CAPÍTULO 2

INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGÍA MOLECULAR

Dr JAVIER SCAGLIA

 INTRODUCCIÓN

 DNA

 GENES

 CROMOSOMAS

 DOGMA CENTRAL

 REPLICACIÓN DEL DNA

 TRANSCRIPCIÓN DEL DNA A RNAm

 CÓDIGO GENÉTICO

 TRADUCCIÓN DEL RNAm A PROTEÍNAS

 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

FISIOLOGÍA ENDOCRINA Y DE LA REPRODUCCIÓN BIOLOGÍA MOLECULAR
CAPÍTULO 2

INTRODUCCIÓN
En el Capítulo anterior hemos dados conceptos sobre mecanismo de síntesis de hormonas, efectos a nivel
citoplasmatico y nuclear , hemos desarrollado conceptos sobre transcripción del DNA para la síntesis de proteinas en
el citoplasma etc. Los conocimientos actuales de Biología Molecular Celular implican fundamentales aportes sobre
los mecanismos moleculares que hemos descripto. Más aún es factible determinarlos conocer sus alteraciones y
eventualmente corregirlos (terapias génicas)
Desde el punto de vista de la Endocrinología hoy en día se conocen muchos de los mecanismos moleculares
de enfermedades endócrinas y es probable que en los próximos años la terapéutica basada en los conocimientos de
endocrinología molecular ocupe un espacio predominante en el tratamiento de las enfermedades neuroendócrinas.
Es por esa razón que consideramos fundamental en base al avance de la Biología Molecular describir algunos
aspectos de esta especialidad relevante en el futuro de la Medicina.
En el presente capítulo vamos a describir el DNA y sus operaciones básicas (replicación, transcripción y
traducción) a nivel molecular. También vamos a estudiar los principios básicos de la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) y sus distintas estrategias, que nos permiten estudiar la estructura del DNA y sus variantes
moleculares.

DNA
Descripción de la doble hélice.
La molécula de DNA está formada por dos cadenas de bases de nucleótidos que se encuentran enlazadas
en forma de doble hélice. (Fig. 2.1). El ADN es una gran base de datos que está en el núcleo de la célula y contiene
las instrucciones completas para la síntesis de todas las proteínas que se necesitan. Todas las células excepto los
glóbulos rojos maduros tienen el mismo DNA que está formado por aproximadamente 3 mil millones de nucleótidos y
se halla compactado unas 10 mil veces su tamaño original. Estirado, el DNA de una célula mide 2 metros.
Es una estructura compleja de la cual el 30% de la misma es codificante (genera proteínas similares) y el
70% restante es estructura no codificante.
El ADN está formado por 2 cadenas en doble hélice que son antiparalelas y que tienen polaridad opuesta.
Están formadas por un fosfato + azúcar (desoxirribosa) + las bases nitrogenadas (nucleótidos), y se unen entre sí por
uniones 5´-3´ fosfodiester. Se disponen en la cadena de la siguiente manera: Los fosfatos por afuera, el azúcar en el
medio y los nucleótidos hacia adentro.
Existen cuatro tipos de nucleótidos Adenina (A) Citosina (C) Timina (T) y Guanina (G), que se unen de la
siguiente forma: las A con las T y las C con las G, las bases púricas con las pirimidínicas: púricas son A y G y
pirimidínicas T y C. (Fig. 2.2). Las A con las T se unen por medio de 2 puentes de Hidrógeno y las C con las G por 3
puentes de hidrógeno.

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CAPÍTULO 2

Figura 2.1. En la molécula de DNA se encuentran apareadas dos cadenas antiparalelas cuyas secuencias de
nucleótidos son complementarias. Una vuelta completa de hélice contiene 10 pares de nucleótidos.

