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Biología Molecular

• 1869 – Friedrich Miescher descubre la nucleína.


• 1898 – Richard Altman describe la nucleína y la llama ácidos nucleicos.
• 1919 – Phoebus Levene describe los componentes: azúcar y bases nitrogenadas.
• 1920 – Hasta ese entonces se creía que el ADN era de animales y el ARN de las plantas
porque el ARN no resistía temperaturas ambiente sin degradarse. Era difícil de obtener
porque había que romper la pared celular con celulosa.
• 1935 – A.N. Belozersky extrae ADN de las plantas.
• 1934 – Caspersson y Hammersten descubren que el ADN es un polímero.
• 1944 – Oswald T. Avery describe el ADN como responsable de caracteres hereditarios.
• Experimento de Griffith – El ADN porta la enfermedad y necesita medio de transporte.
Avery, McLeod y McCarthy descubren que el factor de transformación es el ADN.
• 1950 – Edwin Chargaff descubre que A + G = C + T.
• 1952 – Alfred Hershey y Martha Chase apoyan la tesis de Avery sobre el ADN como
portador del material genético con el experimento de bacteriófagos.
• 1952 – Linus Pauling y Corey proponen la hélice α y hojas plegadas β de las proteínas.
• 1953 – Watson y Crick publican su modelo de doble hélice del ADN.
• 1950-53 – Rosalind Franklin fotografió el ADN en la foto 51.
• 1953 – Sanger determina la secuencia aminoacídica de la insulina.
• 1954 –Ochoa y Grunberg descubren el polinucleótido fosforilasa y sintetizan ARN.
• 1957 – Meselson y Stahl demuestran que el ADN es semiconservativo.
• 1958 – Crick propone la hipótesis del adaptador y Zamecnick descubre que es el ARNt.
• 1959 – Arthur Kornberg aísla la ADN polimerasa I.
• 1960 – Hurtwitz y Weiss descubren la ARN polimerasa.
• 1960 – Kendrew y Max Perutz descifran la estructura 3D de hemoglobina y mioglobina.
• 1961 – Formulación del ARNm por Jacob y Monod.
• 1961 – Spiegelman descubre la técnica de hibridación de ácidos nucleicos.
• 1962 – Jacob, Monod y Lwoff proponen el modelo operón para explicar la expresión
génica en las bacterias.
• 1965 – Dilucidación del código genético por los equipos de Nirenberg, Ochoa y Khorana.
• 1965 – Robert Holley determina la secuencia de un ARN.
• 1965 – David Phillips determina la estructura 3D de una enzima (lisozima).
• 1966 – Francis Crick propone la hipótesis del balanceo entre el codón y el anti-codón.
• 1968 – Mark Ptashne y Walter Gilbert identifican el primer gen represor.
• 1969 – Robert Merrifield sintetiza una enzima.
• 1970 – Werner Arber, Daniel Nathans y Hamilton Smith endonucleasas de restricción.
• 1972 – Paul Berg y Herbert Boyer preparan la primera molécula de ADN recombinante
usando enzimas de restricción (primera clonación exitosa).
• 1973 – Stanley Cohen y Annie Yang demuestran que el ADN recombinante puede ser
replicado y mantenido.
• 1974 – Primera patente para realizar recombinación genética.
• 1974 – Maxam y Gilbert secuencian ácidos nucleicos.
• 1975 – Frederick Sanger desarrolla las primeras técnicas para secuenciar ADN.
• 1975 – Edwin Southern publica el invento Southern Blot para reconocer fragmentos de
ADN por hibridación.
• 1976 – Se funda Genetech Incorporated, empresa de ingeniería genética. Sintetizan GH.
• 1978 – Se obtiene la insulina a partir de una bacteria.
• 1978 – David Bostein descubre los RFLP.
• 1980 – El Tribunal Supremo acepta que se patenten organismos obtenidos por ingeniería.
• 1980 – Kary Mullis inventa el PCR, que replica genes específicos. Inicia la terapia génica.
• 1981 – Primer diagnóstico prenatal de una enfermedad por ADN.
• 1982 – Se crea el superratón inyectando GH en los óvulos.
• 1984 – Se crean las plantas transgénicas.
• 1985 – Se usa la huella genética en una investigación judicial.
• 1986 – Se autoriza la vacuna de la hepatitis B.
• 1986 – Aparece el primer secuenciador automatizado.
• 1987 – Primera propuesta para conocer el genoma humano.
• 1987 – Se crean los YACs (vectores de clonación).
• 1988 – Se funda el NCBI y comienza la era de bioinformática.
• 1990 – Se crea la organización HUGO para llevar a cabo el proyecto del genoma humano.
• 1991 – Craig Venter describe los EST: “expressed sequence tag”.
• 1993 – Se clonan embriones humanos pero el experimento no prospera.
• 1995 – Se publica la secuencia del Haemophilus influenzae.
• 1996 – Se completan las secuencias genómicas del E. Coli y la levadura.
• 1997 – Clonación de la oveja Dolly.
• 1998 – Se completa la secuencia genómica de Caenerhabditis elegans.
• 1999 – Primer borrador del genoma humano.
• 1999 – Se publica la secuencia de Drosophila melanogaster.
• 2000 – Primera versión del genoma humano.
• 2002 – Craig Venter presenta la información del genoma humano y comienza el HapMap.
• 2010 – Se completa la primera fase del proyecto genoma humano.
• 2013 – Primer modelo computacional de una célula.

La membrana nuclear tiene más proteínas que lípidos y es más porosa.


La membrana celular tiene más lípidos que proteínas.

• Miescher mezclaba las células con detergente y se precipitaba una capa granulosa con
grumos (núcleos) y quedaba otra capa completamente transparente.

Diferencias Entre Procariotas y Eucariotas

• Antes se creía que el ADN de las procariotas era solo circular, pero también es lineal.
• Los pili en las procariotas ayudan en la transferencia de ADN por la conjugación y
cumplen función de movimiento.
• Están en la superficie y las proteínas que los conforman se contraen y hacen que la
bacteria se mueve hacia delante.
• Los cilios son estructuras de locomoción en las eucariotas. Cumplen función sensorial.
• Los flagelos tienen función locomotora, pero pueden ser sensores de temperatura y de
concentración de químicos. Se encuentran en procariotas y eucariotas.
• El citoesqueleto de la procariota tiene más proteínas que el de la eucariota.
Composición Química de la Célula

• Las células eucariotas tienen núcleo, citoplasma y citosol, membrana plasmática, pared
celular, citoesqueleto, mitocondrias, cloroplastos, aparato de Golgi, lisosomas, vacuolas,
retículo endoplasmático, ribosomas, cilios y flagelos.
• Las células procariotas tienen membrana plasmática, pared celular (compuesta de
peptidoglicanos), cápsulas, citoplasma y citosol, ribosomas, flagelos y pili.

Biomoléculas

• Lípidos (fosfolípidos, glucolípidos y esteroles)


• Glúcidos (oligosacáridos unidos a proteínas y lípidos)
• Proteínas (extrínsecas e intrínsecas)
• Los fosfolípidos tienen cabezas polares y colas no polares.
• El colesterol le da rigidez a la membrana plasmática.

Polímeros

• Homopolímeros: Carbohidratos.
• Heteropolímeros: Proteínas y ácidos nucleicos.

El Agua

• La molécula de agua cambia la distancia de los enlaces cuando cambia de estado y hay
rompimiento de enlaces a temperaturas extremas.
• Los enlaces fosfodiéster son la columna del ADN y se rompen. Unen el OH del carbono 3’
de un nucleótido al carbono 5’ del azúcar de otro nucleótido.
• Cuando se quiere congelar ADN, no se utiliza agua.
• Entre 4 y 10 grados está bien y no pasa nada.

Enlaces Covalentes

• Puentes disulfuro (extremadamente fuertes en proteínas)


• Enlaces amida (enlaces entre péptidos)
• Enlace glucosídico (une base nitrogenada y azúcar en un nucleósido)
• Enlace fosfodiéster (une dos nucleótidos por el grupo fosfato)

Enlaces No Covalentes

• Puentes de hidrógeno (unen las bases de las 2 hebras entre sí)


• Enlaces iónicos o puentes salinos (enlaces en moléculas proteicas)
• Interacciones electrostáticas o fuerzas de Van der Waals (ácidos nucleicos)
• Interacciones hidrofóbicas
La diferencia entre enlaces covalentes y no covalentes es que los covalentes son entre
moléculas con electronegatividad parecida, mientras que los no covalentes no.
Las fuerzas de Van der Waals mantienen una distancia mínima entre moléculas grandes y
son las que mantienen las bases nitrogenadas en su lugar.

Ácidos Nucleicos

• Son polímeros formados por nucleótidos (azúcar, base nitrogenada y grupo fosfato).
• Los nucleótidos del ADN no tienen grupo hidroxilo en el carbono 2, como el ARN.
• El ADN solo se puede unir de una manera, mientras que el ARN de muchas maneras.
• Todos los nucleótidos que entran a la cadena llegan de forma trifosfato.

Enlaces Fosfodiéster

• Se denomina enlace 3’-5’ porque une el OH del carbono 3’ de un nucleótido al grupo


fosfato del carbono 5’ de otro nucleótido.
• Son enlaces covalentes.

Azúcares en los Ácidos Nucleicos

• Son pentosas (cinco carbonos).


• ADN → 2-Desoxirribosa
• ARN → Ribosa

Bases Nitrogenadas

• Purinas → Adenina y guanina (2 anillos).


• Pirimidinas → Citosina, timina y uracilo (1 solo anillo).
• El pseudouracilo es una base nitrogenada menor.
• Se encuentran en el carbono 1’ de los nucleótidos.
• Las bases nitrogenadas menores están en bacterias y ARNt.
• La diferencia entre la timina y el uracilo es la presencia de un grupo metilo en la timina.
• Los genes metilados son los que no se expresan.

Nucleótidos

• ADN → A, G, T o C, desoxirribosa (azúcar que le hace falta un hidroxilo) y grupo fosfato.


