Universidad Tecnológica de Panamá

Facultad de Ingeniería Civil

Lic. en Ingeniería Ambiental

Experiencia de laboratorio #4
MICROORGANISMOS EXISTENTES EN EL MEDIO AMBIENTE

Microbiología Ambiental
I. OBJETIVO
Observar la contaminación por microorganismos en el área de trabajo del laboratorio.

II. RESUMEN
El laboratorio, al igual que otros ambientes, está poblado de muchos microorganismos que
se encuentran suspendidos en el aire o esparcidos junto con el polvo en las diferentes
superficies que componen el área de trabajo. La presencia de estos microorganismos es de
gran importancia para las personas que laboran en el laboratorio. Las técnicas de trabajo
que se deben emplear, deben ser tales que eviten la contaminación de los materiales con
que se trabaja, tales como medios de cultivos, soluciones estériles y equipo de trabajo
estéril. Por ejemplo, las mesas de trabajo se deben limpiar antes y después de la sesión de
laboratorio con Lysol al 5% u otro agente desinfectante.
Para poder trabajar con microorganismos lo primero que tenemos que hacer es crecerlos,
cultivarlos en medios de cultivo, para poder así obtener una gran cantidad de microbios y
poder aislarlos y tenerlos en cultivo puro, para su posterior estudio. Los medios de cultivo
donde van a crecer los microorganismos son como un caldo o sopa nutritiva que contiene
todos los nutrientes que necesitará para su crecimiento: una fuente de carbono, que pueden
ser azúcares, algún extracto de proteínas, que proporcione los aminoácidos necesarios, y un
aporte de vitaminas y sales minerales. Todo eso disuelto en una solución amortiguadora que
controle el pH del medio. Dependiendo del tipo de microorganismo que queramos cultivar,
emplearemos un tipo de medio de cultivo u otro. Es decir, cada microorganismo tendrá
unos requerimientos nutritivos específicos y necesitará un medio de cultivo concreto.
Además, los medios de cultivo pueden ser líquidos o sólidos si les añadimos agar
bacteriológico. Los medios sólidos suelen prepararse en placas de Petri.

III. MATERIALES:
Aproximadamente 300 mL de agar nutritivo Placas petri estériles Aplicadores (de algodón )
estériles Baño de agua caliente

IV. PROCEDIMIENTO:
1) Derrita el agar nutritivo y enfríe aproximadamente a 45°C
2) Ponga de 15 a 20 mL del agar en cada uno de los platos petri a utilizar.
3) En la superficie del medio solidificado, inocule las placas petri de la siguiente manera:
(realice cada paso por duplicado).
o Remueva la tapa del primer plato y déjelo expuesto al ambiente por 30 minutos.
 o Usando el aplicador de algodón, frote un área de su mesa de trabajo y luego frote la
superficie del agar del segundo plato con el mismo aplicador.
o Tenga cuidado de no romper la superficie del agar del segundo plato con el mismo
aplicador.
o Remueva la tapa del tercer plato y colocando su cabeza directamente sobre la placa
o plato, frótese el cráneo vigorosamente con sus dedos.
o Toque con sus dedos, en varios lugares, la superficie del agar del cuarto plato.
o Quite la tapa del quinto plato y tosa o estornude directamente sobre la superficie del
agar.
o Incube un juego de cinco placas a 37°C, por 24 horas y el segundo juego a 25°C
hasta el próximo período de laboratorio.
Una vez sembrados o inoculados los medios de cultivo, los incubaremos o mantendremos a
una temperatura adecuada. Cada microorganismo tiene su temperatura óptima de
crecimiento, unos pueden crecer mejor a 10ºC, otros a temperatura ambiente, otros en
estufas a 37ºC, incluso los hay que crecen a muy altas temperaturas, depende del tipo de
microorganismo. Las bacterias con las que trabajamos habitualmente en el laboratorio de
prácticas se incuban a temperatura ambiente o en una estufa a 37ºC durante uno o dos días.
Después de 24-48 horas, podemos ver el efecto del crecimiento de los microorganismos
sobre los medios de cultivo. Podemos comparar un medio líquido estéril antes de
inocularlo, medir el crecimiento de las bacterias midiendo el grado de turbidez: a mayor
crecimiento bacteriano, mayor turbidez del líquido (al menos durante un rango).

