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6


Biomolecules 2019 , 9 (7), 265; https://doi.org/10.3390/biom9070265 Acceso abierto

(https://doi.org/10.3390/biom9070265)

Artículo
Identificación de MicroRNA que se dirige a Mlph y que
afecta el transporte de melanosomas
Jeong Ah Lee (/search?authors=Jeong%20%20Ah%20Lee&orcid=)† ,
Seok Joon Hwang (/search?authors=Seok%20%20Joon%20Hwang&orcid=)† ,
Sung Chan Hong (/search?authors=Sung%20%20Chan%20Hong&orcid=),
Cheol Hwan Myung (/search?authors=Cheol%20%20Hwan%20Myung&orcid=),
Ji eun lee (/search?authors=Ji%20%20Eun%20Lee&orcid=),
Jong Il Parque (/search?authors=Jong%20%20Il%20Park&orcid=)y
Jae Sung Hwang (/search?authors=Jae%20%20Sung%20Hwang&orcid=0000-0003-
2916-030X)*  (mailto:please_login) (https://orcid.org/0000-0003-2916-030X)
 Departamento de Ingeniería Genética y Escuela de Graduados en Biotecnología,

Universidad de Kyung Hee, Yongin, Gyeonggi-do 446-701, Corea

* Correspondencia: jshwang@khu.ac.kr (mailto:jshwang@khu.ac.kr) ; Tel .: + 82-312-013-
797 
† Igual contribución.

Recibido: 27 de junio de 2019 / Aceptado: 6 de julio de 2019 / Publicado: 8 de julio de 2019

Resumen: Los melanosomas se someten a un complejo proceso de maduración y migran a

los queratinocitos. La melanofilina (Mlph), un complejo de proteínas que incluye la miosina
Va (MyoVa) y Rab27a, permite el movimiento de los melanosomas en los melanocitos En
este estudio, encontramos seis miRNAs dirigidos a Mlph en el mouse usando dos
 programas ( http://targetscan.org (http://targetscan.org) y DianaTools). Cuando los 
melanocitos melan-a se trataron con seis microARN sintetizados, miR-342-5p, miR-1839-5p
y miR-3082-5p inhibieron el transporte de melanosomas e indujeron la agregación de
melanosomas alrededor del núcleo. Los otros microRNAs, miR-5110, miR-3090-3p y miR-
186-5p, no inhibieron el transporte de melanosomas. Además, miR-342-5p, miR-1839-5p y
miR-3082-5p disminuyeron Mlphexpresión. El efecto de miR-342-5p fue el más fuerte entre
los seis miRNA sintetizados. Inhibió el transporte de melanosomas en melanocitos melan-a
y redujo la expresión de Mlph en los niveles de mRNA y proteínas de una manera
dependiente de la dosis; sin embargo, no afectó a las expresiones Rab27a y MyoVa, que
están asociadas con el transporte de melanosomas. Para examinar la especificidad de miR-
342-5p, realizamos ensayos de luciferasa en un vector informador transfectado con
melanocitos de ratón que incluye Mlph en la 3′-UTR (región no traducida). Cuando se trató
con miR-342-5p, la actividad de la luciferasa que se había reducido en aproximadamente el
50% se restableció después del tratamiento con inhibidor. Por lo tanto, identificamos un
nuevo miRNA que afecta a Mlph y el transporte de melanosomas, y estos resultados
pueden usarse para comprender la expresión de Mlph y la regulación de la pigmentación de
la piel.

Palabras clave: transporte melanosoma; melanofilina; microRNA

1. Introducción
Los melanocitos, un tipo de célula de la piel, producen melanina y se encuentran en la
capa basal de la epidermis. La melanina es un pigmento biológico que comprende el tipo de
color amarillo rojizo llamado feomelanina y la eumelanina de tipo marrón amarillento [ 1 , 2 ].
Las diferencias en el color de la piel entre individuos de diferentes razas se deben al tipo de
melanina producida y no al número de melanocitos [ 3 ].
Los melanosomas son orgánulos relacionados con los lisosomas que producen,
almacenan y transportan melanina, y dan como resultado la pigmentación en los melanocitos
 [ 4 ]. El transporte de melanosomas maduros desde el área perinuclear a las puntas

