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Tr

as
p
as
ar
p Centrifugar 10 000rpm/10’ a
4ºC.
ar
te Elimina sobrenadante.

s
u Lavar con buffer TES (1mL),
p centrifugar igual que primer
er paso. Elimina sobrenadante.

io
r Resuspender pellet en TES +
a   5mg/mL de lisozima e
incubar a 37|C x 30’.
vi
al
Adicionar 300µL sol.
n (150mMNaCL, 10mMEDTA,
u  
pH8 + 20µL SDS 40%).
e
Homogenizar hasta que este
v transparente.
o 1 volumen de biofenol
y   (25:24:1), fenol, cloroformo,
alcohol isoamílico.
a Emulsificar y centrifugar a
di 13000 rpm x 10’.
ci Traspasar la parte
o   superior a un vial nuevo,
n repetir paso anterior 2
veces más.
ar
Traspasar la parte superior a
1 un vial nuevo, adicionar 1
 
v volumen de cloroformo,
ol vortex, emulsificar,
centrifugar 13000rpm x 5’.
u Transferir parte superior a nuevo vial
m
Adicionar 1 volumen de
e   isopropanol y homogenizar.,
n centrifugar a 13000 rpm x
10’. Descartar sobrenadante.
d
e Lavar pellet con 600 µL de etanol al 70%, centrifugar
cl 13000 rpm x15’, descartar sobrenadante, dejar secar y
resuspender en 100µL de buffer TE
or

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