EJEMPLOS DE RECOLECCIÓN DE MUESTRA Y RESULTADOS DE

CRECIMIENTO E DESINFECCIÓN CON LYSOL

V.

Resumen de los vídeos

1. Los microbios que te rodean. Un mundo invisible - Microbios en el laboratorio.
Existen dos técnicas básicas en Microbiología: 
1. Cultivo Bacteriano
2. Microscopía
Para trabajar con microorganismos primero deben ser cultivados para posteriormente
estudiarlos y analizarlos.
Cada microorganismo necesita un tipo de medio de cultivo diferente dependiendo de qué
tipo de bacteria es.
Los medios de cultivo pueden ser: líquidos (caldo nutritivo) o sólidos (agar) en caja petri.
Cultivo de medios de cultivo:
1. Se utiliza un aza de siembra la cual se esteriliza en la llama.
2. Luego se toma una pequeña muestra de las bacterias que habrán crecido en el medio
de cultivo.
3. En condiciones de esterilidad, se procede a sembrar las bacterias en el medio ya sea
líquido (Erlenmeyer) o sólido (caja Petri).
4. Si es un medio de cultivo sólido, este permitirá realizar agotamiento por estrías el
cual consiste en una serie de estrías donde se consigue que las bacterias crezcan de
forma aislada.
5. Una vez sembrado el medio de cultivo, se procede a incubar a una temperatura
adecuada dependiendo el tipo de microorganismo. Por ejemplo: unos crecen a una
temperatura de 10°, a temperatura ambiente y otras a temperaturas extremas.

En esta práctica, estos medios de cultivos se incubarán a temperatura ambiente entre 24 a

48 horas. 

Resultados:
Después del tiempo se ve el efecto del crecimiento bacteriano en cada una de las muestras.
Las bacterias y hongos crecen. 

Muestra del suelo Bacterias y hongos que se encuentran en el aire

Muestra de los dedos de las manos Técnica de agotamiento por estrías

Medios de cultivos líquidos

Se observa cómo se crecen los microorganismos en medios de cultivo liquido (caldo

nutritivo).
El medio de cultivo antes de haberlo inoculado (el de la derecha) era transparente, más;
luego del tiempo estimado cambia (el que se ve al lado izquierdo) a un color más turbio,
más oscuro debido al crecimiento microbiano.

Vista de microorganismos en el microscopio

Para realizar esta práctica de deben seguir una serie de pasos:

1. Se realiza un frotis bacteriano. Consiste en tomar la muestra de bacteria y
extenderlas sobre un portaobjetos
2. Se fijan las bacterias al calor en portaobjetos.
3. Luego se proceden a teñir con un colorante (cristal violeta) durante unos minutos.
4. Una vez teñidas se procede al lavado del portaobjetos.
5. Se vuelve a la fijación o secado del frotis bacteriano.
6. Cuando está el frotis preparado se procede a observar en el microscopio.

Como las bacterias son muy pequeñas, se necesita enfocar con el objetivo de máximo
aumento (x100).
Después de enfocar la muestra se agrega el aceite de inmersión. De esta manera se obtiene
un aumento aproximadamente entre 1000 a 2000 veces mayor.
Se observa la forma de las bacterianas ya sea como bacilos o cocos.

Ejemplos de observación de microorganismos

Tinción de yogurt Frotis bucal

Se observa una fila de Se observa la célula epitelial
estreptococos con su núcleo rodeada de
(fragmentos lácteos del yogurt). pequeñas bacterias que son
parte de la microbiota de la boca.

Fuente: https://www.youtube.com/watch?time_continue=83&v=KGPOmLKMsYk

2. Como crece una bacteria

Para llevar a cabo esta práctica se necesita agua, agar, hisopo y placa Petri.