• ARN → A, G, U, o C, ribosa (azúcar) y grupo fosfato.
• El ADN y el ARN tienen las mismas purinas, pero diferentes pirimidinas.
• Un grupo fosfato permite la unión de 2 nucleótidos adyacentes.
• Se forma un enlace fosfodiéster entre ellos.
• En procesos de síntesis, los nucleótidos entran como trifosfatos.
• El grupo fosfato se encuentra en el carbono 5’.
• La unión entre la base purina y el azúcar se da en el nitrógeno 9 de la base y el carbono 1’
del azúcar.
• La unión entre la base pirimidina y el azúcar se da en el nitrógeno 1 de la base y el
carbono 1’ del azúcar.

Oligonucleótidos

• Cadenas (2 hebras) antiparalelas polares de bases nitrogenadas.


• Tienen polaridad por el grupo fosfato en el carbono 5’ y un hidroxilo en el carbono 3’.
• El calor rompe los enlaces puentes de hidrógeno entre las bases y se separan las hebras.
• Entre más pares G-C tenga, más estable será la molécula, ya que estos son más fuertes
que los enlaces A-T.
• Nucleósido → Base nitrogenada + azúcar (sin grupo fosfato).
• La unión de una pentosa con una base nitrogenada para formar el nucleósido se da
mediante un enlace glucosídico.
• Nucleótido → Base nitrogenada + azúcar + grupo fosfato.

Conformación de las Bases Nitrogenadas en los Nucleótidos

• Conformación ANTI → Base nitrogenada fuera del azúcar (la normal en el ADN).
• Conformación SYN → Base nitrogenada encima del azúcar.
• En el ADN casi todos son de conformación ANTI, pero hay algunas purinas SYN.
• El ADN se puede encontrar en otras formas (A, C, Z, H…) por estas conformaciones.
• En el ARN también predomina el ANTI.
• En los telómeros tenemos moléculas de 4 hebras.

Conformación del Azúcar en los Ácidos Nucleicos

• C3’ – endo o conformación A (el carbono 3’ se encuentra arriba).


• C2’ – endo o conformación B (el carbono 2’ se encuentra arriba).
• En el ARN se encuentra principalmente la conformación C3’ – endo (A).
• En el ADN se encuentra principalmente la conformación C2’ – endo (B).

Tautomería de las Bases Nitrogenadas

• Para adenina y citosina, la forma más común es la amino. Si se pierde el doble enlace
queda como imino, como resultado de un cambio en el pH.
• Es peligroso porque se pueden adherir grupos a las bases que distorsionan la información
genética.
• Para la guanina y la timina es más común la forma ceto, que cambia a enol cuando el
doble enlace cambia de lugar, dando origen a un grupo hidroxilo.

Estructura del ADN

• El ADN tienen 3 niveles estructurales.


• Si se desenrolla, mediría 2,2 metros.
• No se puede observar por los plegamientos de los grupos fosfato, que hacen que el ADN
se compacte y se condense.
• El ADN procariota tiene ADN circular en su mayoría (3 mm de largo).
• Rota sobre su mismo eje para que las bases se puedan enlazar.

Estructura Primaria del ADN

• La estructura primaria es el nivel estructural más importante.


• Es el orden de los nucleótidos en la cadena lineal.
• Si se daña la estructura primaria, se daña el ADN.
• Si se dañan las estructuras secundaria y terciaria, el ADN sigue siendo funcional.
• Se escribe de 5’ a 3’.
• La caja TATA regula la transcripción.
• Las secuencias de ADN que cumplen función reguladora no codifican ni se expresan.
• Hebra F (forward)
• Hebra R (reverse)
• Una secuencia R se voltea para leerse de manera 5’ a 3’.
• La cadena F ya se encuentra de forma 5’ a 3’.

Estructura Secundaria del ADN

• Cadenas de ADN se unen mediante puentes de hidrógeno para formar una doble hélice.
• Tiene carga negativa por los grupos fosfato.

Estructura Terciaria del ADN

• Es ADN supraenrollado.

Características de las Hélices de ADN

• A-ADN → Su giro de vuelta es dextrógiro, una vuelta mide 2,8 nm, su plano entre bases
es inclinado y tiene 11 nucleótidos por vuelta.
• B-ADN → Su giro de vuelta es dextrógiro, una vuelta mide 3,4 nm, su plano entre bases
es perpendicular y tiene 10,5 nucleótidos por vuelta.
• Z-ADN → Su giro de vuelta es levógiro, una vuelta mide 4,5 nm, su plano entre bases es
zigzag y tiene 12 nucleótidos por vuelta.

Doble Hélice

• A-ADN → Se ve cuando el ADN esta deshidratado o durante procesos de extracción.


• B-ADN → Es la forma predominante en el ADN.
• Z-ADN → No es muy común, pero existe en algunas secciones y es importante para la
regulación de la expresión génica.
• El diámetro de la hélice es 2,37 nm.
• Hay 0,34 nm entre pares de bases consecutivos.
• El surco menor mide 1,2 nm y el mayor mide 2,2 nm.
• La inclinación de los pares de bases es de 88,8 grados.
• Un giro de vuelta es de 3,54 nm por 10,4 pares de bases.
Enrollamiento del ADN

• Las histonas poseen carga neta positiva.


• El ADN tiene carga negativa.
• La histona H1 lo mantiene compacto.
• El ADN se enrolla en torno a las histonas H2A, H2B, H3 y H3 (2 de cada una) y forma un
nucleosoma.
• Los nucleosomas se enrollan sobre sí mismos y forman los solenoides.
• Los solenoides de enrollan en fibras de cromatina, que se enrollan en cromosomas.
• La heterocromatina es el grado mayor de enrollamiento. No se expresa, tiene mucha
proteína y mucho ARN.

Estructura Primaria del ARN

• Es el orden de los nucleótidos en la cadena.

Estructura Secundaria del ARN

• Tiene tallos y bucles.


• Su presencia indica la estructura secundaria.

Estructura Terciaria del ARN

• Estructuras en forma de trébol o L.

El ADN es más fuerte que el ARN porque el ARN tiene un grupo hidroxilo en el carbono 2’
de la ribosa, mientras que al ADN solo tiene un hidrógeno en ese carbono, y el hidrógeno
no es reactivo.

Desnaturalización de los Ácidos Nucleicos

• Cambiando la temperatura (PCR).


• Cambiando el pH.
• El ADN desnaturalizado absorbe más luz que el normal.

Genoma

• Tenemos genoma humano (22000 – 25000 genes) o nuclear.


• Tenemos genoma mitocondrial (37 genes).

Biología Molecular 2
Genoma Humano

• Comprende el ADN nuclear y en el ADN mitocondrial.


• El 70% del genoma humano es ADN extragénico, por lo que no codifica.
• Los genes comprenden el otro 30% del genoma humano.
• El 5% de ese 30% codifica para algún tipo de proteína (se expresa).
• El otro 95% no es codificante (no se expresa).
• En conclusión, el 97.5-98% de todo el genoma humano no codifica para nada.
• Aproximadamente, un 1.5% del genoma codifica para proteínas.

Genoma Procariota

• El genoma procariota es mucho más pequeño que el eucariota.


• La gran mayoría de los genomas procariotas son circulares. El de E. coli es circular.
• El ADN se puede obtener mediante una lisis bacteriana.
• El ADN se encuentra muy enrollado dentro de la bacteria.
• Los genes en las bacterias se representan a escala en forma de anillos, divididos por
colores dependiendo de su semejanza.
• La medida de los genomas es el número de bases de ADN que contienen.
• El genoma de E. coli mide 4.2 mb (pares de bases) y tiene 1000 genes.
• Puede haber genes encima de otros y espacios entre genes.
• Las flechas indican en que dirección se expresan los genes.

Familias de Genes

• Son diferentes genes que han ido evolucionando, y que hoy día tienen funciones muy
similares.
• El gen modelo para las familias de genes es el gen para las globinas, ya que existen
muchos tipos de globinas, pero todas ellas demuestran en su secuencia que provienen de
un gen ancestral.
• Se piensa que el gen ancestral sufrió un tipo de mutación, causando una división en dos
tipos de genes diferentes, con características diferentes, pero funciones semejantes.
• A su vez, uno de esos genes dio origen por división a otros 2 genes, que posteriormente
se siguieron dividiendo, originando todos los tipos de globinas que existen.
• Muchas personas tienen clases de hemoglobina diferentes, que aunque cumplan la
misma función, se asocian al oxígeno de distintas maneras.
• Esto se da porque las globinas de la hemoglobina de estos individuos no son normales
(𝛼 𝑦 𝛽). Sufrieron algún tipo de mutación.
• Los genes ribosomales también hacen parte de familias de genes.
• Los ribosomas están formados por ARN ribosomal, que está codificado en el ADN, que se
llama ADN ribosomal.
• Hay varios tipos de ARN ribosomal, pero todos cumplen la misma función: forman el
ribosoma (función estructural).
• El ARN ribosomal proviene de un gen ancestral, que se fue dividiendo.
• Los genes que codifican para proteínas histonas (H1, H2A, H2B, H3, H3A, H4) también
son una familia de genes.
• Los genes de una familia de genes suelen estar dentro del genoma uno al lado del otro.
• Las regiones en las cuales se ubican los genes con funciones similares reciben el nombre
de clusters de ADN. Por ejemplo: Cluster para las globinas tipo 𝛼 o para globinas tipo 𝛽.
• En los cromosomas, los genes de un cluster de ADN se ubican unos cerca de otros.
• Hay genes que llevaban miles de años sin expresarse, y ahora se están expresando. Esto
se puede dar como resultado de una mutación.
• La mutación puede hacer 2 cosas:

1. Dañar un gen.
2. Dañar el regulador de un gen, que lo mantiene sin expresarse.

• Los pseudogenes no se expresan por los reguladores de genes. Si se daña el regulador, el


gen comienza a expresarse.
• La información que no codifica para proteínas es más importante que la que sí codifica.

Genes

• El gen es una unidad física funcional y es una función determinada de la herencia.


• Mantienen los caracteres y la información de la especie de una generación a otra.
• Todos los genes que se conocen codifican para proteínas y/o ARN.

Clusters de ADN

• Son las zonas en las que se ubican los genes con funciones similares.
• Los genes con funciones similares están localizados uno al lado del otro dentro del
genoma humano, formando un cluster de ADN.
• Estos genes en los clusters de ADN se ubican cerca de otros en los cromosomas.

Pseudogenes

• Algunos genes sufrieron un tipo de mutación y perdieron funcionalidad.


