Está en la página 1de 82

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN

Aislamiento y selección de bacterias amilolíticas a partir de residuos de tres variedades


de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨ La Hermelinda¨, Trujillo - La Libertad, de
CI

agosto a octubre, 2017


DE

AUTOR:
CA

Br. Angie Estefany Díaz Vega


TE

ASESOR:

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz


IO
BL
BI

Trujillo – Perú

2018

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

AS
IC
Dr. ORLANDO GONZÁLES NIEVES

G
RECTOR

LO
O
BI
Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ AS
VICE- RECTOR ACADÉMICO
CI
EN

Dr. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS


CI

VICE- RECTOR DE INVESTIGACIÓN


DE
CA
TE
IO

Dr. STEBAN ILICH ZERPA


BL

PROFESOR SECRETARIO GENERAL


BI

ii

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA


UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTRORGAN EL TÍTULO

AS
PROFESIONAL DE BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO

IC
G
LO
Dr. FREDDY MEJÍA COICO

O
DECANO

BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA

Dr. WILLIAN ZELADA ESTRAVER


TE

SECRETARIO
IO
BL
BI

Dr. BERTHA SORIANO BERNILLA

iii

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE


MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

PRESENTACIÓN

AS
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

IC
En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el reglamento de Grados y Títulos
de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la Facultad de

G
Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra

LO
consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:

¨Aislamiento y selección de bacterias amiloliticas a partir de residuos de tres variedades

O
de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨, Trujillo - La Libertad, de

BI
agosto a octubre, 2017 ¨ con el cual pretende obtener el Título Profesional de Biólogo –
AS
Microbiólogo.
CI
EN
CI

Trujillo, Febrero del 2018


DE
CA
TE
IO
BL
BI

________________________________

Br. Angie Estefany Diaz Vega

iv

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

AS
MIEMBROS DEL JURADO

IC
G
Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en

LO
concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y
Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.

O
BI
AS
CI
EN

__________________________
CI

PRESIDENTE
Dra. Manuela Luján Velásquez
DE
CA
TE

____________________________
IO

SECRETARIO
BL

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz


BI

____________________________
VOCAL

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Ms.C. David Zavaleta Verde

APROBACIÓN

AS
Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que el presente

IC
Informe de Tesis titulado: ¨Aislamiento y selección de bacterias amilolíticas a partir

G
de residuos de tres variedades de Ipomoea batata procedentes del mercado¨ La

LO
Hermelinda¨, Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre, 2017 ¨, ha cumplido con los
requisitos formales y fundamentales, siendo APORBADO por UNANIMIDAD

O
BI
AS
__________________________
CI

PRESIDENTE
EN

Dra. Manuela Luján Velásquez


CI
DE
CA

____________________________
SECRETARIO
TE

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz


IO
BL
BI

____________________________
VOCAL
Ms.C. David Zavaleta Verde

vi

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

CERTIFICACIÓN DEL ASESOR

AS
El que suscribe, profesor asesor de la tesis titulada:

IC
G
¨Aislamiento y selección de bacterias amilolíticas a partir de residuos de tres

LO
variedades de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨, Trujillo -
La Libertad, de agosto a octubre, 2017 ¨

O
BI
CERTIFICA: AS
Que ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la Facultad de
CI

Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con


su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado acogiendo las
EN

observaciones y sugerencias alcanzadas.


CI
DE
CA

Por lo tanto, autorizo al Br. Angie Estefany Díaz Vega continuar con el trámite del
reglamento correspondiente.
TE
IO
BL
BI

______________________________
Dr. Luis Alberto Llenque Díaz
ASESOR

vii

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

DEDICATORIAS

AS
A Dios, por darme la oportunidad de

IC
vivir y por estar conmigo en cada
paso que doy, por fortalecer mi

G
corazón e iluminar mi mente y por

LO
haber puesto en mi camino a aquellas
personas que han sido mi soporte y
compañía durante todo el periodo de

O
estudio.

BI
A mi madre Rosita.
AS
Por haberme apoyado en todo momento, por
sus consejos, sus valores, por la
CI

motivación constante que me ha permitido ser


una persona de bien, pero más que nada, por su
EN

amor, te amo Mamá.


CI

A mi padre Jorge.
Por los ejemplos de perseverancia y
DE

constancia que lo caracterizan y que


me ha infundado siempre, por el valor
mostrado para salir adelante, te amo
CA

Papá.
A mis familiares.
A mis hermanos Jorge y Kevin, a mi
TE

sobrinito Anghelo y mi cuñada Mariví, por


su apoyo incondicional y sobre todo, para
IO

demostrarles que todos los sueños y metas


se cumplen con esfuerzo y dedicación, Los
BL

amo.
A mis amigos. A Favio, Analucía,
BI

Roberth, Eduardo, Carolina, Gloria,


Claudio, Que nos apoyamos
mutuamente en nuestra formación
profesional y por su apoyo, y a mis
mejores amigas Giannina, Lucia y
Fiorella, aunque no las he visto en
mucho tiempo, siempre están en mi
corazón, los quiero.

viii

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

AS
AGRADECIMIENTO

IC
A mi Maestro, Dr. Luis Alberto Llenque Díaz, quien se ha tomado el arduo trabajo de

G
transmitirme sus diversos conocimientos, especialmente del campo y de los temas que

LO
corresponden a mi profesión, por su tiempo y paciencia. Pero además de eso, ha sido él
quien ha sabido encaminarme por el camino correcto para lograr una de mis metas y lo
que me proponga.

O
BI
Muchas gracias Maestro, que Dios lo bendiga.
Al Departamento técnico de la Escuela de Microbiología y Parasitología de la
AS
Universidad Nacional de Trujillo, gracias a mis amigos Carlos Guzmán Delgado y Ana
Rocío Cevallos Gonzales por su apoyo incondicional en el desarrollo del presente
CI

proyecto de investigación muchas gracias.


EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

ix

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ÍNDICE

Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo ..................................................... ii

AS
Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas........................................................ iii

IC
Presentación .................................................................................................................... iv

G
Miembros del jurado ....................................................................................................... v

LO
Aprobación ..................................................................................................................... vi

O
Certificación del Asesor ................................................................................................. vii

BI
Dedicatoria.....................................................................................................................viii
AS
Agradecimiento .............................................................................................................. ix
CI

Índice .............................................................................................................................. x
EN

Resumen ......................................................................................................................... xii


CI

I INTRODUCCIÓN ....................................................................................................... 1
DE

Objetivos......................................................................................................................... 11
CA

II MATERIAL Y MÉTODOS........................................................................................ 12

1. Material biológico .............................................................................................. 12


TE

2. Metodología ........................................................................................................ 12
IO

2.1. Recolección y transporte de residuos contaminados ................................... 12


2.1.2 Descripción de las variedades de Ipomoea batata .............................. 13
BL

2.2. Selección primaria ....................................................................................... 14


BI

2.3. Obtención de cultivo puro y verificación de pureza .................................... 14


2.4. Selección secundaria.................................................................................... 15
2.4.1. Reactivación del cultivo .................................................................... 15
2.4.2. Preparación del inóculo ..................................................................... 15
2.4.3. Determinación de producción de amilasa .......................................... 15

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

2.4.4. Medición de la actividad enzimática .................................................. 16


2.5. Elaboración de la curva de calibración para cuantificar almidón ................ 17
2.6. Identificación macroscópica, microscópica y bioquímica de los cultivos
seleccionados ...................................................................................................... 17
2.7. Análisis estadístico de los resultados .......................................................... 18

AS
RESULTADOS .................................................................................................. 19

IC
G
DISCUSIÓN ....................................................................................................... 26

LO
CONCLUSIÓN .................................................................................................. 37

O
BI
RECOMENDACIONES .................................................................................... 38
AS
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................... 39
CI

ANEXOS ............................................................................................................ 48
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

xi

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

RESUMEN

El trabajo de investigación estuvo orientado a aislar y seleccionar bacterias

AS
amiloliticas a partir de residuos de tres variedades de Ipomoea batata (camote). Se

IC
recolectaron residuos de las tres variedades de Ipomoea batata del mercado ¨ La

G
Hermelinda, Trujillo – La Libertad ¨; cada muestra fue lavada, se hicieron diluciones y se

LO
sembró en placas Petri con Agar almidón 0.1 % e incubadas a 37° C por 24 h. Mediante

O
el empleo de la técnica de lugol, se aislaron bacterias amilolíticas con mayor halo de

BI
hidrólisis por variedad de Ipomoea batata. Cada cultivo bacteriano fue reactivado en
AS
placas conteniendo Agar almidón e incubadas a 35° C durante 24 h, se preparó una
CI

suspensión con solución salina fisiológica estéril, equivalente al tubo N° 1 del


EN

nefelómetro de Mac Farland (3.0 x 108 UFC/mL); y se agregó 1 mL del inóculo en Caldo

almidón 0.1 % buffer - fosfato a pH 7.0 e incubó a 30 °C por 72 h, luego se centrifugó.


CI

Al sobrenadante (extracto enzimático), se cuantificó la cantidad de amilasas producidas,


DE

midiendo el almidón residual en el espectrofotómetro y se determinó las unidades

enzimáticas de amilasas (UA/mL) por el método de Street - Close modificado por Cueva.
CA

Se aislaron 45 cultivos de bacterias amilolíticas de residuos de Ipomoea batata, en el cual;


TE

se seleccionaron 27 cultivos bacterianos que presentaron mayor halo de hidrólisis de


IO

almidón y se seleccionaron tres bacterias amilolíticas, ADV1- 12, ADV 2 - 03, ADV 3 -
BL

05 para determinar las UA/mL, destacando el cultivo ADV 3 - 05 como mayor productor
BI

de amilasas con 0.0284 UA/mL. De ellas, las bacterias amilolíticas fueron las que

cumplieron mejor con los dos criterios de selección y proceder a su identificación

mediante la bioquímica preliminar correspondiendo al género Bacillus.

xii

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Palabras clave: bacterias amiloliticas, Ipomoea batata, halo de hidrólisis, UA/mL,

amilasas.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

xiii

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

I. INTRODUCCIÓN

Las principales fuentes comerciales de almidón son: semillas o granos de cereales

(maíz, trigo, sorgo y arroz), tubérculos (papa), camote. Actualmente el 75 % de la

AS
producción mundial de almidón se obtiene a partir del maíz, lo cual obedece a su relativo

bajo costo y a su gran disponibilidad. Los almidones contienen del 17 – 27 % de amilosa

IC
G
y el resto de amilopectina, algunos cereales como el maíz , el arroz y el trigo, presentan

LO
variedades de almidones céreos, los cuales están constituidos principalmente por

O
amilopectina ,pero también existen otras variedades que tienen hasta un 95 % de amilosa

BI
(Buitrago S. et al., 2014).
AS
El camote Ipomoea batata (ANEXO 1) es un excelente productor de energía (114
CI

calorías/100g) debido a que sus preservantes están principalmente compuestas de almidón


EN

y de son azucares, fibras, proteínas, minerales y vitaminas. Mientras más del 50 % de la


CI

producción se destina a consumo humano en forma fresca en África, Asia y América


DE

Latina, el 40 % de la producción en Asia se utiliza actualmente como alimento para

animales (Medina L., 2013).


CA
TE

La mayor parte de la producción de camote en el país se vende como producto


IO

fresco sin valor agregado destinado al consumo interno; sin embargo, en los últimos años
BL

se ha iniciado la transformación de camote en harina y almidón. En el Perú se realizan


BI

investigaciones para el uso de harina y puré de camote como sucedáneo de la harina de

trigo en la incorporación indirecta en la dieta, bajo formas como jarabes azucarados,

bebidas alcohólicas, colorantes para alimentos, obtener enzimas y proteínas en la

industria para la producción de almidón y alcohol (Yañez V., 2012).

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Nuestro país posee la mayor diversidad de variedades de camote del mundo, es

por eso que el programa Nacional de Investigación en Papa y Camote (PNP y C), del

Instituto Nacional de Investigación Agraria (INIA), reinició sus trabajos de investigación

AS
en camote a partir de 1991 ,uno de los logros más importantes ha sido la liberación de

tres variedades de Ipomoea batata: IMPERIAL-INIA es un camote tipo "Kumara" (no

IC
G
dulce), de color de piel y pulpa crema, el INA 100-INA Camote amarillo tipo "Apichu",

LO
color de piel y pulpa naranja intenso, el INIA 306-HUAMBACHERO (camote morado)

O
color de piel morado y pulpa amarilla ( ANEXO 2). Los resultados muestran que la

BI
variedad INIA 306-Huambachero, tiene rendimientos que superan en un 20% a las

variedades tradicionales (Fonseca C. y col., 2002).


