Indice

1. Biorremediación
2. Biorremediación de hidrocarburos
3. Biorremediación de Hidrocarburos Aromáticos Polinucleares
4. Biorremediación de compuestos xenobióticos
5. Biorremediación de metales pesados
6. Tratamiento De Efluentes
7. Bibliografia consultada
1. Biorremediación
La biorremediación puede ser definida como el uso de organismos vivos,
componentes celulares y enzimas libres, con el fin de realizar una
mineralización (compuesto blanco Þ CO2 + H2O), una transformación parcial,
la humificación de los residuos o de agentes contaminantes y una alteración
del estado redox de metales.
Históricamente el compostaje fue una primitiva forma de biorremediación en
donde los residuos por ej. derivados de la recolección domiciliaria (restos
orgánicos, inorgánicos, residuos industriales, etc.) son incluidos en containers
permitiendo que puedan ser biodegradados por microorganismos (Senior and
Balba, 1990).
Los factores que gobiernan la biorremediación son complejos y pueden variar
enormemente dependiendo de la aplicación. En muchos casos puede llegar a
ser difícil distinguir entre los factores bióticos y abióticos que contribuyen con la
biorremediación.
La biorremediación es un fenómeno común en la naturaleza cuando en
un ambiente o ecosistema se produce una alteración del equilibrio como es el
caso de una gran tala de árboles, esto origina un aumento considerable
de materia orgánica en el suelo.
En este caso los factores físicos y bióticos tratan de reponer el daño, se
produce entonces un aumento de organismos saprófitos los cuales ocasionan
una gran mineralización de la materia caída, además el resto de esa materia
puede ser reciclada o humificada
Cabe remarcar que cuanto más diversidad biológica exista en un ecosistema
con mayor eficiencia podrá autodepurarse.
Las técnicas de biorremediación pueden ser clasificadas según el tratamiento y
a la fase usada.
Se denomina biorremediación in situ cuando el suelo contaminado se trata en
el lugar, el sitio permanece prácticamente inalterado durante el tratamiento y la
biorremediación ex situ el suelo es retirado y trasladado hasta una unidad de
tratamiento.
El tratamiento es efectuado en fase sólida si el suelo es tratado sobre un lecho
especialmente preparado y no hay líquido libre. Por el contrario se denomina
fase barro cuando se lleva en un reactor y se forma barro entre el suelo
y agua (Ferrari, 1996).
En general existen dos estrategias para ayudar a un ecosistema a remediarse:
La primera es agregar nutrientes de forma de estimular las poblaciones
naturales y así aumentando su actividad y la segunda es introduciendo
microorganismos exógenos dentro del ecosistema como forma de remediación.
En este último caso con las nuevas técnicas de la ingeniería genética se
pueden emplear microorganismos genéticamente modificados haciéndolos más
eficientes en la biorremediación.
2. Biorremediación de hidrocarburos
La descomposición microbiana de hidrocarburos es de considerable
importancia económica y ambiental por los perjuicios que ocasiona.
Una de las principales causas de contaminación del ambiente son los derrames
de petróleo, tal como ocurrió en marzo de 1989 cuando el superpetrolero Exxon
Valdez chocó con varios icebergs en el estrecho del Príncipe Guillermo en
Alaska, derramando 11 millones de galones de petróleo en el
agua ocasionando un impacto ecológico inimaginable cuyo gasto de limpieza
se estimó en (U$ 1500 millones).
Los hidrocarburos varían en su habilidad de ser degradados, los derrames de
estos en el agua tienden a formar laminas en la superficie en donde el viento y
el oleaje crean microscópicas emulsiones. Esto permite que los
microorganismos predominantemente bacterias (pseudomonas, corinebacterias
y micobacterias), algunas levaduras y hasta algas verdes tengan una mayor
superficie de contacto con la partícula, facilitando el acceso a la misma y
permitiendo su degradación.
Pero la biorremediación en el agua se ve afectada por la disponibilidad de
nutrientes debido a que estos generalmente se encuentran en bajas
concentraciones, por lo que generalmente tras un derrame se adiciona fósforo
y nitrógeno como forma de estimular el crecimiento de los microorganismos
que potencialmente degradarán el hidrocarburo.
En el caso de que el derrame sea en el suelo el proceso es diferente, la
oxidación es llevada a cabo por hongos y bacterias y el movimiento del
hidrocarburo es más vertical, además el proceso de humificación tiende a
atrapar el residuo haciéndolo más persistente. En este caso el factor limitante
no está en la disponibilidad de nutrientes sino que la disponibilidad
de oxigeno es baja, por lo que se debe aerear el suelo o agregar peróxido
