Medios de cultivo

MARCO TEÓRICO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. La incubación
depende del metabolismo del microorganismo a cultivar como la atmosfera empleada
(aerobio, microaerofilico, anaerobio) tiempo y temperatura.
Clasificación de los medios de cultivo
Según su consistencia
a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.
b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de
15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se
extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye
ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser
vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y
diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio líquido".
c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar
la motilidad de las especies en estudio.
Según su composición:
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de
los microorganismos poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para
mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.
b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento
al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos,
por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que
tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos
específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento
no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de un grupo de
microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o
Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).
Requisitos de los medio de cultivo provisto por el fabricante:

 Los lotes de medios deben estar debidamente identificados.

 Cada lote recibido debe ir acompañado de evidencias del cumplimiento de las
especificaciones de calidad
En microbiología se le da especial énfasis a la calidad de los medios de cultivo y
reactivos, tal que aquella sea apropiada para los ensayos realizados.
La preparación y esterilización constituyen pasos críticos en el logro de este objetivo.
El fabricante en el momento de la entrega de medio de cultivo debe proveer
información acerca de las especificaciones de calidad
El fabricante en el momento de la entrega de medio de cultivo debe proveer
información acerca de las especificaciones de calidad, como mínimo debe incluir lo
siguiente:

• Nombre del medio y lista de componentes, incluido cualquier suplemento.

• Fecha de vencimiento del medio.
• Condiciones de almacenamiento.
• Control de esterilidad.
• Control del crecimiento de los microorganismos de interés (target) y de los
microorganismos no deseados (no target) y criterios de aceptabilidad.
• Controles físicos y criterios de aceptabilidad aplicados.
• Fecha de emisión de las especificaciones

Siembra
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un
medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento. Las reglas fundamentales para efectuar la siembra
exigen:

 Que se efectúen asépticamente

 Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
 Que se realicen solo los manipuleos indispensables
 Que se trabaje fuera de toda corriente de aire.
 De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar.
Medios sólidos:
Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el
mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios. Siembra en doble capa: se procede de la misma manera
que por inmersión. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio
necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se
utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido,
se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula
de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo.
Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.
Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se
deja solidificar. Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es
obtener colonias aisladas
• Técnica A
Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte
de la superficie de la placa, se quema el ansa, se enfría, se gira la placa a 90° y se
vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro
cuarto de la placa. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin
sembrar.

Fig. 1Técnica A

• Técnica B Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen

3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se repite el
procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.

Fig. 2Técnica B

Fig. 3 Método de siembra tipo estrías

Material Biológico:
Escherichia coli
Clasificacion:
Reino: Bacteria
Filo:Proteobacteria
Clase Gammaproteobacteria
Orden:Enterobacteriales
Familia:Enterobacteriaceae
Genero:Escherichia
Especie: E. coli

Son habitantes casi universales del tracto intestinal de los humanos y de otros
animales de sangre caliente. Escherichia juega un papel nutricional en el tracto
intestinal al sintetizar vitaminas, particularmente vitamina k. (Madigan et al.,2009)   son
bacilos grandes, gram negtivos, aerobios o anaerobios facultativos, móviles, posee
fimbrias; pertenece al grupo de las enterobacterias. Escherichia es responsable de un
número considerable de infecciones del tracto urinario femenino, son entero
patogénicas son cada vez más frecuentes en infecciones gastrointestinales y en
fiebres generalizadas. Para el aislamiento e identificación de la E. coli, se debe tomar
una muestra a 37 ºC en un medio selectivo en condiciones aeróbicas, ya sea en agar
MacConkey o eosina azul de metileno, donde las enterobacterias pueden diferenciarse
por sus características morfológicas y ser diferenciadas por la prueba del indol.
Proteus
Reino: Bacteria
Filo:Proteobacteria
Clase Gammaproteobacteria
Orden:Enterobacteriales
Familia:Enterobacteriaceae
Genero: Proteus

El género Proteus se caracteriza por su rápida movilidad y por la producción de la

