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http://pubs.acs.org/journal/acsodf

Valoración argentométrica sin indicadores para la detección de

cloruro basada en la distancia utilizando dispositivos analíticos
published articles.

basados en papel microfluídico

Longfei Cai, * Zhuang Ouyang, Jiahong Song y Liye Yang
Cite This: https://dx.doi.org/10.1021/acsomega.0c02143
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Resumen: Describimos una estrategia de titulación argentométrica
24, 2020

sin indicadores utilizando un dispositivo analítico basado en papel

microfluídico. Esta estrategia se basó en la formación de sales de
on how

plata insolubles por reacciones que ocurren entre analitos y titulante

on July

(Ag +) en un canal de papel. Después de que las sales de plata

for options

insolubles se formaron y precipitaron en el canal, el sustrato de

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papel modificado con el exceso de titulante en el canal se volvió

marrón rojizo al exponer los dispositivos a una fuente de luz UV
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simple y barata durante 5 minutos, generando una banda de color en

el canal. La detección de cloruro basada en la distancia se logró
midiendo la longitud de la banda coloreada con un límite de detección de 1.7 mg L − 1 Cl−. Este método se usó para
detectar cloruros en el agua del grifo, con un resultado analítico (10.1 ± 1.2 mg L − 1) que coincidía bien con el
obtenido por una titulación de precipitación convencional clásica (9.8 mg L − 1), que se basó en medición del
volumen consumido de titulante. Este método de titulación de precipitación basado en papel está libre de personal
calificado y tiene ventajas de bajo consumo de reactivo / muestra, disposición, portabilidad y operación simple sobre
la titulación de precipitación convencional. Más importante aún, al no tener ningún indicador, este método puede
usarse para detectar más especies que las valoraciones de precipitación convencionales, que están limitadas por el
indicador, por ejemplo, CO2- y SO 2-, que podrían formar sales de plata insolubles en agua. líquidos Además, en
comparación con la mayoría de las titrimetrías en papel informadas anteriormente, esta titulación de precipitación
presentada está libre de cualquier indicador o electrodo selectivo de iones para detectar el punto final de la titulación.

■
INTRODUCTION
La última década ha sido testigo del rápido desarrollo de
un
dispositivo analítico basado en papel microfluídico
(μPAD) desde que este concepto fue introducido por el
grupo Whitesides.1 Sus ventajas de fabricación simple,
operación fácil, bajo costo y desechabilidad son muy
prometedoras y atractivas para aplicaciones analíticas de
punto de atención en diagnóstico clínico 2,3 pruebas
ambientales 4,5 y monitoreo de la seguridad alimentaria. 6−8
Se han acoplado varias técnicas de detección a dispositivos
basados en papel para obtener señales instrumentales para
el análisis cuantitativo, incluyendo fluorimetría 3,9,
electroquímica10,11 y ensayo de quimioluminiscencia.12 Sin
embargo, estas técnicas de detección generalmente están
limitadas por instrumentos caros, operaciones que
requieren mucho tiempo y el requisito de operadores
capacitados. Una alternativa económica y conveniente es el
ensayo colorimétrico, que se basa en las reacciones
cromogénicas que ocurren entre los reactivos y analitos
cromogénicos.13−17 Sin embargo, esta técnica de detección
todavía requiere una cámara digital (o escáner) para tomar
imágenes de las zonas de detección y la imagen. software
de procesamiento para extraer las señales de intensidad de
color.
La titrimetría en dispositivos basados en papel puede
abordar estos problemas mencionados anteriormente porque
la titrimetría no contiene señales instrumentales. En el
análisis de titulación convencional y clásico, el volumen
consumido de titulante en el punto final se usa para calcular
la concentración de los analitos después de que el punto
final es detectado por el cambio de color a simple vista.
Karita y Kaneta, 18 demostraron la titulación ácido-base
usando un μPAD para el análisis de agua caliente ácida en
aguas termales naturales. Este método no requería ningún
instrumento electrónico ni software, por lo que es muy
adecuado para el análisis in situ. Desafortunadamente, la
configuración del canal del dispositivo de papel, así como
los volúmenes de soluciones de titulación, muestra e
indicador depositadas en el dispositivo, deben calcularse y
controlarse estrictamente. Además, se requieren soluciones
titulantes con concentraciones variadas para un ensayo, y la
selección de las concentraciones adecuadas de titulante
depositadas en las zonas de papel es un desafío. Estos
problemas plantean dificultades con el análisis de muestras
reales con titulación ácido-base en papel. Más tarde,
Nogueira.
ACS Omega Article

