un nivel de probabilidad de 0.10 y m–1

grados de libertad. Aquí m (número de lotes) = 6 y tm-1 = 2.01.
Donde s se calcula con base en el siguiente diagrama:

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De acuerdo al programa validar 1.1. se hace el cálculo de la recuperación del adicionado en

las muestras 1 y 2 usando el esquema estadístico propuesto de doble cola ( bilateral).
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ANEXO 4
VALORES DE LA DISTRIBUCIÓN T PARA UN NIVEL DE CONFIANZA DEL 95 %
gl 95%
1 12,71
2 4,3
3 3,18
4 2,78
5 2,57
6 2,45
7 2,36
8 2,31
9 2,26
10 2,23
11 2,2
12 2,18
13 2,16
14 2,14
15 2,13
16 2,12
17 2,11
18 2,1
19 2,09
20 2,09
21 2,08
22 2,07
23 2,07
24 2,06
25 2,06
26 2,06
27 2,05
28 2,05
29 2,05
30 2,04
gl: grados de libertad
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ANEXO 5
CÁLCULO DEL LÍMITE DE DETECCIÓN DEL MÉTODO CON BLANCOS DOPADOS
Preparar una solución con una concentración aproximada a la sugerida a continuación (en
algunos casos la concentración deseada de la solución no se puede obtener por cálculo, es
necesario establecerla por prueba y error):
- Conductividad: Calcular el LDM con base en los resultados de la medición de agua

Tipo I producida o adquirida por el laboratorio.
- Sólidos Suspendidos Totales: Calcular el LDM con base en los resultados de la
medición de una solución patrón de 5 mg de Caolin usp/L.
- Sólidos Totales: Calcular el LDM con base en los resultados de la medición de una
solución patrón de 5 mg/L de Caolin usp y Cloruro de sodio.
- Sólidos Disueltos: Calcular el LDM con base en los resultados de la medición de una
solución patrón de 5 mg/L de Cloruro de sodio.
- Demanda química de oxígeno: Calcular el LDM con base en los resultados de la
medición de soluciones patrón con una DQO de 5 a 10 mg O2/L preparada por dilución
del estándar de 500 mg O2/L (preparada con Hidrógeno ftalato de potasio).
- Demanda Bioquímica de Oxígeno: Calcular el LDM con base en los resultados de la
medición de una solución patrón con una DBO de 1 mg O2/L preparada por dilución de
la solución estándar de control glucosa-ácido glutámico de (150 mg de Glucosa y 150
mg de Acido Glutámico y disolver en un litro de agua destilada) o con base en la
medición de la DBO5 del agua de dilución, el que cumpla con los criterios de precisión
establecidos para el método.
- Grasas y aceites: Calcular el LDM con base en los resultados de la medición de un
patrón de 1 mg/L preparado así: 1 mg de ácido esteárico, disolverlo en Hexano o Éter
de petróleo y aforar a 1000 mL con agua destilada. Mantener esta solución en
recipiente de vidrio bien tapado a temperatura ambiente y protegido de la luz. Puede
ser necesario calentar la solución para solubilizar el ácido esteárico.
- Acidez: Calcular el LDM con base en los resultados de la medición de una solución
patrón de Hidrógeno ftalato de potasio (Potassium hydrogene phthalate) equivalente a
una acidez de 1 mg Carbonato de Calcio /L.
- Alcalinidad total: Calcular el LDM con base en los resultados de la medición de una
solución patrón de Carbonato de sodio o de Tris(Hidroximetil)-amino metano
equivalente a una Alcalinidad de 1 mg Carbonato de calcio/L.
- Cloruros: Calcular el LDM con base en los resultados de la medición de una solución
patrón de 1 mg Cl-/L preparado con cloruro de sodio.
- Dureza total: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de una
solución patrón de Calcio (obtenida a partir de una solución acidificada de Carbonato
de Calcio o por dilución de una solución estándar de calcio) equivalente a una dureza
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de 1 mg/L de carbonato de calcio.