AS
CI

El almidón es un hidrato de carbono complejo (C6 H10 O5)n, en forma de grano o


EN

polvo, es la principal molécula de reserva en la mayoría de las plantas, se acumulan en


CI

los cloroplastos de las hojas y en los amiloplastos (Robinson D, 1991).Los gránulos de


DE

almidón son extraídos por medios físicos para su utilización en diversas industrias, entre

las que destaca la industria alimentaria, debido a las propiedades funcionales que imparte
CA

a los productos donde se adiciona (Bello et al., 2000) y sus derivados son utilizados en la
TE

manufactura de una gran variedad de alimentos, fármacos pegamentos, textiles, papel,


IO

empaques y material de construcción (García y col. 2002).


BL
BI

Estudios recientes sugieren que los almidones pueden ser utilizados en la

elaboración de películas comestibles, debido a sus características de barrera a ciertos

gases como el oxígeno (O2), el dióxido de carbono (CO2), el vapor de agua y el etileno,

barrera a aceites y aromas; y a que pueden prolongar la vida útil de productos altamente

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

perecederos como los frutos, conservando sus propiedades sensoriales (Rindlav y

Gatenholm, 2003).

Los gránulos de almidón contienen entre 6 a 16 % de humedad y pequeñas

AS
cantidades de proteínas, lípidos, fósforo y trazas de materiales inorgánicos. El máximo

contenido de humedad sugerida para un almacenamiento seguro en los almidones es de

IC
G
13 % dado que un contenido mayor de humedad puede ocasionar un daño microbiano y

LO
por tanto el deterioro en la calidad del polímero (Moorthy , 2002).

O
BI
El almidón después de la celulosa, es el segundo hidrato de carbono más
AS
abundante en la biosfera. Aunque el contenido de almidón en los vegetales varía según la

fuente de obtención, los más importantes son los cereales (maíz, arroz, trigo) con un
CI

contenido aproximado de 30 a 80 %, en leguminosas (frijol, arveja, haba) un 25 a 50 % y


EN

en tubérculos (papa, yuca) representa un 60 a 90 % de la materia seca. De la producción


CI

mundial de almidón aproximadamente el 83% se obtiene del maíz, después, la fuente más
DE

importante es el trigo con un 7 % y papa con un 6 % (Bernal y Martínez , 2006).


CA

El almidón consiste de dos polisacáridos químicamente distinguibles: la amilosa


TE

y la amilopectina; la amilosa es un polímero lineal de unidades de glucosa unidas por


IO

enlaces α (1-4), en el cual algunos enlaces α (1-6) pueden estar presentes, tiene capacidad
BL

para enlazar moléculas vecinas por puentes de hidrógeno y generar una estructura
BI

helicoidal que es capaz de desarrollar un color azul por la formación de un complejo con

el yodo, mientras que la amilopectina es un polímero ramificado de unidades de glucosa

unidas en un 94-96% por enlaces α (1-4) y en un 4-6% con uniones α (1-6).(Hernández y

col., 2008). La tendencia actual es buscar fuentes no convencionales como alternativas

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

para obtener almidones que presenten diversas características fisicoquímicas,

estructurales y funcionales, que amplíen la gama de usos en la industria (Hernández M ,

et al., 2008).

AS
En cuanto al almidón de camote, (Moorthy , 2004) encontró un contenido de

amilosa de 15,00%-25,00%, un rango similar al reportado por (Tecson , 2007), de 12.90%

IC
G
a 29.70%. Osundahusi et al. (2003), hizo un estudio con dos especies de camote (blanco

LO
y rojo) procedentes de Nigeria, y reportan un rango mayor a 32.00 % para ambas. Debido

O
a la variación en el contenido de amilosa entre las especies de un mismo producto, es

BI
difícil precisar cuál contiene mayor o menor cantidad de amilosa. Entre los rangos
AS
generales, se presenta variaciones en la cantidad de amilosa según la especie de producto

(Vargas y Hernández , 2013).


CI
EN

Este proceso de hidrólisis enzimática consiste en la utilización de enzimas como


CI

catalizadores para romper moléculas de almidón, donde el tipo de enzima más utilizada
DE

en este proceso son las amilasas, siendo las más conocidas la α- amilasa y la β-amilasa;

las primeras desdoblan el almidón en glucosa y maltosa, y se caracteriza por tener la


CA

facilidad de fragmentar los almidones en dextrinas reductoras que no dan color en el yodo
TE

y la segunda convierte la totalidad de almidón en glucosa (Vargas, 2002).


IO
BL

El contenido de estos dos componentes (amilosa y amilopectina), así como la


BI

composición general de los almidones, serán determinantes en las características

estructurales y funcionales de los almidones, condicionando a estos, a que puedan ser

utilizados en un tipo particular de alimento. Por lo tanto, el contenido de amilosa y

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

amilopectina será adecuado o no dependiendo del uso particular el almidón (Vargas,

2002).

En este estudio el bajo contenido de amilosa resultó favorable en el almidón de

camote, ya que le confiere una menor resistencia en el proceso de hidrólisis enzimática

AS
para la obtención de maltodextrinas. El complejo lípidos amilosa en el almidón de camote

fue de 6.15%, este valor puede atribuirse a la interacción de los lípidos en el interior de

IC
G
la hélice de amilosa o entre las cadenas de amilosa y amilopectina. Se han reportado

LO
rangos de interacción de 8.3 % a 15.5% en complejos lípidos amilosa en almidón de

O
tubérculos (Jayakody et al., 2005).

BI
AS
El almidón es usado por las industrias productoras de papel, textiles, alcohol,

combustible, ácidos cítrico, ascórbico, láctico, glucónico, biotina, sorbitol, metil


CI

glucósidos, molduras y empaques biodegradables. También se usa en la minería y en la


EN

industria del látex (Kirby 1992; citado por Alexander y Zobel, 1992). Además de los usos
CI

mencionados anteriormente, que ocurren en el ámbito mundial, en las regiones orientales


DE

de Asia es importante la utilización del almidón de camote en la fabricación de tallarines

(Terosa y Purog, 2001).


CA
TE

La producción industrial ha desarrollado técnicas de aprovechamiento de recursos


IO

o residuos de producción de diversas industrias con el objeto de adquirir enzimas


BL

utilizando sustratos de bajo costo (Terosa y Purog, 2001).Los microorganismos con


BI

características enzimáticas brindan la obtención de metabolitos que puedan ser usados a

nivel industrial, aprovechando procesos de biodegradación de los polisacáridos como el

almidón, celulosa y lignina, que se encuentran de manera abundante en la naturaleza,

específicamente en el material vegetal (Castillo R., et al., 2014).

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

De manera general, los almidones nativos poseen propiedades limitadas debido

a que estos son susceptibles a altas temperaturas, a pH ácido o extremo, presentan bajas

resistencias a altos esfuerzos cortantes. Por todo lo anterior, es necesario recurrir a ciertas

AS
modificaciones físicas y/o químicas, para superar estos inconvenientes. Estas

aplicaciones van desde utilización de almidones modificados para la industria de

IC
G
alimentos, como para aplicaciones no alimentarias como son la industria textil, del papel,

LO
farmacéutica, y sobre todo para la industria de plásticos degradables, en donde los

O
almidones modificados químicamente, tienen un papel importante como una alternativa

BI
para el mantenimiento del equilibrio ecológico (Trujillo C., 2014).
AS
Las enzimas de origen microbiano presentan ventajas técnico-económicas:
CI

poseen tiempos de generación menores, tienen requerimientos de espacio menor por


EN

unidad de enzima producida y una potencialidad ilimitada en cuanto a la disponibilidad


CI

de nuevas enzimas. Los preparados industriales de enzimas, se caracterizan por la


DE

actividad particular de la enzima deseada, por el efecto del pH, temperatura, tiempo de

reacción, concentraciones de la enzima y del sustrato, así como el efecto de los


CA

inhibidores o activadores, que pueden presentarse en las aplicaciones industriales.(


TE

Guadarrama A., et al., 2017).


IO
BL

Las enzimas convierten a los procesos industriales en eficientes y menos costosos,


BI

por su alto grado de especificidad y adaptabilidad según lo reportado por (Prescott y col.

2012). Acumulan más material procesado y consumen menos cantidad de energía, su

labor hidrolítica implica la ruptura de un enlace mediante la adición de los elementos del

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

agua, por lo que los polisacáridos son degradadoras hasta monosacáridos, como es el caso

de la hidrólisis de almidón a glucosa (Villalba L., et al., 2004).

En la industria alimentaria, las enzimas hidrolíticas nos ofrecen la ventaja de

AS
reducir viscosidad (hidrólisis), mejorar las extracciones (degradación de pectina), hacer

bioconversiones (glucosa a fructosa), causar separaciones (separación del suero en

IC
G
queso), sustituir ingredientes y coadyuvantes en procesos, ahorrar con procesos más

LO
eficientes obteniendo menos subproductos indeseados y mayor capacidad de planta con

O
un incremento de rendimiento de producto, ganancia y mejorar propiedades deseables

BI
obteniendo un producto único, jarabe de alta concentración de fructosa (Bocanegra y

Gallardo , 2005).
AS
CI

Una de las propiedades características de las enzimas es su capacidad de catalizar


EN

ciertas reacciones químicas bien definidas y su presencia se detecta, en general, por la


CI

reacción que cataliza; y la cantidad de la misma se estima a partir de la velocidad de la


DE

reacción; en este sentido, las amilasas son enzimas que degradan el almidón dando como

productos dextrinas y polímeros compuestos progresivamente por unidades de glucosa


CA

(Rodríguez Z., et al., 2006).


TE
IO
BL

Las bacterias amiloliticas tienen numerosas aplicaciones biotecnológicas, un


BI

ejemplo de ello es la producción de jarabes, que contienen oligosacáridos como maltosa

y glucosa. Las otras propiedades y los mecanismos de acción de las amilasas dependen

del origen de las mismas, generalmente las α - amilasas son estables entre pH 5.5 y 8.0

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

en presencia de un componente de calcio con un óptimo entre 4.8 y 6.5 (Dhawale M, y

col.1982).

Se aislaron y se evaluaron bacterias amilolíticas, midiendo el diámetro de los de

AS
halos hidrólisis, producto de la degradación enzimática, de acuerdo a la fórmula: A-B =

C; donde A es el diámetro de la colonia más el halo de hidrólisis, B es el diámetro de la

IC
G
colonia y C es el resultado de la diferencia de las dos medidas. Se seleccionaron los

LO
microorganismos de acuerdo al diámetro del halo y al número de sustratos degradados

O
(Vargas S., 2002).

BI
AS
El proceso de hidrólisis de almidón ocurre mediante varias etapas catalizados por

enzimas entre las que destacan las alfa - amilasa, beta – amilasa, glucoamilasas y otras, y
CI

al parecer solo las alfa - amilasas pueden atacar gránulos de almidón intactos, y la beta-
EN

amilasa y glucoamilasa, actúan sobre los primeros productos liberados por la alfa-
CI

amilasa, que hidroliza de manera aleatoria enlaces α- 1,4 en las moléculas de amilosa y
DE

amilopectina al principio creando huecos al azar en los granos de almidón y liberando

productos que aún son grandes (Pandey A., y col.2000).


CA
TE

La modificación del sustrato también implica cambiar la naturaleza de los


IO

nutrientes que utilizan los microorganismos. En el engranaje del metabolismo celular, los
BL

microorganismos amilolíticos liberan al medio parte de su batería enzimática para utilizar


BI

los sustratos disponibles. Entre las exoenzimas que se liberan se encuentran las amilasas

.Estas desempeñan un papel fundamental en la utilización del almidón como fuente

energética (Rodríguez C., y col. 2006).

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

La selección está encaminada a elegir las cepas que presentan mayor

producción de amilasa, utilizando placas de agar almidón midiendo la zona de

decoloración producida al agregar el reactivo de iodo la enzima alfa-amilasa, que es una

enzima inducible, su producción depende de la presencia de la sustancia que actúa como

AS
inductor (almidón, se emplea un medio diferencial para distinguir las cepas productoras

de amilasa. Las características de las bacterias seleccionadas se dilucidan hasta donde es

IC
G
posible, mediante observaciones y ensayos para acumular datos que permitan realizar la

LO
comparación con las descripciones de varias especies publicadas en el Manual Bergeys

O
(Bergeys D., 2000).

