PRÁCTICA N*5

MORFOLOGÍA Y OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

DE LAS BACTERIAS

YEIKOT STEVEN ESCOBAR AGUILAR 121004512- MAYER ZARAY LINARES

TUNJANO 121004516- NORBEY SANTIAGO CORTES ANAYA 121004508 -
GERMÁN ANDRÉS AGUIRRE MARTÍNEZ 121004500- KARLA SIRENE
ALFONSO MOJICA 121004501

OBJETIVOS
● Preparar frotis de bacterias para observación microscópica.
● Clasificar bacterias por su forma y su reacción a la coloración de Gram.

CONSULTA PREVIA:

1. ¿Cómo se elimina en un cultivo una infección por bacterias?

Los antibióticos son los fármacos utilizados para tratar las infecciones causadas por
bacterias. Actúan contra las infecciones matando las bacterias o dificultando su
desarrollo y reproducción.

En la selección del antibiótico adecuado para el tratamiento de una infección, el

médico debe realizar un diagnóstico específico. En gran parte de las infecciones, la
relación entre el microorganismo causante de esta y el cuadro clínico no es
constante, por lo que es importante identificar cuál es la bacteria responsable del
proceso infeccioso. Referencia

2. ¿En dónde actúan los antibióticos betalactámicos?

Los antibióticos β-lactámicos son bacteriolíticos, y actúan inhibiendo la síntesis de la

barrera de peptidoglicanos de la pared celular de bacterias sensibles. La barrera de
peptidoglicanos es importante para la integridad estructural de la pared celular,
especialmente para los microorganismos Gram positivos.1

Se trata de antibióticos de acción bactericida lenta, con actividad dependiente del

tiempo, que en general tienen buena distribución y escasa toxicidad. Algunas
modificaciones de la molécula original han dado lugar a compuestos con mayor
espectro antimicrobiano, pero la progresiva aparición de resistencias limita su uso
empírico y su eficacia en determinadas situaciones. Aun así, la penicilina continúa
siendo el tratamiento de elección en un buen número de infecciones; las
cefalosporinas tienen un gran abanico de indicaciones; los carbapenémicos se usan
en infecciones nosocomiales y en infecciones causadas por bacterias
multirresistentes, y los inhibidores de las betalactamasas permiten recuperar el
espectro de actividad de las penicilinas a las que acompañan cuando la resistencia
está causada por la producción de betalactamasas.2

3. ¿Cuál es el mecanismo que utilizan las bacterias resistentes a los

betalactámicos?

Hidrólisis enzimática: este mecanismo implica la inactivación de los betalactámicos

como consecuencia de la acción de enzimas que reciben el nombre de
betalactamasas, y es el principal mecanismo de resistencia a betalactámicos. Estas
enzimas son un claro ejemplo de la plasticidad de la genética bacteriana. Referencia

METODOLOGÍA:
MATERIALES
● Cultivo de bacterias Gram positivas y Gram negativa

EQUIPOS
● Microscopio Binocular

VIDRIERIA Y OTROS
● Láminas portaobjetos
● Láminas cubreobjetos
● Asa bacteriológica
REACTIVOS

● Colorante violeta cristal de Gram (violeta de Genciana)

● Solución yodo Gram
● Solución decolorante (acetona-alcohol)
● Safranina
● Solución salina

DESCRIPCIÓN DE LOS REACTIVOS

Colorante violeta cristal de Gram (violeta de Genciana)

● Provoca lesiones oculares graves.

● Toxicidad aguda
● Carcinogenicidad
● Toxicidad acuática aguda y crónica

Solución yodo Gram

● Irritación ocular
● Toxicidad acuática crónica
● no tiene peligros conocidos
Solución decolorante (acetona-alcohol)
 ● Líquido inflamable
● Irritación ocular
● Toxicidad específica en determinados órgano

Safranina

● Lesiones oculares graves

Solución salina

● No tiene ningún peligro conocido

REFERENCIAS

• Audesirk T, Audesirk G. BIOLOGIA LA VIDA EN LA TIERRA. Universidad

de Colorado, Denver. 6ª edición 2003.

• Campbell Neil A. Reece Jane B. BIOLOGIA 7A EDICION. Editorial médica

PANAMERICANA. 2007.
 INFORME

INTRODUCCIÓN

En las últimas décadas se han hecho importantes avances en el estudio de la ultra

estructura bacteriana, lográndose una identificación bioquímica de muchas
fracciones subcelulares; estos avances han permitido ubicar a las bacterias en el
reino Procariota (Perez y Mota 2008). La identificación de bacterias en microbiología
se ha basado, y se sigue basando, en la taxonomía clásica y tradicional de sus
caracteres fenotípicos como morfología, aspecto en los medios de cultivo,
propiedades fisiológicas, propiedades bioquímicas, degradación de
macromoléculas, tipos de enzimas respiratorias, necesidades nutricionales,
características quimio taxonómicas, inhibición por diversas sustancias y reacción
frente anticuerpos. la identificación de microorganismos es esencial para reconocer
un proceso infeccioso. Inicialmente, mediante la coloración de hematoxilina-eosina,
se puede identificar el patrón de inflamación asociado y luego, a través de tinciones
basadas en plata y la tinción de Gram de tejido se visualizan los microorganismos
(Jimenez y Velez 2013). Por ello la adquisición de estas técnicas y conocimientos
son de vital importancia, para formar profesionales de la salud competentes, que
ante una posible infección sepan cómo proceder a identificar las posibles bacterias
que hayan causado la misma, y poder proceder de manera adecuada a tratar dicha
infección y combatir las bacterias presentes en dicho organismo, conocimientos y
técnicas prácticas que se espera se hayan comprendido en la sesión de laboratorio
y para ello se expondrá de manera investigativa todos los conocimientos adquiridos
durante la sesión y buscar despejar dudas o interrogantes que pudieron surgir por
medio de revisión bibliográfica.

