1.

2 Partes y funcionamiento del MO

Microscopio óptico (MO):

La palabra microscopio deriva de dos
vocablos griegos: micros (pequeño) y
scopein (ver).

En términos generales, un microscopio es

todo instrumento que permite amplificar la
imagen de un objeto o de un ser pequeño.

Rubio Campal, F.; García Espinoza, B.; Carrasco Carrasco, M. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos; Parainfo: 1
Madrid, 2004; p 3.
 Partes del microscopio óptico

Mecánica Óptica

Leica Microsystems GmbH, https://www.leica-microsystems.com/es/productos/, 04 de Enero de 2019. 2

 Partes mecánicas del MO

Tubo

Columna
Revólver

Platina
Anillos de enfoque

Control X/Y (platina)

Pie

Leica Microsystems GmbH, https://www.leica-microsystems.com/es/productos/, 04 de Enero de 2019. 3

 Descripción de las partes mecánicas
Pie: Es la base del microscopio.

Tubo Columna: Une el pie con el tubo.

Tubo: En sus extremos estan alojados los

Revólver Columna
oculares y los objetivos.

Platina: Es la plataforma donde se sitúa la

preparación de la muestra para su
observación.
Platina
Revólver: Permite el acoplamiento de 4 a 6
Pie objetivos en orden creciente.

Rubio Campal, F.; García Espinoza, B.; Carrasco Carrasco, M. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos; Parainfo: 4
Madrid, 2004; p 3.
 Descripción de las partes mecánicas

Anillos
de enfoque
Anillos de enfoque : Mueven la platina hacia
arriba y hacia abajo.
 Macrométrico o de avance rápido.
 Micrométrico o de avance lento.

Control X/Y: Permite desplazar la platina en

plano horizontal para explorar diferentes
zonas de la muestra.

Control X/Y

Rubio Campal, F.; García Espinoza, B.; Carrasco Carrasco, M. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos; Parainfo: 5
Madrid, 2004; p 3.
 Partes ópticas del MO

Oculares

Objetivos

Condensador y diafragma

Fuente de luz

Leica Microsystems GmbH, https://www.leica-microsystems.com/es/productos/, 04 de Enero de 2019. 6

 Descripción de las partes ópticas
Oculares
Oculares: Amplía la imagen formada por los
objetivos.

Objetivos: Lentes principales que amplían la

imagen de la muestra.
Objetivos
Condensador: Enfoca la luz a través de la
muestra.

Condensador Diafragma: Regula la cantidad de luz que

y diafragma atraviesa la muestra.

Fuente de luz Iluminador: Fuente de luz.

Rubio Campal, F.; García Espinoza, B.; Carrasco Carrasco, M. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos; Parainfo: 7
Madrid, 2004; p 3.
 Parte interna del microscopio óptico
Ocular
Línea de visión Trayecto de luz
Prisma
Tubo

Lentes Lentes del objetivo

convergentes Muestra
Lentes del condensador

Iluminador

Estativo con la
fuente de luz

Torota, J. G.; Derrickson, B. Introducción a la Microbiología; Médica Panamericana: México, 2007; p 58. 8
 Lentes

Una lente es una pieza de material

transparente que puede enfocar un haz de
luz transmitido de forma que se produce
una imagen.

Convergentes Divergentes

Sternheim, M. M; Kane, W. J. Física; Reverte: Barcelona, 2007; pp 556-558. 9

 Lentes convergentes

Una lente convergente se caracteriza porque un haz de rayos luminosos paralelos, después
de atravesarlas, convergen en un punto para formar una imagen real.

