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UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA AGRONÓMICA Y DESARROLLO
RURAL
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADA PARA EL CARIBE - IBAC
2020
MEDIOS PARA CULTIVO
DE TEJIDOS VEGETALES
UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA AGRONÓMICA Y
DESARROLLO RURAL
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADA PARA
EL CARIBE - IBAC
2020
MEDIO DE CULTIVO
– Sustrato: Material del cual las plantas toman agua y nutrientes.
– Medio de cultivo: Fuente de nutrición e hidratación para el
desarrollo de las plantas cultivadas in vitro.
– Brinda soporte de acuerdo con el proceso morfogenético.
– Formulación: Combinación de componentes que varían con las
características del explante y el proceso morfogenético que se
desea inducir.
– Debe contener todas las sustancias requeridas por una planta
intacta para su crecimiento y desarrollo.
COMPONENTES DE UN
MEDIO DE CULTIVO
– Agua.
– Compuestos inorgánicos.
– Compuestos orgánicos.
– Materiales de soporte.
AGUA
• Tejidos vegetales = >90% agua.
• El equipo requiere de
mantenimiento permanente.
DESIONIZACIÓN
• Remueve contaminantes
capturándolos con base en su carga
eléctrica.
• Agua pasa a través de unas columnas
con resinas con diminutas esferas
plásticas con iones- de hidrógeno (H+)
e hidróxido (OH ), los cuales son
intercambiados por contaminantes
catiónicos o aniónicos presentes en el
agua.
• El proceso es continuo. Agua fluye a
través de las columnas. No hay
necesidad de almacenar agua.
• No elimina contaminantes orgánicos.
• Requiere de mantenimiento
permanente por crecimiento de
hongos y bacterias.
OSMOSIS REVERSA
• Paso del agua a través de
membranas semipermeables.
– Agua.
– Compuestos inorgánicos.
– Compuestos orgánicos.
– Materiales de soporte.
COMPUESTOS INORGÁNICOS
Los compuestos
inorgánicos son todos
aquellos minerales
importantes para el
desarrollo de la planta,
y se denominan como
los macroelementos y
los microelementos.
COMPUESTOS INORGÁNICOS
• Nitrógeno (N):
– Es un componente de los ácidos nucleicos y aminoácidos y es un regulador del pH en el medio.
– Su deficiencia produce cultivos cloróticos y de tamaño reducido.
– Se suministra al medio en forma de amonio (NH4+) y nitrato (NO3-).
• Fósforo (P):
– Es abundante en zonas meristemáticas y es componente de las moléculas de ADN y ATP.
– Los cultivos deficientes en fósforo tienen tamaño reducido y coloración rojiza.
– Se adiciona al medio en forma de fosfato de potasio (KH2PO4) o fosfato de sodio (NaH2PO4).
• Potasio (K):
– Promueve el crecimiento del tejido meristemático.
– Actúa como osmoregulador y regula el pH.
– Se agrega al medio de cultivo en forma de fosfato de potasio (KH2PO4) o cloruro de potasio (KCl).
COMPUESTOS INORGÁNICOS
• Magnesio (Mg):
– Es un componente de la molécula de clorofila y actúa como activador enzimático.
– Su deficiencia se observa en la clorosis de hojas maduras.
– Se agrega al medio en forma de sulfato de magnesio (MgSO4 7H2O).
• Azufre (S):
– Es componente de algunas proteínas y enzimas.
– Su deficiencia se observa en forma de hojas cloróticas.
– El azufre es suministrado al medio en forma de compuestos a base de sulfatos (SO4).
• Calcio (Ca):
– Es elemento componente de la pared celular y en la planta promueve la formación de raíces.
– En cultivo de tejidos su deficiencia puede causar muerte de meristemos (Ápices caulinares).
– Se agrega al medio de cultivo en forma de cloruro de calcio (CaCl2 + 2H2O) o como nitrato de calcio
(Ca(NO3)2).
• Cloro (Cl):
– Este elemento actúa como un osmoregulador y componente del fotosistema II de la fotosíntesis.
– Es adicionado al medio en forma de compuestos a base de cloruros (Cl2-).
COMPUESTOS INORGÁNICOS
• Manganeso (Mn):
– Este elemento es un componente de la membrana de los cloroplastos y su deficiencia se observa en
plantas adultas en forma de moteados.