• Al perder la funcionalidad, esos genes se convirtieron en pseudogenes.
• Han permanecido silenciados durante muchos años, pero últimamente se ha demostrado
que algunos se han empezado a expresar y están codificando para moléculas de tipo
proteico, que cumplen funciones de regulación.

ADN Satélite

• La característica del ADN satélite es que son secuencias repetidas en tándem (una al lado
de la otra). Ejemplo: AGCTAGCTAGCTAGCT.
• El ADN satélite no codifica para nada, ni proteínas ni ARN, pero determina muchas
características de las especies.
• Cada secuencia del ADN satélite puede tener hasta más de 100 pares de bases, que se
repiten n cantidad de veces.
• Está asociado a la heterocromatina, que está compacta y es la que menos se expresa.
• La heterocromatina es importante en la transcripción de ADN.
• Las regiones de ADN satélite se encuentran cercanas a los centrómeros.

Minisatélites y Microsatélites de ADN

• Son secuencias repetitivas que reciben su nombre por el número de pares de bases que
contienen (por su tamaño).
• Están asociados a eucromatina, que es el ADN que se expresa.

Minisatélites

• Contienen repeticiones de aproximadamente 15 pares de bases.


• Forman clusters de más o menos 100 copias.
• También reciben el nombre de VNTR (variable number tandem repeat).
• Se encuentran ubicados muy cercanos a los telómeros (secuencias repetidas).

Microsatélites

• Contienen repeticiones entre 1 y 5 pares de bases.


• Forman clusters de entre 10 y 100 copias.
• Son los más utilizados en la clínica (pruebas de paternidad e identificación de ADN).
• También reciben el nombre de STR (short tandem repeats).
• Se encuentran a lo largo de todo el genoma, en cualquier sitio.

Elementos Genéticos Móviles en Humanos

• La mayoría de las repeticiones del genoma humano están formadas por elementos
transponibles, también conocidos como genes saltarines.
• Para poder saltar de una posición a otra, necesitan ser cortados del genoma.
• Para poder hacer ese corte, se necesita de una enzima.
• El 45% del genoma humano está formado por elementos transponibles.
• No codifican para nada, pero cumplen varias funciones dentro del genoma.
• Estos elementos tienen la capacidad de pasar una región del cromosoma a otra región
del cromosoma, y dependen de enzimas de tipo transposasas o endonucleasas.
• Los genes saltarines provienen de virus que infectaron el genoma humano y se quedaron
insertados dentro de él.
• Existen dos tipos de elementos transponibles en humanos:

1. Transposones de ADN

• No tienen la enzima para hacer el corte. Son el 3%.


• Son secuencias que pueden llegar a tener hasta 3000 pares de bases.
• Cercano a la zona donde está el transposón, hay una endonucleasa que corta el
ADN para que el transposón pueda salir de la secuencia e instalarse en otra
región del genoma.
• Un gen debe tener aproximadamente 300,000 copias de los transposones para
codificar una proteína.

2. Retrotransposones de ADN

• Son secuencias de ADN de dos tipos diferentes:

a) Repeticiones largas en tándem (LTR)


b) Aquellas que no hacen parte de las repeticiones largas en tándem

• Dentro de aquellas que no hacen parte de las LTR, se encuentran las secuencias
SINE (short interspersed elements) y LINE (long interspersed elements).
• La secuencias más conocida es la secuencia Alu, que hace parte de las SINE.
• Las secuencias SINE son las secuencias pequeñas (100-300 pb). Hay
aproximadamente 1,500,000 copias de estas secuencias. Son el 13%.
• Las secuencias LINE son las secuencias largas (6000-8000 pb). Hay
aproximadamente 850,000 copias de estas secuencias. Son el 21%. Como son la
mayoría, se pueden utilizar para identificar individuos por su ADN.
• Las repeticiones largas en tándem (LTR) son mucho más grandes que las LINE.
Hay aproximadamente 450,000 copias de estas secuencias. Son el 8%.

Flujo de la Información Genética

• Desde de la década de 1950 a 1963, se tuvo la idea de que la manera en la que se


transmitía la información genética ocurría por replicación, transcripción y traducción.
• Se creía que todo lo relacionado con el flujo de información genética tenía que ver
únicamente con ADN, ARN y proteínas.
• Hoy se sabe que el ADN no solamente se duplica, sino que es decodificado para formar
ARN, pero ese ARN también puede ser transcrito mediante transcripción reversa,
causando que se convierta en ADN (virus).
• A partir de ARN, se puede obtener otra molécula de ARN, a través de ADN (virus).
• Esto demuestra que el proceso se puede dar en ambas direcciones.
• Se comprobó que de un ARNm se pueden obtener muchos tipos diferentes de proteínas,
ya que en una secuencia se puede encontrar más de un ORF (open reading frame).
• El flujo de información genética es muy variado. El material genético puede ser tanto
ADN como ARN. Se puede pasar de un tipo de molécula a otro por procesos biológicos.

Ácido Desoxirribonucleico

• La replicación de ADN en procariotas se da en moléculas de ADN en forma B, el cual está


formado por 2 hebras antiparalelas de ADN, que se encuentran entrelazadas mediante
enlaces puentes de hidrógeno.
• Las moléculas de ADN son polares porque en los extremos de cada una de ellas hay un
grupo fosfato (extremo 5’) y un grupo hidroxilo (extremo 3’).
• Los puentes de hidrógeno permiten la formación de la doble hélice.

Replicación de ADN en Procariotas

• En la mayoría de los casos, el ADN en procariotas es circular.


• El proceso de replicación en procariotas es un proceso enzimático. Deben existir unas
enzimas, que se van a encargar del copiado (duplicar la información de las cadenas).
• Es un proceso orientado. Siempre se lleva a cabo en dirección 5’ – 3’. Las moléculas
siempre crecen en el extremo 3’, a menos que sea in vitro.
• La replicación se inicia por una señal, que le dice a la célula que debe iniciar la
replicación. Por esto, la célula sintetiza las enzimas que van a actuar en el proceso.
• Las señales son proteínas producidas por la misma célula. La acumulación de las
proteínas (gradiente de proteínas) hace que se genere la señal.
• La señal hace que se de el proceso de replicación. Las enzimas, que ya están sintetizadas
por la célula, están esperando que la topoisomerasa desdoble la zona de inicio, para que
ellas se adhieran a esa zona por afinidad, y comiencen la replicación.

Topoisomerasas

• Como el ADN está supraenrollado, las secuencias están escondidas. Es necesario que
estén disponibles para que las enzimas las puedan reconocer y comenzar la replicación.
• Para comenzar el proceso, se necesita que la molécula de ADN circular supraenrollada se
desenrolle. Las enzimas encargadas de esto son las topoisomerasas (topo = superficie).
• Las topoisomerasas no son específicas. No reconocen ninguna secuencia.
• Se desplazan por la superficie de la molécula y, cada cierto tiempo, se detienen y cortan
la molécula de ADN, liberando la tensión. La zona que cortan se desenrolla.
• Cuando se desenrolla, si en esa región se encuentra la secuencia necesaria para que se
de el inicio de la replicación, el proceso comienza enseguida.
• Si no se encuentra la secuencia de inicio, la topoisomerasa se encarga de volver a sellar
la ruptura, mediante la formación de enlaces fosfodiéster. Sigue siendo una doble hélice,
pero ya no está supraenrollada, sino laxa.
• Esto permite que más adelante, puedan pasar enzimas por ahí fácilmente.
• Las topoisomerasas son de 2 tipos, dependiendo del tipo de corte que realizan:

1. Topoisomerasa I → Solamente corta una sola hebra. La enzima se queda unida al


grupo fosfato de la hebra que cortó, a través de un residuo de tirosina, y espera
que se desenrolle la molécula.

2. Topoisomerasa II → Corta las 2 hebras de la hélice. No permanece unida a las


hebras. Solo libera la tensión.

• Cuando la molécula se corta, se desenrolla en el centro, pero se enrollan más en los


extremos. Cuando se cortan las 2 hebras, se libera más tensión.
• Si la región cortada contiene la secuencia de inicio de la replicación, las enzimas de la
replicación se unen al ADN e impiden que los dos extremos se vuelvan a unir.
• Si en la región donde se liberó la tensión no se encuentra la secuencia de inicio de la
replicación, la topoisomerasa hace una unión nuevamente y forma el enlace fosfodiéster.
• Cuando acaba la replicación, la topoisomerasa se desprende del complejo y es
degradada por la célula.
• Los aminoácidos que la conforman son utilizados para sintetizar otras moléculas.

Origen de Replicación

• La topoisomerasa necesita hacer fácil la llegada a una zona que se conoce como Ori C.
• El Ori es una secuencia de origen o inicio de la replicación. Existe un solo Ori para cada
cromosoma procariota.
• Ori C → Origen de replicación del cromosoma de E. coli.
• El Ori C de E. coli es una secuencia que tiene 245 pares de bases. Tiene repetido en
tándem una secuencia de 13 pares de bases (GATCTNTTNTTTT).
• Como tiene tanta timina, son regiones que se pueden separar fácilmente, ya que los
enlaces A-T solo tienen 2 puentes de hidrógeno.
• Los Ori son secuencias ricas en T-A (no pares).
• Los procariotas solo tienen un Ori de replicación porque el tamaño del ADN no es lo
suficientemente grande para que se necesite más de uno.

Proteína DnaA

• Las secuencias ricas en A-T son importantes porque son los sitios en los cuales se une la
proteína DnaA. El gen que codifica para esa proteína es el gen dnaA.
• La proteína DnaA es un factor de inicio de la replicación. Evita que la topoisomerasa
vuelva a unir los extremos que ha cortado, mediante la formación de enlaces
fosfodiéster. Se une a ambas hebras de la molécula de ADN.
• La proteína DnaA tiene afinidad por las regiones ricas en secuencia A-T.
• Se unen 10 moléculas de esta proteína a las secuencias. Cada una a una secuencia.
• Hay 5 en la hebra parental y 5 en la complementaria.

