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Equipo Investigador:
Manuel Núñez Gutiérrez (Dr. I.A.)
Margarita Medina Fernández-Regatillo (Dra. C.B.)
Pilar Gaya Sicilia (Dra. C.B.)
Ana María Guillén Scapardini (L.Q.)
Antonia María Picón Gálvez (Dra.C.Q.)
José Javier Fernández Alvarez (Dr. Far.)
Angel Fernández Mohedano (L.Q.)
Centro de Investigación:
Centro de Investigación y Tecnología. (C.I.T.). INIA.
Area de Tecnología de los Alimentos
Ctra. de La Coruña, Km. 7
28040 MADRID
Tel: 91/347 67 77 - Fax: 91/357 22 93
Duración:
Enero 1992 - Diciembre 1995
Coste:
Miles de pesetas: 30.350
Financiación INIA 100 %
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PLANTEAMIENTO Y OBJETIVOS
Las enzimas tienen otras aplicaciones en tecnología láctea, tales como el desarrollo
de nuevos productos y la aceleración de la maduración de quesos. Mediante la
adición de enzimas a leche o cuajada se pueden obtener ingredientes alimentarios,
p. ej., sabores y aromas de queso curado, en 1-3 días frente a los 3-12 meses del
proceso convencional. Se pueden también desarrollar nuevas variedades de queso,
con características peculiares de sabor y textura. Finalmente, se puede acortar el
período de maduración de aquellas variedades de queso en las que el proceso
resulte especialmente costoso por su larga duración.
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incluso inferior a 5.0. Por otra parte, sería fundamental que no produjesen a partir
de las caseínas niveles elevados de péptidos hidrófobos, responsables del sabor
amargo en el queso. La inclusión de peptidasas junto con proteinasas produciría
un efecto sinérgico, permitiendo la formación de aminoácidos libres en niveles
suficientes para influenciar significativamente la intensidad del sabor del queso.
RESULTADOS
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quimosina producida por Kluyveromyces fragilis, proteinasa neutra de Bacillus
subtilis y ciprosinas de Cynara cardunculus.
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programada y 30,2% en el queso control a los 60 días) y de la ß-caseína (43,4% de
ß-caseína residual en el queso con liposomas convencionales, 47,2% en el queso
con liposomas de liberación programada y 46,9% en el queso control a los 60
días). Los niveles de N soluble a pH 4,6, en ácido tricloroacético y en ácido
fosfotúngstico fueron 16,66, 9,48 y 3,79% en el queso con liposomas
convencionales, 14,48, 9,22 y 3,50% en el queso con liposomas de liberación
programada y 14,43, 8,31 y 3,19% en el queso control a los 60 días. Los quesos con
liposomas mostraban una textura más blanda que la del queso control (33,92 N y
0,374 J para el queso con liposomas convencionales, 35,98 N y 0,381 J para el queso
con liposomas de liberación programada y 41,27 N y 0,477 J para el queso control
a los 60 días), debido a su mayor proteolisis. La adición de liposomas no influyó
sobre los niveles de péptidos hidrófobos e hidrófilos ni sobre las características
sensoriales (calidad de sabor, intensidad de sabor y amargor) del queso Manchego.
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liberación programada (9,6% y 8,4% de encapsulación, respectivamente) no
modificó la composición del suero pero retrasó el desuerado, dando lugar a un
mayor contenido en humedad en el queso de 24 h. La adición de liposomas de
ciprosinas aumentó la degradación de la ß-caseína (46,3% de ß-caseína residual en
el queso con liposomas convencionales, 43,7% en el queso con liposomas de
liberación programada y 48,0% en el queso control a los 60 días) y aumentó los
niveles de N soluble a pH 4,6 desde las primeras horas (15,70% en el queso con
liposomas convencionales, 13,03% en el queso con liposomas de liberación
programada y 9,32% en el queso control a las 24 h). Los niveles de N soluble en
ácido tricloroacético y en ácido fosfotúngstico de los quesos con liposomas fueron
mayores que los del queso control durante el primer mes de maduración (8,52 y
3,23% en el queso con liposomas convencionales, 9,26 y 3,28% en el queso con
liposomas de liberación programada y 8,50 y 2,97% en el queso control a los 30
días), aumentando en el queso control más rápidamente que en los quesos con
liposomas durante el segundo mes. Se observó una tendencia similar para los
péptidos hidrófobos e hidrófilos. Los quesos con liposomas eran más blandos a las
24 h que el queso control (14,93 N y 0,137 J para el queso con liposomas
convencionales, 19,69 N y 0,179 J para el queso con liposomas de liberación
programada y 23,91 N y 0,203 J para el queso control). La adición de liposomas de
ciprosinas aumentó la intensidad de sabor de los quesos con liposomas (7,01 para
el queso con liposomas convencionales, 6,99 para el queso con liposomas de
liberación programada y 6,63 para el queso control a los 60 días), no detectándose
sabor amargo en ningún queso.
