EQUIPO DE PRUEBAS RÁPIDAS COVID-19-DEET-CNSP/INS

PERÚ Ministerio Instituto Nacional

de Salud de Salud

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA

EQUIPO DE PRUEBAS RÁPIDAS COVID-19

GUÍA PARA EL USO DE PRUEBAS RÁPIDAS

INMUNOCROMATOGRÁFICAS PARA LA DETECCIÓN DE
ANTICUERPOS IgM/IgG COVID-19

2020

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1. Introducción ................................................................................................................ 3
2. Justificación ................................................................................................................. 3
3. Objetivo....................................................................................................................... 4
4. Alcance ........................................................................................................................ 4
5. Glosario de términos ................................................................................................... 4
6. Consideraciones generales. ......................................................................................... 4
6.1 Pruebas PCR........................................................................................................... 4
6.2 Pruebas serológicas para la detección de anticuerpos (Ac) ........................ 4
6.4 Consideraciones del uso de las pruebas serológicas para detección de anticuerpos:
5
7. Desarrollo de la prueba rápida .................................................................................... 6
8. Registro de resultados: ................................................................................................ 9
9. Limitaciones .............................................................................................................. 10
10. Reacciones Cruzadas. ............................................................................................ 10
11. Desecho de material .............................................................................................. 10
12. Referencias Bibliográficas...................................................................................... 10
ANEXO 01: ......................................................................................................................... 12

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1. Introducción

Coronavirus es una gran familia de virus conocidos por causar enfermedades que van desde
un resfriado común hasta manifestaciones clínicas más severas como las observadas en el
Síndrome respiratorio por el coronavirus de Oriente Medio (MERS) y el Síndrome espiratorio
agudo grave (SARS). Un nuevo coronavirus (COVID-19) se identificó en 2019 en Wuhan,
China. Este es un nuevo coronavirus que no se ha identificado previamente en humanos.

El diagnóstico de infección por el virus SARS Cov-2 se realiza mediante la reacción en

cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa en tiempo real (rt-PCR en TR), la cual
detecta la presencia del ARN viral. Esta prueba molecular es actualmente el estándar de
referencia recomendado por la Organización Mundial de la Salud. 1

Las pruebas serológicas (PS) se basan en la detección de Inmunoglobulinas IgM e IgG, las
cuales tienen un incremento a partir de la segunda semana de infección y primera de inicio
de síntomas.2 Existen pruebas basadas en la detección de sangre capilar y sangre venosa.
Las primeras son la base de las denominadas “pruebas rápidas”, que permiten obtener
resultados en pocos minutos. Otro tipo de prueba serológica son las inmunocromatográficas
cuyo principio consiste en detectar los Anticuerpos producidos frente al virus SARS-CoV-2,
mediante flujo lateral en una tira de nitrocelulosa, con antígenos fijados para la detección
de IgM e IgG unidos a un conjugado con un orocoloidal, los que son aplicados en muestras
de suero, plasma o sangre total así como sangre obtenida de punción dactilar, que permite
obtener los resultados en minutos (10 a 20 minutos) sin necesidad de equipamiento, son de
fácil manejo y pueden realizarse fuera del ámbito hospitalario, o laboratorios formales, lo que
permite ser aplicado en campo o a domicilio del paciente con alta sospecha de COVID-19
y para vigilancia epidemiológica

2. Justificación

La infección por COVID-19, también se puede detectar indirectamente midiendo la respuesta

inmune del huésped a la infección por SARS-CoV-2. Se ha descubierto que la prueba ELISA
IgM e IgG es positivo, incluso al cuarto día después del inicio de los síntomas, se producen
niveles más altos en la segunda y tercera semana de enfermedad. 3

El uso de las pruebas inmunocromatograficas o comunmente llamadas “pruebas rápidas”

tiene la finalidad de brindar información referida a los procedimientos y manejo de la
interpretación en la detección de anticuerpos IgM e IgG en frente al SARS-CoV-2.