de hidrogeno (H2O2) para mejora el proceso.
En los derrames, la fracción de hidrocarburo más volátil es evaporada con
facilidad dejando a los componentes alifáticos y aromáticos para ser oxidado
por diversos grupos de microorganismos.
En experimentos llevados a cabo tras los derrames de petróleo se demuestra
que el número de bacterias oxidantes aumenta de 103 a 106 veces poco
después del mismo y en condiciones favorables más del 80 % de los
componentes no volátiles son oxidados entre 6 meses y un año del derrame.
Algunas fracciones, como los hidrocarburos de cadena ramificada y los
policíclicos, permanecen mucho más tiempo en el ambiente principalmente si
llegan a zonas anaerobias ocasionando perjuicios a largo plazo.
3. Biorremediación de Hidrocarburos Aromáticos Polinucleares
Los hidrocarburos aromáticos polinucleares (HAPs) constituyen un grupo de
contaminantes considerado de estudio prioritario debido a sus propiedades
mutagénicas, tóxicas y cancerígenas. En los últimos años la acumulación de
estos a ido aumentado (Menzie et al., 1992).
Una gran variedad de estos compuestos orgánicos no volátiles pueden ser
encontrados en el petróleo contaminante de suelo en donde los niveles de
estos varían, pero generalmente altas concentraciones pueden ser encontradas
en los derrames de hidrocarburos.
El suelo tiene la capacidad de absorber estos compuestos y muchos son
volatilizados en la atmósfera, pero son los microorganismos los principales
degradadores de estos compuestos (Crawford et al., 1993).
Los HAPs consisten en 2 o más anillos benzénicos ya sea en forma simple o
múltiple formando cadenas o racimos y cuanto más anillos tenga el compuesto
más resistente será a la actividad enzimática, (ver tabla 1. donde se describen
las características físicas de los HAPs). Lee and Ryan (Atlas, 1981) notó que la
biodegradación del naphtaleno (2 anillos) era más de 1000 veces superior que
la del benzopireno (5 anillos), en general estructuras conteniendo 4 o más
anillos son difíciles de degradar.
Los estudios de degradación de los HAPs comenzaron hace más de 80 años
cuando Sohgen and Stormer aislaron bacterias capaces de degradar
compuestos aromáticos usándolos como fuente de carbono (Atlas, 1981).
En ambientes acuáticos los principales géneros de bacterias y hongos hallados
son los siguientes, Pseudomonas, Achromobacter, Arthrobacter, Micrococcus,
Nocardia, Vibrio, Acinetobacter, Brevibacterium, Corynebacterium,
Flabobacterium, Candida, Rhodotorula y Sporobolomyces.
En investigaciones realizadas en el suelo mostraron que 11 géneros de hongos
entre los que se destaca Phanerochaetes chrysosporium que es considerado
un microorganismo prometedor debido a la producción de lignasa con alto
potencial de degradar compuestos insolubles de alto peso molecular y 6 de
bacterias fueron los grupos dominantes en la degradación de HAPs.
La degradación bacteriana de estos compuestos normalmente envuelve la
formación cis,dihydrodiol observado por la formación de un diácido como el
ácido cis,cis-mucónico mientras que en eucariotas como los hongos la
oxidación da la formación de trans,dihydrodiol, en ambos casos un diol es un
intermediario indispensable (Alexander, 1977).
Cerniglia y Heitkamp (1989) han sugerido los siguientes principios aplicados a
la degradación de los HAPs.
1) Una gran variedad de bacterias, hongos y algas tienen la habilidad de
degradarlos.
2) La hidroxylación de los HAPs envuelve la incorporación de oxigeno
molecular.
3) Los microorganismos procariotas metabolizan los HAPs con un ataque inicial
de una dioxigenasa para dar cis,dihydrodiol que además es oxidado para
formar dihydroxidos.
4) HAPs con más de 3 anillos de benzeno no sirven como sustrato para
el crecimiento bacteriano lo que hace que deba estar sujeto a una
transformación co-metabólica.
5) Muchos de los genes son codificados por plásmidos.
6) HAPs de bajos pesos moleculares como el naphtaleno son degradados
rápidamente mientras que aquellos de alto peso como el anthraceno o el
benzopyreno son más resistentes.
7) La biodegradación ocurre con mayor eficiencia en la interface
sedimento/agua.
8) La adaptación microbiana puede ocurrir por continuas exposiciones a los
HAPs.
Ultimamente se han desarrollado técnicas de compostaje como forma de
biorremediación.
Dado que si los microorganismos son capaces de degradar compuestos tóxicos
en la naturaleza es de esperar que estos hagan lo mismo en un laboratorio bajo
condiciones optimas. Este tratamiento consiste en la formación de un barro con
el material contaminado y agua.
Tabla 1) Parámetros físicos de los 16 HAPs de mayor prioridad según USEPA.
(PM=peso molecular, PF=punto fusión (ºC), PE=punto ebullición (ºC),
S=solubilidad en agua a 25 ºC)

