ANEXO 1

Curso: Cromatografía
Código: 401542
Nombre de la Tarea: Tarea 1 – Principios cromatográficos

Temáticas a desarrollar:
- Velocidad de migración de solutos: elución cromatográfica, tiempos de
retención, coeficiente de distribución, factor de retención, factor de
selectividad, resolución de la columna, eficiencia de la columna,
factores de retención, selectividad y aplicaciones.
- Cromatograma: ensanchamiento de banda, resolución de picos
cromatográficos y selectividad.
- Cromatografía plana: generalidades, fase estacionaria y fase móvil,
métodos de detección (revelado), metodologías usadas para la
cromatografía en papel, preparación de placas de cromatografía en
capa fina y aplicaciones.
- Cromatografía en columna: generalidades, fase estacionaria y fase
móvil.

Fecha de desarrollo: 15 de febrero al 6 de marzo de 2020

Nombre del estudiante: _Yobanela Muñoz___________

Código: __3463997___
Programa: Ingeniería de Alimentos

EJERCICIO 1 – CROMATOGRAMA Y VELOCIDAD DE MIGRACIÓN DE

SOLUTOS

Tabla 1. Ejercicio 1.1 – Definición de conceptos de velocidad de migración

de solutos
Concepto Definición
Analito: Un  analito es el componente (elemento,
compuesto o ion) de interés analítico de una
muestra. Son especies químicas cuya presencia
o concentración se desea conocer. El analito es

Elución cromatográfica:
Tiempo de retención:
Coeficiente de distribución:
Factor de retención:
una especie química que puede ser identificado
y cuantificado, es decir, determinar su cantidad
y concentración en un proceso de medición
química, constituye un tipo particular de
mensurando en la metrología química.
Se emplea un eluyente que actua
especificamente. Tal como un agente
complejanteque forma complejos estables y no
adsorbible con un componebte o un grupo de
los componentes a separar. Pero que no afecta
a los otros de una manera importante. (elución
selectiva)
Tiempo transcurrido al momento de eluir el
máximo de concentración del soluto.
Relación de concentraciones, o fracciones
molares, de un soluto disuelto en dos líquidos
inmiscibles en estado de equilibrio, cuando el
soluto no se disocia ni se asocia a ellos de la
forma:
ai ( I )
K=
a i (II )
Donde,a i( I ) es la actividad del soluto en el
líquido y a i( II )es su actividad del líquido II. Esta
relación es una constante característica para un
soluto y un disolvente dados y depende de la
temperatura.
El factor de retención es una medida del tiempo
que un compuesto permanece en la fase
estacionaria, en relación con el tiempo que
permanece en la fase móvil. Matemáticamente,
es la relación entre el volumen (tiempo) de
retención ajustado y el volumen (tiempo)
 básico.
k = V / VM = t / tM

El aumento de α (manteniendo kB entre 1 y 5)
también puede lograrse modificando la
temperatura de la columna o la composición de
Factor de selectividad:
la fase móvil, o bien, cambiando la naturaleza
de la fase estacionaria o mediante algún efecto
químico específico.
Capacidad para separar dos o más sustratos o
para distinguir entre ellos. Depende de dos
Resolución de la columna:
factores: primero, separación entre los picos.
Segundo, la definición de las bandas.
Mientras mayor es la capacidad de la columna
de producir picos más estrechos mayor es su
eficiente. La anchura de una banda aumenta a
medida que se mueve a través de la columna,
debido a que cuanto más tiempo transcurre
Eficiencia de la columna:
mayor es la dispersión que puede tener lugar.
Por ello la anchura de la zona está relacionada
directamente con el tiempo de residencia en la
columna, e inversamente con la velocidad a la
que fluye la fase móvil.
Factor de retención: El factor de retención es una medida del tiempo
que un compuesto permanece en la fase
estacionaria, en relación con el tiempo que
permanece en la fase móvil. Matemáticamente,
es la relación entre el volumen (tiempo) de
retención ajustado y el volumen (tiempo)
básico.
k = V / VM = t / tM

