PIGMENTOS: EXTRACCIÓN - SEPARACIÓN Y

CUANTIFICACIÓN

PIGMENTS: EXTRACTION - SEPARATION AND

QUANTIFICATION

AUTORES
Paula Natali Jimenez Martinez 20181180058
Venus Valentina Mora Piernagorda 20181180056
Wilson Rincon Cruz 201721800584

Identificación de Aminoácidos ,(2020). pnjimenezm@correo.udistrital.edu.co,

vvmorap@correo.udistrital.edu.co, wilsonrincon9@gmail.com

RESUMEN

Para que sea absorbida con eficiencia la luz, las plantas usan moléculas especializadas
denominadas pigmentos, las cuales dan color a las diferentes partes del cuerpo, como hojas o
pétalos, según el tipo de luz visible que absorban o reflejen. En el siguiente artículo se
elabora un analisis de los resultados obtenidos a partir de la práctica de laboratorio en la cual
se llevó a cabo la extracción y separación de los diferentes tipos de pigmentos por
cromatografía en papel en función de su polaridad relativa. Una vez separados, se analizará
su migración a lo largo de la fase estacionaria. Asimismo, se llevará a cabo la cuantificación
de las clorofilas presentes en el material vegetal.: 1 para la parte de extracción se tomaron 5 g
de diferentes hojas frescas las cuales se cortaron y adicionaron junto a 5ml de etanol 80%,
después se lleva al baño maría, este producto obtenido se diluye hasta 5 mL con etanol al
80%. Después se mide en un espectrofotómetro a longitudes de onda de 645 y 663 nm. 2
para la separación del pigmento se utiliza una tira de papel, se dibuja una línea a 1 cm del
borde y se agregan una a una 7 gotas de sobrenadante. Se introduce con cuidado la tira de
papel con la muestra en un tubo de ensayo que contiene 2 mL de acetona:éter de petróleo,
dejar durante 30 min. después se analizan las muestras y se aplica una fórmula (RF) para así
determinar la cantidad de pigmento presente en la muestra.

Palabras clave: Pigmento, Cromatografía, Xantofila, Clorofila y Factor de retención

INTRODUCCIÓN:
Pigmentos:
Los pigmentos son moléculas que tienen la capacidad de absorber luz y a su ve presentar
color; un cuerpo tiene la capacidad de absorber cierta longitud de onda dependiendo de su
espectro de absorción, en caso de que no sea capaz de absorber la cantidad de luz que se
direccionan hacia él, se ve reflejada parte de ella generando el color del objeto.En las plantas
podemos encontrar dos tipos de pigmentos encontrados en los cloroplastos de la célula
vegetal, los cuales dan color a las distintas partes de la misma y tiene como función la
absorción de luz solar para su posterior transformación en energía química, empleada en la
fotosíntesis para la producción de alimento. (López, B, S.F)Es importante diferenciar los
pigmentos de otros conceptos como los colorantes, mientras los colorantes tienen la
capacidad de adherirse al sustrato y conferir un color permanente, Los pigmentos, a
diferencia de los colorantes, no se adhieren al sustrato directamente, sino a través de un
vehículo adherente (aglutinante).

Clases de pigmentos:

• Por su origen: Naturales y sintéticos

• Naturaleza química: Orgánicos e inorgánicos
• Por su método de fabricación: Precipitación o calcinación
• Aplicación: decorativos o funcionales

Esta práctica va enfocada en dos tipos principales de pigmentos presentes en los organismos
autótrofos: La clorofila y los carotenoides.

