UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE INGENIERIA QUÍMICA E

INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

Escuela Profesional de Ingeniería Química

ASIGNATURA

BIOTECNOLOGIA

PRODUCTO ACREDITABLE

PRESENTADO POR:
OLIVARES SILVA Jerson Andres. Autor.

REVISADO POR:
BARTUREN QUISPE Ada Patricia. Asesor.

LAMBAYEQUE – PERÚ 2020

 CONTENIDO
I. INTRODUCCION...............................................................................................................................2

II. AREAS DE IMPORTANCIA SIGNIFICATIVA DE LA BIOTECNOLOGIA: OGM’S, TRANSFERENCIA

DE ALERGENOS............................................................................................................................................3

III. BIOSINTESIS MICROBIANA..........................................................................................................6

IV. APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS DE LOS HONGOS.................................................................7

V. APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS...........................................................................................10

VI. PRODUCCION DE ACIDO ASCORBICO.......................................................................................13

VII. PRODUCCION DE ANTIBIOTICOS POR FERMENTACION...........................................................16

VIII. FLUIDOS SUPER CRITICOS COMO MEDIOS DE REACCION EN BIOTECNOLOGIA.......................18

IX. CATALIZADORES BIOLOGICOS...................................................................................................19

Referencias.......................................................................................................................................24

1
I. INTRODUCCION

El tema denominado “Biotecnología” trata sobre los diferentes estudios e

investigaciones que se han realizado a los seres vivos, lo cual ha permitido descubrir

nuevas cosas acerca de ellos para el beneficio de la humanidad.

Este tema me pareció sugestivo, innovador y trascendental, pero sobre todo

para explorar y adquirir conocimientos acerca de él y con la finalidad de conocer cómo

influye en el ser humano.

El trabajo es de vital importancia porque nos muestra una recopilación de

información científica y técnicamente comprobada, además su objetivo principal es dar

a conocer todo lo referente al tema escogido. Así mismo, contiene una información

minuciosamente analizada y está estructurada comprende los antecedentes,

definiciones y clasificación de la Biotecnología, la cual fue sintetizada según a la materia

que pertenece; el segundo abarca todos los aspectos particulares de la Biotecnología.

La biotecnología es un complemento, y no un sustituto, en muchas esferas de

la investigación agrícola convencional. Ofrece una variedad de instrumentos para

mejorar nuestra comprensión y ordenación de los recursos genéticos para la agricultura

y la alimentación. Esos instrumentos están contribuyendo ya a los programas de

mejoramiento y conservación y facilitando el diagnóstico, tratamiento y prevención de

enfermedades de las plantas y los animales. La aplicación de la biotecnología

proporciona al investigador nuevos conocimientos e instrumentos que aumentan la

eficacia de su trabajo. De este modo, los programas de investigación basados en la

biotecnología pueden ser considerados como una prolongación más precisa de los

métodos convencionales (Dreher et al., 2000). Al mismo tiempo, la ingeniería

genética puede ser considerada como una desviación radical de las técnicas

2
convencionales de mejoramiento porque confiere a los científicos la capacidad de

transferir material genético entre organismos que no podrían obtenerse por los medios

clásicos.

El diseño de catalizadores biológicos asistido por ordenador está empezando a

ser una realidad tangible. Las técnicas proporcionadas por la química teórica y

computacional, esencialmente la caracterización de estados de transición y la

consideración de las interacciones que se ponen en juego en medios tan complejos

como los medios proteicos, permiten abordar la tarea de diseñar catalizadores

altamente específicos que sean capaces de trabajar en condiciones suaves de pH,

presión, temperatura, disolvente. Es decir, permiten abrir la puerta a uno de los sueños

de la industria química y sobre todo de aquella industria que pretende ser sostenible y

compatible con la conservación del medio ambiente.

3
II. AREAS DE IMPORTANCIA SIGNIFICATIVA DE LA BIOTECNOLOGIA: OGM’S,
TRANSFERENCIA DE ALERGENOS

Situación actual de los OGM en el mercado internacional.

Acorde a las estadísticas de ISAAA (siglas en inglés de Servicio Internacional de

la adquisición y aplicaciones Biotecnológicas) el área global de cultivos GM ha crecido

47 veces. Desde 1996 y en el año 2004 se calculan 81 millones de hectáreas cultivadas

en 17 países. La soya tolerante a los herbicidas es el OGM más extendido, seguido del

maíz Bt, el algodón Bt y cánola tolerantes a herbicidas. Solamente 14 países poseen

50000 hectáreas dedicadas a cultivos biotecnológicos, estos se concentran en: EU,

Argentina, Canadá, Brasil, China, Paraguay, India y Sudáfrica. Más de una tercera parte

de los OGM están cultivados en países en vías de desarrollo (6).