fabricaron microzonas de papel para monitorear la

titulación ácido-base a través de una aplicación gratuita
llamada Photometrix. Las titulaciones redox también se han
informado utilizando μPADs20,21. Por ejemplo, Myers et
al.20 fabricaron una tarjeta de prueba de papel para realizar
la titulación yodométrica de yodato y la titulación inversa
yodométrica de amoxicilina. Sin embargo, para lograr la
titulación yodométrica y la titulación inversa yodométrica
con una tarjeta de prueba de papel, se requieren una cámara
digital (o escáner) y un software de procesamiento de
imágenes. Más recientemente, Rahbar et al. titulación
inversa argentométrica desarrollada de cloruros a través de
μPADs basados en la distancia.22 El principio de este
método es muy similar a la titulación argentométrica con un
dispositivo basado en hilo reportado previamente.23
Aunque este método está libre de cualquier instrumento
electrónico (cámara digital o escáner ) y el software de
procesamiento de imágenes, se requería que se depositara
una solución indicadora en el canal además del titulador y la
solución de muestra para generar una banda coloreada. Por
lo tanto, se requieren procedimientos tediosos para la
deposición y el secado al aire. Más importante aún, solo
aquellas especies que podrían formar sales de plata con una
solubilidad menor que su contraparte de cromato podrían
producir una banda coloreada y ser detectadas, y por lo
tanto la aplicación de este método está limitada por la
selección del indicador. Phoonsawat et al.24 describieron la
detección basada en la distancia de iones de cloruro
mediante valoración argentométrica utilizando μPADs. En
su trabajo, las nanopartículas de plata y el peróxido de
hidrógeno se mezclaron y depositaron en el canal del papel;
El análisis se basó en el grabado oxidativo de
nanopartículas de plata para formar precipitados de AgCl en
presencia de iones cloruro y H2O2, formando una banda de
color blanco en el canal del papel.

En que consiste? como funciona?

Desarrollamos aquí una estrategia simple de titulación de
precipitación sin indicadores utilizando un μPAD. Solo se
requirió que se depositara un reactivo (nitrato de plata) en el
canal del papel; los analitos reaccionan con el valorante
(nitrato de plata) que modificó el canal para formar sales de
plata insolubles, que se precipitan en el canal hasta que se
consumieron todos los analitos. El canal modificado con el
excedente de nitrato de plata se convirtió luego a marrón
rojizo por exposición a la luz ultravioleta, formando así un
límite claro en el canal entre los precipitados insolubles y el
titulador sin reaccionar. Se midió la longitud de la banda
coloreada formada por el depósito de sales de plata
insolubles para detectar los analitos en las soluciones de
muestra. Esta titulación de precipitación basada en papel no
requiere una cámara digital (escáner) ni un software de
procesamiento de imágenes y tiene las ventajas de bajo
costo, fácil operación y menor consumo de reactivos /
muestras.
RESULTADOS AND DISCUSION
Figura 1. Diagramas esquemá ticos que ilustran el
principio de la titulació n de precipitació n en papel.
Después de que los dispositivos se emparedaron y se
tensaron con portaobjetos de vidrio (A), se depositó una
solució n de nitrato de plata sobre canales utilizando una
micropipeta (B). Luego, la solució n de Cl se pipeteó en
las zonas circulares de los dispositivos para permitir
que la solució n fluya a lo largo del canal (C), formando
bandas de color blanco después de exponerse a la luz
UV (D).
Principio. La titulació n de precipitació n en papel
microfluídico μPADs se basó sobre la formació n de
cloruros de plata insolubles producidos por el reacció n
que ocurre entre iones de plata y cloruros en el canal del
papel: Ag + + Cl− = AgCl. Específicamente, el canal de
papel se modificó primero con el valorante (solució n de
nitrato de plata) mediante la adició n de una solució n
valorante al canal con una micropipeta (Figura 1B). A
medida que la muestra o solució n está ndar que contenía
cloruros se añ adió a la zona circular del dispositivo, la
solució n se absorbe en el canal debido a la acció n
capilar (Figura 1C). Por lo tanto, los iones de plata que
modificaron el canal reaccionan con los cloruros que
 ACS Omega Article
fluyen a lo largo del canal, produciendo cloruros de
plata. Los cloruros de plata precipitaron en el canal
debido a su insolubilidad en líquidos acuosos hasta que
se consumieron todos los iones de cloruro. Se podría
consumir má s nitrato de plata para producir má s
cloruros de plata al aumentar la concentració n de
cloruros en solució n, formando una precipitació n zona
con una distancia má s larga en el canal. Aunque se
precipitaron cloruros de plata blancos en el canal, no se
pudo observar la zona con cloruros de plata
precipitados porque el sustrato de papel modificado
con el exceso de nitrato de plata en la zona vecina
también era blanco. Sin embargo, aunque los
dispositivos estuvieron expuestos a la luz ultravioleta
durante varios minutos, el color del canal, en el que no
se precipitaron los cloruros de plata, se volvió marró n
rojizo, lo que puede deberse a la reacció n que se
produjo entre la celulosa del papel y el exceso de
nitrato de plata. que modificó el canal por exposició n a
la luz ultravioleta. Así, se formaron bandas de color
blanco en los canales de papel. (Figure 1D). Después de
trazar la curva de calibració n entre la longitud de la
banda de color y la concentració n de cloruros, la
longitud de la banda de color blanco formada por la
solució n de muestra se midió para cuantificar los
cloruros en la muestra.
Efecto del tiempo de exposició n. Empleamos varias
exposiciones
fuentes de luz para esta titulació n de precipitació n en
papel, incluida una antorcha LED portá til, luz solar y una
lá mpara de esterilizació n ultravioleta barata. Cuando el
dispositivo estuvo expuesto a la luz emitida por la
antorcha LED, el color del canal modificado con nitrato de
plata no cambió incluso cuando el dispositivo estuvo
expuesto durante 60 minutos. Sin embargo, cuando el
dispositivo estuvo expuesto a la luz solar en un día
soleado durante 3 minutos, el canal modificado con
nitrato de
plata se
volvió
marró n
(Figure 2)