BI
AS
A nivel de laboratorio, la selección de cepas amilolíticas se realiza mediante la

prueba de lugol, siendo esta positiva. El principio de esta prueba se basa en la incapacidad
CI

que presenta el lugol para pigmentar las zonas en las que el almidón ha sido hidrolizado
EN

por acción enzimática o microbiana; por esta razón se utiliza esta prueba para la
CI

determinación rápida de microorganismos que producen enzimas amilolíticas, ya que esta


DE

prueba permite el reconocimiento de las mismas por la formación de un halo no

pigmentado y de diámetro variable alrededor de aquellas colonias que sintetizan este tipo
CA

de enzimas ( Badia M.,et al., 2011).


TE
IO

Una manera fácil y rápida para obtener carbohidratos con propiedades funcionales
BL

específicas es a través de la hidrólisis del almidón. El equivalente de dextrosa(ED) es una


BI

medida del grado de hidrólisis de la molécula de almidón, y se define como el contenido

de azúcar reductores directos (ARD) expresado en por ciento de glucosa en una base seca.

Dependiendo del grado de hidrólisis de la molécula de almidón se puede obtener toda una

gama de productos que, de acuerdo con su contenido de ED, se clasifican en

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

maltodextrinas y jarabes; las maltodextrinas presentan un ED< 20, y los jarabes tienen un

ED≥ 20 (McPherson y Sei, 1997).

Actualmente en nuestra región La Libertad - Perú no se han profundizado estudios

de producción de amilasas a partir de residuos de ciertas variedades de Ipomoea batata,

AS
con características diferentes a las ya comercializadas. Las enzimas α - amilasas

convierten a los procesos industriales en eficientes y menos costosos, por su alto grado

IC
G
de especificidad y adaptabilidad, en el cual acumulan mayor cantidad procesado y

LO
consumen menos cantidad de energía, por lo que su labor hidrolítica implica la ruptura de

O
un enlace mediante la adición de los elementos del agua, por lo que los polisacáridos son

BI
degradados hasta monosacáridos, como es el caso de la hidrólisis de almidón a glucosa.
AS
Los mercados de nuestra región generan grandes cantidades de residuos de
CI

diferentes variedades de camote y son eliminados al ambiente contribuyendo con la


EN

contaminación con bacterias que tienen la capacidad de hidrolizar la amilosa presente en


CI

estos residuos. Por otro lado la comunidad industrial y empresarial, necesita de


DE

microorganismos productores de amilasas para utilizarlos en la obtención de jarabes

glucosados y ser aprovechados por ejemplo de la producción de bioetanol a gran escala.


CA

Por consiguiente, se pretende aprovechar estos residuos amiláceos para aislar y


TE

seleccionar especies nativas de bacterias amiloliticas, cuyas enzimas son fácilmente


IO

recuperables de los medios de producción, además nos permitirá contar con cepas
BL

bacterianas para producir enzimas a nivel comercial y ser utilizadas en la hidrólisis del
BI

almidón a gran escala. Según lo expuesto, ¿Es posible aislar y seleccionar bacterias

amiloliticas con mayor producción de amilasas a partir de residuos de tres variedades de

camote procedentes del mercado La Hermelinda, Trujillo - La Libertad, de agosto a

octubre, 2017?

10

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Objetivos

General:

AS
1. Seleccionar bacterias amilolíticas con mayor producción de amilasas a partir

de residuos de tres variedades de Ipomoea batata (camote) del mercado La

IC
G
Hermelinda Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre, 2017.

LO
O
BI
Específicos:
AS
1. Aislar y seleccionar bacterias amilolíticas a partir de residuos de tres variedades
CI

de Ipomoea batata del mercado La Hermelinda Trujillo - La Libertad, de


EN

agosto a octubre, 2017.


CI
DE

2. Determinar la cantidad de amilasas producidas por las bacterias amilolíticas

seleccionadas en cultivo líquido en caldo almidón 0.1 % buffer fosfato a pH


CA

7.0.
TE
IO

3. Determinar si existe o no diferencia significativa entre las cantidades de


BL

enzimas producidas entre las bacterias amilolíticas seleccionadas.


BI

4. Identificar los géneros de las bacterias amilolíticas seleccionadas con mayor

producción de amilasas.

11

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

II. MATERIAL Y MÉTODOS

1. MATERIAL BIOLÓGICO

AS
Residuos de tres variedades de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨La

IC
G
Hermelinda, Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre, 2017¨. (ANEXO 3).

LO
O
2. METODOLOGÍA

BI
2.1. RECOLECCIÓN, TRANSPORTE DE RESIDUOS CONTAMINADOS
AS
Y DESCRIPCIÓN DE LAS VARIEDADES DE Ipomoea batata
CI

2.1.1. RECOLECCIÓN, TRANSPORTE DE RESIDUOS


EN

CONTAMINADOS
CI

Se recolectó tres residuos por cada variedad de Ipomoea batata


DE

(muestra), se hizo un registro de las características físicas (tamaño y

color aparente), y fueron colocadas en bolsas de polietileno de primer


CA

uso con su respetiva rotulación indicando la variedad de Ipomoea


TE

batata y la fecha de la toma de muestra. (ANEXO 4) Inmediatamente


IO

fueron transportadas en un cooler con cámara de frio hasta el


BL

laboratorio de Fisiología Microbiana del Departamento de


BI

Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo

y se procedió a su respetivo estudio. Este procedimiento se repitió dos

veces más.

12

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

2.1.2. DESCRIPCIÓN DE LAS VARIEDADES DE Ipomoea batata:

Las variedades de camote recolectados como residuos contaminados

con bacterias amilolíticas, según C. Fonseca y col., 2002 tuvieron las

AS
siguientes características físicas:

IC
G
LO
VARIEDAD Registro de las características físicas Código

O
(color aparente)

BI
IMPERIAL-INIA Es un camote tipo "Kumara" (no dulce), de
AS 1
color de piel y pulpa crema.
CI

INA 100-INA Camote amarillo tipo "Apichu", color de piel


2
y pulpa naranja intenso.
EN
CI

INIA 306-HUAMBACHERO Es un camote de color de piel morado y 3


pulpa amarilla.
DE
CA
TE
IO
BL
BI

13

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

2.2 AISLAMIENTO Y SELECCIÓN PRIMARIA

Las muestras fueron lavadas con agua estéril, se pesó 100 g de las porciones

afectadas, se trozó y homogenizó con la ayuda del pistillo del mortero. Luego se

AS
agregó 100 mL de solución salina fisiológica estéril (SSFE), se agitó

manualmente por 5 min. Luego se realizó las respetivas diluciones al décimo

IC
(10-1,10-2 y 10-3, 10-4, 10-5) por cada muestra.

G
LO
Se sembró por superficie 0,1 mL de las 2 últimas diluciones (10-4, 10-5), en 2

O
BI
placas Petri con Agar Almidón (AA) (ANEXO 5), por variedad de Ipomoea
AS
batata, e incubó a 35 °C y se observó el crecimiento de las colonias por 24 h.

(ANEXO 6). De las placas que presentaron colonias aisladas (ANEXO 7), se
CI

vertió el lugol en las zonas circundantes a las colonias para verificar los halos de
EN

hidrólisis (ANEXO 8).


CI

Se seleccionaron a los mejores cultivos que presentaron mayor halo de hidrólisis


DE

≥ a 10 mm de diámetro (ANEXO 9).


CA

2.3. OBTENCIÓN DE CULTIVO PURO Y VERIFICACIÓN DE PUREZA


TE
IO

Cada cultivo seleccionado fue subcultivado por estría en AA (ANEXO 11) se


BL

incubaron a 35 °C durante 24 h. y rotulados en orden correlativo, luego se


BI

conservó en refrigeración. La verificación de la pureza se hizo mediante la

tinción Gram y observación microscópica (ANEXO 23).

Cada cultivo seleccionado fue rotulado de la siguiente manera:

14

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ADV 1 – 01, ADV2 – 01, ADV 3 – 01 y así sucesivamente.

Las tres primeras corresponden a los datos personales del autor, el número

subíndice, indica la variedad, los números siguientes indica el orden correlativo

de aislamiento.

AS
2.4 SELECCIÓN SECUNDARIA

IC
G
LO
2.4.1. Reactivación del cultivo

O
BI
De cada cultivo bacteriano seleccionado se reactivó por estría en placas

conteniendo AA e incubados a 35°C por 24 h.


AS
CI
EN

2.4.2. Preparación de inóculo


CI
DE

A partir del cultivo reactivado se realizó una suspensión en SSFE equivalente

al tubo ° N 1 del Nefelómetro de Marc Farland (3.0 × 108 UFC /mL), (ANEXO
CA

12).
TE
IO

2.4.3. Determinación de la cantidad de amilasa


BL
BI

En un tubo de ensayo se colocó 9 mL de Caldo Almidón 0.1 % - buffer - fosfato

a pH 7.0 (Anexo 13) y se agregó 1 mL de inóculo, se homogenizó manualmente

y se colocó a incubación a 30°C por 72 h, después se centrifugó el contenido a

4000 rpm por 10 min (ANEXO 14); y se cuantificó la cantidad de amilasas

15

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

producidas, midiendo el almidón residual en el espectrofotómetro y se

determinó las unidades enzimáticas de amilasas (UA/mL) por el método de

Street - Close modificado por Cueva.

AS
Se colocó 1 mL de sobrenadante en un tubo de ensayo conteniendo 9 mL de

Caldo Almidón 0.1 % buffer fosfato a pH 7.0, e incubó a 24 °C por 60 min.

IC
G
Posteriormente se centrifugó el contenido a 4000 rpm por 10 min. (ANEXO

LO
15).

O
BI
2.4.4. Medición de la actividad enzimática
AS
CI

La evaluación de la actividad enzimática se realizó mediante el método de


EN

Street – Close modificado por Cueva. En un tubo de ensayo (problema) se


CI

colocó 2.5 mL de solución de Almidón al 0.04 % - buffer - fosfato a pH 7.0 y


DE

0.5 mL de ADE, se mezcló y pre incubó a 37 °C por 5 min. a una T° óptima

para su crecimiento , luego se agregó 1 mL del sobrenadante (extracto


CA

enzimático), se mezcló e incubó a 37 °C por 60 min.


TE
IO

Luego se agregó 2.5 mL de HCl 0.1N; seguidamente, se agregó 0.5 mL de


BL

solución yodada. Se consideró un tubo testigo al que se le agregó 2.5 mL Caldo


BI

almidón 0.1 % buffer - fosfato a pH 7.0 después de haberle agregado 2.5mL

de HCl, se incubó en las mismas condiciones. Las lecturas de las absorbancias

se realizaron en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 580 nm

(ANEXO 16).

16

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

La cantidad de almidón hidrolizado se calculó a partir de la diferencia entre el

almidón inicial y el almidón residual.

Una unidad de actividad amilolitica (UA) fue definida como el total de enzimas

AS
presentes en el sobrenadante que es capaz de hidrolizar 20 mg de almidón en

60 minutos a pH 7.0 a 23 – 25 °C ( Vargas, 2002).

IC
G
LO
2.5. ELABORACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN PARA

O
CUANTIFICAR ALMIDÓN

BI
AS
Se trabajó con una concentración de almidón al 0.04 % y se colocó 0.2, 0.4,

0.6, 0.8, 1.0 mL en tubos de ensayo; posteriormente se aforó a 3 mL con agua


CI

destilada (AD); luego se agregó a cada tubo 2.5 mL de HCl 0.1 N y 0.5 mL de
EN

solución yodada. (ANEXO 17 Y 18). Las lecturas de las absorbancias se


CI

realizaron en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 580 nm (ANEXO


DE

19, 20, 21,22).


CA
TE

2.6. IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA, MICROSCÓPICA Y


IO

BIOQUÍMICA PRELIMINAR DE LOS CULTIVOS SELECCIONADOS


BL
BI

Se detallaron las características macroscópicas (color, borde, textura) y

microscópicas (Coloración Gram), coloración de Wirtz (ANEXO 23, 24, 25,

26) de las bacterias amilolíticas seleccionadas por cada variedad de Ipomoea

batata. Además se realizó la diferenciación bioquímica respectiva de acuerdo

17

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

a lo establecido en el Manual de Bergeys of Determinative Bacteriology

(ANEXO 27, 28,29).