Pero veamos que son los alimentos Genéticamente modificados.

¿Qué son los OGM?

La demanda de alimento global, ha aumentado la necesidad de cultivos

mejorados. La Biotecnología ofrece la tecnología necesaria para producir alimentos más

nutritivos y de mejor sabor, rendimientos más altos de cosecha y plantas que se

protegen naturalmente contra enfermedades, insectos y condiciones adversas. La

tecnología de alimentos genéticamente modificados permite efectuar la selección de un

rasgo genético específico de un organismo e introducir ese rasgo en el código genético

del organismo fuente del alimento, por medio de técnicas de ingeniería genética. Esto

ha hecho posible que se desarrollen cultivos para la alimentación con rasgos ventajosos

específicos u otros sin rasgos indeseables. En lugar de pasar 10 ó 12 años

desarrollando plantas a través de métodos de hibridación tradicional, mezclando

millares de genes para mejorar un cultivo determinado; la biotecnología actual permite

4
la transferencia de solamente unos pocos genes deseables, obteniendo cultivos con las

características deseadas en tiempos muy cortos (http://bioenlaces.com/alimentos.asp).

Un OGM es un organismo ya sea vegetal, animal o microorganismo, en el cual

se ha introducido un segmento de ácido nucleico que se incorpora de manera estable al

genoma, de forma diseñada y que está dirigido a obtener un nuevo fenotipo (5). Esta

introducción es realizada de tal manera que dicho gen no podría haber sido adquirido

por el organismo a través de mutaciones, recombinaciones u otras formas de

transferencias genéticas reconocidas como mecanismos que operan en la naturaleza

sin la intervención humana.

Transferencia de alérgenos

En los Estados Unidos, cerca de una cuarta parte del total de personas dicen

tener una reacción adversa a ciertos alimentos (Sloan and Powers, 1986). Los estudios

han demostrado que el 2% de los adultos y el 8% de los niños sufren alergias

alimentarias verdaderas, provocadas por la inmunoglobulina E (IgE) (Bock, 1987;

Sampson et al., 1992). Las personas con alergias causadas por IgE reaccionan

inmediatamente contra ciertas proteínas, reacción que puede ir desde una picazón a un

shock anafiláctico potencialmente fatal. Las alergias más comunes son al cacahuete,

otros frutos secos, y a los mariscos.

Los alérgenos pueden ser transferidos, por medio de la ingeniería genética, de

alimentos a los que las personas saben que son alérgicas, a alimentos que consideran

seguros.

En marzo de 1996, investigadores de la Universidad de Nebraska de los

Estados Unidos confirmaron que un gen alergénico de la nuez de Brasil había sido

transferido a la soja.

5
 La compañía Pioneer Hi-Bred International puso, en la soja, un gen de la nuez

de Brasil que codifica una proteína de la semilla, para mejorar su contenido proteico

como pienso animal.

En un ensayo in vitro y en una prueba sobre la piel, la soja transgénica

reaccionó con la IgE de los individuos que tenían alergia a la nuez de Brasil, de manera

tal que indicaba que los individuos habrían sufrido una reacción adversa a la soja y

potencialmente fatal (Nordlee et al., 1996) Este caso tuvo un final feliz.

Como resumió Marion Nestle, jefa del Departamento de Nutrición de la

Universidad de Nueva York, en un editorial del respetado New 12 England Journal of

Medicine, “en el caso especial de la soja transgénica, se sabía que la especie donante

era alergénica y, muestras de suero de las personas alérgicas a la especie donante

estaban disponibles para los ensayos; el producto fue retirado” (Nestle, 1996:726).

Sin embargo, virtualmente para cada alimento, le dirán los médicos

especialistas, existe alguien alérgico al mismo. Las proteínas son las que causan las

reacciones alérgicas y, virtualmente, cada transferencia de genes en los cultivos resulta

en una producción de proteínas. La ingeniería genética incorporará proteínas a los

cultivos alimentarios provenientes no sólo de fuentes conocidas de alérgenos comunes

como el cacahuete, los mariscos y los lácteos, sino de plantas de todo tipo, bacterias y

virus, cuyo potencial alergénico es en gran medida desconocido o poco común. Más

aún, no existe manera de realizar pruebas para determinar si una determinada proteína

será alergénica, debido a la escasez de los test que involucran suero de los individuos

alérgicos a esa determinada proteína. Este punto es fuertemente indicativo en el caso

de la soja transgénica que contenía gen de nuez de Brasil, donde los ensayos sobre

animales habían sugerido que la proteína de la semilla de la nuez del Brasil transferida

no era un alergeno (Nordlee et al., 1996). Si se hubiera confiado en los resultados de

las pruebas con animales y se hubiera aprobado la soja, los resultados podían haber

6
 sido desastrosos. Sin embargo, la mayoría de las compañías de biotecnología usan

cada vez más microorganismos en lugar de vegetales alimenticios como donantes de

genes o están diseñando proteínas artificiales, aun cuando el potencial alergénico de

estas proteínas es impredecible y no se pueda verificar. Consecuentemente, continúa

Nestle, “el próximo caso podría ser menos ideal y el público menos afortunado. Es del

mayor interés para todos desarrollar políticas reguladoras para los alimentos

transgénicos, que incluyan notificación previa a la comercialización y etiquetado”

(Nestlé, 1996:727).