enzima ureasa. Es una causa frecuente de infecciones tracto urinario en humanos y
probablemente se beneficia en este aspecto de su capacidad para degradar urea
(Madigan et al.,2009). Son oxidasa-negativas y ureasa-positivas. Algunas especies
son mótiles.2 Tienden a ser organismos pleomórficos, no esporulados ni capsulados y
son productoras de fenilalanina desaminasa.3 Con la excepción de P. mirabilis, todos
los Proteus reaccionan positivos con la prueba del indol. Crecen en medios corrientes
y moderadamente selectivos a temperatura corporal de 37 ºC. Crecen formando capas
diseminadas por virtud de su gran motilidad. Existen variantes inmóviles que forman
colonias lisas.
Staphylococcus aureus
Reino: Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Staphylococcaceae
Géneros:
Staphylococcus
Gram positivas, esféricas, disposición en racimoso no móvil, no forman esporas.
Miembro de la microbiota normal: piel, cavidades (nasofaríngea y orofaringea), son
anaerobio facultativos, productoras de ácido láctico, catalasa positiva, oxidasa
negativas.
Principal causante de infecciones nosocomiales a través de heridas o infecciones
asociadas a dispositivos médicos, causante de intoxicación alimentaria.
Medios de Cultivo:
Agar Salmonella Shigella, es una modificación del agar citrato desoxicolato descrito
por Leifson. Considerado un medio selectivo, adecuado para el aislamiento de
microorganismos gram negativos tolerantes a la bilis, especialmente especies de los
géneros Salmonella y Shigella, a partir de muestras de origen clínico (deposiciones),
aguas y aguas residuales, y alimentos, asi como también otras muestras de origen
industrial. (Agar Salmonella-Shigella (Agar SS), s. f.)
Según el nivel de inhibición de los microorganismos gram positivos y
Enterobacteriaceae diferentes de Salmonella y Shigella, que inhibe por contenido de
sales biliares, verde brillante y citratos. La diferenciación de los organismos entéricos
se logra mediante la incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que
fermentan lactosa producen ácido que, en presencia del indicador rojo neutro, propicia
la formación de colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa
forman colonias incoloras. Este último grupo incluye la mayoría de los patógenos
intestinales, incluidos Salmonella y Shigella. El tiosulfato sódico y el citrato férrico
permiten la detección de producción de ácido sulfhídrico, como lo demuestran las
colonias con centros de color negro. Este medio se utiliza para el aislamiento primario
de Salmonella a partir de muestras fecales humanas. (Instrucciones de uso-Medios en
placas listas para usar, s.f.)
Agar Sangre Base (Agar nutricio), es un medio de cultivo usado normalmente como
rutina para todo tipo de bacteria. Este medio contiene extracto de carne, peptona y
agar, siendo una formulación suficiente para el desarrollo de los microorganismos. El
extracto de carne proporciona a la media fuente de carbohidratos, de nitrógeno y
vitaminas. El empleo de este medio es de acuerdo al tipo de estudio por realizar.
MATERIALES
REACTIVOS BD
Salmonella Shigella Agar Fórmula* por litro de agua purificada

 Extracto de carne bovina 5,0 g

 Digerido pancreático de caseína 2,5
 Digerido péptico de tejido animal 2,5
 Lactosa 10,0
 Sales biliares 8,5
 Citrato sódico 8,5
 Tiosulfato sódico 8,5
 Citrato férrico 1,0
 Rojo neutro 0,025
 Agar 13,5
 Verde brillante 0,330
 mg pH 7,2 ± 0,2 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de
rendimiento.
Agar Sangre Base Fórmula

 Músculo del corazón, infusión de sólidos 2,0 g

 Digerido pancreático de caseína 13,0 g
 Extracto de levadura 5,0 g
 Cloruro de sodio 5,0 g
 Agar 15,0 g
 pH 7,3 ± 0,2 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de
rendimiento.
METODOLOGÍA
Material biológico: Escherichia coli, cepa obtenida del laboratorio de Bacteriologia de
la UNMSM.
Agar Salmonella Shigella (Agar SS)
Preparacion del medio de cultivo:
Se suspendió 63 g de medio de cultivo en 1 litro de agua destilada. Se esterilizo con el
autoclave. Una vez realizado la esterilización esperar a bajar la temperatura a 50 ºC se
distribuyó en placas de Petri estériles en condiciones asépticas.
Siembra:
Se recogió una muestra del cultivo bacteriano (Escherichia coli) a partir de una placa
Petri. Inoculamos con la técnica del estriado directamente a la superficie del medio de
cultivo (Agar SS). Llevamos a la estufa de cultivo a 37ºC. El tiempo de incubación es
de 48 hrs. Transcurrido dicho periodo, se efectuó con la lectura.
Interpretación
Los no fermentadores de lactosa, aparecerán como colonias sin color mientras que
cualquier comensal fermentador de lactosa que sea hábil para crecer en el medio
aparecerá en forma de colonias rosa o roja. La mayoría de las Salmonella y Shigella
son no-lactosa fermentante y aparecen como colonias sin color. Las Salmonella a
menudo aparecerán con un punto negro en el centro que indica producción de H2S.
RESULTADOS
 Escherichia coli
Medio de cultivo: Agar Salmonella-Shigella
Enterobacteria fermentadora de lactosa (+) lo que les da a las colonias color rosa
de diversos tonos, pequeñas y medianas, circulares, convexas, bordes
redondeados, con desarrollo parcialmente inhibido.