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Pan American Health Organization. Laboratory Guidelines for the Detection and Diagnosis of COVID-19 Virus Infection.
2020;(March):1–5. Disponible en: www.paho.org/en/documents/laboratory-guidelines-detection-and-diagnosis-covid-19-
virus-infection
2 Swee Saw Hock School of Public Health. Research on COVID-19 [Internet]. SSHSPH COVID-19 Science Reports. 2020 [citado

el 1 de marzo de 2020]. Disponible en: https://sph.nus.edu.sg/covid-19/research/

3 Sethuraman N, Jeremiah SS, Ryo A. Interpretación de las pruebas de diagnóstico para SARS-CoV-2. JAMA Publicado en

línea el 6 de mayo de 2020. doi: 10.1001 / jama.2020.8259

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3. Objetivo.
Establecer las pautas para la utilización de las pruebas rápidas para la detección de
anticuerpos en las personas afectadas por el COVID 19.

4. Alcance

Pacientes sospechosos de COVID 19 en el ámbito de los servicios de salud, en la

comunidad, ámbitos laborales y con fines de vigilancia epidemiológica

5. Glosario de términos
 Antígeno: Toda molécula extraña al organismo con capacidad de inducir la
producción de anticuerpos.
 Anticuerpo: Inmunoglobulina, proteína de la fracción gamma, con capacidad de
reconocer al antígeno, unírsele y formar el complejo antígeno-anticuerpo.
 Muestra: Una o más partes tomadas de un sistema y destinado a obtener
información sobre éste, a menudo sirve como base para tomar decisiones con
respecto al sistema o su producción.
 Sangre capilar: Es la recolección de una muestra de sangre que se obtiene
punzando la piel.
 Plasma: Parte líquida de la sangre y la linfa. Constituye del 30 al 50 por ciento de la
sangre, tiene nutrientes, electrolitos, gases, albúmina, factores de coagulación, y
hormonas.
 Suero: Componente líquido de la sangre libre de fibrina y factores de coagulación.

6. Consideraciones generales.

6.1 Pruebas PCR

La PCR que significa (por sus siglas en inglés) “Reacción en Cadena de Polimerasa”, es
la prueba de referencia y permite detectar el ARN del virus. La prueba será positiva
cuando en el análisis se detecte material genético del virus. Si la prueba es negativa,
pero existe una alta sospecha, será necesario realizar otra prueba que permita detectar
la presencia o no del virus. La muestra del paciente se extrae mediante la toma de
secreción por hisopado nasofaríngeo y los resultados se obtienen al cabo de unas horas.

Es una prueba, con alta especificidad y sensibilidad, que facilita el diagnóstico precoz de
la enfermedad ya que permite detectar el virus en las primeras fases de la infección
respiratoria. 4,5

6.2 Pruebas serológicas para la detección de anticuerpos (Ac)

Estas pruebas son más rápidas que el PCR y consisten en detectar los Ac producidos
frente al virus, mediante una muestra sanguínea obtenida por punción capilar del dedo.
Además de permitir obtener los resultados en 10 a 20 minutos, son sencillas y pueden
realizarse fuera del ámbito hospitalario, lo que permite ser aplicado en el domicilio de un

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paciente con alta sospecha de COVID-19, aplicado en comunidad y para fines de

vigilancia epidemiológica1,4

6.3 Fundamento de la Prueba

La prueba rápida COVID-19 IgM / IgG es una prueba de diagnóstico in vitro para la
determinación cualitativa de los anticuerpos IgM e IgG de COVID-19 en sangre entera
humana, suero, plasma y sangre de capilar del dedo. El kit de prueba consta de
dispositivos de prueba y diluyente de muestra. Es solo para uso diagnóstico in vitro y
pueden usarse en niveles de atención primario o puntos de atención.
El kit de prueba se basa en la tecnología inmunocromatográfica, los dispositivos de
prueba contienen:

 Almohadilla conjugada: antígeno SARS-CoV-2 recombinante marcado con oro

coloidal y marcador de oro de anticuerpo de control de calidad.
 Membrana de nitrocelulosa: recubierta con dos líneas de detección (línea IgG y línea
IgM) y una línea de control de calidad (línea C). La línea IgM recubierta con anticuerpo
monoclonal IgM anti-humano de ratón detecta el anticuerpo IgM COVID-19. La línea
IgG recubierta con anticuerpo monoclonal IgG anti-humano de ratón detecta el
anticuerpo IgG COVID-19. La línea C recubierta con anticuerpo de control de calidad.
Cuando la muestra se agrega al pocillo de muestra del dispositivo de prueba,
avanzará a lo largo del dispositivo de prueba. 5,6,7

Fuente: journal of virology ((DOI: 10.1002/jmv.25727 )

6.4 Consideraciones del uso de las pruebas serológicas para detección de

anticuerpos:

El día 6 de mayo de 2020, la Organización Mundial de la Salud publicó el documento

titulado “Interpretación de resultados de laboratorio para diagnóstico de COVID-19”, en
el cual se indica claramente la utilidad de las pruebas serológicas/rápidas, teniendo como

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parámetro el tiempo de enfermedad y tres (3) escenarios: (i) Pacientes sintomáticos, (ii)
Contacto con un caso sintomático y (iii) Personas asintomáticas.4

Un resultado positivo de anticuerpos indica contacto previo con el virus, pero no descarta
ni confirma infección activa.

7. Desarrollo de la prueba rápida

7.1 Tipos de muestra para realizar la prueba rápida

 Muestra de sangre total

 Suero
 Plasma

7.2 Almacenamiento de la prueba rápida Covid-19

 Guarde el kit de prueba en un lugar fresco y seco entre 2°C - 30°C (36°F-86°F),
 Mantener protegido de la luz. La exposición a la temperatura y / o humedad fuera de
las condiciones especificadas puede dar como resultado resultados inexactos.
 No congelar, pero se puede refrigerar, en casos que la la temperatura del ambiente,
supere la temperatura de almacenamiento recomendado (mayor a 30°C).
 Utilice los kits de prueba a temperaturas entre 18°C - 25°C o según lo recomendado
por el inserto del kit.
 No use kits con fechas de vencimiento expiradas, la cual se encuentra impresa en la
bolsa de aluminio y la etiqueta de la caja.

7.3 Material necesario

Material de Bioseguridad

 Guantes
 Mandil descartable
 Curitas (Venditas)
 Caja para material punzocortante
 Bolsa de bioseguridad para descarte de material biocontaminante.
 Respirador N95 o FFP2
 Considerar el lavado de manos con jabón o higiene de manos con alcohol gel.

Material para el desarrollo de la prueba

 Dispositivo (casette)
 Lancetas retráctiles
 Marcador (plumón indeleble)
 Algodón

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https://www.paho.org/es/documentos/interpretacion-resultados-laboratorio-para-diagnostico-covid-19

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 Alcohol de 70º
 Ficha de reporte de resultados, según se indica en el punto 8 de la presente guía.

7.4 Obtención de sangre de pulpejo de dedo.

a) Lavarse las las manos con jabón o desinfectarlas con alcohol de 70º
b) Limpiar el área del dedo con un algodón empapado en el alcohol de 70° y esperar a
que el alcohol seque.
c) Abrir la lanceta girando el protector de la punta en 180° (según el tipo de lanceta)
d) Colocar la lanceta sobre el área a realizar la punción en el dedo.
e) Presionar hacia abajo la lanceta contra el dedo.
f) No retire la lanceta hasta oir “click”.
g) Descartar la primera gota con un algodón seco y presionar nuevamente el dedo para
que se vuelva a formar una nueva gota.
h) Tomar el capilar de plástico o dispensador de muestra y dejar que la sangre suba en
el capilar.