III. BIOSINTESIS MICROBIANA

El crecimiento microbiano requiere la polimerización de bloques bioquímicos de

construcción para dar origen a proteínas, ácidos nucleicos, polisacáridos y lípidos. Los

bloques de construcción tienen que encontrarse preformados en el medio de cultivo o

tienen que sintetizarlo las células en crecimiento. Las demandas biosintéticas

adicionales dependen de las necesidades de coenzimas para que participen en la

catálisis enzimática. Las reacciones biosintéticas de polimerización necesitan la

transferencia de enlaces anhídrido a partir del ATP. El crecimiento exige una fuente de

energía metabólica para la síntesis de enlaces anhídrido y para la conservación de los

gradientes transmembrana de iones y metabolitos.

El metabolismo tiene dos componentes, catabolismo y anabolismo. El catabolismo

comprende procesos que albergan energía liberada por la degradación de compuestos

(p. ej., glucosa) y el aprovechamiento de esa energía para sintetizar ATP.

Por el contrario, el anabolismo o biosíntesis, comprende procesos que utilizan la

energía almacenada en el ATP para sintetizar y formar las subunidades, o bloques de

7
 construcción, de macromoléculas que componen la célula. La secuencia de bloques de

construcción en una macromolécula depende de una de dos vías. En los ácidos

nucleicos y proteínas es dirigida por una plantilla: el DNA actúa como plantilla para su

propia síntesis y para la síntesis de diversos tipos de RNA; el RNA mensajero actúa

como plantilla para la síntesis de proteínas. Por otra parte, para los carbohidratos y

lípidos la disposición de los bloques de construcción depende en su totalidad de

enzimas específicas. Una vez que se han producido las macromoléculas, se ensamblan

para dar origen a estructuras supramoleculares de la célula, por ejemplo, ribosomas,

membranas, pared celular, flagelos y pilosidades.

IV. APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS DE LOS HONGOS

Los hongos son organismos eucariotas heterótrofos que se destacan por su

multiplicidad de hábitos de vida, así como por la variedad de ambientes y condiciones

en que se pueden desarrollar, debido a su diversidad metabólica. Se pueden clasificar,

de acuerdo a su morfología, en dos tipos principales: los hongos filamentosos, como los

mohos y las setas, y las levaduras, que son unicelulares y han sido aprovechadas para

la producción de múltiples compuestos de importancia industrial y biotecnológica.

Debido a su mecanismo de toma de nutrientes, que se lleva a cabo por absorción, los

hongos producen un amplio arsenal de enzimas que, al ser secretadas, les permiten

descomponer polímeros en moléculas más simples.

Esta característica les ha conferido en gran medida la habilidad de comportarse

como parásitos, simbiontes o saprótrofos. Entre las enzimas que producen, se incluyen

las proteasas, amilasas, xylanasas, pectinasas y glucosa isomerasas que son

empleadas en la industria alimentaria, principalmente para el mejoramiento de sabores,

texturas, aromas y propiedades nutricionales. Adicionalmente, las peroxidasas, mono

oxidasas, lacasas y oxidasas son utilizadas en procesos de descontaminación. Otras

8
como las alfa-galactosidasas, glutatión transferasas, lactasas y oxigenasas son

aprovechadas en la industria farmacéutica, y las lipasas son de gran provecho para la

industria de manufactura de productos como papel, cuero y detergentes.

Debido a su mecanismo de toma de nutrientes, que se lleva a cabo por

absorción, los hongos producen un amplio arsenal de enzimas que, al ser secretadas,

les permiten descomponer polímeros en moléculas más simples. Esta característica les

ha conferido en gran medida la habilidad de comportarse como parásitos, simbiontes o

saprótrofos. Entre las enzimas que producen, se incluyen las proteasas, amilasas,

xylanasas, pectinasas y glucosa isomerasas que son empleadas en la industria

alimentaria, principalmente para el mejoramiento de sabores, texturas, aromas y

propiedades nutricionales. Adicionalmente, las peroxidasas, mono oxidasas, lacasas y

oxidasas son utilizadas en procesos de descontaminación. Otras como las alfa-

galactosidasas, glutatión transferasas, lactasas y oxigenasas son aprovechadas en la

industria farmacéutica, y las lipasas son de gran provecho para la industria de

manufactura de productos como papel, cuero y detergentes.