Cromosomas
Son estructuras filamentosas situadas en el núcleo. Su nombre deriva del griego croma: color y soma: cuerpo. Su
función más importante es la de albergar los genes. Su comportamiento durante la división de las células somáticas
(mitosis), asegura que cada célula hija tenga su dotación completa de genes. De modo similar, el comportamiento de
los cromosomas durante la meiosis para la formación de gametos asegura a cada uno de ellos (espermatozoide y
óvulo) la dotación haploide.
Estructura : Cada cromosoma consta de una constricción que puede o no ser simétrica a sus brazos, denominada
centrómero. Este divide al cromosoma en 2 brazos: largo (q) y corto (p) (Fig. 2.3). El extremo de cada brazo se
denomina telómero. En humanos los telómeros consisten en secuencias repetidas en tandem o grupos de TTAGGG,
que se mantiene gracias a la enzima telomerasa. La reducción del nivel de telomerasa y una disminución asociada en
el número de secuencias TTAGGG se considera influyente en la muerte celular y en el proceso de envejecimiento.
Cada núcleo de una célula somática contiene 2 juegos de cromosomas, uno paterno y otro materno.
La cromatina que es el material que forman los cromosomas, es una combinación de DNA y proteínas
(Histonas).

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CAPÍTULO 2

Figura 2..2 La estructura del DNA presenta un polímero linael de nucleótidos por adentro de la doble hélice.Por
afuera se encuentra una columna vertebral de azúcares unidas por enlaces fosfodiester. Las Adeninas están unidas
con las Timinas por dos puentes de Hidrógeno, mientras que las Citosinas y las Guaninas están unidas por tres
puentes.

El núcleo humano contiene 46 cromosomas: 22 pares autosómicos y 1 par de cromosomas sexuales (XX
mujer y XY hombre). Un miembro de cada par proviene de cada uno de los padres. Las células somáticas tienen una
dotación diploide (46 cromosomas) y las gametas una haploide (23 cromosomas). El número de cromosomas es
característico y muy variable en cada especie.

GENES
EL gen es la unidad básica de la herencia, es la secuencia de nucleótidos de DNA en un cromosoma que
codifica para una proteína. Cada gen se transcribe a un ácido ribonucleico (RNA), que posteriormente se traducirá a
una proteína.
El gen está compuesto por: una región enhancer, una región promotora, un sitio de iniciación de la trascripción que es
ATG, exones, intrones y una secuencia de finalización.

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La región enhancer es la que le va a avisar a la enzima RNA polimerasa que está por llegar a la región
promotora. La región promotora esta dada por las secuencias (cajas) : CAAT y TATA, que están en -75 y en -25 (se
cuenta así porque se dice que la primera base del primer exón es el +1 para la izquierda es negativo o up stream o
corriente arriba y para la derecha positivo o down stream o corriente abajo), estas cajas indican a la RNA polimerasa
que está por llegar al sitio de iniciación de la transcripción del primer exón. (Fig 2. 4)

Figura 2.3 Esqema de un cromosoma metafásico típico. Se ven las cromátides, los brazos p y q, las bandas
características sus telómeros y el centrómero.

DOGMA CENTRAL
El dogma central de la genética se consolidó en los años 70, y plantea que el flujo de información en una
célula va en un solo sentido. La información primaria está en el DNA, y esta se autorreplica. Luego se generan las
moléculas que dinamizan el proceso que son los RNAs (transcripción), principalmente el RNAm (mensajero), que lleva
la información entre el DNA y los terminales que son las proteínas que se van a sintetizar (traducción).(Fig. 2.5)
A continuación vamos a describir cada uno de estos procesos que componen el dogma central de la genética.

REPLICACIÓN DEL DNA

La totalidad del genoma de una célula se debe replicar exactamente con cada división celular,
independientemente de que esta tenga un cromosoma (procariontes) o muchos cromosomas (eucariontes). La
replicación del DNA debe estar estrechamente vinculada con el ciclo celular.