Cargador de Helicasas (Proteína DnaC)

• Para que las helicasas se puedan subir a las hebras, necesitan la ayuda de una proteína
que se llama cargador de helicasas, conocida como proteína DnaC.
• Cuando las proteínas DnaA se están localizando sobre las secuencias A-T, la DnaC se pega
en todo el extremo de la molécula, para evitar que las proteínas DnaA tapen el extremo.
• La DnaC deja disponible en la parte superior una secuencia, que es afín a la proteína
DnaB (helicasa). La DnaB reconoce la secuencia y se pega.
• Cuando la DnaB se pega, la DnaC se quita y es degradada por la célula, y la helicasa
queda dentro de la hebra de ADN.
• La función de el cargador de helicasas es ayudar a la DnaB o helicasa a que pueda unirse
a la molécula de ADN.
Helicasa (Proteína DnaB)

• La helicasa necesita insertarse en cada una de las hebras del ADN.


• Su estructura tiene un orificio en el centro y 4 estructuras a los lados, que asemejan las
hélices de un ventilador.
• Cuando la helicasa se sube sobre las moléculas de ADN, se desplaza girando en una
dirección. Por el orificio, se sube sobre cada una de las hebras.
• La proteína DnaA le permite ese tipo de unión.
• Las helicasas tienen direccionalidad y, en su gran mayoría, son enzimas que hidrolizan
ATP para realizar su movimiento a lo largo de las cadenas.
• Las helicasas también son conocidas como proteínas DnaB.
• Durante el proceso de replicación, funcionan 2 helicasas. Cada una de ellas se sube sobre
una hebra de ADN. Aunque van en la misma dirección, funcionan en sentido contrario.
• Cuando las helicasas se desplazan, rompen los puentes de hidrógeno.
• La función de las helicasas es el rompimiento de los puentes de hidrógeno para la
separación de las dos hebras.
• Las helicasas obtienen mucha energía mediante la hidrólisis de ATP. Con esa energía,
comienzan a girar y a desplazarse a velocidad, rompiendo los enlaces puentes de
hidrógeno y separando las cadenas, al tiempo.
• Si las cadenas se separan, se podrían volver a pegar, formando los enlaces nuevamente.

Proteínas SSB (Single Strand Binding Protein)

• Son proteínas que tienen estructuras tetraméricas (4 subunidades).


• Son sintetizadas por la célula y actúan como un sanduche.
• En el momento en que las helicasas están actuando, las hebras de ADN se separan. Las
proteínas SSB se suben sobre cada una de la hebras y cubren cada una por lado y lado (2
subunidades y 2 subunidades) para evitar que las hebras se vuelven a unir.
• A medida que el complejo de replicación se une, las proteínas SSB se van desprendiendo
y uniéndose al otro extremo, donde todavía se están separando las hebras.
• La célula solo sintetiza un número determinado de proteínas SSB. Se van reutilizando.

Primasas (Proteínas DnaG)

• La primasa actúa sobre ambas cadenas. Es una ARN polimerasa.


• Esto significa que sintetiza ARN, teniendo como molde una molécula de ADN.
• La replicación se inicia con un proceso de transcripción.

Polimerasas

• ADN Polimerasa I
• ADN Polimerasa II
• ADN Polimerasa III

ADN Polimerasa I
• Consiste de solo una subunidad.
• Interviene en la reparación del ADN, corrigiendo las secciones dañadas.
• Elimina los primers de ARN en cada fragmento de Okazaki y los reemplaza con ADN.
• Son capaces de degradar polímeros de ADN o ARN al eliminar nucleótidos de la molécula,
lo que significa que tiene actividad de exonucleasa, en dirección 3’ – 5’ y 5’ – 3’.
• Todas las polimerasas de procariotas tienen actividad de exonucleasa en dirección 3’ – 5’.

ADN Polimerasa III

• Se pega a la hebra líder con un brazo y a la hebra retrasada con el otro brazo. Es una
enzima tan grande que se pueden encontrar máximo 4 por célula.
• Es la que se encarga de hacer todo el proceso y está formada por varias subunidades.
• Está formada por 2 subunidades α, 2 subunidades ϵ, 2 subunidades θ, 2 subunidades τ y
se une a una pinza 𝛃, que mantiene la polimerasa relacionada con la plantilla de ADN.
• La ADN polimerasa III se une a una sola pinza 𝛃 en la cadena líder, pero en la cadena
retrasada, se une a una distinta por cada fragmento de Okazaki.
• Las subunidades permiten que las hebras pasen a través de ellas.
• Se encarga de sintetizar la cadena líder y la cadena retrasada.
• En la cadena retrasada, además de la ADN polimerasa III, funciona la ADN polimerasa I.

Replicación

• Se da en forma bidireccional. Se aleja del origen de replicación en ambas direcciones.


• Las enzimas no pueden iniciar la formación de una cadena de ADN, solo poner los
nucleótidos. Necesitan de un primer, que es sintetizado por la primasa.
• El primer es una secuencia corta de ARN.
• La primasa sintetiza el primer en el extremo 5’ de la cadena líder y en el extremo 5’ de
cada fragmento de Okazaki.
• Para sintetizar los primers de los fragmentos de Okazaki, la primasa se une a la helicasa
de la cadena retrasada, formando un complejo llamado primosoma.
• A partir del primer, la ADN polimerasa III puede empezar a agregar nucleótidos para
sintetizar las cadenas.
• Los primers de ARN se eliminan después, los espacios se llenan con ADN por la ADN
polimerasa I y se ligan los fragmentos por medio de una DNA ligasa.
• La principal enzima de la replicación es la ADN polimerasa III.
• La replicación se da en sentido 5’ – 3’.
• La cadena líder se sintetiza sin problemas, agregando nucleótidos en el extremo 3’ y así
acercándose a la horquilla de replicación.
• La cadena retrasada se sintetiza de forma discontinua, en fragmentos de Okazaki.
• Cada fragmento crece y se aleja de la horquilla de replicación hacia el extremo 5’ de un
fragmento previamente formado, al cual se une después.
• La DNA ligasa es la enzima que une los fragmentos de Okazaki.

Pasos de la Replicación

1. Las topoisomerasas hacen un corte donde se encuentra el origen de replicación.


2. Las proteínas DnaA se unen a las secuencias ricas en A-T (10) para evitar que las
topoisomerasas vuelvan a unir los extremos por enlaces fosfodiéster. Mientras esto
sucede, los cargadores de helicasa (proteínas DnaC) se unen al extremo de la molécula,
para que las proteínas DnaA no lo tapen. Deja una secuencia afín a las helicasas (DnaB).
3. Con ayuda de las proteínas DnaC, las helicasas (proteínas DnaB) se suben a cada hebra
de ADN y hacen hidrólisis de ATP para desplazarse en dirección 5’ – 3’ sobre las
moléculas de ADN, rompiendo los puentes de hidrógeno y separando las cadenas, y así
formando la burbuja de replicación.
4. Las proteínas SSB se unen a las hebras de ADN separadas para evitar que se unan y
manteniéndolas extendidas.
5. La primasa sintetiza primers en el extremo 5’ de la cadena líder y en el extremo 5’ de
cada fragmento de Okazaki, para que las cadenas comiencen a ser sintetizadas.
6. Las 2 ADN polimerasa III empiezan a sintetizar la cadena líder, añadiendo nucleótidos
en el extremo 3’, y la cadena retrasada, formando los fragmentos de Okazaki a partir de
los primers de ARN.
7. Cuando se terminan de sintetizar, los primers en la cadena retrasada son eliminados
por la ADN polimerasa I, que los reemplaza por ADN.
8. La enzima ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

Replicación del ADN Eucariota

Diferencias entre ADN de Eucariotas y ADN de Procariotas

• A diferencia del ADN de procariotas, el ADN que se replica en eucariotas es lineal.


• Cuando hablamos de ADN circular, no existen extremos, entonces las moléculas que
inician el ciclo de replicación terminan en el mismo sitio.
• Las enzimas que hacen el proceso de síntesis de ADN de procariotas se encargan de
terminar el proceso y dejar una molécula circular sin ningún tipo de corte.
• A nivel de eucariotas, sí se encuentran extremos, por lo que se dan inconvenientes para
separar los complejos enzimáticos y dejar las moléculas nuevas intactas.
• Cuando se trabaja con procariotas, el ADN es pequeño.
• Para el ADN eucariota, las moléculas deben replicar una molécula mucho más grande,
casi en el mismo tiempo.

Orígenes de Replicación

• Mientras que en el ADN de procariotas solo hay un origen de replicación, en el ADN de


eucariotas se dan varios orígenes de replicación.
• Las enzimas en los diferentes orígenes de replicación en eucariotas no inician la
replicación al mismo tiempo.
• A lo largo de las moléculas lineales, habrá sitios en los que se origine el proceso de
replicación, mientras que en otros se va a originar unos milisegundos más tarde.
• Las células eucariotas replican su genoma en pequeñas porciones llamadas replicones.
Cada replicón tiene su origen de replicación.
• Los orígenes de replicación presentan secuencias ricas en pares A-T, lo cual es necesario
porque solo se debe hacer rompimiento de 2 puentes de hidrógeno.
• Esto permite que las moléculas puedan ser separadas fácilmente.

Burbujas y Horquillas de Replicación

• Cada origen de replicación va a generar diferentes burbujas de replicación.


• Al mismo tiempo, va a haber horquillas de replicación en los extremos.
• Las burbujas de replicación se originan debido a que en sus extremos se forman unas
horquillas de replicación, que son formadas por las helicasas, cuando van abriendo el
camino.
• Las horquillas de replicación se van a ir desplazando a medida de que las helicasas vayan
rompiendo los enlaces puentes de hidrógeno.
• Hay varias zonas en las que se lleva a cabo el proceso de replicación.
• Cuando se originan todas las burbujas de replicación, va a llegar un momento en el que
se encuentran.
• Esto permite que se pueda replicar toda la molécula de ADN en menor tiempo.
• La replicación es bidireccional. Se inicia en un solo origen, pero va en dos direcciones. El
único caso en que es unidireccional es en los virus.
• Esto causa que se sinteticen dos tipos de cadenas:

1. Cadena Líder

• Se sintetiza de manera continua, sin traumatismos.


• Se sintetiza a partir de un primer de ARN, que es sintetizado por una enzima
llamada primasa.
• Las primasas actúan en la hebra líder y en la hebra retrasada.
• La primasa es una ARN polimerasa porque se da una transcripción del origen de
replicación. Las primasas en la cadena líder sintetizan en sentido 5’-3’.
• Las enzimas siempre sintetizan en dirección 5’-3’. Por esta razón, no va a haber
ningún problema en la replicación de la cadena líder. Llegan al extremo sin
problemas.
• Para ir al mismo tiempo de la cadena retrasada, la hebra líder puede hacer paros
y revisar los nucleótidos que ya ha colocado. Puede corregir mutaciones.