AS
2.7. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS

Los valores de la producción de amilasas (UA/mL) en cada ensayo realizado

IC
G
por triplicado de cada uno de los cultivos bacterianos seleccionados fueron

LO
analizados mediante la prueba estadística del Análisis de Varianza (ANOVA)

O
con un nivel de significancia del 0,05% para establecer si existe o no diferencia

BI
significativa (Tabla N°6).
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

18

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

III. RESULTADOS

En la Tabla N° 1 se muestra el tamaño promedio de halo de hidrólisis en placa con

Agar almidón (AA) de las 45 bacterias amilolíticas aisladas a partir de residuos de

AS
tres variedades de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨,

Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre, 2017.

IC
G
En la Tabla N° 2 se muestra el tamaño promedio de halo de hidrólisis en placa con

LO
Agar almidón (AA) de las 27 bacterias amilolíticas seleccionadas a partir de residuos

O
de tres variedades de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨,

BI
Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre, 2017. AS
En la Tabla N° 3. se muestran las características macroscópicas y microscópicas de
CI

los tres cultivos bacterianos seleccionados a partir de residuos de tres variedades de


EN

Ipomoea batata procedentes del mercado ¨ La Hermelinda¨ Trujillo - La Libertad, de


CI

agosto a octubre, 2017.


DE

En la Tabla N° 4. se observa la producción de unidades amiloliticas (UA/mL) de los

tres cultivos bacterianos seleccionados (ADV1 - 12, ADV2 - 03, ADV3 – 05) a partir
CA

de residuos de tres variedades de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨ La


TE

Hermelinda¨ Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre, 2017.


IO

En la Tabla N° 5. se observa los resultados de las pruebas bioquímicas de los tres


BL

cultivos bacterianos para la identificación de género.


BI

En la Tabla N°6 se observa La prueba estadística ANOVA Statistics 20, que se

aplicó a los valores promedios UA/mL producidas por los cultivos ADV1 - 12, ADV

2- 03, ADV 3 - 05 .

19

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Tabla N° 1. Aislamiento de 45 cultivos bacterianos a partir de muestras de residuos de


tres variedades de Ipomoea batata con sus respectivas mediciones del halo de
hidrólisis en Agar almidón (AA).

V1 V2 V3

De

AS
Cultivo Halo de hidrólisis Cultivo Halo de hidrólisis Cultivo Halo de hidrólisis
muestreo

IC
ADV1 - 01 5 ADV2 - 01 7 ADV3 - 01 8

G
1 ADV1 - 02 15 ADV2 - 02 15 ADV3 - 02 5

LO
ADV1 - 03 13 ADV2 - 03 16 ADV3 - 03 16

O
ADV1 - 04 8 ADV2 - 04 6 ADV3 - 04 15

BI
ADV1 - 05 14 ADV2 - 05 14 ADV3 – 05 18
AS
ADV1 - 06 13 ADV2 – 06 16 ADV3 – 06 17
CI

2
EN

ADV1 - 07 5 ADV2 – 07 6 ADV3 – 07 16

ADV1 - 08 14 ADV2 – 08 15 ADV3 – 08 8


CI

ADV1 - 09 9 ADV2 – 09 8 ADV3 – 09 9


DE

ADV1 - 10 13 ADV2 - 10 14 ADV3 - 10 15


CA

ADV1 - 11 14 ADV2 - 11 15 ADV3 - 11 18


3
TE

ADV1 - 12 15 ADV2 - 12 14 ADV3 - 12 8


IO

ADV1 - 13 16 ADV2 – 13 5 ADV3 - 13 16


BL

ADV1 – 14 7 ADV2 - 14 6 ADV3 – 14 8


BI

ADV1 – 15 8 ADV2 - 15 16 ADV3 - 15 16

20

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Tabla N° 2. Tamaño promedio de halo de hidrólisis en placa de las 27 bacterias

amilolíticas seleccionadas de las tres variedad de Ipomoea batata

procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨, Trujillo - La Libertad, de

agosto a octubre, 2017.

AS
Variedad de Ipomoea batata

IC
N° muestreo

G
V1 V2 V3

LO
Código de Halo de Código de Halo de Código de Halo de
cultivo hidrolisis cultivo hidrólisis

O
cultivo hidrólisis
(mm) (mm) (mm)

BI
ADV1 - 02 15 ADV2 - 02 15 ADV3- 03 16

1
AS
ADV1 – 03 13 ADV2 - 03 16 ADV3 - 04 15
CI

ADV1 - 15 14 ADV2 - 05 14 ADV3 – 05 18


EN
CI

ADV1 - 06 13 ADV2 – 10 14 ADV3 – 07 16


2
DE

ADV1 - 08 14 ADV2 – 06 16 ADV3 – 06 17


CA

ADV1 - 10 13 ADV2 - 08 15 ADV3 - 10 15


TE

ADV1 - 12 15 ADV2- 12 14 ADV3 - 13 16


3
IO

ADV1 - 11 14 ADV2 – 11 15 ADV3 - 11 18


BL
BI

ADV1 - 13 16 ADV2 - 15 16 ADV3 – 15 16

21

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Tabla N° 3. Características macroscópicas y microscópicas de los tres bacterias

amilolíticas seleccionadas de muestras de residuos de tres variedades

de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨, Trujillo

- La Libertad, de agosto a octubre, 2017.

AS
IC
G
Características Características

LO
Código Macroscópicas Microscópicas

O
del cultivo Reacción Forma

BI
AS Gram

Colonias grandes, cremosas y Bacilos


CI

ADV1 - 12 brillantes, presentan bordes + grandes.


EN

irregulares.
CI

Colonias grandes, cremosas y Bacilos

ADV2 - 03 brillantes, presentan bordes + grandes.


DE

irregulares.
CA

Colonias grandes , bordes irregulares Bacilos

ADV3 - 05 aplanados, de color blanco mate, + grandes.


TE

aspecto harinoso o cremoso,


IO
BL
BI

22

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Tabla N° 4. Producción de unidades amilolíticas (UA/mL) de las tres bacterias

amilolíticas seleccionadas a partir de residuos de tres variedades de

Ipomoea batata procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨, Trujillo -

La Libertad, de agosto a octubre, 2017.

AS
IC
UA/mL

G
Cultivos Promedio

LO
bacterianos 1 2 3

O
BI
ADV 1 - 12 0.0279 0.0279 0.0278 0.0278
AS
ADV 2 - 03 0.0237 0.0260 0.0271 0.0256
CI
EN
CI

ADV 3 - 05 0.0020 0.0558 0.0274 0.0284


DE
CA

p > 0.05
TE
IO
BL
BI

23

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Tabla N° 5. Resultados de las pruebas bioquímicas de tres bacterias amilolíticas

seleccionadas a partir de residuos de tres variedades de Ipomoea batata

procedentes del mercado ¨La Hermelinda¨, Trujillo - La Libertad, de

agosto a octubre, 2017 para la identificación de género.

AS
IC
G
Pruebas ADV1 - 12 ADV 2 - 03 ADV 3 - 05

LO
Bioquímicas

- - -

O
Lisina

BI
+ + +
SIM
- - -
AS
Citrato
+ + +
CI

Glucosa (TSI)
- - -
EN

Urea
+ + +
catalasa
CI

Hidrólisis de + + +
DE

almidón
Manitol + + +
Género Bacillus sp. Bacillus sp. Bacillus sp.
CA
TE

Leyenda:
ADV1: Variedad 1
IO

ADV 2: Variedad 2
BL

ADV 3: Variedad 3
(-): Negativo
BI

(+): Positivo

24

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Tabla N° 6. Prueba estadística del Análisis de varianza (ANOVA) de los valores


promedio de UA/ mL producidas por los cultivos ADV 1 – 12, ADV 2
– 03, ADV 3 – 05.

ANOVA de un factor
Unidades Amilásica

AS
Suma de gl Media F Sig.
cuadrados cuadrática
Inter- 12526.222 2 6263.111 .522 .618

IC
grupos
Intra- 72034.667 6 12005.778

G
grupos

LO
Total 84560.889 8

O
BI
Unidades Amilásica
Repeticiones N Subconjunto
AS
para alfa =
0.05
1
CI

HSD de 2,00 3 256.0000


Tukeya 1,00 3 278.6667
EN

3,00 3 344.0000
Sig. .613
CI

Duncana 2,00 3 256.0000


1,00 3 278.6667
3,00 3 344.0000
DE

Sig. .378
Se muestran las medias para los grupos
en los subconjuntos homogéneos.
CA

a. Usa el tamaño muestral de la media


armónica = 3,000.
TE
IO

La prueba estadística ANOVA se trabajó con IBM SPPS Statistics 20, que se aplicó a
BL

los valores promedios UA/mL producidas por los cultivos ADV1 - 12, ADV 2 - 03, ADV
3 - 05 se determinó que no hubo diferencia significativa (p> 0.05), lo que permite
BI

concluir que los tres cultivos bacterianos evaluados, producen la misma cantidad de
enzimas UA/mL, independiente del tipo de variedad de Ipomea batata que fue aislado.

25

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

IV. DISCUSIÓN

Los microbios subsisten en un habitad en particular cuando éste le provee de

material nutritivo y las condiciones ambientales para su desarrollo y crecimiento; así

AS
mismo, su interacción con los diferentes residuos orgánicos (camote, papa, yuca, etc.)

IC
induce intracelularmente la síntesis y excreción de las enzimas necesarias para

G
degradarlos en moléculas más sencillas que son importantes para la síntesis de nuevo

LO
material celular que se traduce en una población microbiana ya que representan el 90

O
% del total producidas en la industria (Arellano y Olmos, 2000).En este sentido, en

BI
los mercados de la región La Libertad se descartan gran cantidad de residuos
AS
orgánicos de Ipomoea batata compuesto en su mayoría de almidón, la cual puede ser
CI

degradada por microorganismos amilolíticos, principalmente bacterias, entonces a


EN

partir de estos residuos se logró obtener bacterias capaces de sintetizar enzimas


CI

encargadas de hidrolizar dicho sustrato (ANEXO 2).


DE

Las características fisiológicas de los microorganismos hacen el uso de un


CA

mismo sustrato para la captación del medio y crecimiento posterior, facilite el

aislamiento de cepas que utilicen componente energético presente en él.


TE

Investigaciones reportadas por (Anon 2003a y Peters 2004) planteó que el sustrato
IO

determina, desde el punto de vista fisiológico - nutricional, los microorganismos que


BL

forman un ecosistema. Esto justifica la presencia de microorganismos amilolíticos en


BI

altas concentraciones (10-11), lo que no sólo denota el dominio de este grupo

fisiológico, sino que indica, además, la gran capacidad para facilitar el uso de la

energía, a partir del almidón, el cual constituye más del 80 % de los carbohidratos

del Ipomoea batata.

26

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Se recolectaron y procesaron las muestras a partir de residuos de tres

variedades de Ipomoea batata (camote) procedentes del mercado ¨la Hermelinda¨

Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre, 2017 y se logró aislar 45 cultivos

bacterianos en placas con Agar almidón (AA); en el cuál, en el (ANEXO 7), se

AS
observaron las características microscópicas y macroscópicas de los cultivos

bacterianos siendo estas colonias cremosas, medianas y de bordes irregulares; y de

IC
G
acuerdo a sus características tintoriales fueron bacilos Gram positivos(ANEXO 24),

LO
esporulados (ANEXO 25); y se seleccionaron 27 bacterias amiloliticas que

O
presentaron mayor halo de hidrólisis sobre el almidón en placa, la selección primaria

BI
de estos cultivos se hizo en base a su capacidad hidrolítica sobre el almidón (ANEXO

8) según lo reportado por (Villanueva y col. 2007).


AS
CI

Los cultivos con mayor capacidad hidrolítica sobre el almidón se logró


EN

mediante la actividad enzimática, los cuales fueron realizados mediante el método de


CI

Street – Close modificado por Cueva, en el cual las lecturas de las absorbancia que
DE

se realizaron en el espectrofotómetro fue a una longitud de onda de 580 nm. (ANEXO

17), la cantidad de almidón hidrolizado se calculó a partir de la diferencia entre el


CA

almidón inicial y el almidón residual, después de la actividad enzimática.