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Esta relación está regida por dos principios generales: el primer evento que ocurre es la iniciación de la
replicación del DNA, lo que luego produce una división celular. Nunca comienza la división celular hasta que la
replicación del DNA no ha concluido en su totalidad. Tal es así que el hecho de que la replicación ha terminado,
implica en sí mismo un disparador o una orden para que la célula comience a dividirse.
La replicación es la duplicación del DNA y a la unidad de DNA que se está replicando, se la llama
replicón. Cada replicón se “dispara” una sola vez por cada ciclo celular, tiene un origen en el cual la replicación se
inicia y un final en el cual la misma se detiene.
La replicación del DNA, se puede dividir en tres etapas, que son la iniciación, elongación y terminación. La
iniciación comprende el reconocimiento de un origen por un complejo de proteínas (primosomas). Antes de que esto
suceda, las cadenas parentales deben separase de forma transitoria y estabilizarse como cadena única. Ahora es
cuando puede comenzar la síntesis de las cadenas hijas en la horquilla de replicación.
Este proceso comienza cuando se une a cada cadena parental una secuencia de RNA permitiendo que se utilice
su extremo 5´ OH como cebador de la síntesis de DNA, debido a que la DNA polimerasa necesita que exista una
doble cadena para comenzar su acción. Este cebador o primer de RNA es sintetizado por la enzima primasa o
cebasa, que es la que cataliza la reacción de cebado. Esta enzima es una RNA polimerasa que está codificada por el
gen adnG que solo se expresa para formar un producto de RNA de 10-11 pares de bases (pb) que se utiliza como
cebador. Estos cebadores comienzan con la secuencia pppAG.
La elongación es llevada a cabo por otro complejo de proteínas (replisoma). El replisoma sólo existe
asociado a la estructura de horquilla de replicación, es decir, que no existe como una unidad independiente. A medida
que este replisoma se mueve a lo largo del DNA, las cadenas parentales se copian y se sintetizan las cadenas hijas.
Esta actividad está desarrollada principalmente por la DNA polimerasa, que es una enzima capaz de sintetizar DNA a
partir de una cadena parental o molde.
La DNA polimerasa extiende la cadena de DNA en el sentido 5´ a 3´, esto es, añadiendo nucleótidos al
extremo 3´ OH, es decir, dando una unión fosfodiester con el nucleótido entrante que tiene un trifosfato en su extremo
5´. (Fig. 2.6)
Esta síntesis es semidiscontinua y cebada por RNA, debido a que una de las dos cadenas se copiará en
forma continua (sentido 5´ a 3´), la que tendrá su 5´OH libre en el sentido en que trabaja la DNA polimerasa, a esta
cadena se la llama conductora o líder.
La cadena homóloga tendrá su 5´OH libre en el sentido contrario, con lo cual la síntesis se tendrá que
realizar por segmentos, que se conocen con el nombre de Okazaki. A esta cadena se la llama retrasada. Fig. 2.7.
Estos segmentos necesitarán un cebador en el comienzo y se extenderán hasta el siguiente cebador, o sea que se
necesitan en esta cadena tantos cebadores como segmentos tengamos. Los cebadores de RNA son eliminados por la
actividad de exonucleasa 5´-3´ , quien además los reemplaza por DNA.

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CAPÍTULO 2

Figura 2.4 Representación esquemática de un gen con sus exones e intrones, región enhancer y las cajas TATA Y
CAAT. Por convención a la izquierda del ATG es negativo o corriente arriba y a la es derecha positivo o corriente
abajo.

Finalmente estos fragmentos son unidos entre sí por otra enzima que es la DNA ligasa que une el extremo
3´OH de un extremo con el 5´ fosfato del otro. Para que se lleve a cabo la síntesis es necesario no solo abrir las
cadenas, sino también evitar que se vuelvan a juntar. Esto se logra gracias a que existen dos proteínas que son la
helicasa, que se encarga de separar las cadenas de DNA usando para eso la hidrólisis de ATP para proporcionar la
energía necesaria y la SSB (proteína de unión a cadena sencilla), que es la encargada de evitar que las dos cadenas
se vuelvan a juntar.
La terminación del replicón ocurre con reacciones de unión y/o terminación. Luego de esto, los cromosomas
duplicados deben separarse, para lo cual usan una estructura de orden superior al DNA.

TRANSCRIPCIÓN DEL DNA A RNAm

La transcripción es el primer paso de la expresión génica, y el paso principal de control. Implica la síntesis de
una molécula de RNA de simple cadena a partir de una cadena codificante de DNA de doble cadena. La síntesis del
RNA es catalizada por la RNA polimerasa y se producen tres diferentes tipos de RNA que son: RNAm (mensajero),

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CAPÍTULO 2

FIGURA 2.5 Dogma central de la Biología Molecular

Figura 2.6 .Replicación del DNA

RNAt (transferencia) y RNAr (ribosomal). En el RNA, el azúcar es la ribosa y tiene Uracilo en lugar de Timina. (Tabla
2.1).
Existen tres etapas bien diferenciadas de la transcripción que son la iniciación, que se produce cuando la
RNA polimerasa se une al promotor, (una secuencia del gen que indica el inicio). El proceso siguiente es la

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CAPÍTULO 2

elongación que no es más que la síntesis del RNA tomando como molde a una de las cadenas del DNA. El último
proceso, la terminación, ocurre cuando la RNA polimerasa encuentra una secuencia denominada terminador.