2. Cadena Retrasada

• Las helicasas están rompiendo los puentes de hidrógeno en la dirección de


síntesis, pero la dirección de síntesis de la cadena nueva de ADN no va en la
dirección que van las helicasas, sino en dirección contraria.
• Utiliza una primasa para sintetizar el primer, y a partir de él comienza el proceso
de síntesis. La primasa sintetiza primers complementarios a la cadena molde en
cada cierto espacio. Los primers son rellenados por una enzima.
• Hay una enzima que se encarga de sintetizar los fragmentos de Okazaki.

• Antes de colocar cada nucleótido, las polimerasas siempre se regresan y revisan que
hayan colocado el anterior de manera correcta.
• Esto ayuda a prevenir las mutaciones en la replicación del ADN.
• Cuando la mujer concibe bajo la influencia del alcohol, las polimerasas en el ADN que se
empieza a sintetizar no se regresan a revisar los nucleótidos.
• Los sistemas de reparación en adultos son muy avanzados, pero un cigoto que se está
formando todavía no tiene los sistemas de reparación activados.
• En eucariotas se utilizan dos enzimas. En procariotas solamente existe una.
• Las eucariotas tienen una enzima para la cadena líder y una enzima para la retrasada.
• Las polimerasas de la replicación son ADN polimerasas ADN dependientes.
• Todas las polimerasas de eucariotas y procariotas son ADN dependientes. Los virus son
los únicos con enzimas ARN dependientes.
• El primer siempre va a ser de ARN, a menos que sea in vitro (ADN).
• El primer es importante porque las enzimas de la replicación (ADN polimerasas) no
pueden colocar el primer nucleótido.
• Las polimerasas son enzimas muy grandes, por lo que se pueden despegar fácilmente del
ADN. Para que esto no ocurra, existen cargadores que las meten por la hebra de ADN.
• La polimerasa que trabaja sobre la hebra retrasada no puede ser la misma que trabaja
sobre la hebra líder, por lo que se utilizan dos enzimas diferentes.

Polimerasas

• ADN Polimerasa 𝛂 → Junto con la primasa, inician la síntesis de cada fragmento. La


primasa sintetiza el primer y la polimerasa los siguientes 20 nucleótidos.
• ADN Polimerasa 𝛃 → Funciona en la reparación del ADN.
• ADN Polimerasa 𝛅 → Es la más importante en la replicación del ADN nuclear. Es la
principal enzima sintetizadora de la cadena retrasada. Reemplaza con ADN los primers de
ARN en los fragmentos de Okazaki.
• ADN Polimerasa 𝛜 → También es sintetizadora, pero se cree que de la cadena líder.
• ADN Polimerasa 𝛄 → Hace la replicación del ADN mitocondrial.
• Hay muchas ADN polimerasas porque existen dos tipos de ADN en los eucariotas:
mitocondrial y nuclear.

Proteínas RPA

• Son como las proteínas SSB en procariotas, pero en eucariotas.


• RPA = Replication Protein A.
• Su función es prevenir que las hebras se vuelvan a unir y mantenerlas estiradas.
• No son tetrámeros. Son compuestos de 6 unidades, pero no se dividen por igual.
• Forman una estructura compleja sobre la superficie de cada una de las hebras y una
pequeña por debajo.

Pasos de la Replicación Eucariota

1. Las helicasas (MCM) hacen hidrólisis de ATP y se mueven en direcciones contrarias,


rompiendo los enlaces puentes de hidrógeno, y así desenrollando la molécula de ADN y
separando las dos hebras.
2. Las proteínas RPA se unen a ambas hebras para evitar que se vuelvan a unir.
3. El complejo primasa-Pol 𝛂 sintetiza primers de ARN-ADN en cada una de las hebras.
4. La ADN Polimerasa 𝛅, unida a la pinza PCNA, reemplaza al complejo primasa-Pol 𝛂 y
comienza a agregar nucleótidos, alargando la hebra retrasada.
5. Se cree que la ADN Polimerasa 𝛜 hace lo mismo en la cadena líder.
6. La ADN Polimerasa 𝛅 elimina el ARN de los primers y lo reemplaza por ADN.
7. La enzima ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

Telómeros

• El ADN eucariota tiene extremos, debido a que es lineal.


• Cuando se inicia la copia del ADN, siempre se debe iniciar a partir de algo pre-existente,
que es una molécula de ARN (primer), que es sintetizado por una primasa.
• No pueden existir moléculas hibridas funcionales (ARN y ADN).
• El ARN debe ser degradado y cambiado por una molécula de ADN que pueda cumplir sus
funciones.
• El ARN que está en el extremo es degradado en dirección 3’-5’.
• No existe la manera de que alguna enzima se una a algún extremo y copiar ese ARN en
forma de ADN, ya que solo copian en dirección 5’-3’.
• En los extremos se encuentra el primer de ARN, que va ser degradado.
• Cada vez que se da un proceso de replicación, se recortan los extremos, que son los
telómeros. Los telómeros se van acortando en cada round de replicación hasta que llega
un momento en que no se pueden acortar más.
• Esto se puede dar porque los extremos de los cromosomas son los telómeros, que son
secuencias repetitivas en forma de tándem, que no codifican para nada.
• Si se va perdiendo parte de esta información, la célula no sufre inconvenientes.
• Los telómeros tienen una longitud determinada por individuo y después de ser cortados
varias veces, llegan a un punto crítico en que ya no pueden ser cortados.
• Si la información genética cercana al telómero comienza a perderse, la célula pierde esa
función. Esto no es posible. Cuando se llega al punto crítico, el núcleo de la célula envía
una información para que se de el proceso de degradación o lisis celular (apoptosis).
• Los telómeros cumplen una función defensora. Protegen la información genética.
• Los telómeros se encuentran en todos los eucariotas. Los procariotas con ADN lineal
tienen secuencias repetitivas diferentes a las de los telómeros eucariotas.
• Son los responsables de la estabilidad estructural de los cromosomas, la división celular y
el tiempo de vida de las diferentes células.
• Están relacionados con el envejecimiento, enfermedades como el cáncer y anomalías
genéticas como la formación de cromosomas en anillo.
• Una de las características de las células cancerígenas es que poseen telomerasa. Sus
telómeros no se están acortando.
• Los seres humanos producen telomerasa hasta cierta etapa del desarrollo, llegando casi
a la adolescencia. A partir de allí, las células dejan de producirla y empieza el
acortamiento de los telómeros.
• Debido a algunas mutaciones, se pierden las regiones teloméricas en ambos extremos de
los cromosomas y dejan de ser viables para expresar sus genes (cromosomas en anillo).

Telomerasa
• La célula ha creado un mecanismo para recuperar parte del telómero, y así mantener el
funcionamiento de la célula por más tiempo.
• Esto se hace a través de una enzima que recibe el nombre de telomerasa.
• Las telomerasas son ADN polimerasas. Son capaces de sintetizar ADN teniendo moldes
de ARN, o lo contrario.
• Las telomerasas alargan nuevamente los telómeros, pero no se recupera toda la región
telomérica. Se recupera parte de la región que se había perdido.
• En los extremos de los cromosomas, queda un brazo sobresaliente. Cuando se estaba
sintetizando complementario al molde, ahí había una molécula de ARN, pero las células
no pueden tener ARN y ADN dentro de una molécula.
• Por lo tanto, el primer de ARN se degrada y queda dentro de la célula una parte de ADN
sobresaliente. Esto es peligroso para la célula.
• En la célula hay exonucleasas. Las exonucleasas degradan las hebras de ADN o ARN. En
cada ciclo de replicación, se perdería gran parte del ADN.
• Para que esto no ocurra, el ARN de la telomerasa forma una estructura en forma de
bucle, a través de la cual se une al extremo 3’ del ADN.
• La telomerasa tiene afinidad por una molécula de ARN. Viene unida con ella. Esta
molécula de ARN es idéntica a la secuencia repetida en tándem que tiene el telómero.
• Esto deja un extremo libre para que la propia telomerasa se una y comience a copiar
complementario al molde, para rellenar el espacio que hace falta.
• De esta manera, el telómero se acorta, pero mucho menos que si no existiera el proceso.
• Cuando las células dejan de producir telomerasa, tienen los telómeros acortados.

Transcripción del ADN

• La transcripción es un proceso enzimático. Las enzimas se encargan de copiar la


información, que está en forma de ADN, y la van a transcribir en forma de ARN.
• Es el proceso más regulado. La célula decide cuales son los genes que se deben expresar
y cuales no se deben expresar.
• Teniendo como molde una molécula de ADN, se sintetiza una molécula de ARN.
• Es el proceso intermedio en el flujo de la información genética.
• Para el proceso de transcripción, van a funcionar unas enzimas llamadas ARN
polimerasas ADN dependientes, o simplemente, ARN polimerasas.
• Las plantas tienen ARN polimerasas IV y V.
• Los factores que participan en la transcripción son proteínas. Los factores de
transcripción ayudan a la enzima a realizar el proceso de transcripción. Son los
reguladores del proceso.
• La síntesis de ARN mensajero la hace la ARN polimerasa II.

Transcripción en Bacterias

• Las bacterias solo tienen una enzima para la transcripción. Se llama ARN polimerasa.
• En las bacterias, la ARN polimerasa es una enzima que tiene 5 subunidades. Por esta
razón, la ARN polimerasa de las bacterias es la más sencilla.
• Tiene 2 subunidades idénticas α, una subunidad β, una subunidad β’ y una subunidad ω.
• Las subunidades β y β’ se encargan de hidrolizar ATP y permitir el movimiento de la
enzima por la hebra de ADN.
• Las otras se encargan de acoplar el proceso para sintetizar las nuevas moléculas.
• Tienen 4 factores de transcripción, que son proteínas. El sigma es el encargado de regular
el inicio de la transcripción. El rho es el encargado de regular la finalización del proceso.

Arqueobacterias

• Es una sola ARN polimerasa, pero es diferente a la de las bacterias.