TE
IO

Se seleccionó a 3 cultivos bacterianos que presentaron mayor halo de


BL

hidrólisis en Agar almidón (AA), los cultivos bacterianos seleccionados fueron

(ADV 1 – 12, ADV2 - 03, ADV 3 - 05), donde: ADV 1 - 12 = 15 mm, ADV2 - 03 =
BI

16 mm, ADV 3 - 05 = 18 mm (ANEXO 9), siendo el cultivo ADV 3 – 05 el que

presentó mayor halo de hidrólisis con 18 mm de diámetro a diferencia de los otros

dos cultivos que presentaron menor halo de hidrolisis.

27

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Los cultivos bacterianos seleccionados fueron (ADV 1 - 12, ADV2 - 03,

ADV 3 - 05).En el cuál; ADV 1 - 12 presentó 0.0278 UA/mL, ADV2 - 03 presentó

0.0256 UA/mL y el cultivo ADV 3 - 05 presentó 0.0284 UA/mL, que es mayor en

comparación con los otros dos cultivos bacterianos. Según lo reportado por Mai, N.

AS
T., y col. Evaluaron 25 bacterias productoras de amilasa aisladas de suelos , de las

cuales se identificaron a Bacillus stearothermofilos y Bacillus licheniformis, ambas

IC
G
productoras de amilasa , la actividad amiloliticas encontrada fue de 19, 11, 15 y 13

LO
UA/mL respectivamente, en el que usaron almidón de yuca como fuente de carbono

O
en un medio basal compuesto por extracto de carne, extracto de levadura , fosfato de

BI
potasio, sulfato de amonio, sulfato de magnesio y cloruro de sodio a pH 7.4 y
AS
temperatura de 55 °C.( Vargas , 2002).En esta investigación las UA/mL obtenidas en

el que usaron almidón de yuca en un medio basal, son muy elevados en comparación
CI

a las UA/mL a partir de residuos de tres variedades de Ipomoea batata, debido a que
EN

el medio basal de yuca les proporcionó mayor cantidad de nutrientes para las
CI

bacterias aisladas respectivamente y así poder aumentar la excreción de enzimas


DE

amilasas.
CA

De los estudios que citaremos, se encontró que el contenido de amilasa en el


TE

almidón de yuca varía según la especie analizada, y que esa cantidad es afectada por
IO

la edad del cultivo o el clima. Lo anterior se puede ver en los resultados obtenidos en
BL

el estudio realizado por Onitilo (2007), en África, quien analizó cuatro especies de
BI

yuca, en él que encontró contenidos de amilasa entre 20.01 a 20.47 UA/mL; mientras

que Moorthy (2004), menciona en su revisión bibliográfica un rango más amplio,

que va desde el 20.00 al 27.00 UA/mL, además, indica que de este total de UA/mL,

aproximadamente el 40% corresponde a amilasa soluble. Vargas et al. (2012),

28

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

mencionan que para variedades de yuca cultivadas en Costa Rica (Valencia y

Brasileña), los contenidos son del 37% y 38% respectivamente. Lo anterior denota la

variabilidad en el contendido de amilasa/ amilopectina que pueden tener los mismos

productos de diferente origen. Se encontró también, que el contenido de amilopectina

AS
en el almidón de yuca según (Onitilo et al. 2007), es de 79.53% a 79.99%.

IC
G
En otras investigaciones realizada por (Hungate, 1962) en Ipomoea batata,

LO
obtuvieron un total de 32 cepas puras. Después de atender a sus características

O
macroscópicas y microscópicas, realizaron observaciones con el microscopio y

BI
llevaron a cabo tinciones diferenciales, se pudo determinar que, de los aislamientos
AS
realizados en las bacterias, 6.25 %, 9.37 % fueron bacilos Gram negativos, 25 %

correspondieron a cocos Gram positivos y 34.3 % fueron bacilos Gram positivos.


CI

De estos, uno tenía capacidad de esporulación y el 34.4 % correspondió a cepas


EN

fúngicas. Como resultado encontró que el 66 % de las cepas aisladas posee


CI

capacidad amilolítica. En esta investigación se confirma la presencia de


DE

microrganismos acompañantes como bacterias Gram negativas, que al no presentar

halo de hidrólisis sobre el almidón no fueron aisladas ni seleccionadas al inicio de la


CA

investigación; sim embargo, si se obtuvo bacterias amilolíticas Gram positivas en los


TE

residuos de las tres variedades de Ipomoea batata.


IO
BL

El 83 % de las cepas bacterianas, al igual que el 100% de las fúngicas y de


BI

levaduras con capacidad amilolítica, presentaron índices similares o superiores al de

las cepas control en el cual la levadura asignada como LRO presentó un diámetro de

halo de hidrólisis de LRO = 5.5 mm y la levadura asignada como LRP presento un

diámetro de halo de hidrólisis de LRP= 5 mm

29

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Aspergillus nigger y A. oryzae tienen una capacidad amilolitica reconocida en el cual

A.nigger = 33.5 mm de halo de hidrólisis y A. oryzae = 33 mm, los índices de

capacidad amilolitica encontrados en esta investigación son importantes para

describir las características fisiológicas de estos microorganismos ya que fueron

AS
aisladas en diluciones de 10 -9.Sin embargo, en este estudio, fue fundamental que esta

capacidad se acompañara de altos conteos en el material original, pues daría una

IC
G
acción superior en la hidrólisis de almidón (Baldensperger et al. 1985).

LO
O
Comparado con el aislamiento de bacterias amiloliticas a partir de residuos

BI
de tres variedades de Ipomoea batata procedentes del mercado ¨ La Hermelinda¨,
AS
Trujillo – la Libertad, de agosto a octubre, 2017; que las dos cepas de levaduras

tuvieran capacidad amilolítica es un aspecto relevante, si se considera que la literatura


CI

señala que las enzimas amilasas se encuentra solo de forma excepcional en este
EN

género (Carrillo 2003). Por otra parte estos microrganismos tienen una alta capacidad
CI

generadora de biomasa proteica y de vitaminas (Anon 2003b).


DE

El espectro de aplicación de las amilasas se ha ampliado en muchos otros


CA

campos, tales como la química clínica, médica y analítica, así como su amplia
TE

aplicación en la sacarificación de almidón y en la industria textil, alimentaria,


IO

fermentativa, papelera, cervecera y destiladora. Estos cultivos podrían servir para las
BL

siguientes industrias como por ejemplo La Cervecería Backus y Johnston (con nombre
BI

comercial Cervecerías Peruanas Backus S.A. y con nombre de empresa Unión de

Cervecerías Peruanas Backus y Johnston S.A.A.) es una

empresa cervecera peruana perteneciente al grupo SABMiller, la segunda corporación

cervecera más grande a nivel mundial que se encargan de la elaboración de cerveza,

30

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

en el cual, uno de sus procesos corresponde a la conversión del almidón de un cereal en

azúcares fermentables por acción de las enzimas que se encuentran en la malta y la

posterior fermentación alcohólica de los mismos por la acción de la levadura. Sim

embargo; la elaboración de la cerveza se puede hacer con cualquier cereal que se

AS
"maltea" (es decir cualquier semilla que posea almidón y sea susceptible de germinar);

la cebada posee entre un 60%- 65% de almidón. El objetivo de este paso es la

IC
G
producción de amilasas que será utilizada para descomponer el almidón en moléculas

LO
sencillas de degradar (Murray y col, 1996).

O
BI
AS
Por lo tanto, sería de gran utilidad las bacterias amilolíticas asiladas a partir

de residuos de tres variedades de Ipomoea batata, que pueden ser utilizados


CI

directamente o sus enzimas extracelulares (las amilasas), como alternativa a las


EN

enzimas comerciales de alto costo que se aplican en los procesos de hidrólisis de


CI

almidón ya que se obtienen de una manera más fácil, rentable y económica (Chávez,
DE

2002).

El efecto positivo de la T° a 37° C al incrementar la velocidad de la hidrólisis del


CA

almidón por Bacillus está determinado por la cantidad de calor dentro del sistema, que
TE

permitió la interacción entre las moléculas del almidón y la amilasa, promoviendo un


IO

acercamiento mutuo, un acoplamiento rápido e inicio de la catálisis (Voet y Voet, 2006);


BL

estas interacciones serán más adecuadas y rápidas en la medida que no se altera la


BI

estructura funcional de las enzimas presentes. Comparado con el aislamiento de bacterias

amiloliticas a partir de residuos de tres variedades de Ipomoea batata procedentes del

mercado ¨ La Hermelinda¨, Trujillo – la Libertad, de agosto a octubre, 2017, Por su

naturaleza proteica de las amilasas, cualquier incremento de temperatura mayor a 37° C

31

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

puede desestabilizar dicha interacción o altere la estructura tridimensional de la moléculas

enzimática hace que se pierda la acción catalítica y por lo tanto disminuya dicho proceso

catalítico.

AS
Por ejemplo, el alcohol etílico es producido a partir de cualquier compuesto

orgánico que contenga niveles considerables de azúcar o materiales que puedan

IC
G
convertirse en azúcar simple ,es uno de los insumos más importantes en la industria

LO
química y en los últimos años se utiliza en la producción de combustibles, para ello se

O
vienen desarrollando nuevas tecnologías para la producción de alcohol como

BI
alternativa a su obtención industrial a partir de la caña de azúcar, utilizando otros
AS
materiales vegetales ya sea amiláceos como es el caso del maíz, camote, papa, yuca,

trigo , etc. Comparando con la investigación, se demostró que si hay presencia de


CI

bacterias amiloliticas degradadoras de almidón en residuos de tres variedades de


EN

Ipomoea batata, en el cual presentan las enzimas alfa- amilasas para degradar el
CI

almidón en moléculas más simples (Núñez, 2009).


DE

En la industria de almidones a escala mundial, el 99% corresponde al


CA

almidón de maíz. Producir jarabe del almidón a partir de residuos de camote es una
TE

idea nueva utilizando bacterias amilolíticas de diferentes variedades de Ipomoea


IO

batata (camote) Según estudios realizados por (Chávez, 2002) dos investigadores de
BL

la Universidad de Tuskegee en Georgia, Estados Unidos, reportaron haber elaborado


BI

un jarabe dulce con los residuos de Ipomoea batata, comparado con la investigación

seria una nueva opción para procesar jarabes a partir de residuos de Ipomoea batata.

32

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Comparado con la investigación se confirma la presencia de bacterias

amilolíticas a partir de residuos de tres variedades de Ipomoea batata ya que estas

bacterias amiloliticas presentan enzimas que sirven para convertir los almidones en

jarabes ya que estas enzimas son en su mayoría productos del metabolismo microbiano

AS
a comparación de otros cultivos microbianos que ofrecen un precio elevado de sus

enzimas por unidad en el mercado empresarial y su alto costo generalmente se ve

IC
G
justificado por su eficiencia en la reacción; es por ello que se debería utilizar estas

LO
bacterias amilolíticas que fueron seleccionadas a partir de residuos de Ipomoea batata

O
ya que son descartados diariamente en los centrales de abastos en grandes cantidades,

BI
pero también tienen eficiencia en la degradación del almidón. La investigación sobre
AS
mejores métodos para realizar las reacciones está respaldada por la demanda que gozan

los jarabes edulcorantes según (Montoya, 1998).


CI
EN

El consumo de los edulcorantes, distintos al azúcar de caña en la industria,


CI

ha ido aumentando en los últimos cincuenta años también. Es allí donde el jarabe de
DE

glucosa goza de mayor aceptación, es apreciado especialmente por su bajo poder

edulcorante que permite incrementar la concentración de sólidos, sin aumentar el


CA

dulzor de la solución, para los jarabes de glucosa lo componen las industrias


TE

procesadoras de jaleas y mermeladas, helados, puros y cigarrillos, repostería, cueros,


IO

productos farmacéuticos y otros gracias a las bacterias con capacidad amilolitica


BL

capaces de hidrolizar el almidón (Carell, 1990).


