TIPOS DE SIEMBRA

M.Sc. Estefanía Peña

 Aprender a aplicar diferentes
tipos de técnicas de siembra.

OBJETIVOS
Aprender mediante el uso de
técnicas microbiológicas a aislar
y cultivar microorganismos en
medios sólido y líquidos.
 SIEMBRA, SEMBRAR O
INOCULAR

• Es introducir artificialmente una porción de

muestra (inóculo) en un medio adecuado,
con el fin de iniciar un cultivo microbiano,
para su desarrollo y multiplicación.
• Una vez sembrado, el medio de cultivo se
incuba a una temperatura adecuada para el
crecimiento.
 LAS SIEMBRAS PUEDEN SER

• 1.- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera

vez.
• 2.- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra
primaria.
 Que se efectúen asépticamente

Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén

esterilizados

L AS R E G LAS Que se realicen solo los manipuleos indispensables

FUNDAME NTALES
PAR A E FE CT UAR L A
SI E MB R A E XI GEN: Que se trabaje fuera de toda corriente de aire.

De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar.

Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio

utilizado y los requerimientos del microorganismo a estudiar.
 El material que se inocula en el
medio se denomina inoculo.

AISLAMIENTO
Cuando se inocula un medio como
agar nutritivo u otros medios con
agar en placas Petri, por el método
de siembra por estría cruzada en
placa, las células quedan separadas
individualmente.
 MATERIALES USADOS PARA SIEMBRA

Asa de Drigalsky Asa de Bacteriológica Filamento o aguja

• Pipeta: Debe ser previamente esterilizada y tener un tapón de
algodón en la zona que entra en contacto con el dispensador
de pipeta. Las más utilizadas en el trabajo ordinario son: las de
"Pasteur", que se elaboran con cristal fusible o plástico
descartable.
• Hisopos: Consisten en un fino aplicador, generalmente de
madera, con una pequeña mota de algodón adherida en uno de
sus extremos. Para ser esterilizados deben ser colocados en el
interior de tubos de ensayo con tapón de algodón.
 COLONIAS O UNIDADES
FORMADORAS DE COLONIAS

• Durante la incubación, las células microbianas individuales se

reproducen tan rápidamente que en un tiempo de 18 a 24 horas
producen masas visibles a simple vista, denominadas colonias.
• Cada colonia que se observe diferente, presumiblemente es un
cultivo puro de una sola clase de bacterias. Si dos células
microbianas procedentes del inoculo original quedan muy cerca la
una de la otra sobre el medio de agar, las colonias que resulten
pueden quedan mezcladas o muy juntas. La siembra por estría
permite aislar bacterias que dan lugar a colonias separadas y
posteriormente, transfiriendo una sola colonia a un medio nuevo,
se permite el desarrollo de un cultivo puro bacteriano.
 SIEMBRA POR ESTRÍA

http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/streakplate/streak_plate/streak_plate.html
 MEDIO LIQUIDO

• Siembra por dilución: Se toma el

tubo de ensayo con medio
líquido, como el caldo simple. Se
toma el material a diluir y se
siembra en el tubo con el uso del
asa cargada con el material
bacteriológico, se agita, con
movimientos moderados.
• - Medio de cultivo: Liquido
• - Instrumento: Asa
• - Finalidad: poner la
bacteria en suspensión.
SIEMBRA EN MEDIO LÍQUIDO
 MEDIOS
SÓLIDOS

• Siembra por inmersión: se

coloca el inóculo en una placa
o caja de Petri y sobre el
mismo se vierte el medio de
cultivo previamente fundido.
Este método se utiliza para
microorganismos aerobios.
 MEDIOS SÓLIDOS

• Siembra en doble capa: Una vez

solidificado el medio se vierte una cantidad
extra de medio necesaria para cubrir la
capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.).
Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y
microaerofílicos.
 • Siembra en superficie: se vierte sobre
una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se
deja solidificar y se coloca sobre la superficie el
inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se
extiende el inóculo hasta su absorción total por el
MEDIO medio de cultivo. Este tipo de siembra se
recomienda para microorganismos aerobios
SÓLIDO estrictos.
 MEDIOS SÓLIDOS

• Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo

fundido y se deja solidificar.
• Con éste procedimiento se puede conseguir una buena separación de las
colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca
en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se
toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del
medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas:
TECNICA DE SIEMBRA POR ESTRIAS

✓Con un asa bacteriológica, se pasa una porción de

la muestra a la superficie de un medio de cultivo
hecho a base de agar y se siembra en el medio por
estrías en cuadrantes.
 TÉCNICAS DE SIEMBRA POR ESTRÍAS

• Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener

colonias aisladas
• • Técnica A Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas
en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el ansa, se enfría, se gira
la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada
inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por último, sin quemar el
ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.
 POR AGOTAMIENTO

• Técnica B Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se

hacen 3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se
repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.
DILUCIONES
SERIADAS