– Es suministrado al medio en forma de sulfato de manganeso (MnSO4 H2O).
• Zinc (Zn):
– Tiene diversas funciones, entre ellas la de actuar como activador enzimático de la clorofila.
– Se suministra al medio en forma de sulfato de zinc (ZnSO4 7H2O).
• Boro (B):
– Es un elemento menor que al parecer funciona en el transporte de azucares, la estructura de la
membrana celular y en el metabolismo del ácido fenólico.
– Es suministrado al medio en forma de ácido bórico (H3BO3).
• Cobre (Cu):
– El cobre interviene en la síntesis de clorofila y en la transferencia electrónica.
– Se adiciona al medio en forma de sulfato de cobre (CuSO4 5H2O).
COMPUESTOS INORGÁNICOS
• Sodio (Na):
– Es un elemento que actúa como osmoregulador y confiere tolerancia a la salinidad en algunos tipos de
plantas.
– Se adiciona al medio de cultivo en forma de compuestos a base de sodio (Na+).
• Molibdeno (Mo):
– Se cree que interviene en la fijación del N en amonio.
– Es agregado en el medio como molibdato de sodio (Na2MoO4 2H2O).
• Cobalto (Co):
– Es un elemento componente de la Vitamina B12 e interviene en la síntesis de ácidos nucleicos.
– Es agregado al medio de cultivo en forma de cloruro de cobalto (CoCl2 6H2O).
• Hierro (Fe):
– Está involucrado en la síntesis de clorofila y en las reacciones de óxido/reducción que se suceden en los
cloroplastos y mitocondrias, entre otras observándose su deficiencia en hojas con apariencia clorótica.
– El hierro es adicionado al medio mezclando sulfato ferroso (FeSO4 7H2O) con la sal disódica del ácido
etilendiaminatetraacético (EDTA) formando el quelato de hierro.
COMPONENTES DE UN
MEDIO DE CULTIVO
– Agua.
– Compuestos inorgánicos.
– Compuestos orgánicos.
– Materiales de soporte.
COMPUESTOS ORGÁNICOS
• Carbohidratos o fuentes
energéticas
• Sacarosa:
– Es un disacárido compuesto por fructosa y glucosa (C12H22O12).
– Se adiciona al medio en forma de azúcar común y casi siempre en una
concentración de 30 g L-1.
– Es el mas utilizado por su costo y fácil consecución.
• D-Manitol:
– Azúcar que se utiliza para regular el potencial osmótico del medio.
– Se utiliza frecuentemente cuando se cultivan protoplastos.
• D-Sorbitol:
– No usada frecuentemente como fuente energética.
– Tiene la particularidad de ser transportada a través del floema.
VITAMINAS
• Mio-inositol:
– Es un constituyente del complejo B de vitaminas y componente regular de todos los medios de cultivo.
– Aunque no es estrictamente necesario, los cultivos desarrollan mejor en presencia de éste.
No es necesario ni conveniente su
presencia en condiciones in vitro.
– Agua.
– Compuestos inorgánicos.
– Compuestos orgánicos.
– Materiales de soporte.
MEDIO DE CULTIVO
• Compuesto en el cual se encuentran
en solución todos los compuestos
orgánicos e inorgánicos para la
nutrición vegetal.
• Contiene cantidades
significativas de potasio, sodio,
calcio y magnesio, aunque no
son perjudiciales.
• Murashige y Skoog (1962): Mas utilizada a nivel mundial. Tiene un contenido alto de sales.
• Gamborg et al. (1968) también conocida como B5; contiene menor concentración de sales y
es utilizada preferiblemente en el cultivo de callos, células y protoplastos.
• Nitsch & Nitsch (1969): Cultivo de anteras. Menos sal que MS pero mas que White.
– Formulaciones premezcladas:
• Cantidades específicas para determinada cantidad de agua.
• Facilidad de preparación.
• Permite manejar concentraciones.
– Disminuye costos.
– Medio líquido
• Erlenmeyers.
• Cajas de petri.
• Tubos de ensayo (Puentes de
papel filtro).
SELLANTES Y CUBIERTAS
• Tapas o cubiertas
– Papel aluminio.
– Tacos de algodón.
– Plásticas.
– Membrana de intercambio.
• Sellantes
– Parafilm.
– Nescofilm.
– Cristaflex.