MATERIALES

● Cultivo de bacterias Gram positivas y Gram negativa

● Colorante violeta cristal de Gram (violeta de Genciana)
● Solución yodo Gram
● Solución decolorante (acetona-alcohol)
● Safranina
● Solución salina
CUESTIONARIO

¿Cuáles bacterias son más susceptibles a los antibióticos cuyo blanco de acción es
la pared celular?

● Las porinas son estructuras proteicas que determinan la permeabilidad de la

membrana externa por medio de canales abiertos al tránsito de agua,
facilitando el transporte pasivo de moléculas hidrofílicas. Por medio de
canales hidrofílicos se selecciona el ingreso de partículas según carga y
tamaño de éstas, permitiendo la difusión de un elevado número de moléculas
incluyendo antibióticos. Se encuentran presentes en la membrana externa de
bacterias Gram negativas, siendo su estructura diferente a las proteínas de
membrana. (Delcour, 2009)

ya que están conformadas de dos hojas antiparalelas con secuencia polar,

siendo una proteína extremadamente resistente a detergentes

¿Por qué las bacterias Gram positivas son más resistentes al estrés ambiental

● Mohammed Bakkali, científico del departamento de Genética de la Facultad

de Ciencias de la UGR, sostiene que el abuso que hacemos de los
antibióticos “obliga” a las bacterias a captar ADN de otras bacterias que sí
son resistentes a ellos, ya que la presencia de antibióticos las somete a un
enorme estrés.

Las bacterias Gram positivas tienen una mayor cantidad de peptidoglucano a

comparación de las bacterias Gram negativas de esta forma se genera una
estructura rígida, con forma de jaula que rodea la totalidad de la célula, y que
hace del peptidoglicano (mureína) una de las moléculas de mayor tamaño
que se conocen haciéndolas más resistentes al estrés ambiental.

¿Qué función específica cumple cada uno de los reactivos utilizados en la

coloración Gram de las bacterias?

● cristal violeta: teñir a todas las bacterias gram positivas y gram negativas
● lugol: fija el colorante
● alcohol 96°: decoloración de las bacterias gram negativas
● safranina: teñir las bacterias gram negativas
RESULTADOS

GRAM NEGATIVAS GRAM POSITIVAS

Tinción de Gram
Bacterias presentes en el yogurt
Extracción de muestra (cultivo sólido) Frotis de Muestra en portaobjetos

Fijar muestra (Calor-aire) Tinción muestras -(cristal violeta)

después de un minuto Fijación de colorante (lugol)

se lava con agua esperar 30 segundos
 se lava abundantemente con agua alcohol 96- 15 segundos

se vuelve a lavar con agua safranina 1 o 2 min para teñir bacterias

gram negativas

finalmente se vuelve a lavar con agua se seca con ayuda de un mechero

 Objetivo de 100 aumentos y una gota de inmersión

ANÁLISIS DE RESULTADOS
El fundamento de la técnica está basado en las diferencias de las paredes celulares
entre las bacterias Gram negativas, donde la capa de peptidoglicano es delgada y
las de las bacterias Gram positivas con capas gruesas. Esta diferencia de
espesores de paredes tiene como ventajas que las bacterias se tiñen diferentes
siendo más fácil su identificación.
Se pudo observar que dependiendo del color que tomen las bacterias se puede
deducir si son Gram positivas o Gram negativas, si toma un color azul oscuro o
morado se puede deducir que son bacterias Gram positivas, esto se debe a que
poseen una pared celular gruesa con numerosas capas de peptidoglucano, las
cuales retienen el colorante cristal violeta.
Si se torna de color rosa es porque son bacterias Gram negativas, y toma este color
debido a que estas bacterias poseen una pared celular fina y que tienen una
segunda membrana lipídica esto hace que se retenga el colorante cristal violeta y de
esta manera toman el color de la safranina.

CONCLUSIÓN

En esta práctica al preparar un frotis de bacterias para la observación, se pudo

identificar y clasificar bacterias según su forma y reacción a la coloración de Gram,
dependiendo de la forma se pueden denominar por ejemplo: si están en forma de
esferas son cocos, en forma de bastones son bacilos y en forma de espiral se les
denominan espirilos.

Dependiendo de la reacción se puede concluir que hay 2 tipos: GRAM positivas o

GRAM negativas y se observan con ayuda de la tinción sus diferencias las GRAM
positivas toman un color violeta y las GRAM negativas un color rosado.

REFERENCIAS

1. Delcour, A. H. Permeabilidad de la membrana externa y resistencia a los

antibióticos. Biophys, 2009.

2. Jiménez Guillermo A. – Vélez Hoyos A. Tinción de Gram de tejido.

Microbiología. Investigaciones dinámicas. 2013.
https://www.dinamicaips.com.co/files/investigaciones/2013_investigacionesdi
namica_tincion_gram_tejido.pdf

3. Mohammed Bakkali, científico del departamento de Genética de la

Facultad de Ciencias de la UGR

4. Mota M. Perez M. Capítulo 2 Morfología y Estructura bacteriana.2008.

http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf

5. Vizcarrondo, M. Gutierrez, S. 2001, laboratorio de microbiología-

morfología y tinción de los microorganismos.