Nombre Sinónimo Nº de Formula PM PF PE S

anillos

Naftaleno 2 C10H8 128.17 80 218 31.7

Acenaftileno 3 C12H8 152.20 80- 280 -

83

Acenafteno 1,8-Etilennafteno 3 C12H10 154.21 93- 279 3.8

96

Fluoreno 2,3-Bencindeno 3 C13H10 166.22 115 293 1.685

Fenantreno 3 C14H10 178.23 100- 340 1.00

101

Antraceno 3 C14H10 178.23 216 340 0.0446

Fluoranteno Benzo(jk)fluoreno

1,2-Benzacenafteno 4 C16H10 202.26 107- 384 0.206

110

Pireno Benzo(def)fenantren 4 C16H10 202.26 156 393- 0.123

o 404

Benzo(a) 1,2-Benzantraceno 4 C18H12 228.29 157- 438 0.0094

antraceno 155

Criseno 1,2-Benzofenantreno 4 C18H12 228.29 254 448 0.0018

Benzo(b)

fluoranteno 3,4 Benzofluoranteno

Benceno(e)

acefenantrileno 5 C20H12 252.32 163- - 0.0014

 165

Benzo(k) 8,9 Benzofluoranteno

fluoranteno 11,12- 5 C20H12 252.32 217 480 -

Benzofluoranteno

Benzo(a)piren Benzo(def)criseno 5 C20H12 252.32 179 495 0.0038

o

3,4-Benzopireno

Dibenzo(ah)

antraceno 1,2,5,6- 5 C22H14 278.35 266 524 0.0006

dibenzantraceno

Benzo(ghi) 1,12-Benzoperileno 6 C22H12 276.34 279- 510 0.0002

perileno 277

Indeno(1,2,3-
cd)

pireno o-fenilenpireno 6 C22H12 276.34 180- - -

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El tratamiento se efectúa en un biorreactor donde se realiza el proceso en

forma controlada, es decir se suministra nutrientes, se inocula con los
microorganismos deseados, se mantiene en aereación continua, así como
el mantenimiento del pH y la temperatura.
En experimentos en la Universidad de Helsinski con compostaje
de suelos contaminados con clorofenol se observó una decontaminación de los
mismos.
La concentración de clorofenol fue reducida de 212 mg Kg-1 a 30 mg Kg -1
durante 4 meses de compostaje ( Valo and Salkijona-Salonene, 1986), además
se observó que el proceso de descomposición se aceleraba si se inoculaba con
Rhodococcus chlorophenolicus.
El ambiente que se genera en el compostaje está caracterizado por elevadas
temperaturas (>50ºC), alta concentración de nutrientes, suficiente oxigeno y un
pH neutro.
La Shell Research Ltd. delineó diferentes factores que limitan la degradación
de hidrocarburos en el suelo (Morgan and Watkinson, 1989). La optimización
de esos factores puede ser llevada a cabo por un a buen compostaje.
Williams and Keehan (1993) indicaron que los microorganismos que degradan
contaminantes no difieren significativamente entre el suelo y el compostaje. Sin
embargo la potencial transformación varía por diferentes razones.
Primero, la elevada temperatura que se genera en el compostaje incrementa la
cinética enzimática que envuelve el proceso. Segundo, la oportunidad para la
cooxidación puede ser aumentada debido a la variedad de sustratos
presentados.
Tercero, las modificaciones en el microambiente físico y químico del
compostaje pueden servir para aumentar la diversidad microbiológica.
Finalmente, las altas temperaturas aumenta la solubilidad y la transferencia de
masa, esto hace que sea más metabolizado por los microorganismos.
Las altas temperaturas son el factor más determinante en el ambiente del
compostaje, esto se debe a que la presión de selección sobre las bacterias se
ve intensificada por el aumento de temperatura. Finstein, reportó que en
compostajes con temperaturas superiores a 61ºC .las especies bacterianas
decaen drásticamente (Racke and Frink, 1989). Bajas poblaciones a altas
temperaturas en compostaje de suelo con petróleo han sido demostradas por
estudios en la Mankato State University (Goetz, no publicado).
Tanto bacteria termófilas gram positivas como negativas son capaces de
degradar hidrocarburos tal como el género Thermomicrobium y muchos de los
termófilos están obligados a metabolizar hidrocarburos.
Se ha descubierto una bacteria termófila Bacillus licheniformis HA1, el cual es
muy efectivo para iniciar el compostaje. Su rol sería de prevenir la caída del pH
en estadios tempranos del compostaje y permitiría el desarrollo de otros
termófilos contribuyendo entonces con la descomposición de la materia
orgánica en fase termófila del compostaje. (Kiyohiko et al., 1994)
4. Biorremediación de compuestos xenobióticos
Se denomina compuesto xenobióticos (xeno, vocablo que significa extraño) a
aquellos compuestos sintetizados artificialmente por síntesis química con fines
industriales o agrícolas. Aunque estos compuestos pueden ser semejante a los
compuestos naturales muchos son desconocidos en la naturaleza. Así, los
organismos capaces de metabolizarlos no podrían existir en la naturaleza!.
Algunos de los xenobióticos más conocidos son los plaguicidas entre los que
se incluyen herbicidas, insecticidas, nematicidas, funguicidas, etc..
Dentro de los plaguicidas se encuentran los ácidos clorofenoxialquil
carboxílicos, ureas sustituidas, nitrofenoles, triacinas, fenilcarbamato,
organoclorados, organofosforados.
Algunas de estas sustancias pueden actuar como donadores de electrones o
como fuente de carbono para ciertos microorganismos.
Estos compuestos tienen diferencias en la persistencia en el ambiente (ver
tabla 2) pero esa persistencia es aproximada dado que depende de varios
factores ambientales como la temperatura, el pH, la aereación y el contenido de
sustancias orgánicas del suelo. Algunos de los insecticidas clorados pueden
persistir por más de 10 años.
Hay que remarcar que en la degradación de un plaguicida no solo intervienen
los microorganismos, sino que también puede sufrir volatilización, filtración o
degradación química.
Plaguicidas en el suelo
Cuando un plaguicida llega al suelo éste queda sometido a diversos factores
que van a afectar su persistencia. El lavado de los suelos, la degradación
biológica y química, la adsorción por coloides, la volatilización y la absorción
por los cultivos son algunos de éstos factores.
El período en que un pesticida persiste en el suelo es de gran importancia ya
que refleja el tiempo en que la plaga estará sometida al control, afectando la
polución del medio ambiente, su acumulación en plantas, etc..
Tabla 2) Persistencia de herbicidas e insecticidas en los suelos

