LABORATORIO BIOQUÍMICA (BIOCIENCIAS ll)

EXTRACCIÓN DE ADN

DANIEL ANDRES MORENO ANZOLA

20181081

JUAN ORLANDO SALAS NARVAEZ

20181085

DOCENTE

ADRIANA GIL

SEPTIEMBRE 8, 2020
 1. INTRODUCCIÓN
2. LA PREMISA DE ADN
3. FUNCIÓN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS
4. LOS REACTIVOS
5. DOS ENFERMEDADES
6. CONCLUSIONES
7. BIBLIOGRAFÍA

1. INTRODUCCIÓN

La extracción del ADN son métodos que han ido evolucionando y está
revolucionando la medicina con la información que nos brinda la molécula del ADN.
El ADN es un ácido nucleico que contiene las instrucciones genéticas usadas en el
desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos​ y algunos virus, también
es responsable de la transmisión hereditaria, con el cual se puede diagnosticar con
más precisión mutaciones, bacterias o virus causantes de enfermedades, pero esta
información proviene de del ADN nuclear y ADN extranuclear (mitocondrias) que
aunque son diferentes de entrada, por su ubicación y estructura. Las características
que los diferencian son: que el ADN nuclear se encuentra en el núcleo de las células
eucariotas y poseen dos copias por célula, es lineal con extremos abiertos y
compuesto de 46 cromosomas y contiene un aprox. 3 millones de nucleótidos, es
diploide (genes heredados del padre y de la madre), a diferencia del ADN
mitocondrial está ubicado en las mitocondrias y contiene aprox. de 100- 1000 copias
, es una molécula cerrada y circular conformado por 19.596 nucleótidos, es haploide
(solo se hereda de la madre), con ayuda del mitocondrial se puede saber si la
mutación del feto proviene de la madre o del padre. y a la hora de realizar un buen

2. REMISIÓN DE MUESTRAS PARA LA EXTRACCIÓN DEL ADN

a. Identificación de Muestras.

El laboratorio debe desarrollar y proveer guías e instrucciones precisas para

la toma de muestras, ya sea para uso interno o para quienes las remitan
desde otras instituciones. Estas instrucciones deben indicar las cantidades
mínimas necesarias de cada tipo de muestra para llevar a cabo los análisis,
así como las condiciones de conservación, transporte y estabilidad de las
muestras desde el momento de su obtención hasta el arribo al laboratorio.
Asimismo recomendará o asesorará sobre la elección de la muestra en que
se podrá realizar la investigación toxicológica, y cuando corresponda, el
momento oportuno de la toma de la muestra. Las personas que participan en
 la toma de muestras deben ajustarse a la normativa existente sobre
tratamiento y manejo de material peligroso.

MATERIALES REQUERIDOS PARA LA TOMA DE MUESTRAS

Un par de guantes de látex o nitrilo desechables para cada toma

*. Tapabocas, gorros y bata (desechable o de tela).

* Lancetas estériles (si se toma muestra de sangre)

*. Alcohol antiséptico y motas de algodón, gasa o toalla de papel (si se toma

muestra de sangre)

*. Hisopos (escobillones) estériles (si se toma muestra de mucosa bucal)

*. Tarjetas FTA para muestras sanguíneas o bucales, sobres para embalaje

individual de tarjetas

*. Formatos de consentimiento informado y anexos.

Registros de cadena de custodia (FPJ8) y Rótulos de EMP y EF (FPJ7).

Sobres de manila para embalaje de documentos

B. CADENA DE CUSTODIA

El Sistema de Cadena de Custodia es el conjunto de procedimientos que permiten

asegurar las características originales de los elementos materia de prueba o
evidencias físicas desde su recolección hasta su disposición final parte desde la
verificación o confirmación de una noticia punible hasta su presentación en la
diligencia.

documentación

Debe documentarse mediante el diligenciamiento de un formato, donde:

-Esté identificado el Elemento detallando sus particularidades,

-Se identifiquen los custodios, sitio exacto, fecha y hora de los traspasos y
traslados,

-Se debe diligenciar sólo un ejemplar, sin copias.

-No deben existir tachaduras, enmendaduras, tachados, borrados, etc.,

 -Quien recibe un elemento debe diligenciar inmediatamente el registro de
continuidad de cadena de custodia en presencia de quien entrega

FORMATO DE CADENA DE CUSTODIA (FOTO)

 C. Almacenamiento y conservación

Las muestras deben almacenarse de un modo seguro, a una temperatura

apropiada, protegidas de la luz, de manera tal que se asegure la salvaguarda de su
integridad y que asegure la estabilidad de los analitos a investigar.