Figura 3. (A) Imagen de μPAD capturados después

Figura 2. Imágenes que muestran el efecto del
tiempo de exposición en un rango de 0 a 30
min en la formación de la banda de color
blanco con (A) luz solar y una (B) lámpara
esterilizadora. Concentración de Cl−: 25 mg L
− 1; concentración de AgNO3: 0.1 mol L − 1;
volumen de solución de Cl: 35 μL; volumen
de AgNO3: 7.5 μL.
de agregar 35 μL de agua en las zonas circulares de
dispositivos con canales modificados con soluciones
de AgNO3 de concentraciones variadas. (B) Imagen
de μPAD capturados después de agregar 35 μL de
solución que contiene 100 mg L − 1 Cl− en las zonas
circulares de los dispositivos con canales
modificados con solución de AgNO3 de
concentraciones variadas. Fuente de luz de
exposición: luz Philips TUV fuente; tiempo de
exposición: 5 min. Otras condiciones son las mismas
que las de la Figura 2.

Sin embargo, la luz solar está limitada por el clima, lo que
plantea dificultades para realizar la valoración de la
precipitación en papel en días y noches lluviosos / nublados.
Para abordar este problema, se utilizó una lámpara de
esterilización ultravioleta barata y portátil de 6 W como
fuente de luz de exposición. Se observó un color marrón
rojizo en el canal modificado con nitrato de plata después de
que el dispositivo se expuso a la luz emitida por esta lámpara
de esterilización durante solo 2 minutos, produciendo una
banda de color blanco en el dispositivo (Figura 2B). Por lo
tanto, utilizamos la lámpara de esterilización (Philips TUV)
como fuente de luz de exposición para formar una banda de
color en el dispositivo de papel.
Efecto de la concentración de AgNO3. Para estudiar el
efecto de la concentración de AgNO3 en la formación de la
banda de
color blanco, se prepararon soluciones de AgNO3 en un
rango de 0.025-0.20 mol L-1 y se depositaron en el canal
del papel. Después de que se añadieron 100 mg de solución
L − 1 Cl− a la zona circular seguido de exposición a la luz
UV, se observó la banda de color blanco. La Figura 3B
muestra que la longitud de la banda de color blanco
disminuyó con la concentración de AgNO3, lo que indica
que se puede obtener una mayor sensibilidad con la
solución de AgNO3 a menor tiempo requerido para el
secado al aire también aumentó el dispositivo, lo que puede
reducir la velocidad de análisis. Se usó un total de 35 μl de
solución de cloruro para aplicaciones analíticas que
implican velocidad de análisis y sensibilidad de detección.
Efecto de las especies extranjeras comunes. Para estudiar el
efecto de algunas especies foráneas comunes en la
determinación de Cl−,
50 mg de solución L − 1 Cl− así como la solución mixta
concentración. Sin embargo, cuando la concentración de la
solución de AgNO3 era inferior a 0.1 mol L − 1, incluso
una solución blanca acuosa en ausencia de iones cloruro
podría producir una banda de color blanco en el canal del
papel (Figura 3A). Esto puede deberse a la disolución de
AgNO3 que modificó el canal del papel por el líquido
acuoso que fluye. Por lo tanto, 0,1 mol L − 1 AgNO3 se
utilizó para modificar el canal de papel para aplicaciones
analíticas.
Efecto del volumen de solución de cloruro. Cloruro
Se usó una solución (100 mg L − 1) para estudiar el efecto
del volumen de solución de cloruro en la longitud de la
banda de color blanco manteniendo constante el volumen y
la concentración de nitrato de plata a 7.5 μL y 0.1 mol L −
1, respectivamente. La Figura 4 muestra que la longitud de
la banda de color blanco aumentó con el volumen en un