- Dureza cálcica: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de una
solución patrón de Calcio equivalente a una dureza de 1 mg/L de carbonato de calcio.
- Hierro: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de una solución
patrón de 0.1 mg Fe/L preparado por dilución a partir de una solución madre.
- Sulfatos: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de una solución
patrón de 0.5 mg SO4=/L preparado por dilución a partir de una solución madre.
- Color: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de agua Tipo I
preparada en el laboratorio o adquirida y filtrada a través de membrana de 0.2 micras.
- Turbiedad: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de agua Tipo I
preparada en el laboratorio o adquirida.
- Nitritos: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de una solución
patrón de 0.002 mg NO2-/L preparado por dilución a partir de una solución madre.
- Nitratos: Calcular el LCM con base en los resultados de la medición de una solución
patrón de 0.01 mg NO3-/L preparado por dilución a partir de una solución madre
Tabla 1. Valores de la distribución t de student para un 99 % de confianza
gl 99% gl 99%
1 31,82 20 2,53
2 6,96 21 2,52
3 4,54 22 2,51
4 3,75 23 2,50
5 3,36 24 2,49
6 3,14 25 2,48
7 3,00 26 2,48
8 2,90 27 2,47
9 2,82 28 2,47
10 2,76 29 2,46
11 2,72 30 2,46
12 2,68 40 2,42
13 2,65 50 2,40
14 2,62 60 2,39
15 2,60 70 2,38
16 2,58 80 2,37
17 2,57 90 2,37
18 2,55 100 2,36
19 2,54  2,33
gl: grados de libertad
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ANEXO 6
TABLA DE DATOS PARA EL ESTADÍSTICO G (TEST DE COCHRAN)
Tabled are critical values for the ratio of the largest of independent estimates of a variance, each
based on observations, to the sum of the estimates of the variances. Normality of the observations
is assumed. The null hypothesis is that all variances are the same; the test for equality of variances
is Cochran's test. The column headings are the values of .
Critical values for Cochran's test

Upper 0.05 significance level critical values
df
N 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 17 37 145 
K
2 .9985 .9750 .9392 .9057 .8772 .8534 .8332 .8159 .8010 .7880 .7341 .6602 .5813 .5000
3 .9669 .8709 .7977 .7457 .7071 .6771 .6530 .6333 .6167 .6025 .5466 .4748 .4031 .3333
4 .9065 .7679 .6841 .6287 .5895 .5598 .5365 .5175 .5017 .4884 .4366 .3720 .3093 .2500
5 .8412 .6838 .5981 .5441 .5065 .4783 .4564 .4387 .4241 .4118 .3645 .3066 .2513 .2000
6 .7808 .6161 .5321 .4803 .4447 .4184 .3980 .3817 .3682 .3568 .3135 .2612 .2119 .1667
7 .7271 .5612 .4800 .4307 .3974 .3726 .3535 .3384 .3259 .3154 .2756 .2278 .1833 .1429
8 .6798 .5157 .4377 .3910 .3595 .3362 .3185 .3043 .2926 .2862 .2462 .2022 .1616 .1250
9 .6385 .4775 .4027 .3584 .3286 .3067 .2901 .2768 .2659 .2568 .2226 .1820 .1446 .1111
10 .6020 .4450 .3733 .3311 .3029 .2823 .2666 .2541 .2439 .2353 .2032 .1655 .1308 .1000
12 .5410 .3924 .3264 .2880 .2624 .2439 .2299 .2187 .2098 .2020 .1737 .1403 .1100 .0833
15 .4709 .3346 .2758 .2419 .2195 .2034 .1911 .1815 .1736 .1671 .1429 .1144 .0889 .0667
20 .3894 .2705 .2205 .1921 .1735 .1602 .1501 .1422 .1357 .1303 .1108 .0879 .0675 .0500
24 .3434 .2354 .1907 .1656 .1493 .1374 .1286 .1216 .1160 .1113 .0942 .0743 .0567 .0417
30 .2929 .1980 .1593 .1377 .1237 .1137 .1061 .1002 .0958 .0921 .0771 .0604 .0457 .0333
40 .2370 .1576 .1259 .1082 .0968 .0887 .0827 .0780 .0745 .0713 .0595 .0462 .0347 .0250
60 .1737 .1131 .0895 .0765 .0682 .0623 .0583 .0552 .0520 .0497 .0411 .0316 .0234 .0167
120 .0998 .0632 .0495 .0419 .0371 .0337 .0312 .0292 .0279 .0266 .0218 .0165 .0120 .0083
 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000 .0000
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ANEXO 7
RECHAZO DE DATOS ATÍPICOS
Para cada serie de datos obtenidos, calcular el estadístico T para los valores extremos de
cada grupo (valor máximo y mínimo) de la siguiente manera:
- Calcular el valor promedio xprom y la desviación estándar s.

- Calcular el estadístico T así:
Talto = (xalto – xprom)/s para el valor alto;

Tbajo = (xprom – xbajo)/s para el valor bajo
- Si el valor de T calculado es mayor que el valor de T crit (Ver Tabla 1), el dato se rechaza.
De acuerdo con el tamaño pequeño de las poblaciones que se van a manejar, se pueden
rechazar como máximo dos datos; si la aplicación del criterio de rechazo da positiva para
más de dos datos, el ensayo debe repetirse.
Tabla 1. Valores críticos del estadístico T para rechazo de datos
n 95% 99% n 95% 99%

3 1,15 1,15 19 2,53 ---
4 1,46 1,49 20 2,56 2,88
5 1,67 1.75 21 2,58 ---
6 1,82 1,94 22 2,6 ---
7 1,94 2,10 23 2,62 ---
8 2,03 2,22 24 2,64 ---
9 2,11 2,32 25 2,66 ---
10 2,18 2,41 26 2,67 ---
11 2,24 --- 27 2,69 ---
12 2,29 2,55 28 2,71 ---
13 2,33 --- 29 2,72 ---
14 2,37 2,76 30 2,74 3,10
15 2,41 2,71 40 2,87 3,24
16 2,44 2,75 50 2,96 3,34
17 2,47 --- 60 3,03 3,41
18 2,50 2,82 100 3,21 3,60
n: Número de medidas
Con los datos no rechazados se realiza el cálculo de los atributos.