BI

En comparación con el aislamiento de bacterias amiloliticas a partir de

residuos de Ipomoea batata se confirma que estas bacterias amiloliticas al utilizar al

almidón como fuente de carbono, al mismo tiempo que ha tenido que ocurrir la

33

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

excreción de las amilasas para permitir la hidrólisis del almidón , esta es llevada a cabo

por la enzima alfa-amilasa que corta los enlaces alfa- 1,4 internos en forma aleatoria

del almidón pero que parte de las moléculas resultantes de dicha hidrólisis son

asimiladas por la bacteria para obtener la energía y los metabolitos primarios para su

AS
crecimiento según estudios realizados por (James y Lee , 1997) y que para la

producción de jarabes se basa en la hidrólisis del almidón es conveniente el uso de

IC
G
estas bacterias amiloliticas para obtener grandes cantidades de enzimas dispuestas a

LO
degradar el almidón , en el mundo actualmente se busca alfa-amilasas y

O
amiglucosidasas con características diferentes a las ya comercializadas Según estudios

BI
realizados por (Agudelo y col,2004).
AS
En los ensayos realizados en Zamorano, se observó que el jarabe elaborado
CI

con almidón con residuos de Ipomoea batata tenía menos viscosidad que el elaborado
EN

con almidón de maíz. A la vez, tenía un color amarillento y un contenido menor de


CI

glucosa que el sirope de maíz. Los residuos en el jarabe producían el color amarillento,
DE

Comparado con esta investigación si afirma que es factible el uso industrial de residuos

de Ipomoea batata, ya que sería una buena opción para popularizar en la industria dicho
CA

sustrato como materia prima y así poder lograr la hidrólisis más eficiente posible al usar
TE

las baterías amilolíticas de estos residuos (Pérez, 1995).


IO
BL

Según lo reportado por (Betancur et al. 2001), los contenidos de amilasa de


BI

los almidones de camote y yuca fueron de 19.6 y 17.0 UA/mL; lo cual resultaron ser

menores al compararlos con el maíz (28.3 UA/mL).El almidón de camote fue similar al

almidón de papa con un contenido de amilasa de 21 UA/mL, por lo tanto en comparación

a los resultados de esta investigación fueron muy elevadas y el contenido de amilasa

34

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

de camote utilizado fue de una distinta variedad a las analizadas en esta investigación a

partir de residuos de tres variedades de Ipomoea batata donde ADV 1 - 12 presentó

0.0278 UA/mL, ADV2 - 03 presentó 0.0256 UA/mL y el cultivo ADV 3 - 05 presentó

0.0284 UA/mL.

AS
La gran mayoría de microorganismos amilolíticos encontrados y reportados

IC
G
por estudios pertenecen al género Bacillus, según (Achi, O.K, y col 1992). Reportaron

LO
el estudio de producción de amilasa por Bacillus alvei, encontrando una alta actividad

O
de amilasa de 868 UA/mL utilizando almidón de yuca en un medio basal compuesto

BI
por fosfato de potasio, sulfato de magnesio, tryptona, cloruro de calcio, extracto de
AS
levadura, citrato de sodio y harina de soya, incrementa el crecimiento celular, mientras

que los de origen inorgánico (sulfato de amonio, cloruro de amonio) decrecen el


CI

crecimiento de las células, mientras que la adición de 0.1 % de citrato de sodio en el


EN

medio basal estimula la síntesis de amilasa ,esto se debe a que en esta investigación no
CI

se utilizó calcio ya que es esencial para aumentar la producción de amilasa o su


DE

estabilización en el que el citrato ayuda a mantener el calcio en solución. Comparado

con esta investigación las UA/mL obtenido a partir de residuos de Ipomoea batata
CA

procedentes del mercado¨ La Hermelinda¨ Trujillo - La Libertad, de agosto a octubre,


TE

2017; es menor debido a que no se utilizó citrato de sodio en el medio basal para
IO

estimular la síntesis de amilasas.


BL
BI

En el (ANEXO 29), se muestran las pruebas bioquímicas que se realizaron a las

tres bacterias amilolíticas seleccionados ADV 1 - 12, ADV2 - 03, ADV 3 - 05, fueron

catalasa (Cortez, 2001) y Amilasa, fermentadores de la glucosa, móviles, positivos (Mac

35

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Faddin, 1980) lo que permitió determinar que los cultivos aislados y seleccionados

corresponde al género Bacillus sp. (ANEXO 30, 31, 32, 33,34). De acuerdo al manual

de Bergeys los microorganismos del género Bacillus están clasificados como aerobios

o anaerobios facultativos Gram positivos, formadores de endosporas, pertenecientes a

AS
la familia bacillaceae y las esporas pueden ser clasificadas de acuerdo a su localización

en el bacilo: centrales, subterminales o terminales ( Bergeys D. 200).

IC
G
LO
El análisis de varianza utilizado fue IBM SPSS Statistics 20 en el cual, mostró la

O
adecuación del sistema de trabajo y numero de ensayos de verificación que confirmaron

BI
su validez (ANEXO 34), donde se demuestra que no existe diferencia significativa en la
AS
producción de UA/mL entre las bacterias amilolíticas de los residuos de Ipomoea batata;

por lo tanto los microorganismos obtenidos a partir de residuos de tres variedades de


CI

Ipomoea batata procedentes del mercado¨ La Hermelinda¨, Trujillo – La Libertad,


EN

producen la misma cantidad de UA/mL.


CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

36

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

V. CONCLUSIÓN

S e concluyó, que se seleccionaron 27 cultivos bacterianos con capacidad hidrolítica a

AS
partir de residuos de tres variedades de Ipomoea batata y se seleccionaron tres cultivos

bacterianos que presentaron mayor halo de hidrólisis ≥ a 10 mm de diámetro, para la

IC
G
identificación mediante la bioquímica preliminar y fueron identificadas como Bacillus sp.

LO
en los tres residuos de Ipomoea batata , destacando el cultivo ADV 3 - 05 quien presentó

O
mayor unidades amiloliticas UA/mL, en condiciones de laboratorio como mayor

BI
productor de amilasas en medio líquido en Caldo almidón 0.1 % buffer fosfato a pH 7.0,

con 0.0284 UA/mL.


AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

37

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

VI. RECOMENDACIONES

 Preparar y esterilizar por separado los reactivos de la solución del caldo almidón

buffer – fosfato a pH 7.0 y finalmente mezclarlos adecuadamente.

AS

IC
Comparar estos resultados, utilizando otros cultivos puros de Bacillus aislados de

G
otras variedades de Ipomoea batata y de otros residuos organicos.

LO
 Las bacterias amiloliticas aisladas a partir de residuos de tres variedades de

O
Ipomoea batata pueden ser utilizadas a nivel industrial gracias a las enzimas que

BI
degradan el almidón y tienen numerosas aplicaciones biotecnológicas.
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

38

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

AGUDELO B, SANCHEZ C y C Figueroa.2004.Produccion de jarabe glucosado


mediante sacarificación enzimática empleo de un reactor con
membrana. Perú: Universidad Nacional de Trujillo, Ingeniería

AS
Química;415:196-199.[Acceso:06/08/17]

IC
https://www.researchgate.net/profile/Juan_Quintero18/publication/262
763244_study_of_glucose_syrup_production_from_maltodextrines_u

G
sing_two_comercial_enzymes/links/58e24d6e92851c36954f3315/stud

LO
y-of-glucose-syrup-production-from-maltodextrines-using-two-

O
comercial-enzymes.pdf

BI
ASGHER M, JAVAID M, RAHMAN S, LEGGE R. A 2016.termostable a - amylase
from moderately thermophilic Bacilus subtilis strain for starch
AS
prosessing. Journal of food Enginnering. VOL. 118, No 4, 405–416,
CI

[Acceso: 09/09/17] CODEN PDBIAD DOI: 10.18054/pb.v118i4.3737


EN

ANON2003a.Ganaderia.Nutricion animal. Alimentación alternativa para


cerdos.[Acceso:22/08/17] Disponible en: htttp
CI

//www.windows/temp/agronegocios.htm
DE

ANON 2003b. Mohos y levaduras. Alimentos tropicales. [Acceso:


22/08/17]htpp://www.fao.org/livestock/agap/frg/afris/español/docume
CA

nt/tfeed8/refs/467.htm

BLANCO F.2001 Métodos Apropiados de Análisis Estadístico Subsiguientes al


TE

análisis de Varianza (ANDEVA).Revista Agronomía Constarricense;


IO

25(1): 53-60. [Acceso: 22/08/17]


http://www.mag.go.cr/rev_agr/v25n01_053.pdf
BL

BUITRAGO S, SÁNCHEZ E, GUERRERO H. 2014.Aislamiento de


BI

microorganismos amilolíticos, celulolíticos y lignolíticos a partir del


suelo de humedales de Bogotá. Isolation of amylolitic, cellulolytic and
ligninolytic microorganisms from Bogotá’s wetland soils. Revistas
Sennova (Colombia) Vol.1 (1), pp. 148-155 [Acceso:

39

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

08/10/17]http://revistas.sena.edu.co/index.php/sennova/article/view/89
/101

BERNAL L, MARTÍNEZ B. Una visión de la degradación del almidón. Revista del


centro de investigación Universidad La Salle.2006; 7 (25):77 -
90.[Acceso:23/06/17]

AS
http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/4614/Ze%C3%
B1a%20Silva%2CLaura%20Janett.pdf?sequence=1&isAllowed=y

IC
BERGEYS D. 2000. Manual of the Determinative Bacteriology 1989 – 2000. Eigth

G
Edition. Filadelfia; 2: 540 –589. [Acceso: 22/08/17]

LO
http://www.worldcat.org/title/bergeysmanualofdeterminativebacteriol

O
ogy/oclc/754547/editions?referer=di&editionsView=true

BI
AS
BOCANEGRA A Y R GALLARDO, 2005.Bacillus sp, hidrolisis del almidón,
obtención de ciclodestrinas de Solanum tuberosum, de la región de
CI

Pamplona, En CLON .Colombia: Universidad de Pamplona ; 3 (1)57-


EN

68.[Acceso:11/09/17]http://repository.unad.edu.co:8080/bitstream/105
96/1528/1/46455179pdf.pdf
CI
DE

BELLO P.L.A., AGAMA A.E., SÁYAGO A.S.G., MORENO D.E., FIGUEROA


J.D.C. 2000. Some structural, physicochemical and functional studies
CA

of banana starches isolated from two varieties growing in Guerrero,


México.Starch, 52(2-3):68-73. [Acceso: 10/11/17]
TE

http://pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/jf980828t
IO
BL

BADÍA M, HERNÁNDEZ B, MURREL J, MAHILLON J, PÉREZ, 2011.


BI

Aislamiento y caracterización de cepas de Bacillus asociadas al cultivo


de arroz. Rev. Bras. De Agroecología; 6(1): 90 - 99 [Acceso: 08/10/17]
http://orgprints.org/23097/1/Bad%C3%ADa_Aislamiento.pdf

BALDENSPERGER, J., LE MER, J., ANIBAL, L. & QUINTO, P.J. 1985.Solid state
fermentation of banana wastes.Biotechnol Lett.

40

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

7:743.[Acceso:22/08/17]http://www.imedpub.com/articles/production
-of-amylase-using-banana-waste-by-bacillus-subtilis-under-solidstate-
fermentation.pdf

C. FONSECA, R. ZUGER, T. WALKER Y J. MOLINA, 2002. Estudio de impacto

AS
de la adopción de las nuevas variedades de camote liberadas por el

IC
INIA, en la costa central, Perú. Caso del valle de Cañete. Centro
Internacional de la Papa Lima, Perú. [Acceso: 10/10/17]

G
http://cipotato.org/wp-content/uploads/2014/09/SW63967.pdf

LO
CASTILLO A, ESKER P, GÓMEZ L. 2014. Evaluación agronómica de trece

O
genotipos de camote (Ipomoea batatas L.) Agronomía

BI
Costarricense,38(2):67-81.[Acceso:08/12/17]
https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agrocost/article/view/17275
AS
CHÁVEZ D, 2002. Elaboración de jarabe de glucosa partiendo del almidón de
CI

camote (Ipomoea batata L.).Honduras, Diciembre. [Acceso: 07/08/17]


EN

https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agrocost/article/view/17275

CRUEGER W y A CRUEGER, 1989.Biotecnologia: Manual de Microbiología


CI

Industrial. España: Edit. Acribia, S.A; [Acceso: 09/09/17]


DE

http://www.worldcat.org/title/biotecnologia-manual-de-microbiologia-
industrial/oclc/318177308
CA

DHAWALE, M. R., J. J. WILSON y G. G. KHACHATOURIANS. 1982. Improved


method for detection of starch hydrolysis. Appl. Environ. Microbiol.
TE

44(3):747-750. [Acceso: 03/05/17]


IO

http://pubmedcentralcanada.ca/pmcc/articles/PMC242086/pdf/aem001
78-0237.pdf
BL

GARCÍA M, MARTINO M, ZARITZKY N. 2000.Microstructural characterization


BI

of plasticized starch-based films. Starch, 52 (4) : 118 -


124.[Acceso:08/06/17]
https://is.muni.cz/el/1431/podzim2013/C3804/Thermoplastic_starches
_Properties_challenges_A_Review.pdf

