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CURITIBA
2010
1 CONSTRUÇÃO DA CURVA DE CALIBRAÇÃO
Foram preparadas seis soluções padrão com base em uma solução padrão de
albumina de soro bovino (BSA) (5 mg/mL). As soluções apresentaram absorbância
(540 nm) e concentrações relacionadas na Tabela 1:
C1V1=C2V2 (2)
O tubo 14 tem a concentração da proteínas em 1ml de leite logo por uma regra
de três simples pode-se obter a concentração em g/100mL de leite:
3,24 mg ----------------------------------------- 1 mL
X mg ------------------------------------------ 100 mL
X = 324 mg/100 mL = 0,324 g/100 mL
O tubo a ser usado como “branco” tem em sua composição apenas a água
destilada e a solução de biureto, este tem como finalidade identificar o valor do pico
no comprimento de onda de 540nm que a solução tem sem que qualquer porção de
amostra ou de solução padrão seja adicionada, permitindo assim a exclusão do sinal
gerado por interferentes.
No caso dos padrões, diferentes proporções de solução padrão de proteína
e água são misturadas ao biureto e colocadas no espectrofotômetro para encontrar
o valor do pico da solução em 540nm. Estes dados podem ser então usados para
compor uma curva de calibração, que são valores de picos de concentrações
conhecidas, alinhadas em uma reta de equação calculável, a qual pode ser usada
para identificar a concentração de proteína em uma amostra pela substituição da
variável “y” na equação pelo valor do pico da amostra.
02. Três mL de uma solução de azul de metileno (sol. A) foram diluídos a 7,5 mL
com água destilada (sol. B). A absorbância da solução B a 550 nm foi 0,4. Como
você determinaria a concentração da solução A?
ou
Na qual:
u.m: unidade de massa