Algunas levaduras tienen la capacidad de fermentar azúcares en condiciones

anóxicas, lo que hace posible la producción de alcohol etílico. Esta propiedad ha sido

aprovechada desde la antigüedad para la fabricación de productos como el pan, la

cerveza, el queso y el vino. Actualmente, esta característica de las levaduras se utiliza,

además, para la generación de biocombustibles a partir de sustratos ricos en almidón.

Estos microrganismos también son aprovechados para la producción de suplementos

nutricionales y probióticos y tienen potencial para degradar compuestos

hidrocarbonados y explosivos, y para fijar metales pesados.

9
 Los hongos también llaman la atención por su capacidad para sintetizar

diferentes metabolitos secundarios, moléculas que no son fundamentales para la

supervivencia o para su desarrollo, pero que les pueden conferir una ventaja en su

medio ambiente particular. Su producción está condicionada por la presencia de

determinadas fuentes de carbono, nitrógeno, fósforo y otros minerales, y también se

pueden dar efectos estimuladores o inhibidores de acuerdo con la proporción de

sustratos y productos.

Entre estas, encontramos antibióticos, agentes inmunosupresión y

antitumorales, micotoxinas y ácidos grasos. Al producir sustancias que pueden limitar el

crecimiento de otros organismos, los hongos se han utilizado como agentes

biocontroladores de insectos que disminuyen la contaminación generada por el uso de

agentes químicos en el ambiente.

Las innovaciones tecnológicas e industriales y los avances en biología molecular

han permitido potencializar el aprovechamiento de los metabolitos que se pueden

producir a partir de los hongos. La manipulación genética de las levaduras ha favorecido

la producción de proteínas de interés terapéutico. Asimismo, se están produciendo

enzimas con características mejoradas a partir de hongos recombinantes. La ingeniería

metabólica también ha permitido alterar las características de las cepas empleadas,

para incrementar la producción o adaptarla a las condiciones deseadas

10
V. APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS

Se utilizan los progresos de la biotecnología agrícola para incrementar la

productividad de los cultivos, especialmente mediante la reducción de los costos de

producción logrados disminuyendo la necesidad de plaguicidas, sobre todo en las zonas

templadas. La aplicación de la biotecnología puede mejorar la calidad de vida, creando

cepas de mayor rendimiento, o que pueden crecer en ambientes diversos, lograr una

rotación mejor para conservar los recursos naturales o plantas más nutritivas, que se

conservan mejor cuando están almacenadas o están siendo transportadas. Se consigue

así un abastecimiento continuo de alimentos a bajo costo.

Después de dos décadas de investigaciones intensivas y costosas, el cultivo

comercial de variedades transgénicas de plantas ha tenido lugar en los últimos años

con variedades transgénicas de más de veinte especies vegetales. Las más

importantes, desde un punto de vista comercial, son el algodón, el maíz, la soya y la

colza. Los países en que se efectuaron los cultivos incluyen algunos de los más

importantes productores agrícolas del mundo: Argentina, Australia, Canadá, China,

Francia, México, África del Sur, España y los EE.UU. Las características más frecuentes

de las nuevas variedades son la resistencia a insectos (algodón, maíz), resistencia a los

herbicidas (soya) y maduración lenta de la fruta (tomate). Las ventajas obtenidas con

estos cultivos transgénicos iniciales son: mejor control de insectos y malezas, mayor

productividad, y un manejo más flexible de los cultivos. Los beneficiarios son

principalmente los granjeros y empresas agrícolas, pero también se benefician los

consumidores, con la producción más barata de alimentos. Los beneficios más

generales a favor del ambiente y la sociedad, se reflejan en una agricultura más

sostenible y mayor seguridad en los alimentos, gracias al uso reducido de pesticidas.

Las combinaciones que se están probando en economías emergentes incluyen

11
variedades resistentes a los virus de melones, papayas, zambo, tomate y pimientos;

arroz, y tomates resistentes a los insectos; papas resistentes a las enfermedades, y

ajíes de maduración lenta. También se está trabajando para utilizar plantas como el

maíz, y el plátano como mini-fábricas para producir vacunas y plásticos biodegradables.

Los posteriores avances de la biotecnología tendrán, probablemente, como

resultado, cultivos con una amplia gama de características, de entre las cuales serán de

especial interés para los consumidores las relacionadas con una calidad nutritiva

superior. Estos cultivos podrían ofrecer beneficios nutricionales a millones de personas

que sufren de malnutrición y desórdenes deficitarios. Se han identificado genes que

pueden mejorar la composición de los aceites, las proteínas, los carbohidratos y los

almidones de granos y tubérculos.