41

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

GUADARRAMA A, OROZCO J, MORALES M. 2017.Obtención de α-amilasa a


partir de Aspergillus oryzae. Facultad de Química, Universidad
Autónoma del Estado de México, Toluca, Estado de México. [Acceso:
15/07/17]
https://smbb.mx/congresos%20smbb/morelia07/TRABAJOS/Area_III
/Carteles/CIII-24.pdf

AS
HASHIM S, DELGADO O, HATTI-KAUL R, MATTIASSON E. STARCH

IC
HYDROLYSING B, 2004. halodurans isolates from a Kenyan soda

G
lake.Biotechnol Lett; 26 (10):823-8.[Acceso:21/07/17]

LO
http://repositorio.concytec.gob.pe/bitstream/CONCYTEC/99/1/llenqu
e_dl.pdf

O
BI
HERNÁNDEZ M, TORRUCO J, CHEL L, BETANCUR D, 2008. Caracterización
fisicoquímica de almidones de tubérculos cultivados en Yucatán,
AS
México. Ciênc. Tecnol. Aliment., Campinas, Jul.-Set. 2008, 28(7):718
-726.[Acceso:26/07/17]
CI

http://www.scielo.br/pdf/cta/v28n3/a31v28n3.pdf
EN

JAYAKODY L., HOOVER R., LIU Q., WEBER E. 2005.Studies on the tuber and
CI

root starches. I. Structure y physicochemical properties of Inala


(Solenostemon rotundifolius) starches grown in Sri Lanka. Food
DE

Research International, 38: 615- 629. [Acceso: 13/05/17]


http://dr.lib.sjp.ac.lk/bitstream/123456789/1872/3/Preliminary%20Stu
CA

dy%20of%20Mineral%20Constituents%20in%20Selected%20Cultiva
rs%20of%20Root%20and%20Tuber%20Crops%20in%20Sri%20Lan
TE

ka.pdf
IO

JAMES J and B LEE.1997. Glucoamylases: Microbial Sources, Industrial


BL

Applications and Molecular Biology - A Review.J of Food Biochem;


21(6):1-52.
BI

[Acceso:20/07/17]http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1745-
4514.1997.tb00223.x/abstract?pagewanted=all

KONEMAN E. AVLEN S.JANDA W.SCHRECKENBERGER.WINN W.2000.


Diagnóstico microbiológico. Quinta Edición. Parte 1: 99 -100. [Acceso:
06/12/17] file:///C:/Users /Downloads/Dialnet-

42

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ValidacionDelProcesoDeAutoclavadoDeResiduosHospita-
3988833.pdf

MAC FADDIN J.1980. Pruebas Bioquímicas para la identificación de bacterias.


Argentina: Editorial Medica Panamericana S. A;[Acceso:
21/07/17]https://www.dasumo.com/libros/mcfaddin-pruebas

AS
bioquimicas-para-la-identificaci%C3%B3n-de-bacterias-de-
importancia-cl%C3%ADnica-pdf.html

IC
MEDINA L. 2013.Obtención de maltodextrinas por vía enzimática a partir del

G
almidón de camote. (Ipomoea batata)¨.Centro Interdisciplinario de

LO
Investigación para el desarrollo integral Regional. CIIDIR-IPN-

O
MICHOACÁN.pg.(15-16).[Acceso:05/06/17]

BI
http://tesis.ipn.mx/bitstream/handle/123456789/12388/Medina%20Ga
rc%C3%ADa%20Luis%20-%20B091334.pdf?sequence=1 AS
MCPHERSON A.E., SEIB P.A. 1997. Preparation and properties of wheat and com
CI

starch maltodextrins with a low dextrose equivalent. Cereal Chemistry


EN

74:424 - 430. [Acceso: 08/12/17]


http://tesis.ipn.mx/bitstream/handle/123456789/12388/Medina%20Ga
CI

rc%C3%ADa%20Luis%20-%20B091334.pdf?sequence=1
DE

MOORTHY S.N. 2002.Physicochemical and functional properties of tropical


starches: a review.Starch, 54: 559 - 592. [Acceso: 29/06/27]
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3550970/
CA

MOORTHY, S. 2004. Starch in food: structure, function and applications.


TE

Cambridge: Publishing Limited Woodhead.[Acceso:10/05/17]


http://aevnmont.free.fr/SACH-
IO

BOOKS/Cacbohydrat/Starch%20in%20food.pdf
BL

MONTOYA D. 1998.Tecnología de enzimas. En: Primer Congreso Internacional de


BI

Microbiología Industrial. Santa Fé de Bogotá: Universidad Ponficia


Bolivariana;[Acceso:02/11/17]http://www.scielo.org.co/pdf/vitae/v12
n2/v12n2a03.pdf

MIKÁN J, CASTELLANOS D. 2004. Screening para el aislamiento y


caracterización de microorganismos y enzimas potencialmente útiles

43

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

para la degradación de celulosas y hemicelulosas.


Rev.Colomb.Biotecnol. 6(1): 58-71.[Acceso:10/11/17]
https://revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/559

NUÑEZ L. 2009.Impacto de la producción de bioetanol en el mercado del maíz. Un


análisis desde la dinámica de sistemas .México: Universidad

AS
Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Economía y Sociedad; XIV
(23): 153-124. [Acceso: 08/07/17] Disponible en:

IC
http://redalyc.uaemex.mx/rsc/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=5101190400

G
6

LO
OSUNDAHUSI, O., FAGBEMI, T., KESSELMAN, E. & SHIMONI, E. 2003.

O
Comparison of the physicochemical properties and pasting

BI
characteristics of flour and starch from red and white sweet potato
cultivars. Journal of Agricultural and Food Chemistry 51: 2232-2236.
AS
[Acceso: 17/06/17] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12670162
CI

ONITILO, M., SANNI, L., OYEWOLE, O. y MAZIYA-DIXON, B. (2007).


EN

Physicochemical and functional properties of sour starches from


starches from different cassava varieties. International Journal of Food
CI

Properties 10(3): 607-620.[Acceso:15/09/17]


https://www.researchgate.net/publication/249017583_Physicochemi
DE

cal_and_Functional_Properties_of_Sour_Starches_from_Different-
Cassava_Varieties
CA

PÉREZ, J. 1995. Uso del Follaje de Camote (Ipomoea batata, L.) en la


TE

Alimentación de Corderos. Proyecto de graduación para recibir el


título de Ingeniero Agrónomo. Escuela Agrícola Panamericana.
IO

Zamorano,Honduras.[Acceso:04/11/17]https://bdigital.zamorano.edu
BL

/bitstream/11036/2310/1/AGI-2002-T012.pdf

PANDEY A. 2003.Solid-state fermentación .Biochem Eng J ; 35(10): 1153 -


BI

1169.[Acceso:04/11/17]http://www.davidmoore.org.uk/21st_Centur
y_Guidebook_to_Fungi_PLATINUM/REPRINT_collection/Pandy_
solid-state-fermentn2003.pdf

44

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

PRESCOTT L, HARVEY J y D KLEIN. 2002. Microbiología 5 ta ed. Argentina:


Edit. Interamericana S. A;[Acceso: 15/07/17]
https://www.scribd.com/doc/242230949/TRATADO-DE
MICROBIOLOGIA-MEDICA-pdf

PETERS, D.2004.Use of sweet potato in pig production in Asia: agricultiral anda

AS
socio- economic aspects.Animal Sci: pg.25 [Acceso: 22/08/17]
http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.195.5726

IC
&rep=rep1&type=pdf

G
ROBINSON D. 1991.Bioquímica y valor nutritivo de los alimentos. España:

LO
Editorial Acribia, S.A; [Acceso: 04/09/17]

O
https://www.casadellibro.com/libro-bioquimica-y-valor-nutritivo-de-

BI
los-alimentos/9788420006994/253575

RODRÍGUEZ Z. BOUCOURT R. RODRÍGUEZ J. ALBELO N. NUÑEZ O.


AS
HERRERA F. 2006. Aislamiento y selección de microorganismos con
CI

capacidad de degradar el almidón. Instituto de Ciencia Animal.


Apartado Postal 24. San José de las Lajas. La Habana, Cuba. Revista
EN

Cubana de Ciencia Agrícola, 40(3). [Acceso: 13/05/17]


CI

http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA_8/ARTORIG5_
2.htm
DE

RODRÍGUEZ C, ÁNGELES M. 2006.Aplication of solid - state fermentation to


food industry - A review. J Food Eng; 76(3): 291 - 302. [Acceso:
CA

28/10/17] http://medcraveonline.com/JABB/JABB-04-00094.php
TE

RINDLAV-WESTLING, A. Y GATENHOLM, P. 2003.Surface composition and


morphology of starch, amylose and amylopectin
IO

films.Biolmacromolecules, 4: 166 -172.[Acceso:10/11/17]


BL

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12523862
BI

SÁNCHEZ C, MEJÍA C, FIGUEROA C, ESQUIVIA M, AGUDELO L, ZAPATA


N, GÓMEZ M. 2005. Estudio de cepas nativas amiloliticas. Revista
Ciencias Agropecuarias; 12(2):21-25. [Acceso: 26/08/17]
http://scielo.sld.cu/pdf/ctr/v36n1/ctr01115.pdf

45

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

TECSON, E. 2007. Development of functional foods in the Philippines. Food


Science and Technology Research 13 (3): 179 -186. [Acceso:
25/08/17]
https://ageconsearch.umn.edu/record/52381/files/Philippine%20Mar
ket%20Research%20Report_MDA.pdf

AS
THIPPESWAMYS, GIRIGOWDA K and V. MULIMANI. 2006. Isolation and
identification of alpha-amylase producing Bacillus sp. from dhal

IC
industry waste. Indian J Biochem Biophys;43(5):295-

G
8.[Acceso:09/10/17]https://pdfs.semanticscholar.org/6a58/766fd18d

LO
6a525b016241abe457902aa6e5ef.pdf

O
TRUJILLO C. 2014.Obtención de películas biodegradables a partir de almidón de

BI
yuca (Manihot esculenta Crantz) doblemente modificado para uso en
empaque de alimentos. Universidad Nacional Amazónica. Madre de
AS
Dios. Puerto Maldonado. Perú. [Acceso: 15/07/17]
http://www.upv.es/contenidos/ENCDOC/info/U0690345.pdf
CI

VARGAS P, HERNÁNDEZ D.2013. Harinas y almidones de yuca, ñame, camote


EN

y ñampí: propiedades funcionales y posibles aplicaciones en la


CI

industria alimentaria. Tecnología en Marcha, 26(1): 37-


45.[Acceso:12/09/17]http://www.scielo.br/pdf/cta/v28n3/a31v28n3.p
DE

df

VARGAS A, SILVER L. 2002. Selección y evaluación de bacterias del género


CA

Bacillus productoras de amilasa en cultivo


TE

sumergido.UNMSM.[Acceso:04/11/17]http://cybertesis.unmsm.edu.
pe/handle/cybertesis/2579
IO

VILLANUEVA E, ROBLES H Y M OTINIANO.2007. Aislamiento y selección


BL

primaria de bacterias productoras de amilasas. En: Guía de


Prácticas de Microbiología Industrial. Perú. Universidad Nacional
BI

deTrujillo;[Acceso:01/12/17]http://repositorio.concytec.gob.pe/bit
stream.

VILLALBA L, MIKÁN J, SÁNCHEZ J. 2004. Actividades hidrolíticas y


caracterización isoenzimática de poblaciones microbianas aisladas

46

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

del patrimonio documental del Archivo General de Colombia.


Laboratorio de análisis y control, Archivo de Bogotá. 27. Facultad
de Medicina, Universidad Militar Nueva Granada, Departamento de
biología, Universidad Nacional de Colombia. NOVA - publicación
científica.2(2):1-108.[Acceso:13/05/17]
http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA_8/ARTORIG

AS
5_2.htm

IC
G
YAÑEZ V. 2002.Aislamiento y caracterización de marcadores moleculares micro

LO
satélites a partir de la construcción de librerías genómicas

O
enriquecidas de camote (Ipomoea batata). UNMSM, [Acceso:

BI
02/06/17]http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtualdata/Tesis/Basic/Ya%
C3%B1ez_A_V/t_completo.pdf AS
ZEÑA L. 2015. Efecto del almidón comercial de Zea mays sobre la cinética de
CI

producción de amilasas por Bacillus licheniformis. Universidad


Nacional de Trujillo. Facultad de Ciencias Biológicas. Trujillo - Perú,
EN

[Acceso:19/07/17]
CI

http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/4614/Ze%C3
%B1a%20Silva%2CLaura%20Janett.pdf?sequence=1&isAllowed=y
DE
CA
TE
IO
BL
BI

47

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

AS
IC
G
ANEXOS
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

48

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 1.
Tabla N° 1. Posición taxonómica de Ipomoea batata (camote) de acuerdo a The National
Center for Biotechnology Information (NCBI).