Tabla 2.1.: Diferencias entre el DNA y el RNAm.

DNA RNAm
Doble Cadena Simple Cadena
Desoxirribosa Ribosa
Timina Uracilo

Las secuencias se escriben convencionalmente de manera que la transcripción suceda de izquierda

(“upstream”) a derecha (“downstream”). Esto corresponde a escribir el RNAm en la dirección 5´ a 3´. ( Fig.2.8)
El transcripto primario es el producto inmediato de la transcripción, es el RNAm inmaduro que se extiende
desde el promotor hasta el terminador y que conserva sus extremos 5´ y 3´ originales. Tiene la misma organización
que el gen y también se lo llama pre-RNAm. Este transcripto es muy inestable, por lo cual en los eucariontes ocurre el
proceso de maduración del RNAm.
El RNAm inmaduro contiene la secuencia completa del gen, con sus extremos sin modificar, sus exones
(secuencias que codifican para proteínas) e intrones ( secuencias no codificantes).

Procesamiento del RNAm

En las células eucarióticas la síntesis y la maduración del RNAm se produce en el núcleo. Luego que esto
ocurre, el RNAm es exportado al citoplasma, donde es traducido.
El procesamiento o la maduración del RNAm está dado por el splicing, que consiste en eliminar los intrones
que son las secuencias no codificantes del gen, se tapa el extremo 5´ con un capuchón (CAP) , que es sustrato para
diferentes fenómenos de metilación, finalmente se le agrega una cola poli A en el extremo 3´ terminal.
Splicing :Es la etapa más importante del proceso. Consiste en eliminar de los genes las secuencias que no codifican
para proteínas (intrones) y da lugar a un RNA con una secuencia completamente codificadora (sólo los exones).
Durante esta fase, se produce la modificación de los extremos 3´ y 5´.
Todos los extremos 5´ y los 3´ de los exones son equivalentes y en general están dados por las secuencias
GT-AG respectivamente. En el núcleo se produce un RNA de muy bajo peso molecular, que se lo conoce como RNA
pequeño nuclear, que reconoce la secuencia GT-AG y las une formando un loop con el resto del intrón y uniendo los
extremos de lo exones entre sí. Finalmente actúan dos enzimas que son: la S1 endonucleasa que corta el loop y la
ligasa que rellena el espacio, uniendo a los exones entre sí (que son la secuencias que van a codificar proteínas). De
esta manera quedan eliminados los intrones y los exones unidos ,entre, sí dan una secuencia codificante. (Fig 2.9)

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CAP: la transcripción comienza siempre por un nucleótido trifosfato en el 5´, por lo general una Adenina o una
Guanina. El tapón CAP, consiste en agregarle a la primer Guanina otra Guanina en 5´, por lo tanto tendremos dos
nucleótidos conectados por una unión trifosfato 5´-5´, esto está catalizado por la enzima guanitidil-transferasa. Esta
unión es sustrato para diferentes fenómenos de metilación. Por lo tanto llamaremos tapón CAP al bloqueo del extremo
5´ del RNAm con la estructura de las dos guaninas unidas en tri fosfato 5´-5´ metiladas.
Poli A: se llama así al extremo terminal 3´ de residuos de Adeninas.Esta secuencia no está codificada en el DNA, sino
que se añade en el núcleo al RNA después de la transcripción. La reacción de poliadenilación está catalizada por la
enzima poliA-polimerasa, que añade unos 200 residuos A al extremo 3´-OH libre del RNAm. Esta cola se asocia con
una proteína ligadora de poli A (PABP) cada 10-20 bases y da un monómero de 70 kDa. La función principal de esta
cola poli A está ligada a la estabilidad del RNAm, protegiéndolo de la degradación. La eliminación de la cola poli A
inhibe la traducción in vitro.
El procesamiento del RNAm, le permite existir como una partícula ribonucleoprotéica, aumentando así su
vida media y permitiendo que dicho RNAm vuelva a traducirse.

