PRÁCTICA # 6

Cromatografía

OBJETIVOS

1. Ampliar los conocimientos en técnicas de separación de compuestos orgánicos.

2. Aprender las técnicas cromatográficas básicas en un laboratorio de química orgánica.
3. Comprender la relación estructura-polaridad en compuestos orgánicos.
4. Conocer, comprender y adquirir destreza en las técnicas a emplear.
MATERIALES Y REACTIVOS

 Jeringa  Pinza para soporte universal

 Algodón  Pinzas pequeñas
 Agitador de vidrio  Capilares
 4 placas de TLC 2 x 5 cm  5 goteros de plástico
 Cámara cromatográfica  Etanol
 Gradilla completa con tubos de ensayo  Acetato de etilo – Hexano 1-9
 2 Vasos de precipitados  Acetato de etilo – Hexano 1-1
 Probeta de 25 mL  Diclorometano
 Soporte universal
INTRODUCCIÓN

El estudiante deberá consultar y registrar en el cuaderno de laboratorio información relacionada con los procesos a
realizar en durante la práctica. Dentro de la información a consultar se debe incluir:
 Cromatografía en placa delgada
 Cromatografía en capa preparativa
 Cromatografía en columna.
 Reveladores cromatográficos.

PROCEDIMIENTO

Cromatografía en Placa

1. Mida la cantidad de sílica a utilizar asegurando llenar 2/3 de la jeringa que usará como columna.
2. Prepare una suspensión sílica - etanol al 96% (aprox. 20 ml).
3. En el cartucho de una jeringa previamente tapado con algodón, adicione etanol hasta un tercio de la longitud total.
4. Añada suavemente la suspensión a la columna evitando que se acumule la sílica por encima del solvente.
5. Golpee suavemente, con un tubo de goma o con el dedo, las paredes externas de la columna para favorecer la
eliminación de las burbujas de aire que se puedan haber formado.
6. Deje fluir lentamente el etanol hasta que la altura de éste quede 2 mm por encima de la sílica.

7. Deposite 0,5 ml de la muestra a separar sobre la superficie de la sílica con la ayuda de una pipeta.
8. Deje gotear lentamente hasta que la muestra se absorba completamente.
9. Ponga una capa de arena de mar de 0.5 cm sobre la sílica.
1. Añada 1mL de etanol y deje eluir hasta que el solvente quede aproximadamente 1 mm por encima de la superficie
del adsorbente. Si la pared interna de la columna se ha manchado con la muestra al depositarla, se lava dejando
gotear por ella un poco del eluyente (con la ayuda de la pipeta) y se eluye de nuevo hasta que el nivel del líquido

1
 vuelva a quedar 1 mm por encima de la superficie del adsorbente.
10. Finalmente añada suficiente etanol a la columna y eluya hasta observar que sale el primer componente.
11. Una vez todo el primer componente ha sido eluido, continúe la elución utilizando agua como solvente hasta que
el segundo componente salga.

NOTA: a lo largo del proceso cromatográfico la columna nunca debe “secarse”, es decir; la fase estacionaria debe
encontrarse en todo momento cubierta por la fase móvil, ya que de lo contrario se generarían grietas sobre la fase
estacionaria.

Cromatografía en placa delgada

1. Sobre una placa cromatográfica de 5x2 cm trace dos líneas con lápiz, una a 0,7 cm de altura y la segunda a 4,8
cm.
2. En la línea inferior marque dos puntos con un lápiz.
3. Con ayuda de un capilar siembre en el punto de la izquierda la muestra a separar por columna.
4. Con otro capilar siembre en el punto de la derecha el extracto de un producto vegetal.
5. Prepare una cámara cromatográfica usando etanol como solvente, asegurándose que la altura del mismo sea
inferior a los puntos de siembra.
6. Introduzca la placa en la cámara y retírela cuando el solvente haya alcanzado la línea superior.
7. Deje secar la placa y posteriormente obsérvela en la cámara de luz U.V a las diferentes longitudes de onda,
marcando con un lápiz las diferentes manchas que puede identificar.
8. En otras placas realice los pasos del 1-7 usando como solvente: mezcla acetato de etilo-hexano (1-9), mezcla
acetato de etilo-hexano (1-1) y diclorometano.
9. Mida y registre la altura de cada una de las manchas.
RESULTADOS

Reportar sus análisis y resultados según el formato para informes de la facultad de ciencias, haciendo una discusión
donde debe involucrar entre otras cosas, datos bibliográficos y/o reportados, como también comparaciones entre las
estructuras de las muestras a separar, los solventes, y otras metodologías de purificación.
BIBLIOGRAFÍA

1. Vogel A. I., Practical Organic Chemistry, 5 ed., Longman Scientific & Technical, London, 1989.
2. Pavia D. L., Lampam G. M., Kriz G. S. Engel R., A Small Scale Approach to Organic Laboratory Techniques, 3 ed.,
Brooks and Cole, USA, 2011.
3. Pedersen S. F., Myers A. M., Understanding the Principles of Organic Chemistry: A Laboratory Course, Brooks and
Cole, USA, 2011.
4. Rappaport Zvi., CRC Handbook of tables for Organic Compounds Identification 3rd Ed, CRC press inc. USA, 1985.
5. Domínguez X., Experimentos de Química orgánica, Limusa, México, 1987.