Selectividad:
Ensanchamiento de banda:
Resolución de picos:
Referencias bibliográficas:
 https://www.quimica.es/enciclopedia/Analito.html
 Costa J.M (2005) Diccionario de física y química. P 77,190, Recuperado
La selectividad muestra las diferencias de
afinidad por los solutos de las fases
involucradas, indica el potencial de separación
de los solutos en el sistema, pero no mide la
separación real.
El ensanchamiento de las bandas es una
consecuencia de la velocidad finita a que tienen
lugar los distintos procesos de transferencia de
materia que ocurren durante la migración de un
soluto a medida que desciende por la columna.
Algunas de estas velocidades se pueden
controlar por ajustes de variables
experimentales, permitiendo así mejoras en las
separaciones. Las variables más importantes
son:
 Velocidad de la fase móvil
 Coeficiente de difusión del analito en la fase
móvil
 Coeficiente de difusión del analito en la fase
estacionaria Diámetro de las partículas en el
empaquetado
 Espesor de la capa líquida de la fase
estacionaria
La separacion de dos compuestos depende de la
distancia entre el centro de los picos o manchas
correspondientes a cada uno de ellos y de la
anchura de los mismos.Una resolución
adecuada supone una separación correcta.
 de: https://books.google.com.co/books?
id=9_7xnVy4GzsC&pg=PA190&dq=Eluci%C3%B3n+cromatogr
%C3%A1fica&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjX1MWc5MLnAhWwtlkKHSEYDv
cQ6AEIQzAD#v=onepage&q=Eluci%C3%B3n%20cromatogr
%C3%A1fica&f=false
 Harold F. Walton, Jorge Reyes (2005). Análisis químico e instrumental
moderno. P 285, recuperado de :
https://books.google.com.co/books?
id=htRP2dHJkXgC&pg=PA285&dq=Resoluci
%C3%B3n+de+la+columna&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiY66SmkebnA
hVCmuAKHYD0A5oQ6AEIMjAB#v=onepage&q=Resoluci%C3%B3n
%20de%20la%20columna&f=false
 X. Fuentes Arderiu, J. Castiñeras , M Queraltó (1998).Bioquimica Clinica y
patología molecular.p159. Recuperado de:
https://books.google.com.co/books?id=cKGyh_81v-
oC&pg=PA159&dq=resolucion+de+picos&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwi_9c
KGo-bnAhWRiOAKHcZyAdwQ6AEILzAB#v=onepage&q=resolucion%20de
%20picos&f=false

Tabla 2. Ejercicio 1.2 – Coeficiente de distribución

Concepto Definición
Sustancia que se encuentra
Soluto:
disuelta en otra.
sustancia que forma parte en
Solvente:
mayor cantidad de una solución
Es una mezcla homogénea de
Solución:
dos o más sustancias.
Polar: Cuando uno de sus extremos
está cargado positivamente, y
el otro de manera negativa.
Ejemplo
Pigmentos y grasa
Agua, alcohol, éter, etc
Agua y alcohol, vino,
vinagre
Agua (H2O), amoníaco
(NH3), dióxido de azufre
(SO2),sulfuro de ,
hidrógeno (H2S)etanol –
 (C2H6O)
Es todo aquello que carece de
polos, y en química se aplica a
Hidrógeno (H2), butano
cierto tipo de moléculas.  Son
(C4 H10), tetracloruro de
Apolar: aquellas moléculas que se
carbono (CCl4); disulfuro
producen por la unión entre
de carbono (CS2);
átomos que poseen igual
electronegatividad.
Ama el agua. Proviene del
griego hidro que significa agua
y de philia que significa
amistad. Con esta simple
Hidrófilo: definición ya podemos ir Glucosa, metanol, etanol
deduciendo lo que significa que
una sustancia sea
hidrofílica: que se pueden
mezclar con el agua
Odia el agua. Proviene del
mencionado término hidro y
además del término phobos que
significa miedo o temor, por lo
Hidrófobo: tanto una sustancia hidrofóbica Aceite, octano,
será aquella que será repelida
por el agua o que no se podrá
mezclar con ella.

Combinación de dos o más El aire, la leche, bebidas

sustancias en la cual la gaseosas, el cemento.
Mezcla:
sustancia conserva sus
propiedades características
Inmiscible: Compuesto, elemento El agua y el aceite,
o sustancia en particular que no
 tiene la susceptibilidad,
posibilidad o que no se puede o
es imposible de combinar
o mezclar, así mismo la falta de
compatibilidad de ellas.
Concepto Definición Fórmula
Se denomina coeficiente de distribucion y
│A│org y │A│aq son las actividadesm del
soluto A en las fases organicas y acuosas
respectivamentre, este coeficiente varia
Coeficiente de
con la temperatura y depende de la [ A ] org
distribución: naturaleza del solutoy del disolvente K D=
[ A ] aq
organico utilizado en la extracción , pero es
independiente de la concentracion total del
soluto

