ANALISIS INSTRUMENTAL Q.F.

JUAN JOSE VARGAS MAMANI

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PRACTICA N° 7: MODALIDAD VIRTUAL

DETERMINACION CINETICA – ESPECTROFOTOMETRICA DE CREATININA

I. OBJETIVOS

 Determinar la concentración de creatinina

 Comprender los fundamentos de la espectrofotometría en las determinaciones
cuantitativas.
 Entender el uso de la ley de Beer – labert y sus absorbancias derivadas.

II. INTRODUCCIÓN

La creatinina es un compuesto orgánico generado a partir de la degradación de

la creatina (que es un nutriente útil para los músculos).1 Se trata de un producto de
desecho del metabolismo normal de los músculos que habitualmente produce el cuerpo
en una tasa muy constante (dependiendo de la masa de los músculos), y que
normalmente filtran los riñones excretándola en la orina. La medición de la creatinina es
el modo más simple de evaluar el funcionamiento de los riñones.

El nivel de creatinina en la sangre muestra lo bien que funcionan sus riñones. Un nivel
alto de creatinina podría significar que los riñones no funcionan como deberían. La
cantidad de creatinina en la sangre depende, en parte, de la cantidad de tejido muscular
que usted tenga. Por lo general, los hombres tienen niveles de creatinina más altos que
las mujeres.

Una prueba de depuración de la creatinina mide lo bien que los riñones eliminan la
creatinina de la sangre. Esta prueba brinda mejor información que una prueba de
creatinina en la sangre con respecto al funcionamiento de los riñones. La prueba se
realiza tanto con una muestra de sangre como con una muestra de orina que se toma
durante un período de 24 horas.

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El análisis cinético se basa en la medida de la variación de una señal analítica

relacionada con una de las especies implicadas en la reacción. Existen dos formas de
trabajo en análisis cinético, una basada en las ecuaciones integradas de velocidad y
otra en las ecuaciones diferenciales. Considerando la reacción:

A+B ⟶C

La ecuación de velocidad se expresa como:

𝑑[𝐴] 𝑑[𝐵] 𝑑[𝐶]

𝑣=− =− = = 𝑘[𝐴]𝛼 [𝐵]𝛽
𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑑𝑡

Siendo α y β los órdenes de reacción para A y B, y k la constante de velocidad. La

ecuación integrada adquiere diferente forma en función de los órdenes de reacción. La
cinética de la reacción entre la creatinina y el picrato a pH básico ha sido establecida
como de primer orden respecto a la concentración de picrato, OH- y creatinina. Por ello,
si se trabaja en exceso de picrato y de álcali, la velocidad de reacción es únicamente
función de la concentración de creatinina, es decir, puede ser considerada una reacción
de pseudoprimer orden:

𝑣 = 𝑘𝐶𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝐶𝑝𝑖𝑐𝑟𝑎𝑡𝑜 𝐶𝑂𝐻− = 𝑘´𝐶𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎

Dado que la velocidad de reacción está relacionada con la desaparición de la creatinina

pero también con la aparición del producto de reacción, la medida de la absorbancia de
éste puede ser utilizada para la determinación de la velocidad inicial y por tanto, para la
cuantificación de creatinina. Para llevar a cabo una determinación cinética existen
diferentes formas de trabajo. El método de los dos puntos consiste en medir el
incremento de señal a un incremento de tiempo fijo (o el incremento de tiempo a un
incremento de señal preestablecido). Este procedimiento es válido si se trabaja a
tiempos suficientemente pequeños ya que se pretende calcular la velocidad inicial.
Según se describe en la bibliografía los mejores resultados se obtienen trabajando a
tiempo fijo y midiendo el incremento de la señal de absorbancia a 484 nm.

III. MATERIAL Y REACTIVOS:

Reactivos y disoluciones: disolución patrón de creatinina de concentración 80 mg L-1 y

disolución de picrato 1,65 10-3 M preparada en medio NaOH 0,5 M.
Instrumentación: espectrofotómetro de absorción UV-Vis.
Material: cronómetro.
Muestra: muestra sintética de suero preparada a partir de una disolución de 50 g L-1 de
albúmina bovina y creatinina de concentración conocida o una muestra real.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Obtención de la recta de calibrado

Las disoluciones necesarias para la obtención de la curva de calibrado se preparan
directamente en la cubeta del espectrofotómetro. Para ello, se introduce el volumen
necesario de la disolución patrón y de agua para completar 1,5 mL de disolución, y 1
mL de picrato alcalino, de forma que la concentración final de creatinina se encuentre
en el intervalo de concentraciones 0-50 mg L-1. El blanco se prepara de igual modo, es
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decir, con 1,5 mL de agua y 1 mL de reactivo. Se considera tiempo cero de la reacción

el instante en el cual se adiciona la última gota de picrato a la cubeta. A continuación se
tapa la cubeta, se agita y se coloca en el espectrofotómetro, tomando las señales de
absorbancia a los 45, 60 y 180 s.