rango de 15-45 μL. Aunque la sensibilidad de detección
puede mejorarse aumentando el volumen de la solución de
cloruro, el
que contiene 50 mg L − 1 Cl− y un cierto contenido de
algunos
especies extranjeras fueron preparadas. Cuando se añadió el
nitrato de plata al canal y se secó al aire, las dos soluciones
se agregaron a las zonas circulares para producir bandas de
color blanco. La varianza en el valor de longitud producida
por las dos soluciones se midió para evaluar el nivel de
tolerancia de especies extrañas para la determinación de 50
mg L − 1 Cl−. Una concentración de especies extrañas que
produce una diferencia de longitud inferior al 5% se definió
como el nivel de tolerancia. Los niveles de tolerancia para
la determinación de 50 mg L − 1 Cl− fueron 500, 50, 50, 50,
25, 25, 25 y 10 mg L − 1 para SO42−, CO32−, SCN−, Pb2
+, Br−, I−,
C
Article
H2PO4− y SiO32−, respectivamente.
Análisis de muestra. Para trazar una curva de calibración y
obtener una correlación lineal entre la longitud de la banda
de color blanco y la concentración de Cl−, una serie de
soluciones estándar de Cl− con concentraciones variadas en
un rango de 5–200 mg L − 1 fueron preparado. Después de
que las soluciones de AgNO3 se añadieron a los canales y se
secaron al aire, las soluciones estándar de Cl se dejaron caer
en las zonas circulares individuales para producir bandas de
color blanco en los dispositivos
Figura 5. (A) Imagen de μPADs con bandas de color blanco
formadas en los canales mediante la adición de soluciones de
Cl-con concentraciones variadas en zonas circulares (la
imagen se ajustó utilizando el software de imagen J). (SI)
Longitud de las bandas de color blanco que varían en función
de la concentración de Cl−. Cada dato se obtuvo de tres
ensayos repetitivos. Fuente de luz de exposición: fuente de
luz Philips TUV; tiempo de exposición: 5 min. Otras
condiciones son las mismas que las de la Figura 2.
La Figura 5A muestra que la longitud de la banda de color
blanco aumentó con la concentración de Cl−. La correlación
lineal entre la longitud de la banda de color blanco (L, mm) y
la concentración de Cl− (C, mg L − 1) es L (mm) = 16lgC (mg L
− 1) - 3.1 con un coeficiente de correlación ffi cient de 0.995
(Figura 5B). Para obtener el límite de detección de Cl− por
este método, se usaron 2 mg L − 1 Cl− como solución de
muestra modelo y se analizaron 11 veces. Se midieron las
longitudes de la banda de color blanco de 11 ensayos
repetitivos, y se obtuvo una desviación estándar de 1.3 mm.
El límite de detección para la determinación de Cl− (CL) se
calculó de acuerdo con la ecuación lgC (mg L − 1) = 3S, donde
C es el límite de detección de Cl−, S es la desviación estándar
de las longitudes calculadas a partir de 11 corridas repetitivas,
y K es la pendiente de la curva de calibración. Por lo tanto, el
límite de detección de este método es 1.7 mg L − 1 Cl−.
Este método se utilizó para detectar cloruros en el agua del
grifo. Teniendo en cuenta que los contenidos de especies
extrañas comunes en el agua del grifo son más bajos que los
de los cloruros, la muestra no se trató previamente antes del
análisis. La muestra se analizó como se describe en el
procedimiento. Brevemente, la solución de muestra se añadió
a la zona circular del μPAD con un canal que previamente se
modificó con nitrato de plata. Después de que el dispositivo
se expuso a la luz UV, se midió la longitud de la banda de
color blanco para calcular el contenido de cloruros en la