• La Rpo1 es semejante a la β’. La Rpo2 es semejante a la β.
• Su ARN polimerasa tiene muchísimas más subunidades que las bacterias.

Eucariotas

• Tienen ARN polimerasa I, ARN polimerasa II, ARN polimerasa III, ARN polimerasa IV y
ARN polimerasa V. La IV y la V son solo para plantas.
• Las ARN polimerasas tienen el mismo número de subunidades, pero son diferentes.
• Las 5 ARN polimerasas tienen 5 subunidades en común.

Etapas de la Transcripción

• Pre-inicio
• Inicio
• Alargamiento o Elongación
• Terminación

Transcripción en Procariotas

Genes

• En el proceso de transcripción se transcriben genes. Un gen debe tener mínimo 1000 pb.
• Existen solamente 2 tipos de genes, y son los únicos que se pueden transcribir.
• Los genes pueden codificar para ARN (genes ribosomales) o pueden codificar para
proteínas. No existe ningún gen que codifique para otra cosa.
• La transcripción de los genes que codifican para proteínas da como resultado la
producción de un ARN mensajero.
• La transcripción de los genes ribosomales dan origen al ARN ribosomal. Los ARN de
transferencia están incluidos dentro de los ribosomales.
• Los ARN de transferencia se encuentran en clusters, y algunos de ellos están unidos a
ARN ribosomal.
• Para que se lleve a cabo el proceso de transcripción, deben ser identificados los genes
que se van a utilizar en el proceso.
• Para poder localizar un gen, hay que tener en cuenta 2 regiones:

1. Zona Promotora
• Es una secuencia de ADN que no se transcribe, solo regula la expresión del gen.
• Ningún ARN tiene la secuencia promotora.
• La función del promotor es regular el proceso de transcripción y la expresión del
gen, indicándole a la enzima dónde debe empezar la síntesis de ARN.
• Expresar un gen implica que la información que está en el ADN sea transcrita a
ARN, y este ARN se traduzca en una proteína.
• El promotor puede permitir que se de la transcripción del gen o bloquearla.
• Esto lo logra a través de las enzimas o proteínas que se asocian con él.
• La zona promotora tiene 2 regiones consenso. Son comunes entre todos los
promotores procariotas.
• Casi todos los procariotas tienen las zonas consenso en -10 y en -35.
• Se piensa que la zona promotora se encuentra corriente arriba del gen.
• Existen hipótesis que dicen que existen promotores en regiones diferentes a la
región 5’ del gen. Aún no está comprobado.
• Corriente arriba → En dirección 5’.
• Corriente abajo → En dirección 3’.
• Los promotores se representan con una flecha hacia arriba y hacia un lado. La
flecha indica hacia donde está el gen.
• En los procariotas, entre una región promotora y una región terminadora, se
puede encontrar más de un gen. Un promotor puede regular varios genes.
• El ADN en procariotas es muy pequeño para tener tantos promotores, y los
genes con un mismo promotor y terminador sirven en la misma ruta metabólica.
• Gastan menos energía en sintetizar enzimas porque las sintetizan al tiempo, con
una sola ARN polimerasa, que sintetiza todos los ARN mensajeros.
• En los eucariotas, entre una región promotora y una región terminadora, solo se
puede encontrar un gen. Cada gen está regulado por su propio promotor y su
propio terminador.

2. Zona Terminadora

• Ninguna de las enzimas le hace caso a la zona de terminación.


• Le indica a la enzima que se debe detener porque hasta ahí llega la información.
• Es una secuencia, pero las enzimas no terminan porque haya una señal de
terminar. Se vuelan la señal y siguen sintetizando.
• Por esta razón, se necesitan factores adicionales de terminación, que ayudan a
que la enzima se desprenda del ADN y deje de sintetizar ARN.
• Un ejemplo es el factor rho en las bacterias.

• En procariotas, el ARN mensajero, que se produce en el núcleo por transcripción, pasa al


citoplasma y se une al ARN ribosomal en la subunidad menor del ribosoma, por la
secuencia Shine-Dalgarno (SD).
• La secuencia Shine-Dalgarno se necesita para que el ARN mensajero pueda llegar al
ribosoma, unirse con el ARN ribosomal de la subunidad menor y permanecer en una
posición determinada para que se pueda llevar a cabo la síntesis de una proteína.
• Para que el gen sea reconocido, debe tener una zona promotora, una zona terminadora
y una secuencia Shine-Dalgarno, además del mínimo de 1000 pares de bases.
• El sitio de inicio de la transcripción se encuentra corriente abajo de la Shine-Dalgarno.
• En el gen, el sitio de inicio de la transcripción (TSS) se llama +1. Todo lo que está
corriente arriba es negativo.
• El orden es: Promotor, Shine-Dalgarno, TSS y terminador.
• Para ver qué tipo de proteína se produce, se utiliza la técnica PCR.
• Siempre que se va a transcribir, el ADN se representa con dos hebras, y los genes se
representan en dos hebras.
• Solo una de las 2 hebras tiene la información para la síntesis de la proteína o del ARN.

Cadena Codificante

• Es la cadena que contiene la información para la síntesis de la proteína.


• No es la cadena molde. Es la que contiene el gen.

Cadena Molde

• Es la cadena que realmente usa la enzima como molde para sintetizar el ARN mensajero.
• Es la cadena complementaria a la cadena codificante.

Factor de Transcripción Sigma

• Es el primer factor o la primera enzima que comienza el proceso de transcripción. Es la


proteína que realmente regula el proceso de la expresión de los genes.
• Las ARN polimerasas no reconocen nada. Solo reconocen al promotor porque la
subunidad sigma está pegada al promotor.
• Sigma localiza 2 sitios que se unen al surco menor y al surco mayor del ADN. Es la que
reconoce dónde está el promotor.
• Como estos 2 sitios están a -10 y a -35, se encuentran corriente arriba del TSS.
• Se encuentran adentro del promotor. -10 es la caja TATA. -35 es TAGACA.
• La caja TATA es rica en adeninas y timinas.
• Estos dos sitios son los que van a ser reconocidos por Sigma.
• Los factores sigma dependen del tipo de gen que se encuentre codificado.
• Son las secuencias que se encuentran corriente arriba del gen.
• El sitio de inicio de la transcripción (TSS) está dentro del gen.
• Esta zona no se transcribe.
• UTR → Untranslated region.

ARN Polimerasa

• En procariotas hay una sola ARN polimerasa compleja.


• La ARN polimerasa tiene 2 subunidades α, que van a agarrar las hebras de ADN para que
pueda desplazarse la ARN polimerasa.
• Tiene una subunidad ϖ (omega) en la parte de atrás, que restaura la función de la ARN
polimerasa para que se forme la enzima in vitro.
• Tiene una subunidad β′ y una subunidad β, que se encargan de 2 cosas, respectivamente:
1. Hidrolizar ATP para obtener energía y desplazarse.
2. Colocar los ribonucleótidos para sintetizar la molécula de ARN.

Transcripción en Procariotas

• La transcripción es uno de los procesos más regulados a nivel de la célula.


• Los procariotas tienen una secuencia promotora, una secuencia terminadora y entre
ellas uno o varios genes.
• Cada gen debe tener una región de unión al ARN ribosomal, que se encuentra en la
subunidad menor del ribosoma, y un sitio de inicio de la transcripción (+1).
• La hebra que contiene la información recibe el nombre de cadena codificante.
• La hebra complementaria recibe el nombre de cadena molde, ya que es la que se utiliza
para sintetizar la hebra de ARN.
• Cuando se transcribe el gen, se produce un ARN.
• La ARN polimerasa copia complementario a la cadena molde. Como se habla de ARN, se
va a encontrar uracilo en lugar de timina.
• La cadena molde debe estar en dirección 3’ – 5’ porque la síntesis siempre se da en
dirección 5’ – 3’.
• Si la cadena que se va a copiar está en dirección 5’ – 3’, debe ser volteada.
• Teniendo en cuenta el código genético, se determinan los aminoácidos.
• La traducción va en dirección N – C. La N representa el grupo amino y la C el grupo
carboxilo de los aminoácidos.
• El triplete inicial es AUG y codifica para metionina.
• Los codones STOP o de terminación son UAA, UAG y UGA.
• Si la cadena proteica se pasa del STOP, la proteína no va a ser funcional.
• Cuando la proteína se sintetiza es una proteína lineal, y debe plegarse para formar una
estructura tridimensional. Si es muy grande o muy pequeña, no va a lograr tener esta
conformación 3D, que es lo más importante porque ayuda a encontrar los sustratos.
• Las mutaciones cambian los aminoácidos, cambiando así la forma de la proteína.

Factores o Subunidades Sigma

• Son los encargados del inicio de proceso de transcripción.


• Son subunidades, es decir, proteínas pequeñas que cumplen una función.
• Son capaces de localizar la zona promotora porque se encargan de hallar dos regiones
conocidas como zonas consenso, que se encuentran en los promotores.
• Los promotores en eucariotas y en procariotas van a tener 2 zonas promotoras.
• Las zonas promotoras en casi todos los organismos procariotas se encuentran en las
regiones -10 y -35.
• La región -10 recibe el nombre de Caja TATA.
• La región -35 tiene una secuencia, que es TAGACA.

Tipos de Subunidades Sigma

• Hay diferentes tipos de subunidades sigma y dependen de la actividad del gen.


• 𝛔70 → Su uso es general. En -35 se encuentra TAGACA y en -10 la caja TATA. Regula los
genes que tienen que ver con las necesidades básicas diarias de las bacterias.
• 𝛔32 y 𝛔24 → Su uso es el choque térmico. Las proteínas de choque térmico ayudan a la
bacteria a sobrevivir cambios drásticos de temperatura.
• 𝛔54 → Su uso es la descomposición del nitrógeno.
• 𝛔28 → Su uso es la síntesis de flagelos. El gen codifica para la flagelina. En algunas
bacterias, el flagelo solo se sintetiza bajo ciertas condiciones ambientales.
• Cada tipo de sigma reconoce una secuencia promotora diferente en -10 y en -35.