dendríticas de los melanocitos se facilita mediante proteínas motoras dependientes de
microtúbulos y actina [ 5 ]. El transporte de melanosoma dependiente de actina está asociado 
con las proteínas complejas tripartitas, Rab27a, melanofilina (Mlph) y miosina Va (MyoVa).
Rab27a es una GTPasa y un miembro de la familia del oncogén Ras, y su molécula efectora 
es Slac2-a / Mlph, que recluta la proteína motora MyoVa dependiente de actina [ 5 , 6 , 7].
Los defectos en el transporte de melanosomas causan una afección conocida como
síndrome de Griscelli (GS). Griscelli y sus colegas encontraron dos niñas con
hipopigmentación de la piel y cabello gris plateado [ 8 ]. Hay tres tipos de GS, GS tipos 1, 2 y
3, causados por mutaciones en MyoVa, Rab27a y Mlph, respectivamente [ 9 ]. Los tres tipos
causan hipopigmentación de la piel y el cabello; sin embargo, los tipos 1 y 2 de GS causan
deterioro neurológico y deterioro inmunológico, respectivamente, como efectos secundarios.
 Sin embargo, con la mutación Mlph, solo la despigmentación es aparentemente aparente y 
no se observan otros efectos secundarios [ 10 , 11 , 12 ]. Por lo tanto, Mlph podría ser un gen
diana importante para estudios de despigmentación.
Se han estudiado las funciones de muchos miRNA no caracterizados en la piel. Por
ejemplo, miR-31 mejora la proliferación celular y la migración en queratinocitos, y ayuda en la
curación de heridas en la piel [ 13 ]. Un estudio previo mostró que el miR-218 disminuía la
melanogénesis al inhibir directamente el factor de transcripción asociado a la microftalmía
(MITF, por sus siglas en inglés) en melanocitos de ratón melancólico [ 14 ]. Estudios
recientes se enfocaron en la 3´-UTR de genes asociados con el transporte de melanosomas.
Por ejemplo, miR-203 suprimió significativamente el crecimiento de células de melanoma
humano y canino e inhibió el transporte de melanosoma mediante la supresión de las
expresiones MITF y Rab27a [ 15 ]. Además, miR-145 disminuye las expresiones de MyoVa y
FSCN1 en células de melanoma humano [ 16]]. Sin embargo, aún no se han informado los
miRNAs que solo apuntan a Mlph entre las proteínas motoras asociadas con el transporte de
melanosomas en los melanocitos de ratón. En este estudio, intentamos encontrar los
miRNAs que regulan la expresión de Mlph .

2. Resultados

2.1. Identificación de miRNAs dirigidos a Mlph en ratones

Para identificar miRNA dirigidos a Mlph en ratones, utilizamos dos programas. Uno fue
TargetScan y el otro DIANA-microT v3.0. Estos dos programas de bioinformática en línea
predijeron miRNAs que podrían dirigirse directamente a la 3′-UTR de Mlph . En total, 265
miRNAs fueron predichos por TargetScan y 17 por DIANA-microT v3.0. Sintetizamos seis
miRNAs e inhibidores (Inh) identificados por ambos programas ( Figura 1 ). Las secuencias
de microARN se muestran en la Tabla 1 .
 

Figura 1. Predicción de los miRNAs dirigidos a la melanofilina ( Mlph ) en ratones.

 
Tabla 1. Secuencias de microRNAs utilizados en este estudio.

2.2. Efecto de los miRNAs sobre la expresión de Mlph en melanocitos Melan-a

Para investigar si los seis miRNA sintetizados afectan el transporte de melanosoma, los
melanocitos de ratón melan-a se trataron con 10 nM de los miRNAs. Después de 72 h de
transfección, encontramos que se indujo la agregación de melanosomas. Tres miRNAs, miR-
342-5p, miR-3082-5p y miR-1839-5p, indujeron la agregación de melanosomas en
melanocitos melan-a. Sin embargo, los otros tres no indujeron agregación de melanosomas (
Figura 2 a). Entre los seis miRNAs, miR-342-5p tuvo el efecto inhibidor más fuerte en el nivel
de expresión de la proteína Mlph en comparación con el control negativo ( Figura 2 b).
 Figura 2. Efecto de los miRNAs en los melanocitos melan-a. Los melanocitos de 
Melan-a se sembraron a 3 x 10 5 células / pocillo en placas 10π en medios RPMI-1640
con FBS al 10% (suero fetal bovino), P / S al 1% y TPA 200 nM. ( A ) Después de 24 h, 
los melanocitos melan-a se trataron con miRNAs. Hemos examinado las células

