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UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA

ESCUELA PROFESIONAL DE ING. AMBIENTAL

Curso:

MICROBIOLOGIA

Trabajo presentado por:

AREQUIPA - PERU
2020
INFORME N° 7

PREPARACIÓN DE MEDIO PDA Y LA INOCULACIÓN DE LA MUESTRA DE


HONGOS

Resumen

Los hongos pueden crecer en ambientes húmedos y con suficientes nutrientes. En la


práctica de Microbiología, emplearemos agares con características adecuadas para el
crecimiento de estos organismos, como el agar PDA. En esta práctica, se inocularon
una serie de placas de Petri con medio PDA con hongos que crecieron en algunos
alimentos o frutas. Posteriormente se observó el crecimiento de hongos sobre este
medio, este lapso es más prolongado que el de las bacterias. Además, aprenderemos
como se aplican las tinciones de lactofenol para poder observar la estructura de los
hongos y sus esporas, esto con el fin de identificar el tipo de hongo y sus
características morfológicas, en este caso en particular solo reconoceremos el tipo de
hongo por sus características macroscópicas, motivo por el cual debemos esperar una
semana para observar su crecimiento.
Cabe señalar que los objetivos de la práctica es conocer las características macro
morfológicas de colonias fúngicas de distintos tipos de hongos ya sea en: color,
superficie, borde, consistencia, aspecto y desarrollo.
Así mismo debemos atender las explicaciones y sugerencias de nuestro docente antes
de realizar las prácticas de laboratorio de microbiología en nuestros domicilios en el
aislamiento de hongos.

Introducción

El material biológico con el que se trabajará durante la práctica no representa un riesgo


potencial para el estudiante, ya que las especies de hongos que se cultivaran en las
placas Petri son cepas no patógenas para seres humanos. Sin embargo, en futuras
prácticas se aislarán hongos o microorganismos a partir de diferentes sitios (cuerpos de
agua, ambiente, suelo, etc.), cuyos estilos de vida pueden ser diversos, por lo que se
mantendrán estrictas normas de seguridad para evitar riesgos por ingesta, inhalación o
contacto directo.

Los hongos no son plantas ni animales, aunque se parezcan en algunas de sus


características tanto a las unas como a los otros. A las plantas, por ser organismos
sedentarios que se encuentran fijos a un sustrato y, mientras están vivos, no cesan de
crecer. A los animales, pues, aunque las células de los hongos poseen pared como las
de las plantas, las paredes celulares fúngicas son ricas en quitina, la misma sustancia
que hace duro el esqueleto externo de los insectos.
Los hongos se diferencian mucho de las plantas y de los animales, razón por la cual
pertenecen a otro reino llamado Fungí. Han jugado y juegan un papel muy importante
en distintas áreas, como la medicina, la industria y la alimentación.
El medio de cultivo es una sustancia o solución que permite el desarrollo de
microorganismos, mientras que el cultivo es el producto del crecimiento de un
organismo. Los medios utilizados en micología deben contener los nutrientes
suficientes para asegurar el desarrollo y reproducción de los hongos (carbono,
nitrógeno, vitaminas, oligoelementos, etc.) y un pH ligeramente ácido (6 – 6.3) para
facilitar su crecimiento e inhibir al mismo tiempo el desarrollo de otros
microorganismos.

En esta práctica analizaremos muestras de hongos procedentes de cualquiera de estos


alimentos, tales como la naranja, café o pan, el éxito de esta práctica está en la
observación del detalle en la morfología de los tipos de hongos, en seguir en orden
correcto del experimento, en el cuidado y manejo adecuado de cada material y
reactivo.

MATERIALES
• Medio de cultivo PDA (gelatina, papa, agua)
• Pinzas.
• Asas de siembra
• Recipientes descartables (reemplazando placas Petri)
METODOLOGIA
PREPARACIÓN DE MEDIO PDA
Se pelará una papa harinosa (tamaño aproximado: puño de mano) y se cortará en
cuadritos pequeños para su fácil cocción.
Colocarlas en una cacerola pequeña y agregar un vaso de agua, luego hervirlo durante
15 minutos, el termino de cocción lo indicará la turbidez del agua ya que significará la
presencia de almidón. Al terminar la cocción se filtrará el líquido contenido de almidón,
una vez obtenido esto se mezclará con 5 cucharadas de gelatina diluida en un vaso de
agua caliente.
Una vez terminada mezcla se distribuirá el medio PDA en envases descartables y
estériles (Figura N° 1)

Figura N° 1: Distribución en Placas Petri de Vidrio

INOCULACIÓN DIRECTA - (FRUTA)