Relación de conceptos
Cuando el coeficiente de distribución tiene un valor ________, la
concentración del soluto en un solvente apolar es ________ que la
concentración del soluto en un solvente polar. Por el contrario, si el
coeficiente de distribución tiene un valor ________, la concentración del
soluto en el solvente apolar es ________ que la concentración del soluto en
un solvente polar.
Referencias bibliográficas:
 https://conceptodefinicion.de/solvente/
 https://www.uaz.edu.mx/histo/Biologia/Wiki/Apolar.pdf
 Morrison,R. Boyd,R. (1998) Química organica(5ª. Ed.).(pp 224).
Recuperado de: https://books.google.com.co/books?
id=3b2Yk_dzH70C&pg=PA224&dq=Hidr
%C3%B3filo&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjb8MCV9_LnAhVkTt8KHRTfCKQ
Q6AEIOjAD#v=onepage&q=Hidr%C3%B3filo&f=false
 Tabla 3. Ejercicio 1.2 – Factor de retención
Cromatograma 1 Cromatograma 2
Factor de retención (k’) 4,5 11
Fase más densa (solvente)
Soluto
Concepto Definición
Es la curva de elución que se obtiene en una
cromatografía y representa la señal recogida
por el detector en respuesta a la concentración
Cromatograma: de analito en función del tiempo o del volumen
de fase móvil añadido.

Tiempo transcurrido al momento de eluir el

Tiempo de retención (tR):
máximo de concentración del soluto.
Tiempo desde la inyección hasta la salida de
Tiempo muerto (tM): una sustancia que no interacciona con la fase
estacionaria.
Ancho de banda (W):
Señal en un cromatograma:
Referencias bibliográficas:
 http://stadium.unad.edu.co/preview/UNAD.php?
url=/bitstream/10596/9904/3/401542_Cr

Tabla 4. Ejercicio 1.2 – Cromatograma

Compuesto Tiempo de retención s (tR) Ancho de banda (W)
a 1,95 0,47
 b 2,50 0,36

Compuesto pico “a” Compuesto pico “b”

Tiempo de t ´ R =t R−t 0 t ´ R =t R−t 0
retención
t ´ R =1,95−0,56 t ´ R =2,50−0,56
corregido
(tR’) t ´ R =1,39 t ´ R =1,94
t ´ R −t 0 t ´ R −t 0
K ´= K ´=
t0 t0
Factor de
retención 1,39−0.56 1,94−0.56
K ´= K ´=
(k’) 0,56 0,56
K ´=1,48 K ´=2,46
2 2
t ´R t ´R

Número de
N=16
w ( ) N=16
w ( )
platos 1,48 2
2,46 2

teóricos (N)
N=16 ( )
0,47
N=16 ( )
0,36
N=158,6 N=747,11
L L
H= H=
N N
Altura de
38 38
plato (H) H= H=
158,6 747,11
H=0,23 H=0,050
Factor de t ´ Rb 1,94
selectividad α= α= α =1,39
t ´ Ra 1,39
(α)
t ´¿ 1,94−1,39
Resolución Rs= Rs=
1 1 Rs=1,32
(Rs) ( w +w ) ( 0,47+ 0,36 )
2 a b 2
 √N √N
E= E=
Resolución 4 4
con relación
√ 158.6 √ 747,11
al factor de E= E=
4 4
retención
E=3,14 E=6,8
Resolución
con relación α −1 1,39−1
S= S= S=0,28
a la α 1,39
selectividad
K´ K´
R= R=
1+ K ´ 1+ K ´
Resolución
con relación 1,48 2,46
R= R=0,59 R= R=0,71
1+1,48 1+2,46
a la
eficiencia

Tabla 5. Ejercicio 1.2 – Características de un cromatograma

Pregunta
¿Qué indica el tiempo de
retención en el análisis
cromatográfico realizado?
¿Qué indica el número de
platos?
¿Qué indica la altura de plato?
Respuesta
Indica el tiempo que tarda en ser detectado
el analito por el detector, depende del
volumen de retención y el caudal
Valoraciones teóricas de número de etapas
de partición (distribución) que sufren las
moléculas de la muestra durante su paso a
lo largo de la columna.
El número de platos depende de la longitud
de la columna, a mayor longitud de
columna, mayor número de platos
De la altura del plato depende la eficacia, a
menor altura de plato y mayor número de
 platos más eficacia de la columna
cromatografíca.
¿Qué relación tiene la
resolución con el factor de
retención, la selectividad y la
eficiencia?
Referencias bibliográficas:
-R.W.Yost;L.S Ettre;R.D Conlon (1980) introducción a la cromatografía
liquida práctica. Perkin-Elmer.(p. 40,41)