Po 04 Procedimiento de Validacion de Metodos Analiticos PDF

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CODIGO PO-04

RESPONSABLE DEL PROCESO:

CONTROL DE CAMBIOS EN EL DOCUMENTO

VERSION FECHA DEL

Firma y Fecha:26/08/2010 Firma y Fecha: 19/05/2011 Firma y Fecha: 21/05/2011

 Incertidumbre de medida: Parámetro, asociado al resultado de una medición, que

 Validación: Confirmación mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han

El Director Técnico del área es el responsable de la aplicación y supervisión de las

 Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. EURACHEM- CITAC Guide QUAM:

6. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO

6.1. PLANEACIÓN GENERAL DE LA VALIDACIÓN

Realizar las siguientes actividades para orientar el proceso de la validación propiamente

- Crear un archivo físico (carpetas) para toda la documentación generada en el proceso.

Nota: Si al momento de la validación no se han unificados criterios para los formatos de

6.2. ACTIVIDADES PRELIMINARES A LA VALIDACIÓN

- Determinar el intervalo de concentraciones entre las cuales se puede aplicar el método

6.3. METODOLOGÍA PARA LA VALIDACIÓN

6.3.1. Recomendaciones generales

6.3.2. Diseño experimental

- Un blanco de reactivos (BK) o un patrón con una concentración baja ( C Eb ).

- Dos estándares de concentración conocida uno de concentración baja y otro de

Nota 2: Este diseño experimental no aplica para la validación de la Demanda Bioquímica de

6.3.3. Metas de precisión y exactitud

6.3.3.1. Meta de precisión

El coeficiente de variación CV máximo aceptable para un grupo de mediciones individuales

6.3.3.2. Meta de porcentaje de recuperación de muestras adicionadas

El rango aceptable de porcentaje de recuperación de muestras adicionadas es entre el 80% y

Nota: Para verificar el cumplimiento de las metas de precisión y del porcentaje de

6.3.3.3. Meta de exactitud

6.3.3.4. Metas de precisión y exactitud para el análisis de DBO5

La meta de precisión expresada como desviación estándar máxima es el 15% de la media

6.3.3.5. Metas de precisión y exactitud para el análisis de pH y conductividad

La meta de precisión expresada como coeficiente de variación CV máximo aceptable para un

La meta de exactitud expresada como error relativo máximo aceptable es de 5%.

6.4. CÁLCULO DE LOS ATRIBUTOS DE LOS MÉTODOS

6.4.1. Rango de trabajo o rango lineal

- Ingresar la información solicitada en la tabla de valores, columnas Concentración (Las

ABST = 100 − %T, en donde %T = (1 / 10(A))*100

- Visualmente buscar el conjunto de puntos de la curva de Ringbom en donde se presenta

6.4.2. Curva de calibración y linealidad

La recta de regresión se determina por el método de mínimos cuadrados. La recta de

X: La concentración de los patrones

B) Test de linealidad (Test del Coeficiente de Correlación (r)):

El coeficiente de correlación refleja el grado de relación entre las variables X (concentración)

Valores muy elevados de r no deben tomarse erróneamente como indicadores de linealidad,

El cuadrado del coeficiente de correlación se denomina coeficiente de determinación e indica

Parámetro Estadístico Valor Obtenido

C) Test de varianza de la pendiente (b)

Después de ingresar los valores de Concentración y absorbancia correspondiente a la curva

Determinar la existencia de regresión lineal sistema aplicando el siguiente test estadístico:

t exp = ‫׀‬b‫ ׀‬/ Sb

Tabla de Hipótesis para la Pendiente

D) Test de la varianza de la ordenada o termino independiente (a)

El valor de a, intercepción con el eje de ordenadas u ordenadas en el origen, índica el error

Después de ingresar los valores de Concentración y absorbancia correspondiente a la curva

Los límites de confianza de la ordenada al origen se calculan así:

Siendo t el valor de distribución de Student para n – 2 grados de libertad a una probabilidad

Evaluar el resultado obtenido con base en el siguiente crterio: El valor de t tabulado en

Tabla de Hipótesis para a:

E) Limites de confianza para la recta

Después de ingresar los valores de Concentración y absorbancia correspondiente a la curva

Donde, Yi Λ: Respuesta corregida

Tabla Límites de confianza para la recta

vSM + V CMbaja = (v + V) * [ CMbaja + (0,2 a 0,3) * CMbaja ]

vSM + V CMalta = (v + V) * [ CMalta + (0,3 a 0,4) * CMalta ]