Se ha incorporado al arroz un gen que produce beta caroteno y vitamina A (arroz

dorado). Este gen mejoraría la dieta de 180 millones de niños que sufren deficiencia de

vitamina A, causante de dos millones de muertes anuales. De modo similar, la

introducción de genes que tripliquen la cantidad de hierro del arroz es un remedio

posible para la deficiencia de hierro que afecta a más de dos mil millones de personas y

ocasiona anemia en la mitad.

Los progresos en tecnología genética pueden ayudar a resolver problemas

médicos, agrícolas y ambientales de los países pobres.

Hasta aquí, los mayores esfuerzos privados han sido dirigidos a la introducción

de características útiles para los productores de países industrializados, porque en ellos

las compañías pueden recuperar sus inversiones. Se necesitan nuevas modalidades

que movilicen recursos públicos y privados para que no se deje atrás a la gente pobre

en la revolución genética.

12
 Las aplicaciones de la biotecnología en agricultura están en su infancia. A

la mayoría de plantas modificadas genéticamente se les ha alterado una sola

característica, como, por ejemplo, la tolerancia a los herbicidas o a las plagas. El rápido

progreso de la genómica puede mejorar la producción de plantas, conforme se vayan

identificando más genes funcionales. Esto puede permitir una exitosa producción de

características complejas, como la tolerancia a la sequía o a la salinidad, controlada por

muchos genes.

Algunos de los productos que han sido mejorados a través de la biotecnología son:

• Maíz, soja y algodón que ahora requieren menores aplicaciones de

herbicidas/pesticidas

• Soja con menor contenido de grasas saturadas y mayor contenido de ácido

oleico, lo que ofrece una mejor estabilidad cuando se fríe

• Papayas resistentes a los virus que logran que los cultivos sean más

confiables y se obtengan mejores rendimientos

• Pimientos mejorados para lograr un mejor sabor (más dulces) y que

permanezcan más duros después de la cosecha

• Papas y maíz resistentes a las enfermedades y que ofrecen mayores

rendimientos El volumen de cultivos biotecnológicos en desarrollo continúa

creciendo.

La biotecnología se ha usado en un número de cultivos por varios años, se

espera que en los próximos años haya más productos mejorados

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 genéticamente en el mercado. Algunos de los beneficios que se pueden esperar

en el futuro cercano incluyen:

• Reducción de los niveles de toxinas naturales, como los alérgenos, en las

plantas

• Aparición de métodos más simples y rápidos para detectar a los patógenos,

toxinas y contaminantes (para reducir el riesgo de las enfermedades que se

transmiten por los alimentos)

• Prolongación de la frescura

VI. PRODUCCION DE ACIDO ASCORBICO

La aplicación de los conocimientos y técnicas adquiridas desde la aparición e

implementación de la biotecnología moderna en los diversos campos de interés actual

(salud, alimentación, medio ambiente, industria, etc.) ha permitido el desarrollo de

nuevos métodos de producción de compuestos de importancia que se caracterizan por

su efectividad, control y seguridad.

En el campo de la producción alimentaria, el frecuente uso de microorganismos

en la mejora de procesos biocatalíticos, como la fermentación y la conservación de

alimentos procesados ha significado un gran paso hacia el crecimiento exponencial de

dicha industria, que busca además de obtener ganancias económicas, satisfacer las

necesidades de los consumidores, aumentando al mismo tiempo la calidad y cantidad

de los productos introducidos al mercado.

ácido ascórbico, uno de los compuestos más importantes en la industria

alimentaria, debido a su gran utilización como preservativo, antioxidante y agente

vitamínico, a través de técnicas derivadas de la denominada Ingeniería Metabólica, que

14
es definida como la mejora dirigida de las propiedades celulares a través de la

modificación o introducción de reacciones bioquímicas específicas, mediante el uso de

la tecnología del ADN recombinante (Stephanopoulos, 1999).

Ácido ascórbico La vitamina C, también denominada ácido ascórbico (debido a

su vitámero más conocido y abundante), es un conjunto de sustancias con actividad

vitamínica cuya ingesta se cree evita el escorbuto, y cuya adición a los alimentos evita

el deterioro por oxidación. Con excepción del ácido L-ascórbico (derivado de la

Dglucosa), y el ácido L-dehidroascórbico (producto de la oxidación del anterior), las 2

demás sustancias pertenecientes a este grupo tienen una insignificante importancia

nutricional.

En la actualidad, la vitamina C es ampliamente utilizada como antioxidante

debido a su estructura química, capaz de neutralizar los radicales libres; al oxidarse se

convierte en ácido dehidroascórbico, conservando su actividad vitamínica (alrededor de

un 80%).

Por esta función primaria, al ácido ascórbico se le atribuye la prevención de

cáncer, problemas cardiovasculares y el aumento del sistema inmunológico (Martínez et

al., 2005). Incluso promueve la absorción del hierro nohemínico presente en algunos

vegetales y frutas (Hallberg, 1997).