Inicio de la Transcripción

• La subunidad sigma le indica a la ARN polimerasa el sitio donde está el promotor, que es
el lugar donde se debe unir la enzima.
• La superficie de la subunidad sigma es muy afín a la ARN polimerasa.
• La ARN polimerasa, se pega a la sigma, y juntas empiezan a desplazarse por toda la
cadena molde de ADN hasta localizar el punto +1, donde empiezan a copiar el ARN.
• La molécula de ADN está supraenrollada. Cuando se desenrolla el primer giro, el proceso
es complejo. En la transcripción no existen helicasas ni topoisomerasas.
• La ARN polimerasa separa la zona donde está el punto +1 y va a empezar a copiar
complementario al molde.
• Se va a llevar a cabo una síntesis completa de ARN, pero si durante el proceso logran
desarrollar menos de un giro (menos de 10 nucleótidos) y se detiene el proceso, se llama
transcripción abortiva.
• En la mitad del giro no hay surcos, y la subunidad sigma se desprende del complejo. Al
desprenderse, desprende la ARN polimerasa y se acaba el proceso.
• El pedazo de ARN que lograron sintetizar es degradado por la célula.
• Normalmente, ocurren entre 9 y 10 transcripciones abortivas antes de que se de una
transcripción normal.
• Si logra pasar el primer giro de vuelta, va a terminarse el proceso. Para que se de una
transcripción exitosa, se deben colocar por lo menos 10 nucleótidos.
• Apenas pasa el primer giro de vuelta, la subunidad sigma se desprende del complejo y
quedan solamente las dos α, ϖ, la β y la β’ de la ARN polimerasa haciendo el proceso.
• La subunidad sigma solamente trabaja durante el inicio del proceso de la transcripción.

Elongación o Alargamiento

• Es en este momento que se da el paso de elongación o alargamiento, cuando la molécula


de ARN empieza a crecer por la adición de nucleótidos por la ARN polimerasa.
• El ARN se encuentra unido a la cadena molde de ADN mediante puentes de hidrógeno,
formado el complejo híbrido ADN-ARN.
• En el caso de que la célula necesite de la proteína rho para la terminación, en esta fase,
Rho se sube en el extremo 5’ y se desplaza a lo largo del ARN que se está sintetizando,
hidrolizando ATP en el proceso.

Terminación
• La ARN polimerasa se encuentra con la secuencia terminadora.
• En la secuencia terminadora, hay muchos pares A-T.
• La ARN polimerasa casi nunca atiende la señal de terminación. A pesar de que haya un
pare, la enzima continúa el proceso.
• Debido a que el proceso es sumamente regulado e importante, existen otros
mecanismos para detener el proceso. Se basan en estructuras secundarias.
• Una de las formas de terminar la síntesis de ARN es mediante la formación de estructuras
secundarias de ARN, que se llaman tallos y bucles.
• Corriente abajo del terminador en los ARN, en el extremo 3’ del ARN, existe una
secuencia palíndroma en tándem, repetida n cantidad de veces.
• Estas secuencias repetidas en tándem no codifican para nada.
• Entre secuencias, se van a encontrar varios nucleótidos diferentes.
• Una secuencia palíndroma se da cuando al leerla en dirección 5’ – 3’, es igual que al leer
su secuencia complementaria en dirección 5’ – 3’.
• Cuando una secuencia es palíndroma, entre nucleótidos de una misma hebra se pueden
formar puentes de hidrógeno, dando origen a tallos y bucles.
• Cuando la ARN polimerasa no pone atención a la secuencia de terminación, sigue
copiando información, pero lo que se está generando es complementario entre sí.
• Se forman enlaces puentes de hidrógeno y se originan las estructuras secundarias, que
interfieren con el desplazamiento de la enzima.
• Al hacer ese tipo de interferencia, la enzima no puede continuar, por lo que se detiene y
se desprende el ARN del complejo ARN-ADN.
• Otra forma de terminar el proceso de transcripción es la terminación por acción de la
proteína rho, que es una proteína grande, formada por 6 subunidades.
• La proteína rho es muy afín al ARN, específicamente a la secuencia que se encuentra en
el extremo 5’ del ARN (Shine-Dalgarno).
• Si la célula tiene la proteína rho sintetizada previamente, ese será el mecanismo que se
va a utilizar para la terminación del proceso de transcripción.
• La proteína rho se monta al extremo 5’ de la molécula de ARN en la fase de elongación y
se desplaza a través del ARN por hidrólisis de ATP.
• Llega un momento en el que debido al peso que tiene rho, se acerca tanto al complejo de
transcripción que desprende el ARN que se está sintetizando.
• Cuando lo desprende, se acaba el proceso de síntesis.
• La proteína rho se va a unir al ARN y va a permitir que el ARN se desprenda del complejo
híbrido ADN-ARN.
• Si el ARN no se sintetiza completamente, no va a llegar al ribosoma.

Procesamiento de la Transcripción

• Antes de llegar al ribosoma, el ARN pasa por otros estadíos. Por lo tanto, si el ARN no
está completo no va a haber síntesis de proteínas.
• La célula degrada el ARN no funcional antes de llegar al ribosoma. Utiliza los
ribonucleótidos para sintetizar otro tipo de ARN.
Pasos de la Transcripción en Procariotas

Fase de Iniciación

1. La subunidad sigma localiza las zonas consenso (-10 y -35) en el promotor y le indica el
sitio a la ARN polimerasa.
2. La ARN polimerasa se pega a la subunidad sigma y juntas se desplazan hasta el sitio de
inicio de la transcripción (TSS), que se encuentra en la posición +1.
3. La ARN polimerasa separa la zona del TSS, que se encontraba enrollada, y a partir de
ahí empieza a sintetizar el ARN complementario a la cadena molde, junto con la
subunidad sigma, en dirección 5’ – 3’.
4. Si no logran colocar más de 10 nucleótidos (un giro de vuelta), el proceso se detiene y el
fragmento de ARN se degrada. Esto se conoce como transcripción abortiva.
5. Si logran colocar más de 10 nucleótidos, en el instante en que terminan de sintetizar el
ARN para el primer giro de vuelta, la subunidad sigma se desprende y queda la ARN
polimerasa sola para terminar el proceso.

Fase de Elongación

6. Por su cuenta, la ARN polimerasa continua colocando ribonucleótidos, lo que causa el


crecimiento de la molécula de ARN.
7. Si la proteína rho se va a utilizar para la terminación, se sube al extremo 5’ del ARN y
empieza a hidrolizar ATP para desplazarse a lo largo de la cadena que se está formando.

Fase de Terminación

Forma 1

8) La ARN polimerasa se encuentra con la secuencia terminadora y así finaliza el proceso


de transcripción.

Forma 2

8. La ARN polimerasa se encuentra con la secuencia terminadora.


9. A pesar de esto, la ARN polimerasa sigue copiando información, pero la información
que está copiando es una secuencia palíndroma en tándem.
10. Como es así, se forman enlaces puentes de hidrógeno entre los nucleótidos de la misma
hebra, dando lugar a estructuras secundarias de ARN, conocidas como tallos y bucles.
11. Los tallos y bucles interfieren el paso de la ARN polimerasa, causando que se detenga y
se desprenda el ARN del complejo híbrido ADN-ARN.

Forma 3

8. La ARN polimerasa se encuentra con la secuencia terminadora y frena.


9. La proteína rho se acerca mucho al complejo de transcripción y, por su gran peso, el
ARN que se está sintetizando se desprende.
10. Se acaba el proceso de síntesis de ARN al desprenderse el fragmento de ARN, la ARN
polimerasa y la proteína rho.

Regulación de la Transcripción Procariota

• El primer modelo que explica cómo los procariotas regulan la expresión de sus genes es
el operón lac (operón lactosa). El gen se llama lac.
• Solamente en procariotas, existe una estructura genómica que se llama operón.
• Operón → Es un componente del genoma procariota. Está representado por un
promotor, más de un gen y un terminador.
• Los eucariotas solo tienen un gen entre promotor y terminador.
• En bacterias, existen dos tipos de regulación:

1. Regulación Inducible → Induce el proceso.


2. Regulación Represible → Evita que se de el proceso.

Operón Inducible

• El operón lac es un operón inducible. Esto significa que existe una molécula que induce o
que hace posible que se de el proceso.
• Los genes que se encuentran codificados en el operón se van a expresar solamente si esa
molécula induce su expresión.
• El operón lac fue creado por Jacob y Monod.
• La lactosa es la molécula que induce a los genes del operón lac.
• Si la bacteria no está en un medio donde hay lactosa, no sintetiza las enzimas que le
permiten degradar lactosa.
• Si la bacteria está en un medio donde hay lactosa, inmediatamente empieza a sintetizar
las enzimas que le permiten utilizar la lactosa.
• El operador se encuentra entre el promotor y los genes, y es el segundo regulador,
además del promotor.
• Al igual que el promotor, el operador es una secuencia que no codifica para nada, pero
que regula la expresión de un gen.
• El operador sirve como sitio de unión de los represores y de los inductores, que son
proteínas. De esta manera, regulan la expresión de los genes.
• Los genes que se encuentran en el operón lac codifican para tres proteínas distintas, que
son la 𝛃-galactosidasa, una permeasa (proteína transportadora) y una transacetilasa.
• Las 3 proteínas se encargan de dos cosas:

1. Introducir la lactosa al interior de la célula (permeasa).


2. Degradar la lactosa, rompiendo el enlace glucosídico entre la glucosa y la galactosa.

• Cuando la célula está en un medio en el que hay lactosa, debe sintetizar las enzimas, ya
que necesita de ellas para utilizar la lactosa.
• La permeasa es necesaria para introducir la lactosa al interior de la bacteria.
• La transacetilasa trabaja en un proceso de cambio de conformación de la lactosa cuando
está en el interior de la bacteria.
• La 𝛃-galactosidasa va a permitir la degradación de la lactosa a glucosa y galactosa para
que los monosacáridos estén disponibles, y la célula pueda hacer procesos internos con
el fin de obtener energía.
• Corriente arriba del promotor, bien lejano del promotor, se encuentra el represor lac.
• El represor lac o gen lacIq es un gen que codifica para una proteína represora.