AS
Reino Viridiplantae

IC
Subreino
Embryophyta

G
LO
División Magnoliophyta

O
BI
Subdivisión Angrospermae
AS
Clase Magnoliosida
CI

Subclase Asteridae
EN
CI

Orden Solanales
DE

Familia Convolvulaceae
CA

Género Ipomoea
TE

Sección batata
IO

Especie Ipomoea batata


BL
BI

49

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 2.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

Figura N° 1. Recolección de las muestras de residuos de las tres


variedades de Ipomoea batata (camote) del mercado
La Hermelinda, Trujillo – La Libertad.

50

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 3.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI

Figura N° 2. Muestras de cada uno de los tres tipos de residuos de Ipomoea batata
(camote) recolectados y llevados al laboratorio para su procesamiento.
EN
CI

ANEXO 4.
DE
CA
TE
IO
BL
BI

Figura N° 3. Lavado de los residuos de las tres variedades de Ipomoea batata (camote),
(muestra) en bolsas de polietileno con 100 mL ADE.

51

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 5.

COMPOSICIÓN g/L

Agar Agar 2.3

AS
IC
NaCl 0.5

G
Peptona 1.0

LO
O
Almidón 0.2

BI
Extracto de carne AS 0.3
CI

pH: 7.0
EN
CI

Figura N° 4. Composición química del almidón 0.1 %


DE
CA
TE
IO
BL
BI

52

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 6. Figura N° 5. Colonias de bacterias aisladas de las tres variedades de


Ipomoea batata en AA.

V1

AS
IC
G
LO
O
BI
V2
AS
CI
EN
CI
DE
CA

V3
TE
IO
BL
BI

53

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 7. Figura N° 6. Colonias de bacterias aisladas seleccionadas de las tres


variedades de Ipomoea batata en AA.

V1 V2

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN

V3
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

54

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 8.
Figura N° 7. Halos de hidrólisis del almidón de los cultivos aislados a partir de muestras
de residuos de tres variedades de Ipomoea batata (camote): IMPERIAL-
INIA, INA 100-INA, INIA 306-HUAMBACHERO en Agar Almidón (AA).
Selección primaria, por el método del yodo.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

55

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 9.
Tabla N° 8. Aislamiento de 45 cultivos bacterianos a partir de muestras de residuos de
tres variedades de Ipomoea batata con sus respectivas mediciones del halo de hidrólisis
en Agar almidón (AA).
V1 V2 V3

AS
De
Cultivo Halo de hidrolisis Cultivo Halo de hidrólisis Cultivo Halo de hidrólisis
muestreo

IC
ADV1 - 01 5 ADV2 - 01 7 ADV3 - 01 8

G
LO
1 ADV1 - 02 15 ADV2 - 02 15 ADV3 - 02 5

ADV1 - 03 13 ADV2 - 03 16 ADV3 - 03 16

O
BI
ADV1 - 04 8 ADV2 - 04 6 ADV3 - 04 15
AS
ADV1 - 05 14 ADV2 - 05 14 ADV3 – 05 18
CI

ADV1 - 06 13 ADV2 – 06 16 ADV3 – 06 17


EN

2
ADV1 - 07 5 ADV2 – 07 6 ADV3 – 07 16
CI

ADV1 - 08 14 ADV2 – 08 15 ADV3 – 08 8


DE

ADV1 - 09 9 ADV2 – 09 8 ADV3 – 09 9

ADV1 - 10 13 ADV2 - 10 14 ADV3 - 10 15


CA

ADV1 - 11 14 ADV2 - 11 15 ADV3 - 11 18


TE

3
ADV1 - 12 15 ADV2 - 12 14 ADV3 - 12 8
IO

ADV1 - 13 16 ADV2 – 13 5 ADV3 - 13 16


BL

ADV1 – 14 7 ADV2 - 14 6 ADV3 – 14 8


BI

ADV1 – 15 8 ADV2 - 15 16 ADV3 - 15 16

56

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 10.

Tabla N° 9. Selección de 27 cultivos bacterianos a partir de muestras de residuos de tres


variedades de Ipomoea batata, que presentaron mayor halo de hidrólisis de almidón en
placa con AA y se seleccionaron tres cultivos bacterianos resaltados con negrita para la
identificación mediante la bioquímica preliminar.

AS
IC
Variedad de Ipomoea batata

G
N° muestreo

LO
V1 V2 V3

O
Código de Halo de Código de Halo de Código de Halo de
cultivo hidrolisis cultivo hidrólisis cultivo hidrólisis

BI
(mm) (mm) (mm)

ADV1 - 02 15 ADV2 - 02 15 ADV3 - 03 16


AS
1
CI

ADV1 – 03 13 ADV2 - 03 16 ADV3 - 04 15


EN

ADV1 - 15 14 ADV2 - 05 14 ADV3 – 05 18


CI

ADV1 - 06 13 ADV2 – 10 14 ADV3 – 07 16


DE

ADV1 - 08 14 ADV2 – 06 16 ADV3 – 06 17


CA

ADV1 - 10 13 ADV2 - 08 15 ADV3 - 10 15


TE
IO

ADV1 - 12 15 ADV2- 12 14 ADV3 - 13 16


3
BL

ADV1 - 11 14 ADV2 – 11 15 ADV3 - 11 18


BI

ADV1 - 13 16 ADV2 - 15 16 ADV3 – 15 16

57

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 11.
Figura N° 10. Cultivos puros de las bacterias amilolíticas en Agar Almidón.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

58

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 12.
Figura N° 11. Inóculo bacteriano equivalente al tubo N° 1 del nefelómetro de Mac Farland
obtenidos a partir del cultivo joven.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN

ANEXO 13.
CI

Tabla N° 12.Composición química del Caldo Almidón 0.1 % buffer - fosfato a pH: 7.0
DE

COMPOSICIÓN g/ L
CA
TE

Almidón 1.00
IO

(NH4)2SO4 0.50
BL

CaCl2 0.50
BI

KH2PO4 1.49

NaHPO4, 12 H2O 3.22

59

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 14.
Figura N°13. Obtención del extracto enzimático de cada variedad de Ipomoea batata
(camote) mediante la centrifugación.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

60

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 15.

Figura N° 14. Tubos de ensayo conteniendo las soluciones coloreadas para medir el
almidón residual.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI

ANEXO 16.
Figura N° 15. Espectrofotómetro utilizado para medir la absorbancia de las soluciones
DE

coloreadas a 580 nm.


CA
TE
IO
BL
BI

61

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 17.
Figura N° 16. Tubos de ensayo conteniendo las soluciones coloreadas para la elaboración
de la curva de calibración para cuantificar el almidón.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN

ANEXO 18.
Tabla N° 17. Determinación de la curva de calibración.
CI
DE

Estándares Concentración de Absorbancias Fx


almidón mg/mL
CA

S1 0.026 0.216 0.120

S2 0.053 0.326 0.162


TE

S3 0.08 0.478 0.167


IO

S4 0.10 0.630 0.158


BL

S5 1,33 0.801 1.660


BI

𝒎𝒈 𝒅𝒆 𝒂𝒍𝒎𝒊𝒅ó𝒏 ( 𝒆𝒔𝒕𝒂𝒏𝒅𝒂𝒓𝒆𝒔)
Fx =
𝒍𝒆𝒄𝒕𝒖𝒓𝒂𝒔 𝒆𝒔𝒑𝒆𝒄𝒕𝒓𝒐𝒇𝒐𝒕𝒐𝒄𝒐𝒍𝒐𝒓𝒊𝒎𝒆𝒕𝒓𝒊𝒄𝒂𝒔 (𝒆𝒔𝒕𝒂𝒏𝒅𝒂𝒓𝒆𝒔)

Fx = 0.453 Leyenda: F = Factor S= Estándar

62

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

TABLA DE DATOS

ANEXO 19.
Tabla N° 18. Absorbancias del almidón residual, inicial y valores del almidón hidrolizado
en mg/ mL del cultivo bacteriano seleccionado ADV 1 – 12.

AS
IC
bacteria N° Almidón Residual Blanco sin almidón Almidón inicial Almidón

G
amilolitica DE Problema testigo Hidrolizado

LO
ENSAYO mg/mL

O
01 ENSAYO 0.018 0.019 1.25 0.5580

BI
ADV 1 - 12 02 ENSAYO 0.017
AS 0.023 1.25 0.5585
CI

03 ENSAYO 0.020 0.019 1.25 0.5571


EN
CI
DE

ANEXO 20.
Tabla N° 19. Absorbancias del almidón residual, inicial y valores del almidón hidrolizado
CA

en mg/ mL del cultivo bacteriano seleccionado ADV 2 - 03.


TE

N° Almidón Blanco Almidón Almidón


IO

bacteria DE Residual sin almidón Inicial hidrolizado


amilolitica ENSAYO Problema Testigo mg/mL
BL
BI

01 ENSAYO 0.192 0.070 1.24 0.4747

ADV 2 - 03
02 ENSAYO 0.091 0.061 1.24 0.5204

03 ENSAYO 0.041 0.041 1.24 0.5431

63

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 21.
Tabla N° 20. Absorbancias del almidón residual, inicial y valores del almidón hidrolizado
en mg/ mL del cultivo bacteriano seleccionado ADV 3 - 05.

AS
Bacterias amiloliticas N° Almidón Blanco Almidón Almidón hidrolizado

IC
DE Residual sin almidón Inicial mg/mL
ENSAYO Problema Testigo

G
LO
01ENSAYO 1.150 0.197 1.24 0.0407

ADV 3 - 05

O
02 ENSAYO 0.123 0.075 1.24 1.117

BI
03 ENSAYO 0.027 1.047 1.24 0.5494
AS
CI
EN

ANEXO 22.
Tabla N° 21. Determinación de las unidades amilolíticas (UA/mL) de los tres cultivos
CI

seleccionados.
DE
CA

REPETICION
VARIEDAD DE
CAMOTE BACTERIAS
TE

1 2 3 P mg / mL
IO

IMPERIAL - INIA ADV1 – 12 0.5580 0.5585 0.5571 0.5578


BL

INA – 100 INA ADV2 - 03 0.4747 0.5204 0.5431 0.5127


BI

INIA-306
HUAMBACHERO ADV3 – 05 0.0407 1.117 0.5494 0.5690

64

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 23.
Figura N° 22. Observación microscópica de los tres cultivos seleccionados mediante
tinción Gram. Objetivo 100x.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
ADV1– 12 ADV2 – 03 ADV3 – 05
CI

Variedad 1 Variedad 2 Variedad 3


EN

IMPERIAL – INIA INA – 100 INA INIA – 306 - HUAMBACHERO


CI
DE

ANEXO 24.
CA
TE
IO

Espora
externa
BL
BI

Figura N° 23. Observación microscópica de esporas del


cultivo ADV1 – 12, mediante la coloración
de Wirtz. Objetivo 100x.

65

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 25.

Espora
subterminal

AS
IC
G
LO
O
BI
Figura N° 24. Observación microscópica de esporas del
cultivo ADV2 – 03, mediante la coloración
AS
de Wirtz. Objetivo 100x.
CI

ANEXO 26.
EN
CI
DE
CA
TE

Espora
subterminal
IO
BL
BI

Figura N° 25. Observación microscópica de esporas del


cultivo ADV3 – 05, mediante la
coloración de Wirtz. Objetivo 100x.

66

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 27.
Figura N° 26. Pruebas bioquímicas de identificación de género del cultivo bacteriano
ADV 1 – 12.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

67

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 28.
Figura N° 27. Pruebas bioquímicas de identificación de género del cultivo bacteriano
ADV 2 - 03.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

68

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

ANEXO 29.
Figura N° 28. Pruebas bioquímicas de identificación de género del cultivo bacteriano
ADV 3 – 05.

AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

69

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.

También podría gustarte