Su acción como conservante es debatida debido a su inestabilidad, y a las

reacciones de deterioro a las que se ve expuesta, por ejemplo, las de pardeamiento.

Debido a los requerimientos vistos anteriormente, la producción a escala industrial de

esta vitamina debe ser eficiente, esto con el fin de satisfacer los sectores demandantes

y aumentar la disponibilidad y consumo de este ácido.

15
 Obtención industrial del ácido ascórbico En 1934, Reichstein y Grüssner en su

artículo (Productive synthesis of L-ascorbic acid (Vitamin C)) describieron un proceso

que constaba de varias etapas químicas y una conversión enzimática.

El proceso inicia con la reducción química por hidrogenación catalizada por

metales de la D-glucosa, la cual es convertida a Dsorbitol, el cual se oxida a L-sorbosa

gracias a la enzima Sorbitol-deshidrogenasa, sintetizada por Acetobacter suboxydans

en un proceso sumergido a 30-35°C, con agitación y aireación vigorosas.

La L-sorbosa obtenida es oxidada químicamente a ácido 2-ceto-L-gulónico (2

KLG) que luego es convertida a su sal sódica, el 2-cetoL-gulonato, el cual finalmente se

transforma a ácido ascórbico (Hancock, 2002).

El proceso global produce aproximadamente 1 kg de ácido L-ascórbico a partir

de 2 kg de glucosa. Sin embargo, este proceso de síntesis industrial implica la

utilización de enormes cantidades de sustancias tóxicas para el medio ambiente como

acetona y ácidos minerales, así como un consumo de energía alto.

Los procesos de fermentación biocatalizada se describieron inicialmente por

(Sonoyama et al., 1982), quién creó un proceso de síntesis enzimática del ácido 2- ceto-

L-gulónico, que constaba de dos etapas:

La primera etapa, una oxidación de la D-glucosa por una especie del género Erwinia a

ácido 2,5 diceto-D-glucónico (2,5-DKG) y la segunda, una reducción de 2,5-DKG a

ácido 2-ceto-L-gulónico (2- KLG), llevada a cabo por la Corynebacterium sp. a la cual,

después de 16h de crecimiento, se le suplementa con el cultivo anterior de Erwinia

herbícola esterilizado. La sal obtenida después de 66h de incubación es transformada

químicamente con facilidad a ácido L-ascórbico.

16
 El balance total del proceso, basado en consumo de D-glucosa, es de

aproximadamente 80-85%.

VII. PRODUCCION DE ANTIBIOTICOS POR FERMENTACION

VII.1 Producción de cefalosporina C por fermentación en medio sólido de

Acremonium chrysogenum C10

La cefalosporina C (CPC) es la precursora de todas las cefalosporinas

comerciales, antibióticos β-lactámicos modernos de muy alto costo, pero aun así

ampliamente usados (Demain y Elander, 1999). A pesar de que se han logrado

mejoras significativas en la producción de CPC a través de diversos estudios de

la fisiología de Acremonium chrysogenum, especialmente en lo que se refiere a

la caracterización de los complejos enzimáticos que participan en la formación

de los productos intermedios de la biosíntesis, el conocimiento del

funcionamiento de estos complejos se sigue considerando como “cuello de

botella” en las fermentaciones para la producción de los antibióticos derivados de

la CPC (Gutiérrez y col., 2000). Además, se observa que su producción por A.

chrysogenum se encuentra muy por debajo de la productividad alcanzada en la

producción de penicilina por P. chrysogenum (Brakhage, 1998), observándose

un crecimiento deficiente del microorganismo productor de CPC; por lo tanto,

aún quedan muchos esfuerzos por realizar y búsqueda de alternativas para

incrementar la producción de esta sustancia. La fermentación en estado sólido

(FS) es una alternativa que ofrece ventajas ecológicas para el crecimiento de

hongos y actinomicetos, y puede presentar otras ventajas significativas sobre los

métodos de cultivo sumergido para la manufactura de productos no tradicionales

de interés (Barrios-González y Mejía, 1996).

17
 Producción de CPC Condiciones generales:

Temperatura: 25°C

pH inicial: 6.8 o variable de acuerdo al experimento.

Inóculo: 0.1% peso seco biomasa/peso de soporte humedecido,

procedente de cultivo de 38 h de MSMA

Aireación: 1.4 L/h (columna), 5 minutos en campana de flujo laminar

cada 24 h. (matraz) % de Humedad: 70% en bagazo de caña y 75% en

espuma de poliuretano o variable de acuerdo a experimento.

Se evalúa el porcentaje de recuperación del producto desde el medio sólido,

mediante simulación de condiciones de cultivo además de la adición al medio sólido de

cantidades 36 conocidas de cefalosporina. La cantidad recuperada nos indica la

eficiencia del proceso. La extracción de la cefalosporina de cada uno de los soportes de

fermentación se realiza por las técnicas indicadas.