transfectadas con seis microRNAs representativos. Después de 72 h, las células se
observaron en campo brillante utilizando un microscopio digital (iRiS TM , Logosbio,
Anyang, Corea). La agregación de melanosomas se estimó contando las células con
agregación de melanosomas perinucleares en tres campos microscópicos aleatorios
por pocillo a 200 aumentos. ( B) Melan-a melanocitos tratados con miRNAs 10 nM
durante 72 h. Seis miRNAs mostraron efectos en el nivel de expresión de proteínas de
Mlph. Los valores se presentan como la media ± desviación estándar de tres pozos.

 2.3. Efecto de miR-342-5p en la expresión de Mlph en melanocitos Melan-a 

Para investigar si miR-342-5p afectó el transporte de melanosomas de una manera
dependiente de la dosis, miR-342-5p se trató con 2.5 nM, 5 nM y 10 nM miR-342-5p durante
72 h ( Figura 3 a). El tratamiento con 2.5 nM, 5 nM y 10 nM miR-342-5p incrementó la
agregación de melanosomas de una manera dependiente de la dosis en comparación con el
control. miR-342-5p disminuyó los niveles de ARNm y proteína de Mlph de una manera
dependiente de la dosis ( Figura 3 b, c). El nivel de expresión de ARNm Mlph se midió
usando PCR cuantitativa en tiempo real.
 Figura 3. Efectos de miR-342-5p en los melanocitos melan-a. Los melanocitos de 
Melan-a se sembraron a 3 x 10 5 células / pocillo en placas 10π en medios RPMI-1640
con FBS al 10%, P / S al 1%, TPA 200 nM. ( A ) Después de 24 h, los melanocitos 
melan-a se trataron con miR-342-5p de una manera dependiente de la dosis. Después

de la transfección durante 72 h, las células se observaron en campo brillante utilizando
un microscopio digital (iRiS TM , Logosbio, Corea). ( B ) Melanocitos a melanocitos
tratados con miRNAs 10 nM durante 72 h. MiR-342-5P efectos en el nivel de Mlph. ( C )
Las células se recogieron para ARN 48 h después de la transfección. Mlphlos niveles
de expresión se determinaron utilizando q-PCR en tiempo real. El experimento se
repitió tres veces. Los datos se analizaron utilizando la prueba t no pareada de Student
**, p <0.01. ( D ) Melan-a melanocitos fueron sembrados a 2 × 10 5 células / cámara.
Después de 24 h, los melanocitos melan-a se trataron con miRNA y siRNA de acuerdo
 con el protocolo del fabricante. Después de 72 h, las células fueron fotografiadas. Los 
valores se presentan como la media ± desviación estándar de tres pozos.

La agregación de melanosomas alrededor del núcleo se realizó mediante el uso de

inmunofluorescencia de anticuerpos HMB45 ( Figura 3 d).

2.4. Efecto de mir-342-5p en las expresiones Rab27a y MyoVa

Para determinar si miR-342-5p afecta a otras expresiones clave de la proteína de
transporte melanosoma, examinamos las expresiones Rab27a y MyoVa juntas. miR-342-5p
disminuyó el nivel de Mlph pero no afectó los niveles de MyoVa y Rab27a. Para verificar la
especificidad del efecto de miR-342-5p en la expresión de Mlph, se examinó el efecto de
rescate utilizando un inhibidor de miR-342-5p ( Figura 4 a). El inhibidor de miR-342-5p
aumentó los niveles de Mlph.
 Figura 4. Niveles de expresión de Mlph, MyoVa y Rab27a por miR-342-5p o con 
inhibidores. Los melanocitos de Melan-a se sembraron a 3 x 10 5 células en placas de
seis pocillos durante 24 h. ( A ) Después de 24 h, los melanocitos melan-a se trataron 
con miR-342-5p e inhibidores. Después de 72 h, miR-342-5p efectuó los niveles de

Mlph, MyoVa y Rab27a. ( B ) Examinamos si mmu-miR-342-5p se dirige directamente a
Mlph mediante el uso de bases de datos de predicción de objetivos miRNA en línea. ( C
) Los reporteros de luciferasa estaban relacionados con Mlph 3'-UTRs. miR-342-5p o
mímico revuelto (Scr mímico) se cotransfectaron con un constructo de luciferasa-UTR
en melanocitos melan-a, y se determinó la actividad de la luciferasa.