Carotenoides:

Químicamente la mayoría de los carotenoides son tetraterpenoides, compuestos de 40 átomos

de carbono formados por ocho unidades isoprenoides unidas de forma que la secuencia se
invierte en el centro de la molécula. Es decir, la unión de dichas unidades es "cabeza-cola",
excepto en el centro de la molécula, donde es "cabeza-cabeza". (Antonio J, 2007). Debido a
ello, los dos grupos metilo centrales de la cadena poliénica están separados por seis átomos
de carbono, mientras que el resto están separados por cinco. Algunos carotenoides son
acíclicos, si bien la mayoría contienen anillos a uno o ambos extremos de la molécula.
Considerando los elementos químicos presentes en sus moléculas, los carotenoides pueden
dividirse en dos grandes grupos: carotenos, que son hidrocarburos, y xantofilas, que
contienen átomos de oxígeno. Éste puede estar presente en forma de grupo hidroxilo
(zeinoxantina, lactucaxantina, etc.), metoxilo (esferoidenona, espiriloxantina, etc.), epóxido
(anteraxantina, licopeno-1,2-epóxido, etc.), carbonilo (capsantina, esferoidenona, etc.) o
carboxilo (norbixina, neurosporaxantina, etc.), principalmente. Otros grupos oxigenados
presentes en carotenoides son acetatos (fucoxantina, dinoxantina, etc.), lactonas (peridinina,
uriólido, etc.) y sulfatos (caloxantina-3-sulfato, nostoxantina- 3-sulfato, etc.)
No todos los carotenoides constan de ocho unidades isoprenoides, ya que algunos,
denominados apocarotenoides, poseen un esqueleto de menos de 40 átomos de carbono
 Figura1.Estructura química del Betacaroteno. Fuente: By KES47 (File:Beta-carotene.png)
[Public domain], via Wikimedia Commons

Clorofila:

Hay cinco tipos principales de clorofila: a, b, c y d, más una molécula relacionada que se
encuentra en procariontes llamada bacterioclorofila. En las plantas, la clorofila a y clorofila b
son los principales pigmentos fotosintéticos. Las moléculas de clorofila absorben longitudes
de onda azules y rojas, como se demuestra con los picos en los espectros de absorción
anteriores. A nivel estructural, las moléculas de clorofila se componen de una cola hidrófoba
("que le teme al agua") que se inserta en la membrana del tilacoide y una cabeza de anillo de
porfirina (un grupo circular de átomos que rodean a un ion magnesio) que absorbe la luz.Hay
cinco tipos principales de clorofila: a, b, c y d, más una molécula relacionada que se
encuentra en procariontes llamada bacterioclorofila. En las plantas, la clorofila a y clorofila b
son los principales pigmentos fotosintéticos. Las moléculas de clorofila absorben longitudes
de onda azules y rojas, como se demuestra con los picos en los espectros de absorción
anteriores.

A nivel estructural, las moléculas de clorofila se componen de una cola hidrófoba ("que le
teme al agua") que se inserta en la membrana del tilacoide y una cabeza de anillo de porfirina
(un grupo circular de átomos que rodean a un ion magnesio) que absorbe la luz.Aunque tanto
la clorofila a como la clorofila b absorbe luz, la clorofila a tiene una función única y crucial al
convertir la energía de la luz en energía química (como puedes ver en el artículo reacciones
dependientes de la luz). Todas las plantas fotosintéticas, algas y cianobacterias contienen
clorofila a, mientras que solo las plantas y algas verdes contienen clorofila b, junto con
algunos tipos de cianobacterias (López,B, 2017)Debido a la función central de la clorofila a
en la fotosíntesis, todos los pigmentos utilizados además de la clorofila a se conocen como
pigmentos accesorios, que incluyen otras clorofilas, así como otras clases de pigmentos,
como los carotenoides. El uso de pigmentos accesorios permite la absorción de una gama más
amplia de longitudes de onda y, por lo tanto, una captura mayor de energía de la luz solar.
 Figura 2. Estructura química clorofila a, clorofila b, Fuente: By KES47 (File:Beta-
carotene.png) [Public domain], via Wikimedia Commons

METODOLOGÍA

Figura 3.Metodología utilizada para realizar la práctica de laboratorio.