solución de muestra de acuerdo con la correlación lineal
mencionada anteriormente. La longitud promedio de la
banda de color blanco obtenida de tres corridas repetitivas
es de 13 ± 1 mm y, por lo tanto, el contenido de Cl− en el
agua del grifo fue de 10.1 ± 1.2 mg L − 1. Para evaluar la
precisión de este método de titulación de precipitación
usando el μPAD, la muestra se analizó mediante un método
de titulación estándar convencional, y el contenido de la
muestra Cl− en fue de 9.8 mg L − 1, lo que coincidió bien con
el obtenido en este documento. estrategia de titulación de
precipitación.
CONCLUSIONES
Desarrollamos la titulación de precipitación
usando un papel simple.
dispositivo analítico microfluídico basado. Esta
precipitación en papel presentada tiene las ventajas
de reducir el consumo de muestra / reactivo, la
disposición, la portabilidad y las operaciones
simples sobre su contraparte convencional. En
comparación con la titulación de base ácida y
yodométrica basada en papel, esta titulación de
precipitación presentada en papel está libre de una
cámara / escáner digital, software de
procesamiento de imágenes y un indicador. El
canal de papel modificado con AgNO3 del
dispositivo fue estable durante 3 días
manteniéndolo en la oscuridad a 4 ° C. Además,
esta titulación de precipitación en papel sin
indicadores tiene algunas ventajas sobre la
argentometría en papel informada anteriormente,
incluidos los procedimientos simplificados y las
aplicaciones analíticas ampliadas. Además, este
método puede usarse para determinar otras
especies que podrían formar
sales de plata insolubles blancas, por ejemplo,
CO2−3 y SO2−4. Creemos que esta titulación de
precipitación basada en papel puede ampliar las
aplicaciones analíticas de los dispositivos
analíticos basados en papel microfluídico.
SECCIÓN EXPERIMENTAL
Productos químicos y aparatos. Todos los
reactivos utilizados fueron de grado analítico a
menos que se indique lo contrario. El agua
ultrapura se produjo con un sistema de
purificación de agua (EPED-EQ-10T, Nanjing
Eped Technology Development Co., Ltd.,
Nanjing, China) y se usó en todas partes. El nitrato
de plata se adquirió de Zhujiang Chemical Co.,
Ltd. (Guangzhou, China). Se adquirieron cloruro
de sodio, metasilicato de sodio no hidrato y
cromato de potasio en el Centro de Desarrollo de
Reactivos Químicos de Tianjin Yongda (Tianjin,
China). El sulfato de sodio anhidro y el nitrato de
plomo se adquirieron de Sinopharm Chemical
Reagent Co, Ltd. (Shanghai, China). El carbonato
de sodio anhidro, el bromuro de sodio, el yoduro
de potasio, el ácido sulfúrico y el hidróxido de
sodio se adquirieron de Xilong Scienti fi c Co.,
Ltd. (Shantou, China). El tiocianato de potasio y el
dihidrógeno fosfato de sodio se adquirieron de
Tianjin Damao Chemical Reagent Factory
C
(Tianjin, China) y Tianjin Zhiyuan Chemical Article
Reagent Co. Ltd. (Tianjin, China), respectivamente.
Se adquirió una lámpara esterilizadora ultravioleta
barata de 6 W (Philips TUV) y una antorcha LED
portátil (Supfire A5) en una tienda comercial local.
Procedimiento para la titulación de precipitación en
μPADs. La configuración del μPAD se diseñó con
el software CorelDRAW X3. La configuración
diseñada consiste en un canal recto (3 × 40 mm),
una zona circular (6 mm de diámetro) y una regla
(40 mm). Después de imprimir el patrón en una
hoja de papel de filtro (102, Hangzhou Xinhua
Paper Limited, Hangzhou, China) con una
impresora de cera (Xerox ColorQube 8580), el
papel se calentó a 120 ° C durante 1,5 minutos en