2.5. miR-342-5p apunta directamente a Mlph en los melanocitos Melan-a

Identificamos el sitio de unión de mmu-miR-342-5p en la 3´-UTR de Mlph ( Figura 4 b).
 
Para identificar la especificidad de miR-342-5p, construimos un vector sensor uniendo la
región 3′-UTR de Mlph de ratón a un vector pGLuc-basic con indicador de luciferasa. Para
determinar la secuencia objetivo reconocida por el miRNA, miR-342-5p se trató con un
inhibidor, mientras que el control no. El tratamiento con miR-342-5p redujo la actividad
luciferasa, y el tratamiento de miR-342-5p con inhibidor restauró la actividad luciferasa (
Figura 4 c).

3. Discusión
Los melanosomas maduran completamente durante el transporte desde el núcleo de los
melanocitos a la punta de dendrita de los melanocitos. Luego, los melanosomas se
transfieren a los queratinocitos [ 17 , 18 ]. Durante el transporte del melanosoma, tres
proteínas, Mlph, Rab27a y MyoVa, forman un complejo tripartito. Estos son los reguladores
clave del transporte melanosoma [ 19 , 20 ].
En este estudio identificamos los miRNAs que afectaron la expresión de Mlph e
intentamos comprender su efecto. Cuando los melanocitos melan-a se trataron con los
miARN seleccionados, se observó que los miARN suprimían el transporte de melanosomas (
Figura 2 a). La agregación significativa de melanosomas en el área perinuclear fue evidente
en la transfección de miR-342-5p en melanocitos melan-a ( Figura 3 a). miR-342-5p
disminuyó los niveles de proteína de Mlph de una manera dependiente de la dosis ( Figura 3
b). Estudios anteriores han demostrado que el miR-5110 suprime la pigmentación en los
melanocitos de alpaca al atacar conjuntamente a los miembros de la familia MLPH y WNT 1 [
21]]. Sin embargo, miR-5110 no tiene efecto en el transporte de melanosomas en
melanocitos melan-a. miR-342-5p disminuyó los niveles de Mlph, pero no afectó las
expresiones de Rab27a y MyoVa ( Figura 4 a). Hasta ahora no ha habido ningún informe
sobre el miRNA dirigido a Mlph en ratones o humanos. A partir de este estudio, encontramos
miARN que afecta la expresión de Mlph en ratones, y podemos esperar que miARN tenga
una función similar en humanos, que es un área de investigación que se explorará en
estudios futuros. Según varios estudios previos, la expresión de Mlph es muy importante para
el transporte de melanosomas. Se ha demostrado que las mutaciones en Mlph causan
 defectos en el transporte de melanosoma en los melanocitos [ 7 ]. El tratamiento con miR-

342-5p redujo el nivel de ARNm de Mlph ( Figura 3c) apuntando a la 3´-UTR de Mlph.
Los niveles de expresión de Mlph y Rab27a de miR-3082-5p y miR-1839-5p 
disminuyeron (no se muestran los datos). Hay informes de que un miRNA puede dirigirse a
dos genes simultáneamente. Por ejemplo, un estudio publicado en Japón en 2013 mostró 
que un miRNA puede dirigirse a dos genes simultáneamente en una línea celular de cáncer
gástrico [ 22 ]. miR-224 se dirige a DPYSL2 (dihydropyri-midinase-like-2) y KLAS, que es un
protooncogén [ 22 ]. DPYSL2 codifica la proteína mediadora de respuesta de colapsina 2
(CRMP2), una proteína citosólica [ 23]. Esta proteína es necesaria para el crecimiento y
promoción de las neuronas. Generalmente está atado a la membrana celular y es esencial
para la señalización del tejido. Por lo tanto, se puede considerar que miR-3082-5p y miR-
1839-5p apuntan a dos genes simultáneamente, similar a miR-224. miR-3082-5p está
 controlado en células de melanoma de ratón por la curcumina y podría ser un potencial 
miRNA anti-cáncer [ 24 ]. Sin embargo, miR-1839-5p aún no ha sido investigado.
Se ha informado que miR-342-5p está regulado al alza en los modelos de ratones
transgénicos de la enfermedad de Alzheimer (EA), incluidas las líneas APP / PS1, PS1DE9 y
PS1-M146V [ 25 ]. miR-342-5p se une directamente a la 3'-UTR del mRNA de AnkG y
disminuye los niveles de AnkG a través de la represión de la traducción en neuronas de
ratones transgénicos de AD. Sin embargo, no ha habido informes sobre los efectos de miR
342-5p en la expresión Mlph. Encontramos un nuevo miRNA que afecta el transporte de Mlph
y melanosoma y podría ser importante para comprender la expresión de Mlph y la regulación
de la pigmentación de la piel.