Solvente de extracción: Agua destilada

Se toman 2 g de muestra del cultivo sólido, los cuales se tratan con 50 mL de

agua destilada, agitándose completamente con agitador magnético durante 30 min. El

contenido completo es filtrado a través de un filtro de nylon Nytal. El residuo es tratado

nuevamente de la misma manera con agua destilada, filtrando posteriormente. Se

mezclan los filtrados y se utiliza esta solución para el ensayo. Se hacen las diluciones

necesarias para obtener halos de inhibición que se encuentren dentro de la línea

dosis/respuesta del ensayo.

18
 Solvente de Extracción: Amortiguador de Fosfatos pH 3.0

Se pesa 1 g de muestra del cultivo sólido se agita a 175 rpm por 60 min. con 3

mL de tampón de fosfatos 0.1 M (pH 3.0) a 25 °C. Al final del tiempo de centrifugación

se repite la adición de extractante y la centrifugación dos veces más (volumen final de

extractante: 9 mL). Se hacen las diluciones necesarias para que los halos de inhibición

se encuentren dentro de los valores normales para la línea dosis/respuesta.

Solvente de Extracción: amortiguador de fosfatos pH 5.5

Se pesan 0.5 g de la muestra del cultivo sólido y se añaden 3 mL de

amortiguador de fosfatos de potasio (pH 5.5, 0.01 M). Se agita y centrifuga a 2700 rpm,

durante 20 min. Se separa el sobrenadante, el cual se utiliza para determinar la

concentración de CPC. Se hacen las diluciones necesarias para que los halos de

inhibición se encuentren dentro de los valores normales para la línea dosis/respuesta.

VIII. FLUIDOS SUPER CRITICOS COMO MEDIOS DE REACCION EN

BIOTECNOLOGIA

El continuo desarrollo tecnológico que se está llevando a cabo en todas las

áreas, y en particular en la química, va orientado a la obtención de nuevos y mejores

procesos que sean más respetuosos con el medio ambiente, que resulten más

económicos, que utilicen menos cantidades de energía y de materias primas. En

definitiva, lo que se pretende es la optimización de los mismos para alcanzar los

máximos rendimientos posibles con los menores impactos sobre el medio ambiente.

19
 El dióxido de carbono supercrítico (scCO2) y los líquidos iónicos a temperatura

ambiente (ILs), se han revelado recientemente como prometedores disolventes

respetuosos con el medio ambiente. Son energéticamente eficientes, selectivos y

capaces de reducir los residuos, siendo una alternativa a los disolventes orgánicos. La

utilización de estos medios alternativos de reacción permite trabajar en condiciones más

respetuosas con el medio ambiente, incluso aumentando considerablemente la eficacia

de los procesos. En la misma línea, los reactores de membrana constituyen el medio

donde los procesos de reacción, separación y/o concentración se integran en una única

etapa con unos costes energéticos mínimos. Por lo tanto, los líquidos iónicos, el CO2

supercrítico y la tecnología de membranas aparecen como uno de los marcos más

eficientes y limpios donde se podrán desarrollar los futuros procesos industriales.

IX. CATALIZADORES BIOLOGICOS

A pesar de que existen diferentes moléculas de origen biológico capaces de

catalizar reacciones químicas: aminoácidos, ARN o incluso algunos carbohidratos, los

catalizadores biológicos por excelencia son las enzimas, proteínas que han

evolucionado a lo largo de millones de años para catalizar transformaciones químicas

en los seres vivos. En los últimos años se ha publicado un gran número de trabajos

sobre la catálisis enzimática que han permitido establecer las bases por las cuales estas

sustancias son capaces de acelerar las reacciones químicas con respecto a los

procesos equivalentes en ausencia de las mismas. Aunque se han propuesto diversas

hipótesis para explicar esta actividad catalítica,4 el consenso parece haberse alcanzado

alrededor de la idea básica de Linus Pauling5 sobre el acoplamiento entre la enzima y el

20
sustrato. Más concretamente, la enzima está diseñado para estabilizar la conformación

del sustrato en el estado de transición, alcanzando entonces el complejo activado

enzima sustrato (E·S ) una energía respecto a los reactivos (E·S) menor que la que

tendría el mismo estado de transición en ausencia de la enzima (S ). Esta estabilización

relativa del estado de transición se alcanza, básicamente, a través de interacciones

electrostáticas y de enlace de hidrógeno que se establecen entre la proteína y el

sustrato. El origen de la catálisis estaría en la diferente naturaleza de las interacciones

establecidas en el seno de la enzima y en ausencia de ésta, es decir en disolución

acuosa. Mientras el entorno enzimático, gracias a la estructura tridimensional de la

proteína alcanzada a partir del plegado de su secuencia, está diseñada para estabilizar

una cierta distribución de cargas, en disolución acuosa, esa estabilización sólo puede

alcanzarse después de reorientar adecuadamente las moléculas de agua, tal y como se

muestra esquemáticamente en la Figura 1. Este hecho parece dar cuenta de la mayor

parte de la diferencia entre las energías libres de activación de la reacción catalizada y

no catalizada en aquellos casos que han podido ser estudiados detalladamente.