Fig. 4 Escherichia coli en agar Salmonella-Shigella

Material biológico: Staphylococcus aureus, cepa obtenida del laboratorio de
bacteriología de UNMSM
Agar Sangre Base (BSA)
Preparación del medio de cultivo
Se suspendió 40g de del polvo en 1L de agua destilada. Autoclavar a 121°C durante
15 minutos, para la preparación de agar sangre, enfriar la base a 50°C y se añade
asépticamente sangre desfibrinada estéril al 5% y se mezcla bien.
Siembra:
Se recogió una muestra del cultivo bacteriano (Staphylococcus aureus) a partir de una
placa Petri. Inoculamos con la técnica del estriado directamente a la superficie del
medio de cultivo (BSA). Llevamos a la estufa de cultivo a 37ºC. El tiempo de
incubación es de 48 hrs. Transcurrido dicho periodo, se efectuó con la lectura.
Interpretación:
La mayoría de cepas de S. aureus producen B hemólisis por lo que aprovechan este
medio para crecer, presentan colonias grandes de formas cremosas, convexas y de
bordes lisos; el color amarillo es debido a los carotenoides, que puede ser favorecida
si se incuba a temperatura ambiente y luz natural durante 24 a 48 horas.
RESULTADOS
 Staphylococcus aureus
Medio de cultivo: Agar sangre base
Bacteria que coloniza las fosas nasales, piel y mucosas de personas, produce
enfermedades mediadas por toxinas y es una bacteria beta hemolítica, colonias de
color dorado, de formas convexas y bordes lisos.

Fig. 5 Staphylococcus aureus en BSA

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Escherichia coli en agar SS:
El desarrollo se presentó parcialmente inhibido debido a que el medio es selectivo e
indiferencial, es decir que el medio es selectivo porque contiene sales biliares para
evitar el crecimiento de Gram positivas y diferencial por que posee componentes
químicos como la lactosa específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies
químicas cuyo crecimiento no interesa, tal medio crece bien las entero bacterias como
Salmonella y Shigella que no son fermentadoras de lactosa, el crecimiento de
Escherichia coli se debió a que es fermentadora de lactosa , lo cual sus colonias se
presentaron de color rosa o rojiza y poco crecimiento, otras razones posibles a su
crecimiento escaso se podría deberse que en el momento de la inoculación se extrajo
poca cantidad de biomasa.
Staphylococcus aureus en agar sangre base:
El desarrollo de las colonias se dio con normalidad y se logró el objetivo porque se
logró aislar las colonias por agotamiento y se pudieron apreciar las características de
las colonias, este al ser un medio nutricio permite que pueda crecer cualquier tipo de
bacteria, pero si le añadimos sangre al medio podemos determinar que se trataría de
Stphylococcus aureus porque es una bacteria beta hemólitica, las característica del
color dorado se debe a carotenoides, que puede ser favorecida si se incuba a
temperatura ambiente y luz natural durante 24 a 48 horas. También al tomar poco
inóculo permitió que se pueda aislar las colonias y ayudó a la visualización de éstas.
CONCLUSIONES
 Se concluye que las características morfológicas de las bacterias en diferentes
tipos de medios de cultivo nos ayuda para el reconocimiento y aislamiento de
bacterias como E. coli, Staphylococcus aureus , Proteus.
 Se deduce que es importante conocer los fundamentos bioquímicos de la
acción de las bacterias sobre los carbohidratos para la detección de bacterias.
 Se determina que es importante conocer la composición química de los medios
para poder utilizar el más adecuado para un tipo de bacteria.
RECOMENDACIONES
• Se debe seguir practicando en los métodos de siembra para el aislamiento de
bacterias principalmente el método de la placa estriada para así obtener
mejores resultados durante la práctica.
• Hay que tratar de tomar una cantidad de inóculo baja y no alta, ya que al estar
cargado no podríamos realizar un buen aislamiento de las colonias
BIBLIOGRAFÍA
 Agar Salmonella-Shigella.( Agosto,2016) Recuperado de
http://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/Agar-SS.pdf
 Instrucciones de uso-Medios en placa Listos para usar (2013, Abril) recuperado
de http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8779
 Lopez Tevez, Leonor & Torres, Carola. Medio de cultivo ( 2006) Recuperado de
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
 Madigan. Martinko. Parker. Ed.Brock Biología de los microorganismos.
Pearson. 10° Edición. España. 1998.
 Santambrosio, Eduardo, Ortega, Marta & Garibaldi, Pable. Siembra y recuento
de microorganismo (2009).Recuperado de
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/pr
acticoIII.pdf
 S.S. Agar.( 2016) recuperado de
http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU345_SPA.pdf
 Placas de petri Salmonella Shigella Agar. (diciembre,2015) Recuperado de
http://aravanlabs.com.uy/wp-content/uploads/2015/12/especificaciones-placas-
de-petri-salmonella-shigella-agar.pdf