Figura 2..7. El DNA se transcribe a RNAm inmaduro que contiene exones e intrones, luego del splicing se produce el
RNAm maduro listo para salir del núcleo y traducirse a proteína.

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CÓDIGO GENÉTICO
El código genético es la relación que existe entre la secuencia de un DNA y la secuencia de aminoácidos de
la proteína que este induce. Es decir que una determinada secuencia de DNA siempre produce la misma secuencia
de aminoácidos en una proteína, El código es universal o sea que es el mismo para todas las especies salvo algunas
excepciones.Es un alfabeto de 4 letras (A, T o U, C y G), que en codones (grupos de 3 letras) van a codificar para los
20 aminoácidos. Tenemos por lo tanto 64 codones para codificar 20 aminoácidos. Cada codón puede codificar para
un aminoácido, una señal de stop o para una señal de iniciación (AUG) que es metionina.
En el código hay 3 señales de stop (UAA, UAG y UGA), que son codones que no codifican para
aminoácidos, una señal de iniciación (AUG), que codifica para metionina, con lo que todas las proteínas comenzarán
con metionina, la tengan o no como primer aminoácido de su cadena; y el resto de las señales son las que codifican
para los 20 aminoácidos. Esto nos indica que existe más de un codón para cada aminoácido, excepto para la
metionina, esto se conoce con el nombre de degeneración del código genético.

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Figura 2.8. En la figura se muestra una secuencia de DNA que se transcribe a un único RNAm desde el sitio pomotor
hasta el terminador

Un gen está compuesto por una sucesión de codones que son leídos secuencialmente desde un punto inicial
en un extremo hasta otro final en el otro. Escrito en el sentido 5´ a 3´, la secuencia de nucleótidos del gen que codifica
para una proteína, corresponde con la secuencia de aminoácidos de la misma escrita de su extremo N-terminal al C-
terminal. (Fig 2.10)

TRADUCCIÓN DEL RNAm A PROTEÍNAS

La traducción convierte la secuencia de nucleótidos del RNAm en la secuencia de aminoácidos que forman
la proteína. Además del RNAm que tiene la secuencia de codones para los aminoácidos de la proteína, son
necesarios el RNAt y el RNA r para completar el aparato de síntesis de proteínas.
El RNAt es el adaptador, es una molécula muy pequeña que tiene entre 74 y 95 pares de bases. Existe un
RNAt para cada aminoácido, el cual está unido al RNAt de forma covalente. Tiene una secuencia de trinucleótidos que
es el anticodón que reconoce al codón que es complementario al aminoácido que representa. Fig. 2.11. El ribosoma

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tiene dos subunidades. Este proporciona el ambiente para controlar la interacción entre el RNAm y el RNAt. El
ribosoma se comporta como una pequeña factoría migratoria que viaja a lo largo del molde (RNAm maduro) y
participando en los ciclos de síntesis de uniones peptídicas.

Figura 2.9 : El DNA se transcribe a RNAm inmaduro que contiene exones e intrones.Luego del splicing se produce
RNAm maduro,listo para salir del nucleo y traducirse a proteína

En la traducción se reconocen tres etapas bien diferenciadas que son la iniciación, elongación y terminación.
La Iniciación, que está dada por las reacciones que preceden a la formación de la proteína propiamente. Comienza
cuando la subunidad 30S del ribosoma se une al RNAm, luego se le acopla la subunidad 50S y finalmente entra el
RNAt con el primer aminoácido (metionina), formando así el complejo de iniciación. Este paso es relativamente lento y
es el que va a determinar la velocidad de traducción del RNAm. La Elongación, está dada por todas las uniones
peptídicas desde el primero hasta el último aminoácido. Los aminoácidos se añaden a la cadena uno por vez, traídos
cada uno por su RNAt específico. El ribosoma se mueve a lo largo del RNAm y la cadena se extiende desde el peptidil
RNAt a el aminoacil RNAt. Este es el paso más rápido de la síntesis de proteínas.La Terminación, comprende los

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CAPÍTULO 2

pasos que se necesitan para liberar la cadena polipeptídica completa, esto es, se libera la proteína del RNAt y el
ribosoma se vuelve a disociar en sus subunidades. (Fig. 2.12).