Foco
Eje

Lente biconvexa
Cromer, A. H. Física para las ciencias de la vida; Reverté: Barcelona, 1981; p 358. 10
Martínez Ramírez, E; Martínez Ramírez, J. Física 2° Bachillerato; Parainfo: Madrid, 2016; p 219
 Tipos de lentes convergentes

Las lentes convergentes son más anchas por el centro que por los extremos.

a) Doble convexa (biconvexa) b) Plano convexa c) Menisco convergente

Cromer, A. H. Física para las ciencias de la vida; Reverté: Barcelona, 1981; p 358. 11
Martínez Ramírez, E; Martínez Ramírez, J. Física 2° Bachillerato; Parainfo: Madrid, 2016; p 219
 Lentes divergentes

Una lente divergente se caracteriza porque un haz de rayos luminosos paralelos, después
de atravesarlas, diverge para formar una imagen virtual.

Foco
Eje

Lente bicóncava
Cromer, A. H. Física para las ciencias de la vida; Reverté: Barcelona, 1981; p 358. 12
Martínez Ramírez, E; Martínez Ramírez, J. Física 2° Bachillerato; Parainfo: Madrid, 2016; p 219
 Lentes divergentes

Las lentes divergentes son más anchas por los extremos que por el centro.

a) Bicóncava b) Plano cóncava c) Menisco divergente

Cromer, A. H. Física para las ciencias de la vida; Reverté: Barcelona, 1981; p 358. 13
Martínez Ramírez, E; Martínez Ramírez, J. Física 2° Bachillerato; Parainfo: Madrid, 2016; p 219
 Lentes

Conoce tu visión, www.design.com, 04 de Enero de 2019. 14

 Trayecto de la luz en el microscopio óptico
Ocular
Línea de visión Trayecto de luz
Prisma
Tubo

Lentes Lentes del objetivo

convergentes Muestra
Lentes del condensador

Iluminador

Estativo con la
fuente de luz

Torota, J. G.; Derrickson, B. Introducción a la Microbiología; Médica Panamericana: México, 2007; p 58. 15
 Lentes del ocular

Aumentos
10x
Lente ocular
Lente ocular

Diafragma Lente de campo

Diafragma
Lente de campo

Ocular de Huygens Ocular de Ramsden

Alicia Brusco, H; López Costa, J.J.; Fabían Loidl, C. Histología Médico-Práctica; Elsevier: Barcelona, 2014; pp 24-25. 16
Histopotica, https://histoptica.com/microscopios-clasificacion-de-oculares/, 04 de Enero de 2019.
 Lentes del ocular

Protector
Lente ocular
Tercer lente

Segundo grupo de lentes

Diafragma Plano de la imagen intermedia
Tornillo fijador Primer grupo de lentes

Ocular Periplan
Alicia Brusco, H; López Costa, J.J.; Fabían Loidl, C. Histología Médico-Práctica; Elsevier: Barcelona, 2014; pp 24-25. 17
Histopotica, https://histoptica.com/microscopios-clasificacion-de-oculares/, 04 de Enero de 2019.
 Lentes del objetivo

El aumento total se calcula

mediante el producto del aumento
del ocular por el aumento del
objetivo empleado.

Diámetro de campo

Leica Microsystems GmbH, https://www.leica-microsystems.com/es/productos/, 04 de Enero de 2019. 18

Alicia Brusco, H; López Costa, J.J.; Fabían Loidl, C. Histología Médico-Práctica; Elsevier: Barcelona, 2014; pp 24-25.
 Información de los objetivos
Tipo
de objetivo
Aumentos

Aumento/
Apertura numérica
Inmersión
Collar de corrección
Escaneo confocal

Collar de corrección
Corrige la variación del espesor y la
temperatura del vidrio de cobertura.
Inmersión
Agua
Aceite
Glicerina

Leica Microsystems GmbH, https://www.leica-microsystems.com/es/productos/, 08 de Enero de 2019. 19

 Información de los objetivos
Tipo de objetivo Etiqueta de color
Clase de objetivo,
Método de contraste
designaciones especiales Estándar
Pol/DIC
Ph 0 1 2 3

Código de color
Aumento/ (aumentos)
Apertura numérica
Detalles adicionales en:

• Medios de inmersión
(oil/W/Glyc)
• Método de contraste

Tubo largo/ Espesor

de vidrio (mm)
Óptica ICS: ∞
Sistema de corrección de color infinito
Fluido
Vidrio de color estándar: 0.17
Sin vidrio: 0 de inmersión
intensivo:-
Aceite
Agua
Glicerina
Collar de corrección mecánica para Aceite/Agua/Glicerina

• Corrección de espesor de vidrio

• Inmersión diferente
• Temperatura diferente
• Diafragma

Carl Zeiss Microscopy GmbH, https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/microscope-components/objectives.html, 04 de Enero de 2019. 20

 Parte interna de los objetivos de un MO
Corte transversal de un objetivo
Hilo de objetivo 1
Cubierta externa del objetivo 2
Sistema de resorte para el mecanismo
3
de protección de muestras
Conjunto de lentes para la corrección
4-7
de imagen
Cuello corrector para adaptarse a los
espesores o temperaturas de los 8
vidrios de cobertura
Sistema de lente frontal 9
Porta lente frontal 10
Carl Zeiss Microscopy GmbH, https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/microscope-components/objectives.html, 04 de Enero de 2019. 21
 Tipos de objetivos
Acromáticos Semi- apocromáticos Apocromáticos
HI PLAN PL Fluotar PL APO
N PLAN PL S-Apo PL APO CS/CS2
FL PLAN PL IRAPO

Aberración
esférica

Aberración
cromática

Leica Microsystems GmbH, https://www.leica-microsystems.com/es/productos/, 08 de Enero de 2019. 22

 Tipos de objetivos

Acromático 10x Fluorita 10x Apocromático 10x

Lentes
dobles Lentes
triples
Lentes
triples Grupo de
Lentes lentes
Lentes
dobles dobles
dobles
Lentes Lentes
frontales frontales

Factores de corrección comunes de objetivos ópticos

Davidson Wattson, M. Cibercita. En: Microscopy. The source for microscopy education. https://www.microscopyu.com/microscopy-
50
basics/introduction-to-microscope-objectives, 13 de Enero de 2019.
 Función de las lentes

Lentes fotográficos, www.design.com, 07 de Enero de 2019. 24

 Tipos de objetivos

Corrección de objetivos para aberración óptica

Aberración
Tipo de objetivo Aberración esférica Curvatura de campo
cromática
Acromático 1 color 2 colores No
Plan Achromat 1 color 2 colores Si
Fluorite 2-3 colores 2-3 colores No
Plan Fluorite 3-4 colores 2-4 colores Si
Plan Apochromat 3-4 colores 4-5 colores Si

Davidson Wattson, M. Cibercita. En: Microscopy. The source for microscopy education. https://www.microscopyu.com/microscopy-
25
basics/introduction-to-microscope-objectives, 13 de Enero de 2019.
 Objetivos apocromáticos
10x (NA=0.30) 20x (NA=0.65) 40x (NA=0.95) 100x (NA=1.40)

Lente frontal
elemental

Grupo de lentes frontales Lente frontal estacionario

de bajos aumentos autoensamblado
Davidson Wattson, M. Cibercita. En: Microscopy. The source for microscopy education. https://www.microscopyu.com/microscopy-
26
basics/introduction-to-microscope-objectives, 13 de Enero de 2019.
 Apertura numérica (AN)

La apertura numérica determina el poder de resolución y el brillo de la imagen. Es una

medida para el ancho y la profundidad del punto focal que produce el objetivo.

Cono
de luz

Davidson Wattson, M. Cibercita. En: Microscopy. The source for microscopy education. https://www.microscopyu.com/microscopy- 27
basics/numerical-aperture, 14 de Enero de 2019.
 Características de objetivos

Lentes y objetivos en microscopia, https://www.youtube.com/watch?v=4kzojQOSUxU , 09 de Enero de 2019 28

 Resolución

El límite de resolución LR de un
sistema óptico generalmente se
define como la distancia más
pequeña entre dos estructuras de
objeto que se perciben como
separadas.