4. Materiales y métodos.

4.1. Materiales
miRNA fue comprado de GenePharma (Shanghai, China). Lipofectamine RNAi MAX se
adquirió de Invitrogen (Carlsbad, CA, EE. UU.).

4.2. Cultivo de células

Los melanocitos Melan-a son melanocitos murinos inmortalizados altamente
pigmentados derivados de ratones C57BL / 6. Los melanocitos Melan-a se obtuvieron de la
Dra. Dorothy Bennett (St. George's Hospital, Londres, Reino Unido). Los melanocitos de
Melan-a se mantuvieron en medio RPMI-1640 (Welgene, Gyeongsan, Korea) suplementado
con un 10% de suero bovino fetal (FBS), 10 U / mL de penicilina, 100 μg / mL de
estreptomicina y 200 nM forbol 12-miristato 13 acetato (PMA; Sigma-Aldrich Co., St. Louis,
MO, EE. UU.).

4.3. Transfección
Un día antes de la transfección, los melanocitos melan-a se sembraron en placas de seis
pocillos con una confluencia del 60%, y se aplicaron miRNA, inhibidores y 20 mN de ARNip
mixto RNAi MAX (Invitrogen) según el protocolo del fabricante.
 4.4. Western Blot 
Las transferencias se incubaron con anticuerpo β-actina (1: 20000, Sigma), anticuerpo
MyoVa (1: 800, Cell Signaling Technology, Beverly, MA, EE. UU.), Anticuerpo Rab27a (1: 500, 
Santa Cruz, CA, EE. UU.), Mlph anticuerpo (1: 800, ProteinTech Group, Inc. Chicago, IL, EE. 
UU.) a 4 ° C durante la noche. Luego se lavaron las transferencias tres veces con TBS-T
(solución salina tamponada con Tris con Tween 20) y se incubaron con anti-conejo conjugado
con peroxidasa de rábano picante (1: 1000, Bethyl Laboratories, Montgomery, AK, EE. UU.)
O anti-ratón (1: 20000). , Bio-Rad, Hercules, CA, EE. UU.) Antisuero a temperatura ambiente
durante una hora. Los anticuerpos unidos se detectaron utilizando un sustrato
quimioluminiscente SuperSignal® West Pico (Thermo Scientific, Waltham, MA, EE. UU.). Las
bandas en las membranas se detectaron mediante quimioluminiscencia y se visualizaron con
FluorChem E (ProteinSimple, San José, CA, EE. UU.).
 
4.5. Inmuno-Fluorescencia (IF)
Un día antes de la transfección, los melanocitos melan-a se sembraron en una cámara a
60% de confluencia y se aplicaron miRNA más 20 mN de ARNip mixto ARNi MAX
(Invitrogen) según el protocolo del fabricante. Los melanocitos Melan-a transfectados con
miRNA y siRNA después de 72 h se lavaron con DPBS (salina tamponada con fosfato de
Dulbecco) y luego se fijaron en 2 ml de formalina durante 15 minutos a temperatura
ambiente. Las cámaras se lavaron tres veces con PBS y luego se permeabilizaron con 1 ml
de Tripton al 0,1% durante 15 minutos y luego se bloquearon utilizando 1 ml de BSA al 2%
(albúmina de suero bovino). Después del lavado completo, las secciones se incubaron con el
primer anticuerpo (HMB45) diluido con BSA al 2% durante dos o tres días a 4 ° C con
agitación. El anticuerpo conjugado con FITC se diluyó con BSA al 2% o PBS tratado durante
una hora a 4ºC con agitación, seguido de lavado tres veces con PBS.