Figura 2..10 . Código Genético.Es un alfabeto formado por cuatro letras que se agrupan de a tres en codones. Existen
64 codones que codifican para Una señal de iniciación, 20 aminoácidos y tres señales de stop

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

Es la técnica más usada en biología molecular, fue desarrollada por Kary Mullis en 1983. La PCR permite
copiar y amplificar secuencias de DNA a partir de una cadena molde (clonar) rápidamente, sin necesidad de utilizar
ninguna célula viva. Esta técnica amplifica más de mil millones de veces un DNA que se obtiene de una región
seleccionada de un genoma, siempre que se conozca la secuencia del mismo o por lo menos del fragmento que se
quiere estudiar. De esta manera podemos diseñar una secuencia de nucleótidos (primers) que servirán de secuencia

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CAPÍTULO 2

cebadora para la Taq polimerasa que lo copiará y delimitarán el tamaño del fragmento que queremos amplificar.

Principio de la PCR
Es una técnica de amplificación in vitro de secuencias especificas de DNA. Se basa en relacionar ciclos de
tiempo y temperatura para: abrir la doble cadena de DNA, hibridar los primers o cebadores y sintetizar el ADN
tomando a cada cadena como molde. Permite amplificar un segmento millones de veces y posteriormente por
técnicas complementarias analizar la estructura estudiada. Por este método se determnan mutaciones genéticas que
pueden ser origen de alteraciones en la síntesis de enzimas. Dado que estas estan involucradas en la síntesis de
hormonas es posible determinar la causa de graves alteraciones endócrinas ( por ejemplo alteraciones de las enzimas
que actuan en la síntesis de esteroides. El ejemplo más típico son las alteraciones de 21-hidroxilasa .(ver Capitulos 6
10 y 11. )
Los tres ciclos de este procedimiento se denominan: desnaturalización, hibridación o annealing y elongación
o síntesis respectivamente. (Fig. 2.13). La desnaturalización consiste en separar con temperatura (95ºC) las dos
cadenas de DNA. La hibridación o annealing, es el proceso en el cual se pegan los primers a cada una de las hebras
de DNA previamente separadas. Por último la elongación o síntesis, se produce cuando actúa la Taq polimerasa,
tomando como comienzo la última base de la pequeña doble cadena que forman el DNA molde y el primer. Esta
enzima actúa a 72º C.

Componentes de la PCR
Taq Polimerasa : la Taq polimerasa proviene de la bacteria Thermus Acuaticus . Esta enzima actúa a 72ºC y copia
DNA a partir de otra cadena de DNA que toma como molde.

Figuraigura 2.. 11. RNAt “El adaptador” Estructura en “hoja de trebol” que está dada por los tres extremos asa d, asa
T y anticodón y un brazo aceptor de aminoácido. En todos los RNAt el aminoácido se une a la A de la secuencia CCA.

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CAPÍTULO 2

Nucleótidos tri fosfato (DNTP’S): Son los nucleótidos ATCG, que forman parte de la cadena de DNA que está
sintetizando la taq polimerasa, éstos deben tener el 3’ oxidrilo libre. Esta enzima lee la cadena molde y toma el
nucleótido complementario y de esta manera va “armando” la cadena hija.
Primers :Son una secuencia de 20 letras (bases) que se sintetizan en el sentido 3’ a 5’ de ambas cadenas.

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Figura 2.12. Traducción de RNAm a proteínas

Electroforesis: es la última etapa de la PCR, se usa para visualizar los productos de la misma. Cuando amplificamos
un fragmento de DNA, y lo corremos en una electroforesis ya sea en un gel de agarosa o de poliacrilamida, lo que
estamos haciendo es disponer los distintos productos amplificados por PCR por peso molecular de mayor (cerca del
punto de siembra) a menor (lejos del punto de siembra) y luego los veremos revelándolos con Nitrato de Plata
(Poliacrilamida) o Bromuro de etidio (agarosa y poliacrilamida).( Fig. 2.14)
Todo lo que se ha hemos descripto hasta aquí de la PCR, es un resumen de los pasos que se deben seguir
para obtener un producto amplificado, para obtener una banda en un gel de agarosa o poliacrilamida que corresponde
al fragmento de DNA que queremos estudiar.