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sueros experimentales que en los sueros control. El nivel de αs-caseína residual en
los quesos experimentales fue significativamente menor que en el queso control
desde el dia 30, y el nivel de ß-caseína desde el dia 15. El nitrógeno soluble a pH 4,6
fue más elevado en los quesos experimentales que en el queso control desde el dia 1,
y el nitrógeno soluble en ácido tricloroacético y en ácido fosfotúngstico desde el dia
15. Los péptidos hidrófobos e hidrófilos fueron significativamente más altos en los
quesos experimentales desde el dia 15. Los quesos experimentales mostraron una
textura más blanda, con valores menores de fracturabilidad, elasticidad y firmeza
desde el dia 30, debido a su proteolisis más acentuada. La calidad del sabor mejoró
con la adición de la cisteína proteinasa a la leche y no se registraron diferencias en
amargor entre los quesos experimentales y control. La intensidad del sabor
aumentó significativamente con la adición de proteinasa a la leche desde el dia 15.
El queso Manchego elaborado a partir de leche con 2,0 unidades de
proteinasa/litro alcanzaba en 36 dias la intensidad de sabor que tenía el queso
control a los 60 dias.
FORMACION DE PERSONAL
PUBLICACIONES
Artículos científicos
Picón A., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1994) The effect of liposome
encapsulation of chymosin derived by fermentation on Manchego cheese ripening.
Journal of Dairy Science, 77. 16-23.
Picón A., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1994) Microencapsulation of cyprosins
from flowers of Cynara cardunculus L. in dehydration-rehydration liposomes.
Biotechnology Letters, 16. 1031-1034.
Picón A., Medina M., Nuñez M. (1995) Prediction of clotting time for milk
coagulation by mixtures of proteolytic enzymes. Food Chemistry, 52. 411-414.
Picón A., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1995) Kinetics of milk coagulation by
mixtures of cyprosin and chymosin. Milchwissenschaft, 50. 393-395.
Picón A., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1995) The effect of liposome-
encapsulated Bacillus subtilis neutral proteinase on Manchego cheese ripening.
Journal of Dairy Science, 78. 1238-1247.
7
Picón A., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1995) Release of encapsulated proteinase
from dehydration-rehydration liposomes by a co-encapsulated phospholipase.
Biotechnology Letters, 17. 1051-1056.
Mohedano A.F., Fernández J., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1996) Hydrolysis of
milk proteins and formation of peptides by micrococci isolated from raw milk and
cheese. Milchwissenschaft, 51. 70-73.
Fernández J., Mohedano A.F., Polanco M.J., Medina M., Nuñez M. (1996)
Purification and characterization of an extracellular cysteine proteinase produced
by Micrococcus sp. INIA 528. Journal of Applied Bacteriology 81, 27-34.
Picón A., Serrano C., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1996) The effect of liposome-
encapsulated cyprosins on Manchego cheese ripening. Journal of Dairy Science 79,
1699-1705.
Mohedano A.F., Fernández J., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1997) Effect of pH,
temperature and culture medium composition on the production of an
extracellular cysteine proteinase by Micrococcus sp. INIA 528. Journal of Applied
Microbiology 82, 81-86.
Artículos de divulgación
Libros
8
Mohedano A.F., Gaya P., Medina M., Nuñez M. Actividad proteolítica de
Micrococcus de origen lácteo sobre caseínas y proteínas del suero. XIV Congreso
Nacional de Microbiología. Zaragoza (España). 1993.
Mohedano A.F., Gaya P., Medina M., Nuñez M. (1993) Efecto de las proteinasas de
Pseudomonas aisladas de leche de oveja sobre las caseínas y las proteínas del suero.
IX Congreso Nacional de Química. Sevilla (España).
Picón A., Medina M., Gaya P., Nuñez M. Prediction of clotting time for milk
coagulation by mixtures of proteolytic enzymes. 89th Annual Meeting American
Dairy Science Association. Minneapolis (USA). 1994.
Picón A., Serrano C., Medina M., Gaya P., Nuñez M. (1994) Accelerated ripening
of ewes' milk Manchego cheese using a liposome-encapsulated neutral proteinase.
24th International Dairy Congress. Melbourne (Australia). 1994.
Carrera E., Gaya P., Medina M., Nuñez M. The effect of milk coagulant on the
formation of hydrophobic peptides in cheese. 90th Annual Meeting American Dairy
Science Association. Cornell (USA). 1995.
Fernández J., Mohedano A.F., Gaya P., Medina M., Nuñez M. Optimización de la
producción en fermentador discontinuo de una proteinasa extracelular por
Micrococcus sp. INIA 528. VI Congreso de la Sociedad Española de Biotecnología.
Valladolid (España). 1996.
Picón A., Gaya P., Medina M., Nuñez M. Release of encapsulated proteinase from
dehydration-rehydration liposomes by a co-encapsulated phospholipase. 5th
Symposium on Lactic Acid Bacteria. Veldhoven (Holanda). 1996.