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Cuarta Unidad Metabolismo de Proteínas y Ácidos Nucleicos

- INHIBICION DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS PROTEICAS --


ACCION DE LA SOYA HERVIDA Y CRUDA SOBRE EL EFECTO PROTEOLITICO DE LA TRIPSINA.
INTRODUCCION:
La tripsina actúa como una endopeptidasa e hidroliza prácticamente toda clase de proteínas. Digiere las proteínas
desnaturalizadas y parcialmente digeridas, con mayor rapidez que las originales desdoblándose en polipéptidos de peso variable
y algunos aminoácidos.

Algunos alimentos en estado natural poseen componentes perjudiciales para la nutrición. Por ejemplo, el frijol de soja contiene
un principio cuya actividad antitripsina dificulta la digestión de las proteínas. Esta sustancia de naturaleza peptídica es inactivada
por el calor, ello explica en parte que el valor nutritivo del frijol de Soja aumenta considerablemente si se coce a ebullición por
varios minutos.

El ovomucoide de la clara de huevo inhibe también de manera enérgica la tripsina. Es interesante también que el aceite de semilla
de algodón posea un pigmento, el gisipol, con actividad antioxidante y antitripsina que disminuye el apetito y dificulta la digestión
de las proteínas.Los extractos de páncreas poseen también un péptido inhibidor de la tripsina, la alfa-1 antitripsina fecal (1-AT-
Fecal) que es una glicoproteína, secretada a la luz intestinal.

FUNDAMENTACIÓN DE LA TECNICA:
El inhibidor de tripsina es una de las peptidasas encontradas en la soya. Este inhibidor es el único polipéptido que forma complejo
estable y enzimáticamente inactivo con la tripsina gracias a la compatibilidad de sus enlaces peptídicos con el sitio activo de esta
última, reduciendo la disponibilidad celular. La soya también tiene lipooxigenasa, ureasa, hemaglutinina y factor antitiroideo. El
inhibidor de la tripsina de la soya, es termolábil así que en la soua hervida pierde su capacidad de inhibir a la tripsina.

FINALIDAD:
▪ Demostrar el efecto inhibidor del extracto de soya cruda sobre el efecto proteolítico de la tripsina, efecto que desaparece
cuando la soya es hervida.

MATERIAL Y EQUIPOS
▪ Material: de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimetradas.
▪ Equipos: centrífuga, baño maría, olla para baño de agua hirviendo.
▪ Reactivos:
• Buffer fosfato 0,1 M pH 8.
• Solución de ninhidrina 0,25% saturada con butanol.
• Solución de tripsina 20 mg%
• Proteína de soya cruda 30%
• Proteína de soya hervida 30%
• Etanol absoluto.

PROCEDIMIENTO
▪ Se arma el siguiente sistema, colocando:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (ml)
I II III IV
Buffer fosfato 0.1M pH 8.0 2.5 2.5 2.5 2.5
Proteína de soya cruda al 30% 0.5 0.5 -- --
Proteína de soya hervida al 30% -- -- 0.5 0.5
Solución de tripsina al 20% 0.2 -- 0.2 --
Se mezclan y colocan todos los tubos en baño maría a 37 ºC, durante 60 minutos.
Transcurrido el tiempo, se agrega:
Etanol absoluto (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0
Se mezclan y todos los tubos se centrifugan a 2500 rpm, durante 10 minutos.
Observe los resultados.

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▪ Se arma un segundo sistema, colocando:


TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (ml)
I II III IV
Sobrenadante anterior 1.0 1.0 1.0 1.0
Ninhidrina al 0.25% 1.0 1.0 1.0 1.0
Se somete a todos los tubos a baño de agua hirviendo durante 5 minutos.
Observe los resultados.

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Actividades a desarrollar por el alumno:


- Explique bioquímicamente lo encontrado.

PREGUNTAS DE APLICACIÓN.
1) ¿Cuál fueron los objetivos de la práctica?
2) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
3) Identifique los componentes del sistema empleado en la práctica y señale sus principales características.
4) ¿Cuál es la acción de la soya sobre la digestión de la proteína?
5) ¿Cuál es la razón de utilizar ninhidrina en el experimento de la digestión de las proteínas?
6) ¿Qué ocurre si se trata con el calor la soya?
7) ¿Por qué el ovomucoide de la clara de huevo inhibe la acción de la tripsina?
8) ¿Qué es el gisipol y cómo actúa en su acción antioxidante?
9) Elabore un esquema mostrando el mecanismo de acción de la ninhidrina.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011