Modificaciones de la PCR
Existen muchas estrategias para hacer que esa banda de amplificación nos brinde información sobre ese
DNA que se ha amplificado y para saber las caracteristicas de ese fragmento. Por ejemplo,compararlo con un
fragmento similar que se considere normal para la codificación de una proteina. Con estas modificaciones,se puede

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CAPÍTULO 2

conocer el peso molecular tiene un fragmento, que secuencia de nucleótidos tiene, si tiene o no una mutación si
tiene o no un sitio de restricción presente, etc.

Los avances que se están dando en la biología molecular, están haciendo que se rescriban las patologías
médicas, en todas las áreas. La velocidad en el desarrollo de la robótica y de la informática ha hecho que se
describiera el mapa del genoma humano en 5 años menos que el tiempo previsto.
Es de gran importancia entender el dogma central de la genética y como se producen esos eventos a nivel molecular,
para luego poder utilizar esas herramientas en la práctica médica.

Figura 2..13. Reacción en cadena de la polimerasa Se suceden los ciclos de tiempo y temperatura, para
desnaturalizar la doble cadena: 1 min a 94ºC; para el annealing: 1 min a 50 – 65 ºC y para la elongación: 1 min a
72ºC. Luego de 30 ciclos se obtienen 500 millones de copias del DNA de doble cadena que queremos estudiar.

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es la técnica más usada en biología molecular y se utiliza
para los fines más diversos, como por ejemplo secuenciar el genoma de todas las especies, dar diagnóstico y
pronóstico de enfermedades mono o poiligénicas, evaluar polimorfismos, en medicina forense y legal realizar los

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CAPÍTULO 2

estudios de filiación, en virología e inmunología con la detección de la carga viral y más recientemente se la está
empezando a usar para saber el tipo de respuesta y la dosis que hay que darle a cada paciente (farmacogenómica).
En reproducción asistida se la está empezando a utilizar para hacer el test pre implantacional (PGD), que nos dice si
el embrión que todavía no fue implantado ha heredado o no la enfermedad que portan sus padres.
Los usos de esta técnica de laboratorio son infinitos, lo que se pretende en este capitulo es que puedan
entender los usos básicos y a partir de esto que tengan en cuenta estos procedimientos como una herramienta más
en la práctica diaria.

Figura 2.14 Revelado de un gel de poliacrilamida con nitrato de plata. Paciente con cáncer de mama familiar. La
mutación de uno de los alelos provoca la pérdida de la banda por diferente migración en el gel. Calles 1, 3, 6, 7 y 10
mutados, calles 2, 4, 5, 8 y 9 normales. Tomado de J. Scaglia y col. III Congreso Argentino de Endocrinología
Ginecológica y Reproductiva. (SAEGRE). Buenos Aires, 12-14 de Abril de 2000.

GLOSARIO
Alelo es una de varias alternativas de un gen que ocupa un locus dado en un cromosoma.
Aminoacil-RNAt es un RNA de transferencia que transporta un aminoácido cuya unión covalente se sitúa entre el NH2
del aminoácido y el grupo 3´o 2´ OH de la base terminal del RNAt.