RESULTADOS:

Solvente 15cm
P1 0,9 cm
P2 2,0 cm
P3 9,8 cm
P4 12,5 cm
Tabla 1. Cromatografía en papel
 λ 645 λ 645
1 0,127 0,296
2 0,41 1,017
3 0,393 0,921
4 0,137 0,325
5 0,18 0,422
Tabla 2. Cuantificación de clorofila

Solvente 5,1 cm
P1 0,3 cm
P2 0,8 cm
P3 3,0 cm
P4 4,8 cm
Tabla 3. Cromatografía, solvente: acetona: éter de petróleo(1:3)

Figura 4. Cromatografía en capa fina

Figura 5. separación de pigmentos.

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Según (Varella 1981) la acetona es uno de los solventes más utilizados en la extracción de
pigmentos fotosintéticos ya que estos son solubles en solventes orgánicos. La acetona es
eficiente solamente si la prueba es completamente triturada. Y también se somete a la
centrifugación para clarificar la muestra.Durante la cromatografía la fase móvil asciende por
el papel por la capilaridad, por lo tanto se deduce que aquellas muestras más afines con el
agua serán los que más ascenderán como en el caso de los resultados obtenidos para las
cuales como lo podemos ver en la tabla los mayores resultados en factor de retención están
entre las muestras 2 y 3,ese factor en una clorofila nos muestra la relación entre los
compuestos y las fases que se dividen en la estacionaria (papel) y móvil (solución de los
pigmentos).Asimismo se demuestra que aquellas clorofilas pigmentos que presentan una
menor distancia recorrida en el papel son las mismas que mostraron un bajo factor de reparto,
esto ya que al ser menos soluble el pigmento el pigmento de desplaza de forma lenta.

La clorofila es ligeramente menos soluble que la xantofila por lo que queda debajo en el
papel de cromatografía ya que posee tanto grupos apolares como grupos ligeramente polares
lo cual dificulta su recorrido en la fase móvil del sistema cromatográfico. La clorofila b es
menos soluble y por esto no presenta un alto factor de retención. 'observó cómo permaneció
en la parte inferior del papel debido a que presenta una alta cantidad de grupos apolares en su
estructura.el éter tiene la capacidad de solubili tanto compuestos apolares como compuestos
ligeramente populares por lo que es m2s eficaz al momento de mostrar los pigmentos en el
papel de cromatografía ya que el etanol solo solubilizar compuestos totalmente apolares

CONCLUSIONES

-El pigmento de mayor solubilidad siempre quedará evidenciado en la parte superior del
papel de cromatografía debido a que lamayor solubilidad de este lo hace desplazarse en la
corriente de fase móvil con mayor facilidad, mientras que el pigmento con menor solubilidad
ascender a una velocidad menor por lo que queda en la parte inferior

-El éter es mucho más efectivo que el etanol en las pruebas de cromatografía ya que este
puede solubilizar tanto compuestos apolares como compuestos ligeramente polares. El factor
de retención obtenido nos indica que una mayor cantidad de pigmento fue retenido en la
prueba con éter que con el de etanol debido a la capacidad que el primero tenía de solubilizar
los pigmentos.En la prueba también se evidencia la presencia de carotenos que son incluso
m2 solubles que la xantofila

BIBLIOGRAFÍA:
● Villa, T. Molina, H. seminario química inorgánica de coordinación (2018);

Recuperado de:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/SEMINARIOPigmentos_32679.pdf

● Antonio J. Meléndez-Martínez, Isabel M. Vicario, Francisco J. Heredia Pigmentos

carotenoides: consideraciones estructurales y fisicoquímicas (2007); Recuperado de:

http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0004-06222007000200002

● López, B. Carotenoides: estructura, funciones, clasificación, alimentos (2017);

Recuperado de: https://www.lifeder.com/carotenoides/

● “Reacciones de la fotosíntesis dependiente de la luz”, de OpenStax College (CC BY

3,0). Recuperado de: http://cnx.org/contents/f829b3bd-472d-4885-a0a4-

6fea3252e2b2@1

● Estructura química clorofila a, clorofila b, Obtenido de: By KES47 (File:Beta-

carotene.png) [Public domain], via Wikimedia Commons

● Varella, M. (1981) El problema de la determinación de clorofila a en el

fitomicrobentos: discusión sobre la metodología. Instituto Español de Oceanografía.

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