¿A PARTIR DE QUÉ MUESTRAS SE PUEDE EXTRAER EL ADN?

· Sangre : Sangre tomada con un Anticoagulante EDTA (solo servirá los glóbulos
blancos)

· Manchas: secado

· Residuo metanólico: chelex

· ​Tierra soporte absorbente y tiene en su composición ácido humico y fulvico

(nos ayudan a la extracción del ADN)

· Semen

· Saliva

· Cabello

· Hueso

· Diente

· Tejido

¿QUÉ MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN EXISTEN Y EN QUÉ CASOS SE

UTILIZA Y SUS VENTAJAS Y DESVENTAJAS?

ORGÁNICAS

● Fenol Cloroformo (Solventes)

● Técnica Orgánica (Solventes)

VENTAJAS

- ADN de muy buena calidad y cantidad.

 - Péptidos y proteínas son extraídas en la fase orgánica (Fenol), después se
realiza digestión con proteinasa K.
- El cloroformo permite que todo el fenol pueda ser lavado.

DESVENTAJAS:

- Reactivos altamente tóxicos

- Pérdidas significativas de ADN y mucho más si está degradado

INORGÁNICA

Técnica inorgánica

A. CHELEX

El método de Chelex-100 ha sido empleado para la extracción de ADN en TEP con

el objetivo de ser utilizado posteriormente en la técnica de la Reacción en Cadena
de la Polimerasa (RCP).

VENTAJAS

- Previene la degradación del ADN por quelación de los iones metálicos

durante la ebullición al 5%.
- Tiene copolímeros de estireno di-benceno- iones iminodiacetato.
- los reactivos no son tóxicos y no se pierde ADN.

DESVENTAJAS:

- El ADN aislado es de cadena sencilla, utilizado en PCR pero no en RFLPS.

B. SALTING-OUT

El método de Chelex-100 ha sido empleado para la extracción de ADN en TEP con

el objetivo de ser utilizado posteriormente en la técnica de la Reacción en Cadena
de la Polimerasa (RCP).

VENTAJAS:

- Técnica de tipo inorgánica

- Utiliza reactivos bajos en toxicidad
- Permite visualizar la malla del ADN.

DESVENTAJAS​:
 - Requiere una mayor cantidad de muestra.

CON BASE EN LA GUÍA Y EL VIDEO DESCRIBA CADA UNO DE LOS

REACTIVOS UTILIZADOS EN LA EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DEL ADN Y
SUS FUNCIONES

BUFFER DE LISIS I:​ este proceso nos va ayudar a la lisis de los glóbulos rojos

​ acarosa 0.3 M:​también puede usarse como detergente. Se le considera un

S
agente 100% activo y biodegradable en forma líquida.

Tris HCl 10 mM pH7.5: Es una solución BUFFER, que mantiene el PH de la

solución estable, aproximadamente entre 7.5 y 8.2

Cloruro de Magnesio 5 mM: Funciona como un cofactor de las enzimas que

degradan el ADN. Ósea las nucleasas, por lo tanto al agregarle EDTA, estos son
inhibidores protegiendo así el ADN.

Tritón 100x: se usa frecuentemente como un auxiliar de disolución para proteínas

integrales en medios acuosos; no obstante debe usarse a la concentración mínima
posible con el objeto de no contaminar la muestra, lo que alteraría la determinación
de trazas en espectroscopia de masas de la disolución resultante.

BUFFER DE LISIS II PH 8.0

EDTA de sodio pH 8 :​que posee 4 grupos carboxilos y 2 grupos amino y cuya

forma totalmente desprotonada puede unirse a iones de magnesio.

NaCl: Forman una capa iónica suave que recubre el ADN y así lo protegen y
ayudan a evitar su degradación. Además de deshidratar y precipitar proteínas
celulares.

SDS 10% (sodio dodecil sulfato): Esto degrada la membrana celular, capturando
lípidos y proteínas, evitando que grandes cantidades significantes de ADN queden
atrapadas en los restos celulares.

Perclorato de Sodio:​ Ayuda a precipitar restos de membrana y proteínas

NaCl 6 Molar:​ Ayuda a la solubilización del ADN

Etanol 70%:​el botón precipitado de ADN, se lava con etanol al 70%. El objetivo de
este lavado es remover todas las sales que aún estén presentes
Isopropanol:​ ayuda a la precipitación de DNA

Agua destilada : ​ayuda al procesos Lisis de Trofozoitos

¿QUÉ APLICACIONES TIENE EL ADN EN MEDICINA FORENSE?