Microtúbulos
Alicia Brusco, H; López Costa, J.J.; Fabían Loidl, C. Histología Médico-Práctica; Elsevier: Barcelona, 2014; pp 27-28. 29
MicroscopU, https://www.microscopyu.com/microscopy-basics/resolution, 04 de Enero de 2019.
 Resolución

Súper resolución: Núcleo de una célula de cáncer de hueso

Image for: US Patent granted for Super Resolution Localization Microscopy of naturally occurring GFP, https://idw-online.de/en/image166905,
30
17 de Enero de 2019.
 1.3 Métodos de iluminación

Campo claro Campo oscuro Contraste de fase

Torota, J. G.; Derrickson, B. Principios de Anatomía y Fisiología; Médica Panamericana: México, 2013; p 60. 31
 Métodos de iluminación
Ojo Ojo Ojo

Ocular
Ocular
El objetivo solo captura Placa de difracción
la luz reflejada por la Luz no difractada
muestra (no alterada por la muestra)
Objetivo
Objetivo Luz refractada o difractada
(alterada por la muestra)
Muestra Luz no Muestra
reflejada Condensador
Condensador
Diafragma anular
Disco opaco

Luz Luz Luz

Campo claro Campo oscuro Contraste de fase
Torota, J. G.; Derrickson, B. Principios de Anatomía y Fisiología; Médica Panamericana: México, 2013; p 60. 32
 Métodos de iluminación

Campo claro Campo oscuro Contraste de fase

 La iluminación brillante  No puedan teñirse con  Observación detallada

muestra las estructuras métodos estándares. de estructura interna
internas y el contorno de la muestra en
de la cubierta externa.  Microorganismos no microorganismos
teñidos suspendidos vivos.
en un líquido.

Torota, J. G.; Derrickson, B. Principios de Anatomía y Fisiología; Médica Panamericana: México, 2013; p 60. 33
 Microscopio de fluorescencia

Zoe Bio-Rad
Bio-Rad, http://www.bio-rad.com/es-mx/product/zoe-fluorescent-cell-imager?ID=N74CIZE8Z, 14 de Enero de 2019. 34
 Fotomicrografías de microscopio de fluorescencia

Células de Mucus caliciformes teñidas con germen de trigo aglutinina Alexa Fluor 350 (lectina fluorescente azul),
filamentos de actina teñida con phaloidina Alexa Fluor 568 fluorescente rojo-naranja y núcleos teñidos con tinción de
ácido nucleico verde SYTOX en una sección del intestino del ratón.
Bio-Rad, http://www.bio-rad.com/es-mx/product/zoe-fluorescent-cell-imager?ID=N74CIZE8Z, 14 de Enero de 2019. 35
 Microscopio de fluorescencia
Detector

Ocular Filtro de emisión

Espejo dicroico

Fuente de luz

Filtro de excitación
Objetivo

Muestra

Bio-Rad, http://www.bio-rad.com/es-mx/product/zoe-fluorescent-cell-imager?ID=N74CIZE8Z, 14 de Enero de 2019. 36

 Interpretación de microestructuras y fotomicrografía

Células de fibroblastos de riñón de mono verde africano normal (línea CV-1)

https://www.microscopyu.com/galleries/popups/diverter?s=normal-african-green-monkey-kidney-fibroblast-cells-cv-1-line-6, 20 de Enero de 37
2019.
 Interpretación de microestructuras y fotomicrografía

Células de fibroblastos de riñón de mono verde africano normal (línea CV-1)

https://www.microscopyu.com/galleries/popups/diverter?s=normal-african-green-monkey-kidney-fibroblast-cells-cv-1- 38
line-5, 14 de Enero de 2019.
 Interpretación de microestructuras y fotomicrografía

Células de fibroblastos de riñón de mono verde africano normal (línea CV-1)

https://www.microscopyu.com/galleries/popups/diverter?s=normal-african-green-monkey-kidney-fibroblast-cells-cv-1- 39
line-2, 14 de Enero de 2019.