EJERCICIO 2 – CROMATOGRAFÍA PLANA

Tabla 6. Ejercicio 2.1 – Definición de conceptos de cromatografía plana

Concepto Definición
Es una lámina que puede estar
impregnada de una sustancia. Se
Fase estacionaria:
encuentra extendida sobre la superficie
del plano.
Fase móvil: Fluye a través de la fase estacionaria.
Métodos de detección o revelado: Si la muestra (mancha) no es coloreada
se requiere de métodos que nos
permitan visualizar el(los)
componente(s) presentes. También se
conoce este procedimiento como
Revelado.
Estos métodos son:
Químicos (por inmersión o rociado). Se
obtienen derivados coloreados o
fluorescentes
 Físicos (ópticos). Generalmente se utiliza
radiación UV

La cromatografía en papel pertenece a la

categoría "Cromatografía de líquidos". La
fase estacionaria se compone de una
cinta de papel introducida verticalmente
en un recipiente de cristal y la fase móvil
Cromatografía de papel:
de un líquido. El movimiento de la fase
móvil se produce debido a la fuerza
capilar. Un campo de uso de la
cromatografía en papel es el análisis de
mezclas.
La cromatografía en capa fina pertenece
a la categoría "Cromatografía de
líquidos" y el principio de funcionamiento
es el mismo que el de la cromatografía
en papel. La diferencia entre ambos
procedimientos se encuentra en la fase
estacionaria, que en el caso de la
Cromatografía en capa fina:
cromatografía en capa fina se compone
de materia pulverizada como la alúmina,
gel de sílice o celulosa que se sitúan
sobre plaquitas de vidrio. Las ventajas
de la cromatografía en capa fina son un
tiempo de ejecución rápido y una alta
muestra de comprobación.
Referencias bibliográficas:
 M, Valcárcel;A, Gomez.(1988). Técnicas analíticas de separación (p. 383)
editorial reverté. Recuperado de: https://books.google.com.co/books?
id=WPYYF75dejsC&printsec=frontcover&hl=es&source=gbs_ge_summary
_r&cad=0#v=onepage&q&f=false
 http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Thin.htm
 https://www.pce-iberica.es/instrumentos-de-medida/instrumentos-
laboratorios/cromatografia.htm

Tabla 7. Ejercicio 2.2 – Cálculo Rf ensayo 1 y 2

Calculo Rf ensayo Distancia del borde de Distancia borde h a b

1y2 siembra disolvente
Ensayo 1 0,6 - 6,7 3,4 -
Ensayo 2 0,6 0,8 6,7 3,7 2,9

Muestra “a”

Ensayo 1
Cálculo de Rf.

Muestra “a”

Cálculo de Rf.

Muestra “b”
Ensayo 2

Cálculo de Rf.

Muestra “c”
 Cálculo de Rf.

Muestra “d”

Cálculo de Rf.

Tabla 8. Ejercicio 2.2 – Justificación ensayos 1 y 2

Pregunta Respuesta
Para el ensayo 1, ¿qué significa Respuesta:
que la muestra “d” presentara
un desplazamiento de 2,8 cm y
la muestra patrón fue de 3,3?
Para el ensayo 2, ¿por qué se Respuesta:
empleó esa composición de
fase móvil?
Para el ensayo 2, ¿Por qué la Respuesta:
muestra “c” no presentó un
desplazamiento con la
composición de la fase móvil?

Para el ensayo 2, ¿por qué se Respuesta:

tiene un frente de disolvente?

Para el ensayo 2, indique desde Respuesta:

la estructura de cada muestra,
cuál es la afinidad con la fase
móvil.
Referencias bibliográficas:
-

EJERCICIO 3 – CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Tabla 9. Ejercicio 3 – Cromatografía de columna

Cromatografía en
Aspecto Cromatografía plana
columna
Eluyente
Se realiza por la
distancia recorrida de la
Separación
muestra en la fase
estacionaria
Longitud de la fase
estacionaria
Velocidad de flujo
Tiempo de separación
Cantidad de muestras Se pueden separar
a separar varias muestras.
Fase móvil
Fase estacionaria
Detección
Factores que influyen
en la separación
Afinidad de la fase
móvil con la polaridad
de los analitos

Referencias bibliográficas:
-