Identificación de personas en un ámbito legal

- Identificar al resto emergente de un desastre o conflicto armado ej. Tsunami,

torres gemelas o palacio de justicia
- Identificar a alguien que esté involucrado en un hecho punible Ej. robo,
asesinato, violación u otros delitos, o para demostrar la inocencia de un
acusado.
- Identificará a un presunto padre que esté involucrado en una afiliación. Ej.
Demanda debido a que no hizo el reconocimiento

¿QUÉ APLICACIONES TIENE EL ADN EN EL DIAGNÓSTICO DE

ENFERMEDADES?

El diagnóstico molecular es una área dinámica en constante desarrollo que ha

revolucionado el diagnóstico clínico. La detección y cuantificación específica de
material genético en una muestra biológica ha mostrado un significativo impacto en
todas las áreas de la salud, sobre todo en las áreas de las enfermedades
infecciosas y el cáncer
DOS ENFERMEDADES EN LAS CUALES SE REQUIERE LA EXTRACCIÓN DEL
ADN COMO PARTE DEL DIAGNÓSTICO MOLECULAR, PUEDE TENER EN
CUENTA UNA DE SU PROYECTO DE AULA

★ SARS-CoV-2 (COVID-19)

prueba molecular o también conocida como prueba RCP, esta prueba de

diagnóstico detecta el material genético del virus que causa la COVID-19 usando
una técnica de laboratorio llamada reacción en cadena de la polimerasa (RCP).Un
trabajador de la salud recolecta fluido nasal o de la garganta con un hisopo, o, con
menos frecuencia, una muestra de saliva.

Los resultados pueden estar listos en minutos si se analiza en el mismo lugar, o

unos pocos días si se envía a un laboratorio externo. Las pruebas moleculares se
consideran muy exactas cuando se realizan de manera adecuada por un profesional
de atención médica, pero la prueba rápida parece no detectar algunas infecciones.

★ CÁNCER DE COLON

La ONCOTYPE DX® es la prueba que fue desarrollada por Genomic Health y está
diseñada para ver la actividad de 12 genes. Siete de los genes son conocidos ser
envueltos en el crecimiento y/o distribución del cáncer de colon. Los cinco otros
permiten al laboratorio ver si la prueba está funcionando. La prueba se hace en
tejido canceroso de colón eliminado durante cirugía .El propósito de la prueba es
hacer predicciones sobre la probabilidad del regreso del cáncer después de que
esté quitado quirúrgicamente. Si el cáncer es probable que regrese, el paciente
puede escoger tomar quimioterapia.

¿Cuáles pacientes pueden escoger recibir la prueba Oncotype DX®?

La prueba es para pacientes que tienen etapa II cáncer de colon confirmado

CONCLUSIONES

● La extracción de ADN , consiste en el aislamiento y purificación de moléculas

de ADN y se basa en las características fisicoquímicas de la molécula.
● El método de extracción de ADN es un método muy utilizado en los diferentes
campos de la medicina, pero se concluye que a la hora de extraer el ADN
tiene una limitación , ya que se debe tener muy en cuenta el tipo de tejido, ya
que no de todos los tipos de tejido se puede extraer, como también el tipo de
anticoagulante que se utilice.
● La extracción de ADN , sin duda alguna es una prueba fundamental para la
prevención, diagnóstico y tratamiento de enfermedades como el cáncer,las
enfermedades infecciones, entre otras ; pero también es bastante importante
en la medicina forense para identificar personas implicadas en un delito o
personas que se encuentren pérdidas por un suceso funesto al igual que para
comprobar paternidad o maternidad y el hecho de una violación.

BIBLIOGRAFÍA
1. https://www.fiscalia.gov.co/colombia//wp-content/uploads/policiajudicial/DOC-
CNPJ/Cartilla%20Toma%20de%20Muestras%20-CNPJ.pdf
2. https://www.paho.org/panaftosa/index.php?option=com_docman&view=downl
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3. http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf
4. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0716864015001546
5. http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0036-363420090
00900008
6. https://lasillarota.com/las-diferencias-entre-el-adn-nuclear-y-mitocondrial/7052
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7. https://www.medicinalegal.gov.co/servicios-a-la-ciudadania/servicios/pruebas-
geneticas
8. https://www.ucm.es/data/cont/docs/185-2013-07-15-documento37709.pdf
9. http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn/#:~:text=Descripci%C3%B3n-,
Se%20le%20llama%20extracci%C3%B3n%20al%20m%C3%A9todo%20por
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