una placa calefactora, formando barreras de cera
debido a la penetración de cera fundida en el grosor
del papel.
Antes del análisis de titulación, los μPADs se
tensaron mediante un emparedado con placas de
vidrio (Figura 1A). Un total de 7.5 μL de
Se depositaron 0,10 mol de L-1 AgNO3 en el canal
con una micropipeta. Después de que el dispositivo
se secó al aire durante 10 minutos, se colocaron 35
μL de soluciones estándar o de muestra que
contenían cloruros en la zona circular, permitiendo
que el líquido fluya a lo largo del canal. Después de
secar al aire durante 10 minutos, los dispositivos se
expusieron a la luz UV durante 5 minutos. Se midió
la longitud de la banda de color blanco para el
análisis cuantitativo de cloruros.
Procedimiento para la detección de cloruro con un
método estándar.25 Después de verter 100 ml de
agua del grifo en un matraz Erlenmeyer de 250 ml,
se añadieron dos gotas (aproximadamente 100 µl)
de fenolftaleína (10 g L − 1) al matraz. Se usaron
NaOH (0.05 mol L − 1) y HNO3 (0.05 mol L − 1)
para ajustar el pH de la solución hasta que el color
se convirtió de rojo a incoloro. Después de agregar
1.0 mL de 50 g L − 1 K2CrO4 a la solución, Se
cargaron 0,014 mol de L-1 AgNO3 en una bureta
de 25 ml y se agregó gota a gota a las soluciones
mezcladas hasta que el color de las soluciones
mezcladas cambió de amarillo a rojo anaranjado. El
volumen consumido de titulante se midió para
calcular el
contenido de cloruros CCl- (g L− 1) en la muestra
utilizando la siguiente ecuación:
35,5∗C Ag∗V Ag
Ccl= V Cl−¿ ¿
donde CAg y VAg son la concentración y el volumen
consumido de la solución de nitrato de plata, V Cl- es
el volumen de la solución de muestra añadida en el
matraz Erlenmeyer, y 35.5 es el peso de un átomo
de cloro (g mol − 1).
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AUTHOR INFORMATION (13) Liu, C.; Gomez, F. A.; Miao, Y.; Cui, P.; Lee, W. A
Corresponding Author colorimetric
Longfei Cai − School of Chemistry and Environmental assay system for dopamine using microfluidic paper-based
Engineering, Hanshan Normal University, Chaozhou, analytical devices. Talanta 2019, 194, 171−176.
Guangdong 521041, China; orcid.org/0000-0001-7025- (14) dos Santos, G. P.; Correâ, C. C.; Kubota, L. T. A simple,
8048; Email: cailf@hstc.edu.cn sensitive and reduced cost paper-based device with low quantity
of chemicals for the early diagnosis of Plasmodium falciparum
Authors malaria using an enzyme-based colorimetric assay. Sens.
Actuators, B 2018, 255, 2113−2120.
Zhuang Ouyang − School of Chemistry and
Environmental Engineering, Hanshan Normal
University, Chaozhou, Guangdong 521041, China
Jiahong Song − School of Chemistry and
Environmental Engineering, Hanshan Normal
University, Chaozhou, Guangdong 521041, China
Liye Yang − Chaozhou Central Hospital,
Chaozhou, Guangdong 521000, China
Complete contact information is available at:
https://pubs.acs.org/10.1021/acsomega.0c02143

Notes
The authors declare no competing financial interest.

■ ACKNOWLEDGMENTS
Financial support from the Guangdong Provincial
Education
Research Innovation Fund (no. 2018GXJK108),
Guangdong Provincial Research and Reform Fund for
Higher Education Learning and Teaching, Hanshan Normal
University Con- struction Fund for Basic Education of
Chemistry (no. Z18042), and the Learning and Teaching
Reform Fund from Hanshan Normal University are

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gratefully acknowledged.

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