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1, PROCEDIMIENTO PARA EL RECUENTO DE CELULAS TOTALES Y

LIMITACIONES RECUENTO DE CELULAS TOTALES 

El crecimiento de poblaciones se mide:  


 Estimando los cambios en el número de células
 La cantidad de algún componente de las mismas.
 Peso total seco de las células.
 
Existen métodos de contar el número de células o determinar la masa celular, para
diferentes organismos o diferentes situaciones.
Recuento de células totales:
Se puede determinar mediante el método de recuento directo, este se puede hacer de dos
maneras:
 
 Muestras secas (porta)
 Muestras líquidas: se emplean cámaras de recuento especiales
 
El recuento directo por microscopía es un método rápido para conocer el número de
células pero tiene limitaciones: 
1. No distingue las células vivas de las muertas.
2. Células pequeñas son difíciles de ver en el microscopio y se pierden en el
recuento
3. La precisión es difícil
4. Se requiere de un microscopio de contraste para las células que no se tiñen 
5. No es adecuado para suspensiones con baja densidad celular. 
6. Las células móviles se deben inmovilizar antes del recuento
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2. RECUENTO DE CELULAS VIABLES Y SUS LIMITACIONES: Fuentes de error


en el recuento en placa

También llamado recuento en placa o recuento de colonias. En el recuento microscópico


directo podemos encontrar células vivas y muertas, solo contaremos células vivas para
desarrollar el recuento de células viables. La célula viable es aquella que se divide y da
lugar a una descendencia y el método usual se basa en contar el número de células de la
muestra que es capaz de formar colonias en un medio sólido.
Hay dos maneras de realizar un recuento de la placa para viables:
 
 Método de extensión en placa
 Método del vertido en placa

Las células en la placa no se desarrollarán en todas en colonias a la misma velocidad, se


obtendrán menos colonias de las posibles, las colonias varían de tamaño y se desarrollan
colonias muy pequeñas que pasan desapercibidas en el recuento. Si se desea un recuento
preciso, se debe hacer con mucho cuidado y hacer las placas de las diluciones por
duplicado, una agrupación de dos o más células producirá una colonia  y entonces el
recuento de viables será erróneamente meno
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3. METODO DE EXTENSION EN PLACA 

En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su


siembra en placa. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos
microorganismos, que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. 

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/
cap309.htm

4. METODO RECUENTO EN PLACA

Se basa en la suposición de que cada bacteria o agrupación de colonia crece y se divide


para formar una sola colonia

Dispersión de la muestra

Formación de colonias

https://es.scribd.com/doc/38138496/Recuento-y-Cuantificacion-de-Microorganismos

5  DILUCIÓN DE LAS SUSPENSIONES CELULARES ANTES DE LA SIEMBRA


EN PLACA MEDIDAS INDIRECTAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO 

Es importante que el número de colonias en las placas no sea muy grande, pues se
podrían fusionar y dar estimaciones erróneas, el número de colonias no debe
ser demasiado bajo para que el calculo sea significativo y para obtener el número
apropiado de colonias se debe diluir la muestra.

Las medidas de turbidez son un método rápido y útil para obtener estimaciones del
número de células. una suspensión celular turbia se debe a que las células dispersan la
luz que atraviesa la suspensión, cuantas más células estén presentes mayor será la luz
dispersada y habrá mayor turbidez, esto se mide con un fotómetro o espectrofotómetro. 
Las longitudes de onda más usadas para medir la turbidez bacteriana son:
540nm
600nm
660nm
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6. OBTENCION DE UNA CURVA ESTANDAR FACTORES AMBIENTALES 
Es preparar para cada microorganismo una curva estándar relacionando alguna medida
directa del número de células, esta curva puede contener datos tanto del número de
células como la masa celular, estimando ambos parámetros a partir de una simple
lectura de la turbidez. A altas concentraciones, la luz dispersada por la célula, que no
alcanzaría el detector, puede ser redispersada por otra, en este caso el número de células
y la turbidez pierden linearidad.

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