7.5 Desarrollo de la prueba.

a) Realizar la prueba en una superficie nivelada y limpia.

b) Verificar la fecha de vencimiento, si la fecha de vencimiento ha expirado, utilice otro
kit.
c) Revisar el desecante, debe ser transparente, si observa alguna alteración utilice otro
kit.
d) Codificar el casete con los datos del paciente, utilizando un plumón indeleble.
e) Considerar lo señalado en la letra “g” del punto 7.4, dispense una gota de sangre
extraída en el pozo de muestra redondo, según se indique el inserto (20-50 ul).
f) Añada las gotas de diluyente de ensayo, de acuerdo al inserto de la prueba realizada
(2 a 3 gotas).
g) Realice la lectura después de 10; 15 o 20 minutos (según se indique en el inserto de
prueba)

NOTA: Las lecturas realizadas después de los minutos indicados en el inserto, el

volumen de muestra utilizado (mayor o menor de lo indicado), la formación

de burbujas durante el dispensado de la muestra o al adicionar el buffer ,

pueden conllevar a resultados INCORRECTOS.

7.6 Interpretación de resultados

Para realizar las lecturas de las pruebas rápidas para la detección de anticuerpos
IgM e IgG se debe tener en cuenta los días de la infección y la sintomatología del
paciente

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https://microbioun.blogspot.com/2020/

 Formación de los anticuerpos o inmunoglobulinas IgM a partir del séptimo día de la

infección u ocurrida la sintomatología.
 Formación de los anticuerpos o inmunoglobulinas IgG a partir de los 14 días de la
infección u ocurrida la sintomatología, la presencia de este anticuerpo puede tener
un periodo de duración mayor.

LECTURA E INTERPRETACIÓN

CASSETTE NO REACTIVO REACTIVO IgM/IgG

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REACTIVO IgG REACTIVO IgM INVALIDO

INTENSIDAD DE LA BANDA O LINEA

REACTIVO IgM : Se visualiza banda control y banda IgM.

REACTIVO IgG : Se visualiza banda control y banda IgG.
REACTIVO IgM e IgM: Se visualiza las tres bandas IgG, IgM y banda control.
NO REACTIVO : Se observa formación de banda.
INVALIDO : No se visualiza la banda control, solo se observa banda IgG, solo
IgM o IgG/ IgM, en estos casos se debe repetir la prueba.

Nota: Un volumen de muestra insuficiente o técnicas de procedimiento incorrectas son las

razones más probables del falla de la línea de control. Revise el procedimiento y repita la
prueba, con una nueva prueba. Si el problema persiste, deje de usar el kit de prueba
inmediatamente

8. Registro de resultados:

 Los resultados de la prueba deberán ser reportados según el manual del SICOVID
online (Sistema Integrado para COVID19).

http://www.minsa.gob.pe/procesos_covid/documentos/Manual_SISCOVID_ONLINE_
v40.pdf
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FICHA DE REPORTE DE RESULTADOS DE PRUEBA RÁPIDA. COVID-19( ver anexo 01)

9. Limitaciones
 El resultado de la prueba no puede usarse para el diagnóstico de COVID-19. Si el
resultado no coincide con la evaluación clínica, realice más pruebas.
 El kit de prueba, solo se puede usar con sangre completa (de vena o yema del dedo),
suero o plasma. Si usa otras muestras, puede obtener resultados incorrectos.
 No llevar a cabo las lecturas los tiempos indicados en el inserto del Kit. Lo que
conllevaría a resultados incorrectos.
 No cumplir con el procedimiento indicado en el inserto o instrucciones de uso.

10. Reacciones Cruzadas.

Las pruebas rápidas inmunocromatograficas para detección de anticuerpos COVID-

19 pueden dar reacciones cruzadas con enfermedades como: virus respiratorio H1,
N1, Zika, chikunguya, sífilis, VIH, HTLV, entre otros, por lo que se recomienda
verificar las indicaciones de los insertos del kit utilizados para tomar las
consideraciones y medidas necesarias.