Con el asa de siembre en ángulo, coger una pequeña porción de la muestra de fruto u
otro alimento (infectado con hongos) y sembrar por puntos, introduciendo suavemente
la muestra en el agar papa, incubar a temperatura ambiente.
RESULTADOS

Después de la inoculación procedimos a tapar la placa Petri, sellarla con cinta adhesiva
y lo cubrimos con un plástico negro.
Al pasar 6 días, observamos que el hongo ha crecido (Figura N° 2 y 3) donde se ve el
hongo en el centro de color verde y con bordes blancos.
Gracias al detalle Macroscópico podemos determinar que el hongo cultivado es un
Penicillium digitatum.
Este es un hongo mesófilo del género Penicillium que normalmente lo encontramos en
el suelo de las zonas productoras de los cítricos. Es la mayor fuente de decaimiento de
las frutas en épocas de post-cosecha y es el responsable de las enfermedades de los
cítricos conocida como putrefacción verde. En la naturaleza, este hongo necrotrófico
patógeno hiere a la superficie de los cítricos creciendo en forma de filamentos y se
reproduce asexualmente a través de la producción de conidias.

Figura N°2: Observación de Hongos Cultivados


Figura N°3: Detalle del Penicillium Digitatum

DISCUSIÓN

En el aislamiento realizado se ha obtenido, Peniciliium digitatum, comúnmente


conocidos como moho verde, y este ha sido reportado como patógenos poscosecha de
los cítricos (McGuire, 2000; Wild, 1994) y son responsables de pérdidas económicas en
todo el mundo (Skouboe et al., 1999). La infección comienza con la penetración de las
esporas en las heridas de los frutos en el árbol, durante la cosecha o el transporte
(Spotts et al., 1998).
Los síntomas aparecen como cambios en la coloración del fruto (Snowdon, 1990),
debido al desarrollo del micelio sobre la superficie, seguida por la aparición de una
masa de esporas de color verde-olivo (P. digitatum), como manifestación clara de una
infección.
La pudrición de los frutos por esta causa puede llegar al 40 % de la producción total,
por lo que la detección oportuna reviste de importancia.
Las condiciones climáticas y de cultivo (variedad en cultivares, aplicación de
fertilizantes, tipo de suelo, entre otros) pueden determinar la susceptibilidad de los
frutos a las enfermedades, maduración, manejo y almacenamiento (Plaza et al., 2003;
Smilanick et al., 2003).

CONCLUSIONES

Los medios de cultivo pueden prepararse a partir de sus componentes o según las
recomendaciones dadas en la práctica, cuando este se consigue comercialmente hay
varias reglas que se deben guardar para asegurar la buena calidad del medio
preparado.

El agua utilizada debe ser destilada o desmineralizada, proveniente de un sistema


adecuado de destilación, su medida debe ser exacta y en ningún momento con
aproximaciones que generalmente se traducen en una alteración de la consistencia del
medio, especialmente cuando se trata de agares.

Todos los medios de cultivo después de prepararlos y vertidos en la caja de Petri,


deben ser secados, con la finalidad de eliminar el exceso de agua. Para evitar la
coalescencia y mezcla de las colonias cuando se hace la siembra.

Los hongos en una ambiente adecuado y con nutrientes necesarios se pueden


reproducir rápidamente.

También se deben sellar con cinta adhesiva para evitar contaminaciones externas.
BIBLIOGRAFIA

Allende Molar, R., Picos Muñoz, P. A., Márquez Zequera, I., Carrillo Fasio, J. A.,

García Estrada, R. S., & León Félix, J. (2013). Identificación Morfológica y

Molecular de Penicillium oxalicum Causante de Pudrición de Tallos y Frutos de

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Skouboe, P.; Frisvad, J.C.; Taylor, J. W.; Lauritsen, D.; Boysen, M.; Rossen, L. 1999.
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Snowdon, A. L. 1990. Color Atlas of Post-Harvest Diseases and Disorders of Fruits and
Vegetables, Vol. 1, General Introduction and Fruits. CRC Press, Boca Raton FL.
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Spotts, R.; Sanderson, P.G.; Lennox, C. L.; Sugar, D.; Cervantes, L.A. 1998.
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and Technology 13, 27–36.
ANEXOS

Figura N° 4 : Pelado de papa

Figura N° 5: Picado de la papa


Figura N° 6: Hacer hervir la papa picada

Figura N° 7: Preparación PDA con gelatina transparente


Figura N° 8: Distribución en Placas Petri de Vidrio

Figura N° 9: Esterilización del ASA con el mechero de alcohol


Figura N° 10: Raspado de hongo en la Fruta infectada

Figura N° 11: Inoculación de los hongos de fruta en PDA


Figura N° 12: Sellado de Placa Petri y cubierto con bolsa negra

Figura N°13: Detalle del Penicillium Digitatum a los 6 días.

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