Sustancia Tiempo para la desaparición

del 75 al 100%

Insecticidas clorados

DDT 4 años

Aldrín 3 años

Clordano 5 años

Heptacloro 2 años

Lindano 3 años

Insecticidas organofosforados

Diazinón 12 semanas

Malatión 1 semana

Paratión 1 semana

Herbicidas

2,4-D(ácido 2,4-diclorofenoxiacético) 4 semanas

2,4,5T(ácido2,4,5,triclorofenoxiacético) 20 semanas

Dalapín 8 semanas

Atrazina 40 semanas

Simazina 48 semanas

Propazina 1.5 años

Degradación microbiana
Durante muchos años se creía que los mecanismos de degradación de los
plaguicidas eran similares en animales y en microorganismos. Pero con el
avance de las investigaciones se apreciaron las diferencias, en animales se da
una conversión de éstos compuestos de forma que puedan ser excretables,
éste proceso se da principalmente en el higado. En microorganismos su
utilización es por el contrario una forma de obtención de energía o fuente de
carbono.
Las vías metabólicas son muy variadas, fermentaciones, respiraciones
anaeróbicas, acción de exoenzimas y procesos quimiolitótrofos pueden ser
encontrados (Matsumura, 1982).
Existen dos formas por la que la cual la microflora puede degradar el
plaguicida.
I) La sustancia favorece el crecimiento microbiano y es empleada como fuente
de carbono, energía y raras veces como fuente de nitrógeno, azufre, etc..
El número de microorganismos aumenta y el aislamiento se realiza utilizando el
plaguicida como única fuente de nutrientes. Luego de que el compuesto fue
degradado las poblaciones decrecen.
II) Por cometabolismo, el compuesto no actúa directamente como fuente de
nutrientes sino que se debe emplear otras como la glucosa, que al disminuir en
el medio inducen las enzimas necesarias para la degradación del plaguicida.
Las reacciones catabólicas ocurren principalmente cuando las dosis de
pesticidas son altas y la estructura química permite su degradación.
(Alexander, 1977) indica una serie de reacciones que pueden ser realizadas
por microorganismos heterótrofos sobre los plaguicidas:
Detoxificación- Conversión de una molécula tóxica en otra no tóxica
(Arthrobacter spp).
Degradación- Transformación de una sustancia compleja en productos más
simples ej. la mineralización que da como
resultado la aparición de CO2, H2O, NH3, etc. (Pseudomonas spp)
Conjugación- Formación de compuestos por reacciones de adición, en donde el
microorganismo combina el plaguicida con metabolitos celulares (adición de
aminoácidos, ácidos orgánicos, etc.).
El estudio de la biodegradación de los plaguicidas no es sencillo en el suelo, ya
que las concentraciones son muy bajas. Se deben emplear cromatografias de
fase gaseosa o líquida, espectrofotometría ultravioleta, para poder detectar
trazas de pesticidas o sus intermediarios de la degradación.