OBTENCION Y ANALISIS DE FRACCIONES CELULARES

ETAPAS Centrifugación de gradiente de

1) Primer etapa (homogeneización) densidad isopicnica:
Que todo se encuentre en equilibrio, Formación de un gradiente discontinuo.
proceso de ruptura de células o tejidos para Centrifugación de gradiente de
tener un lisado celular (ruptura de la densidad zonal:
membrana celular, causa que las organelas La densidad máxima del gradiente no ha de
y material genético salga) exceder a la de las partículas a separar,
a) Sonicacion: aplicar energía partículas mas pesadas originan un pellet.
ultrasónica para agitar partículas en
una muestra
b) Presión osmótica:
c) Tratamiento con detergentes:
destruye la bicapa lipídica mediante
agentes que rompen las
asociaciones hidrofóbicas.
Son pequeñas moléculas anfipaticas
que tienden a formar micelas en el
agua, actúan en membranas.
Tienen cola hidrofóbica y cabeza
hidrofilia, su cola se una a la proteína de
membrana y van a desplazar a los
fosfolípidos, formando un complejo
hidrosoluble de proteína-lípido-
detergente
Las cabezas pueden ser iónicos y no
iónicos.
d) Tratamiento con enzimas:
2) Filtración
Separación de componentes no deseados
presentes en la suspensión celular
mediante un medio poroso, retiene solidos
y permite el paso de líquidos.
3) Centrifugación
Una vez que se tienen todos los
componentes celulares libres, se separan en
fracciones mediante la centrifugación
En este proceso se coloca la muestra en un
tubo dentro de un rotor para someter a las
partículas a una fuerza centrifuga.
Centrifugación diferencial:
Se usa para obtener algo en especifico.