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CAPÍTULO 2

Amplificación se refiere a la producción de copias adicionales de una secuencia cromosómica, que puede estar como
DNA intra o extra cromosómico.
Antiparalelas son las cadenas de la doble hélice que están en orientaciones opuestas de modo que el extremo 5´ de
una se alinea con el extremo 3´ de la otra.
Autosomas Son todos los cromosomas con excepción de los sexuales XY.
Cadena codificadora o codificante del DNA tiene la misma secuencia del RNAm.
Cadena líder del DNA es la que se sintetiza de forma continua de 5´ a 3´.
Cadena retrasada del DNA es aquella que debe crecer en el sentido 3´ a 5´, y debe ser sintetizada en forma
discontinua en fragmentos cortos (Okasaki) en dirección 5´ a 3´.
Caja CAAT es parte de una secuencia conservada localizada corriente arriba de los puntos de comienzo de las
unidades de transcripción eucariótica, que es reconocida por un gran grupo de factores de transcripción.
Caja TATA es un septámero conservado rico en AT, que se encuentra a unas 25 pb del punto de comienzo de cada
unidad de transcripción de la RNA polimerasa II eucariótica y puede participar en la colocación de la enzima para la
iniciación correcta.
CAP es una proteína reguladora positiva activada por el AMPc. Se necesita para que la RNA polimerasa inicie la
transcripción.
Cariotipo es el complemento cromosómico completo de una célula o de una especie.
Cebador es una secuencia corta (a menudo de RNA) que esta apareada con una cadena de DNA y proporciona un
extrema 3´ OH libre donde la polimerasa comienza la síntesis de una cadena de desoxirribonucleótidos.
Centrómero Es una región constreñida de un cromosoma que comprende el ponto de sujeción del huso mitótico y
meiótico.
Código genético es la correspondencia entre los tripletes en el DNA (o RNA) y los aminoácidos de las proteínas.
Codón es un triplete de nucleótidos que representa un aminoácido o una señal de terminación.
Cromátides son las copias de un cromosoma producidas por replicación.
Cromatina es el complejo de DNA y proteínas en el núcleo de la célula en interfase. Aquí los cromosomas individuales
no se pueden distinguir.
Cromosoma es una unidad discreta del genoma que transporta muchos genes. Cada uno consiste en una molécula
muy larga de DNA duplex y una masa aproximadamente igual de proteínas. Sólo es visible en la división celular en
metafase.
Deleciones son los cambios generados por la eliminación de una secuencia de DNA, uniéndose las regiones que
existían a cada lado.
DNA polimerasa es una enzima que sintetiza una cadena hija de DNA, tomando a otra cadena de DNA como molde.
DNA satélite consta de muchas repeticiones en tandem (idénticas o parecidas)de una unidad de repetición básica.

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FISIOLOGÍA ENDOCRINA Y DE LA REPRODUCCIÓN BIOLOGÍA MOLECULAR
CAPÍTULO 2

Empalme o Splicing describe la eliminación de intrones y la unión de los exones en el RNA; así, los intrones se
eliminan, mientras que los exones se empalman unos con otros.
Exón es cualquier segmento de un gen interrumpido que está representado en el producto del RNA maduro. Los
exones contienen la secuencia codificante del gen.
Fragmentos de Okasaki son los tramos cortos de 1000 a 2000 bases que se producen durante la replicación
discontinua; posteriormente se unen covalentemente en una cadena.
Gen es el segmento de DNA involucrado en producir una cadena polipeptídica; comprende regiones que preceden y
siguen a la región codificadora (líder y cola) así como secuencias intermedias (intrones) entre segmentos
codificadores individuales (exones).
Genotipo es la constitución genética de un organismo.
Hibridación es el apareamiento de cadenas complementarias de DNA y RNA para dar lugar a un híbrido DNA-RNA.
Heterocigoto es un individuo con diferentes alelos en algún locus particular.
Histonas son proteínas de unión al DNA conservadas en eucariotas, que forman el nucleosoma, la subunidad básica
de la cromatina.
Homocigoto es un individuo con el mismo alelo en los loci correspondientes de cromosomas homólogos.
Intrón es un segmento de DNA que se transcribe, pero que es eliminado del interior de la transcripción por un
empalme entre las secuencias de los exones que están situados a cada lado del mismo.
Locus es la posición en un cromosoma en la que reside un gen para un rasgo particular.
Loci es el plural de locus.
Mutación describe cualquier cambio en la secuencia del DNA del genoma.
Pares de bases (pb) es un apareamiento de A con T y de C con Gen una doble hélice de DNA.
Polimorfismo se refiere a la presencia simultánea en la población de genomas que muestran variaciones alélicas.
Promotor es una región del DNA que participa en la unión de la RNA polimerasa para iniciar la transcripción.
RNA polimerasa es una enzima que sintetiza RNA usando un molde de DNA.
Telómero es el extremo natural de un cromosoma; la secuencia de DNA consta de unidades repetidas sencillas con
un extremo protuyente de cadena sencilla que se puede plegar en la horquilla.

Agradecimientos
Dra. Patricia M. Guimerá y Dr. Hugo E. Scaglia.

BIBLIOGRAFÏA

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CAPÍTULO 2

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* El autor del presente Capítulo es Bioquímico. Master en Ingeniería Genética y Biología Molecular. Director de
GeneLab.

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