Procedimiento:

1. Se vierte 10 g de agar en 330 ml de agua.

2. Mezclar hasta obtener una solución totalmente disuelta.
3. Se coloca la solución en un microondas por un tiempo de 4 minutos.
4. Una vez pasado los 4 minutos, se debe dejar enfriar durante 3 minutos.
5. Luego, se procede a verter la solución sobre las cajas Petri y taparlas durante una
hora.
6. Después de haber pasado una hora, la solución debe estar solidificada.
7. Se utiliza un hisopo para obtener las bacterias, frotándolos en alguna superficie que
esté expuesta a bacterias, por ejemplo en la manija de una puerta.
8. Luego se frota el hisopo en el agar de forma ondulada y suavemente, cerrarlo.
9. Se obtiene con otros hisopos más bacterias en diferentes superficies y se colocan las
bacterias sobre las demás cajas Petri
10. Las cajas Petri deben ser guardan en una caja cerrada durante un mes.

Resultados:
Se obtienen las bacterias que se encuentran
en cada superficie.
Fuente: https://www.youtube.com/watch?v=JIZ7lj3y4MQ

VI. RESULTADOS:
1. Examine los platos y cuente el número de colonias en cada uno.
Medio de cultivo Forma de colonia Ilustración
 Tinción de yogurt Las colonias se presentan
de color rosa en forma de
estreptococos.

Fuente: [ CITATION Ála16 \l

6154 ]
Frotis bucal Las colonias de bacterias
tienen forma de
estafilococos.

Fuente: [ CITATION Tan18 \l

6154 ]

2. ¿Por qué los platos o placas petri deben permanecer invertidos durante la
incubación?
R. Si la placa no es invertida durante la incubación, la bacteria no podrá colonizar el
medio de cultivo apropiadamente, lo que evitará que crezca y forme colonias
adecuadamente, o estimulará el crecimiento de otros microorganismos. Cualquiera de
estas dos consecuencias invalidarán el experimento. Además, la condensación o
humedad puede causar vetas, lo que hará que elegir y analizar colonias separadas sea
mucho más difícil. Una vez que la bacteria ha formado colonias, la placa también debe
ser almacenada hacia abajo para mantener los niveles de humedad [ CITATION Tan18 \l
6154 ].

3. ¿Qué precauciones se deben tomar para mantener un nivel de contaminación en el

laboratorio?
R. Para mantener un nivel de contaminación en el laboratorio, se deben tomar las siguientes
precauciones [ CITATION Gar08 \l 6154 ]:
 Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la
sesión práctica.
 Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades programadas,
antes de salir del laboratorio y siempre después de manejar materiales que se sabe o
se sospecha que son contaminantes.
 Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podrían ser fuente de contaminación
(por ejemplo joyas).
 En el caso de las mujeres, mantener el cabello recogido.
  Evitar hablar, sólo lo indispensable.
 No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,
aplicarse cosméticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningún área del
laboratorio.
 Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para tal
fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de
desecho, etc.
 Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo
experimentos no autorizados.
 Emplear técnicas asépticas para el manejo de cultivos de microorganismos.
4. ¿A qué temperatura se derrite el agar?
R. El agar se derrite a una temperatura de 80 – 100 °C. Tolera altas temperaturas de
esterilización sin descomponerse [ CITATION Dur13 \l 6154 ].

Referencias
1. Álamo, Ana. Jugando con pipietas. Tinción simple. Yogurt . [En línea] 3 de diciembre de
2016. [Citado el: 15 de mayo de 2020.]
https://jugandoconpipetas.wordpress.com/2016/12/03/tincion-simple-yogurt/.
2. Feria de las ciencias . Microflora bacteriana de la cavidad bucal: gram negativos. [En
línea] [Citado el: 15 de mayo de 2020.]
https://feriadelasciencias.unam.mx/anteriores/feria20/feria370_01_microflora_bacteri
ana_de_la_cavidad_bucal_gram_neg.pdf.
3. Tang, Vanessa. Geniolandia . El uso de un refrigerador en microbiología. [En línea]
1 de febrero de 2018. [Citado el: 15 de mayo de 2020.]
https://www.geniolandia.com/13160781/el-uso-de-un-refrigerador-en-microbiologia.
4. Garcés, Alessandra. Normas de seguridad en el laboratorio de micriobología. [En
línea] abril de 2008. [Citado el: 15 de mayo de 2020.]
http://www.chlaep.org.uy/pdf/normas_de_bioseguridad.pdf.
5. Durán, Jorge. Informe de practicas de Microbiología. Huánuco-Perú : s.n., 2013.