La recta de calibrado se calcula representando ΔΑ = f(Ccreatinina) a dos pares de tiempos

de reacción (45-180 s y 60-180 s) con objeto de seleccionar el incremento de tiempo
más adecuado.

Determinación de creatinina en la muestra

Se analizan por triplicado alícuotas de la muestra de 1,5 mL siguiendo el procedimiento
descrito en el punto anterior. En caso de que la absorbancia no se encuentre dentro del
intervalo de señales del calibrado, se toma un volumen menor de muestra completando
hasta 1,5 mL con agua. Finalmente, a partir de las absorbancias se calculan A 180 s- A60 s
y A180 s- A45 s, y por interpolación en las ecuaciones de calibrado obtenidas en el apartado
anterior se calcula la concentración de creatinina en la muestra en mg de creatinina por
litro.

V. CUESTIONARIO

1. Compara los resultados obtenidos trabajando con ΔA180-60 s y con un ΔA180-

45 s.
2. Deduce la expresión que relaciona el ΔA con la concentración de creatinina.
3. Propón un método de trabajo alternativo para la determinación cinética de
creatinina.
4. En este caso se trabaja con señales obtenidas a 45, 60 y 180 s ¿Se puede
trabajar con señales obtenidas a cualquier tiempo de reacción?
5. Consulta la bibliografía y compara el resultado obtenido con los niveles normales
de creatinina en suero.

VI. BIBLIOGRAFIA:

 Gomez Benito Carmen, Torres Cartas sagrario (2017) ANALISIS

INSTRUMENTAL MANUAL DE LABORATORIO. Ed Universitat politecica de
Valencia. España.

 Harris Daniel (2016) ANNALISIS QUIMICO CUANTITATIVO.3° edición. Ed

Reverte. España.

 Lopz cancio José (2018) PROBLEMAS RESUELTOS DE QUIMICA ANALITICA.

Ed Paraninfo. España.

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ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA.

ANALISIS DE UN ARTICULO CIENTIFICO

Se escogerá un artículo científico y se hará la traducción con el uso de software u otros

medios, el día de la presentación se realizará una exposición resumida con los puntos
más importantes encontrados en el artículo, se podrá trabajar en pareja si la complejidad
del articulo lo amerite.

Al término de la exposición se harán preguntas al respecto como evaluación.

1. Folin-Ciocalteau Reagent for Polyphenolic Assay

Gabriel A Agbor1,2, Joe A Vinson2 and Patrick E. Donnelly2

2. An alternative colorimetric method for the determination of chloramphenicol

Chukwuenweniwe J EbokaF, Johnson Smart and Sunday A Adelusi

3. Spectrophotometric Determination of Gentamicin Loaded PLGA Microparticles and

Method Validation via Ninhydrin-Gentamicin Complex as a Rapid Quantification
Approach
Ahmad Fahmi Harun Ismail1, Farahidah Mohamed1*, Luqman Muizzuddin Mohd
Rosli1, Mohd Affendi Mohd Shafri2, Muhammad Salahuddin Haris1, Anugerah
Budipratama Adina2

4. OPTIMIZATION, VALIDATION AND APPLICATION OF UV-VIS

SPECTROPHOTOMETRIC-COLORIMETRIC METHODS FOR DETERMINATION
OF TRIMETHOPRIM IN DIFFERENT MEDICINAL PRODUCTS
Goran Stojković1, Elizabeta Dimitrieska-Stojković2, Marija Soklevska1, Romel
Velev2

5. COLORIMETRIC MICRODETERMINATION OF SOME CORTICOSTEROID

DRUGS USING INDOPHENOL AS CHROMOPHORIC REAGENT.
ALAA S. AMIN

6. Color and Pigment Analyses in Fruit Products

Ronald E. Wroistad

7. SPECTROPHOTOMETRIC METHOD FOR RANITIDINE DETERMINATION IN

DRUGS USING RHODAMINE B
ZENOVIA MOLDOVAN

8. Stability Study of Tetracycline Drug in Acidic and Alkaline Solutions by Colorimetric

Method
Munther Abdul-Jaleel Mohammed-Ali

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9. Colorimetric Determination of Cefadroxil and Ceftriazone in Pharmaceutical Dosage

Forms
Ch Aswani Kumar, BM Gurupadayya*, S Navya Sloka, RS Chandan and JC
Thejaswini

10. RAPID COLORIMETRIC ASSAY OF DICLOFENAC SODIUM TABLETS USING 4-

CARBOXYL-2,6-DINITROBENZENE DIAZONIUM ION (CDNBD)
OLAKUNLE S. IDOWU,* OLAJIRE A. ADEGOKE, BOLAJI A. ODERINU
AND AJIBOLA A. OLANIYI

11. Novel Spectrophotometric Method for the Assay of Captopril in Dosage Forms using
2,6-Dichloroquinone-4-Chlorimide
Nahed El-Enany1, Fathalla Belal1, Mohamed Rizk2

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