Figura 1

21
Catalizadores biológicos implicados en procesos de producción de

Cefalosporinas.

Hay multitud de enzimas capaces de actuar sobre las cefalosporinas y sus

derivados (Sonawane, V.C., 2006). Sin embargo, nosotros nos vamos a centrar en la

hidrólisis de CFC para obtener 7-ACA, y en la modificación de este para obtener

diferentes cefalosporinas semi-sintéticas. En la primera parte están implicadas

principalmente dos enzimas D-aminoacido oxidasa (DAAO) y Glutaril acilasa (GAC)

capaces de hidrolizar CFC a 7-ACA. En segundo lugar, este 7-ACA es susceptible de

ser modificado en su C7 por un enzima llamado Penicilin G acilasa (PGA), añadiendo a

este carbono una cadena lateral.

22
D-aminoacido oxidasa. La enzima que modifica la CFC

biocatalizador industrial, sus principales propiedades catalíticas por su

importante papel en la producción del núcleo antibiótico base para la síntesis final de los

derivados semi-sintéticas. D-aminoacido oxidasa (DAAO) (E.C. 1.4.3.3) cataliza la

oxidación de D-aminoácidos a sus correspondientes α-cetoácidos. A pesar de su amplia

distribución en mamíferos y organismos eucariotas, solo se han podido obtener hasta

ahora tres enzimas en preparaciones homogéneas, una de riñón de cerdo y dos de

levaduras, las de Rhodotorula gracilis y de Trigonopsis variabilis (Alonso y col 1998;

Pollegioni y col 2004). Las tres enzimas son homodiméricas con un peso molecular en

torno a los 80 KDa conteniendo una molécula de FAD por cada subunidad unidas de

forma no covalente al enzima (Pollegioni y col 2002). El mecanismo catalítico de esta

enzima se puede resumir de la siguiente forma:

Durante la primera mitad de la reacción, se produce la deshidrogenación del D-

aminoácido al correspondiente aminoácido acoplada a la reducción del FAD (1). El FAD

se reoxida espontáneamente en presencia de oxígeno molecular, el cual se reduce a

peróxido de hidrógeno (2). El aminoácido es entonces hidrolizado a α−ceto ácido y

amoníaco gracias a una molécula de agua (3). La estéreo especificidad de la reacción

es absoluta y restringida a los D-isómeros cuando (Mattevi y col., 1997; Pilone, 2000).

El papel de esta enzima en la síntesis de antibióticos semi-sintéticas reside en la

desaminación oxidativa de la cadena lateral de la CFC. Por supuesto la conformación

23
espacial de la CFC es D, puesto que de lo contrario esta enzima no podría actuar sobre

este sustrato. Esta reacción es muy importante porque genera dos productos, uno el

peróxido de hidrogeno y el otro el (7-β-5 carboxi-5-oxopentanamido)-cefalosporánico (α-

cetoadipil 7-ACA). Estos dos productos son capaces de reaccionar entre sí, de modo

que el peróxido de hidrogeno produce la descarboxilación oxidativa del α−cetoadipil 7-

ACA, generando agua, dioxido de carbono y glutaril 7-ACA (GL-7-ACA) (Figura 1.3)

(Nikolov y Danielsson, 1994; Alfani, F., y col 1998). Esta reacción es muy importante

puesto que este último producto es sustrato de otra enzima, Glutaril acilasa, capaz de

hidrolizarlo a 7-ACA, nuestro núcleo de interés.

Por lo tanto, la D-aminoacido oxidasa es un enzima muy importante para

modificar la CFC y que otra enzima como es la Glutaril acilasa pueda producir el 7-ACA

de forma eficiente.

De este modo se podría llevar a cabo la biotransformación de CFC a GL-7-ACA

mediante un proceso en condiciones suaves y con muy buenos rendimientos. Además,

este proceso no exiges la utilización de solventes clorados, aditivos tóxicos y

condiciones drásticas de operación (p. ej. temperaturas tan bajas como -50º C), por lo

que se logró una gran mejora en términos medioambientales (Pollegioni y col., 2002).

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 Referencias

Hansen, M. (2000). Biotecnología y sistema alimentario. Fundación 1o. de Mayo.

Vasquez, G. R. (2008). Biotecnología: Generalidades, riegos y beneficios. UNED.

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