11. Desecho de material

 Bolsa roja o de bioseguridad: En esta bolsa se deben colocar los algodones

utilizados, pipeta, capilar, casettes, guantes, mandiles.

 Bolsa negra o común: En estas bolsas se deben colocar las envolturas de los
casettes, tapas de las lancetas, cajas de cartón de las pruebas, cubiertas de mandiles
descartables.

12. Referencias Bibliográficas

1. Pan American Health Organization. Laboratory Guidelines for the Detection and
Diagnosis of COVID-19 Virus Infection. 2020;(March):1–5. Disponible en:
www.paho.org/en/documents/laboratory-guidelines-detection-and-diagnosis-covid-
19-virus-infection

2. Swee Saw Hock School of Public Health. Research on COVID-19 [Internet].

SSHSPH COVID-19 Science Reports. 2020 [citado el 1 de marzo de 2020].
Disponible en: https://sph.nus.edu.sg/covid-19/research/
3. Sethuraman N, Jeremiah SS, Ryo A. Interpretación de las pruebas de diagnóstico
para SARS-CoV-2. JAMA Publicado en línea el 6 de mayo de 2020. doi: 10.1001 /
jama.2020.8259
https://www.paho.org/es/documentos/interpretacion-resultados-laboratorio-
para-diagnostico-covid-19

4. Li Z, Yi Y, Luo X, et al. Development and clinical application of a rapid

IgM‐IgG combined antibody test for SARS‐CoV‐2 infection
diagnosis. J Med Virol. 2020; 1– 7. [DOI 10.1002/jmv.25727] [Consulta: 29/04/2020]

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5. Protocolo para las pruebas diagnósticas en los centros sociosanitarios (08/04/2020).

Consejería de Sanidad. Comunidad de Madrid
[https://www.comunidad.madrid/sites/default/files/doc/servicios-
sociales/protocolo_para_las_pruebas_diagnosticas_en_los_centros_sociosanitario
s.pdf] [Consulta: 29/04/2020].

6. Protocolo para las pruebas diagnósticas en los centros sociosanitarios (08/04/2020).

Consejería de Sanidad. Comunidad de Madrid
[https://www.comunidad.madrid/sites/default/files/doc/servicios-
sociales/protocolo_para_las_pruebas_diagnosticas_en_los_centros_sociosanitario
s.pdf] [Consulta: 29/04/2020]

7. Prevención, Diagnóstico y Tratamiento de personas afectadas por COVID-19 en el

Perú, 14 de abril de 2020.
Resolución Ministerial N° 193-2020-MINSA y sus modificatorias
https://www.gob.pe/institucion/minsa/normas-legales/473575-193-2020-minsa

8. Documento Técnico: “Lineamientos para la Vigilancia, Prevención y Control de la

Salud de los Trabajadores con Riesgo de Exposición a COVID-19” aprobados
según R.M Nº 239-2020-MINSA y sus modificatorias aprobado según R.M Nº 265-
2020-MINSA R.M Nº 283-2020-MINSA.
https://www.gob.pe/institucion/minsa/informes-publicaciones/543249- lineamientos-
para-la-vigilancia-de-la-salud-de-los-trabajadores-con-riesgo-de-exposicion-a-
covid-19

9. Directiva Sanitaria Nº 095-MINSA/2020-DIGEMID Directiva sanitaria para el control

y vigilancia de los dispositivos de diagnóstico in Vitro: Pruebas rápidas y moleculares
para COVID-19” mediante resolución ministerial 321-2020-MINSA y sus
modificatorias con resolución ministerial Nº 281-2020-MINSA.

https://cdn.www.gob.pe/uploads/document/file/651727/RM_231-2020-MINSA.PDF

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ANEXO 01: Ficha de reporte de resultados de prueba rápida COVID-19.

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