4.6. PCR cuantitativa en tiempo real

La PCR cuantitativa en tiempo real se realizó con un kit maestro FastStart Essential DNA
Probe Master (Roche, Mannheim, Alemania) con la Universal Probe Library (Roche). La
reacción se llevó a cabo de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las sondas para Rab27a
(# 21, NM_023635.5), Mlph(# 108, NM_053015.3) y MyoVa (# 21, NM_010864.2) se
diseñaron utilizando el Centro de diseño de ensayos de bibliotecas de sondas. Las
condiciones de ciclado fueron de 600 segundos a 95 ° C seguidas de 40 ciclos a 95 ° C
durante 20 segundos y 60 ° C durante 40 segundos en un Lightcycler® Nano (Roche,
Basilea, Suiza). El cADN resultante se amplificó con los siguientes cebadores: Rab27a
sentido 5'-GAAGACCAGAGGGCAGTGAA-3 'y antisentido 5'-ACTGGTTTCAAAA-
TAGGGGATTC-3'; MyoVa sense 5′-GCGCCATCACCCTAAACA-3 'y antisentido 5′-
CCAGTTGACTGACATTGTACCTG-3'. Los tres niveles de expresión génica se normalizaron
a la β-actina de ratón.
Los valores se presentan como media ± desviación estándar de tres pozos.

4.7. miRNA y RNAs pequeños de interferencia

 Para investigar posibles miRNAs dirigidos a la melanofilina, usamos dos programas,

TargetScanMouse ( http://www.targetscan.org (http://www.targetscan.org) ) y Diana Tools
(http://diana.imis.athenainnovation.gr/DianaTools/index.php). 
Todos los miARN utilizados en este estudio, incluidos los inhibidores de cada microARN,
se adquirieron de GenePharma (Shanghai, China) ( Tabla 1 ). Los oligonucleótidos de ARNip 
se adquirieron de Bioneer (Daejeon, Corea). Las secuencias de sentido y antisentido para
dúplex individuales dirigidas a Mlph de ratón fueron las siguientes: Mlph sense era 5'-
GGGCAAAAUACAAAAGGAGUUTT – 3 ', y antisentido era 5'-
CUCCUUUUGUAUUUUGCCCUUTT – 3'.

4.8. Detección y cuantificación de la agregación de melanosomas

Los melanocitos de Melan-a se sembraron en placas de 24 pocillos y se cultivaron
 durante 24 h. Las células se enjuagaron luego en DPBS y se trataron con muestras de RPMI- 
1640 que contenían FBS al 2% durante tres días. Las células se observaron en campo claro
utilizando un microscopio digital (iRiS TM , Logosbio, Corea). La evaluación de la agregación
de melanosomas se realizó contando las células con agregados de melanosomas
perinucleares en tres campos microscópicos aleatorios por pocillo a 200 aumentos.
Los valores se presentan como media ± desviación estándar de tres pozos.

4.9. Ensayo de luciferasa

Construimos un vector sensor uniendo las regiones con un posible sitio de unión de la 3′-
UTR de Mlph de ratón a un vector pGLuc-basic indicador de luciferasa adquirido de
Cosmogenetech (Seúl, Corea) para identificar las secuencias diana reconocidas por los
miRNAs . Para la amplificación de estos ARNm, se sembraron melanocitos melan-a en
placas de seis pocillos a una concentración de 3.0 × 10 5/ bien el día antes de la transfección.
El vector, a una concentración de 0.5 μg / pocillo, y miRNAs 10 nM o miRNA de control no
específico, se usó para la cotransfección de las células usando los liposomas catiónicos
Lipofectamine RNAi MAX. Las actividades de la luciferasa se midieron utilizando un kit de
ensayo de luciferasa de BioLux (NEW ENGLAND BioLabs Inc., MA, EE. UU.) De acuerdo
con el protocolo del fabricante, 48 h después de la cotransfección.

Contribuciones de autor
Conceptualización: SJ y JS; validación: CH, JI y SC; Análisis formal: JA y JI;
investigación: SJ y JA; Curación de datos: JA; escritura — preparación del borrador original:
SJ y JS; escritura, revisión y edición: JA y JS; visualización: JI; supervisión: JS;
Administración del proyecto: JS

Fondos
Esta investigación no recibió financiación externa.

Expresiones de gratitud
 Este trabajo fue apoyado por una subvención de la Fundación Nacional de Investigación

de Corea (NRF) financiada por el gobierno de Corea (MSIT) (NRF-2017R1D1A1B03030045).

Conflictos de interés

Los autores declaran que no existen conflictos de intereses.

Referencias

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