Medio sin Lactosa

• Cuando no hay lactosa en el medio, el represor lac es codificado como si fuera un gen
normal, iniciado por la subunidad 𝛔70.
• Como no hay lactosa, es normal que los genes del operón lac no se expresen.
• Para que no se expresen, el represor lac debe estar expresado.
• El represor lac se codifica para producir el represor, que es una proteína que se tiene la
capacidad de unirse al operador.
• Cuando el represor se une al operador, la subunidad 𝛔70 no se puede unir al promotor y
por lo tanto, la ARN polimerasa no puede transcribir la información que tienen los genes.
• El represor bloquea la expresión de los genes en el operón lac porque está viviendo en
un medio donde no hay lactosa.
• En ausencia de lactosa, el represor se une al operador y bloquea la expresión genómica.

Medio con Lactosa

• Cuando hay lactosa en el medio, la bacteria necesita sintetizar las proteínas que le van a
permitir introducir la lactosa para utilizarla como fuente de energía.
• La lactosa que está en el medio es utilizada para inducir la expresión de los genes. Se une
covalentemente al represor y lo bloquea para que no pueda unirse al operador.
• Si el represor no se puede unir al operador, la ARN polimerasa y la subunidad 𝛔70 se
pueden unir al promotor y se pueden expresar los genes.
• La expresión de los genes da como producto las proteínas que permiten introducir la
lactosa al interior de la célula.
• En presencia de lactosa, la lactosa se une al represor, bloqueándolo, y al estar bloqueado
no se puede unir al operador. La ARN polimerasa puede expresar los genes.

Operón Represible

• El operón trp (operón triptófano) es un operón represible.


• Las bacterias tienen la capacidad de sintetizar triptófano.
• Si hay triptófano disponible en el medio, bloquea la expresión de los genes que sintetizan
triptófano porque es más fácil absorberlo del medio que sintetizarlo. Gasta menos ATP.
• El triptófano disponible en el medio cambia la conformación del represor.
• El represor se une al operador y bloquea la expresión de los genes para sintetizar Trp.
• La bacteria necesita triptófano para producir sus proteínas, ya que es un aminoácido.
En el caso de la lactosa (operón inducible), se bloquea el represor porque es necesario
que se sinteticen las proteínas que van a permitir absorberla.
En el caso del triptófano (operón represible), se bloquea la producción de las proteínas
que lo sintetizan en la célula.
Estos dos modelos son los más comunes de regulación.

Transcripción en Eucariotas

• La estructura del genoma eucariota consiste de genes.


• Mientras que los genes de los procariotas no tienen regiones no codificantes, los genes
eucariotas están constituidos por regiones codificantes y regiones no codificantes.
• Las regiones codificantes reciben el nombre de exones.
• Las regiones no codificantes reciben el nombre de intrones.
• Exón 1 + exón 2 + exón 3 + exón 4 codifican para un solo gen.
• Los intrones no codifican y deben ser escindidos del gen para que pueda ser funcional.

ARN Polimerasas

• En los seres humanos existen tres ARN polimerasas.


• ARN polimerasa I → Se encarga de la transcripción de genes ribosomales, que son los
que contienen la información para sintetizar ARN ribosomal. Se localiza en el nucléolo.
• ARN polimerasa II → Se encarga de sintetizar los ARN mensajeros, que van a ser
traducidos a proteínas. Se localiza en el nucleoplasma.
• ARN polimerasa III → Se encarga de sintetizar los genes de ARN de transferencia y ARN
pequeños, que son los que actúan como intermediarios en la síntesis de proteínas. Se
localiza en el nucleoplasma también.
• Las ARN polimerasas en los eucariotas son más grandes y más especificas que la ARN
polimerasa de los procariotas.
• La 𝛂-amanitina es un compuesto que se encuentra en los hongos. Es capaz de inhibir la
expresión de ciertos genes al inhibir la ARN polimerasa II. Afecta a todas las polimerasas,
pero la II es la más sensible.

Transcripción del Gen

• Solamente la unión de los exones va a producir un ARN mensajero estable, que al final
va a ser traducido en una proteína.
• Los intrones no codifican para nada, pero en algunos casos regulan el proceso.
• Cuando se da el proceso de splicing (corte y empalme), el ARN actúa como si fuera una
enzima, que se conoce como ribozima.
• Sin necesidad de ninguna proteína, la ribozima es capaz de catalizar la escisión de esos
fragmentos de ARN (intrones).

Transcripción en Eucariotas
• Cuando se da el proceso de transcripción, se copia en la misma dirección que en los
procariotas, de 5’ a 3’.
• Hay una cadena codificante y una cadena molde. Se produce ARN mensajero.
• En los organismos eucariotas, no existe la secuencia Shine-Dalgarno.
• Después de sintetizar el ARN, se da un proceso adicional que se llama adición de la
estructura cap.

Estructura Cap y Metilación en el Extremo 5’

• La estructura cap es la adición de unas guaninas en el extremo 5’ del ARN mensajero que
se acaba de sintetizar.
• A diferencia de las uniones normales, la estructura cap no va en dirección 5’ – 3’, sino en
dirección 5’ – 5’.
• En el extremo 5’ del ARN, se va a unir otro extremo 5’. Esto hace que la estructura
adquiera una forma de gancho.
• Cuando el ARN recibe la estructura cap, inmediatamente se pliega formando un gancho.
• En la subunidad menor del ribosoma, hay un canal. El cap en forma de gancho permite
que el ARN mensajero se enganche en el ribosoma para evitar salirse.

Poliadenilación del ARNm

• Se agrega una cola de poli-A al ARN mensajero.


• Una polimerasa le va a agregar una secuencia de adeninas (AAAAA) n cantidad de veces
al extremo 3’ del ARN mensajero.

Corte y Empalme o Splicing

• Cuando el ARN recibe el cap y la cola poli-A, viene a darse el proceso de corte y empalme.
• En este proceso, se cortan los intrones y se pegan los exones, dando como resultado un
ARN mensajero maduro que puede llegar al ribosoma.
• El ARN mensajero viaja al citoplasma para que se lleve a cabo la síntesis de la proteína en
los ribosomas.

Procesamiento de los ARN Ribosomales

• Siempre se empieza a partir de un único ARN ribosomal precursor, que posteriormente


se va a escindir con ayuda de una endonucleasa.
• Como resultado de la escisión, el ARN ribosomal da 2 fragmentos de ARN ribosomal.
• El precursor es de 80s y los dos nuevos son de 20S y de 32S.
• El 20S vuelve a sufrir una modificación, acortándose y convirtiéndose en 18S.
• El 32S sufre una modificación, acortándose y origina el 28S y el 5.8S.
• El 18S es el que está en la subunidad menor, en contacto con el ARN mensajero, y el 28S
y el 5.8S están en la subunidad mayor.
• El 5S es transcrito por la ARN polimerasa III, que es la de los ARN de transferencia.
• De esta manera se da la formación de las subunidades de los ribosomas.
• Este proceso se lleva a cabo en el nucléolo.
Procesamiento de los ARN de Transferencia

• La región de 16 nucleótidos en el extremo 5’ es escindida por una ARNasa P.


• El intrón de 14 nucleótidos en la región anticodón del ARNt es removido por escisión.
• Los residuos de U en el extremo 3’ son reemplazados por una secuencia CCA.
• Algunas bases nitrogenadas son reemplazadas por dihidrouridina (D) y pseudouridina.

Terminación de la Transcripción en Eucariotas

• En el caso de la ARN polimerasa II, que es para los ARNm, funciona como la secuencia de
terminación en procariotas. Hay una secuencia que se encuentra corriente abajo de la
cola poli-A que permite que ahí se termine el proceso.
• En el caso de la ARN polimerasa I, que es para los ARNr, termina la transcripción
mediante la unión de una proteína de terminación, que se une al ADN y disocia el
complejo ADN-ARN.
• En el caso de la ARN polimerasa III, que es para los ARNt, forma una secuencia de poly-U
que induce la separación del complejo ADN-ARN.

Regulación de la Transcripción Eucariota

• Hay varios obstáculos que ayudan a regular la transcripción y están relacionados con la
presencia de los nucleosomas (ADN y proteínas histonas).
• Es un tipo de enrollamiento que también dificulta encontrar la región promotora.
• Participan varias proteínas que se pueden unir a la polimerasa para regular el proceso.
• La regulación en los eucariotas viene dada por el tipo de genes.
• Hay una región promotora. Tanto en procariotas como en eucariotas, existe una zona
consenso, similar en cuanto a secuencias.
• Los eucariotas no tienen región -35. Tienen una región a -60, que también tienen los
procariotas, que se conoce como UAS.
• Corriente abajo del promotor, se encuentra el sitio de inicio de la transcripción.
• No se conoce realmente cómo se regulan los genes, pero hay modelos.

Factores Reguladores de la Transcripción Eucariota

• UAS → Upstream Activating Sequence. Es una secuencia activadora que se encuentra


corriente arriba del promotor. Como es activadora, facilita el proceso de síntesis.
• Silenciador → Secuencia de ADN que bloquea el proceso de síntesis. Necesita que se una
a él una proteína, que realmente es la que va a cumplir la función de bloqueadora del
proceso de transcripción.
• Enhancers → Son secuencias de ADN que promueven, facilitan y aceleran la expresión de
un gen. Las secuencias enhancer casi nunca están cercanas a las regiones promotoras o
cercanas a los genes. Se encuentran distantes del gen que van a regular. Para poder
regular la expresión del gen, el enhancer debe plegarse. Al plegarse, forma estructuras
que hacen viable que la enzima pueda empezar el proceso de síntesis, ya que evitan que
se vuelva a formar el complejo del nucleosoma.
• Histonas → Son un factor determinante para que se pueda llevar a cabo la expresión de
los genes.
• BRE → Binding Response Elements. Son proteínas que se unen a secuencias cercanas a la
zona promotora que regulan el proceso. Dependiendo de la unión de las proteínas, se va
a dar o no el proceso de transcripción. Se encuentran corriente arriba del gen.
• Las proteínas activadoras se unen al enhancer y a proteínas relacionadas con la TATA
box. Al unirse a los enhancer, forman estructuras complejas que le indican a la ARN
polimerasa dónde iniciar el proceso de síntesis de ARN.

Tipos de Ensamblaje en la Transcripción de Genes Eucariotas

• Las proteínas de cada tipo son diferentes porque los genes que regulan son genes
diferentes. El ser humano es multicelular y tiene tejidos. Debe haber proteínas que
regulen la expresión de genes específicos de un tejido.
• Los modelos de regulación de los genes de mantenimiento celular y de los genes de
tejido específico son muy similares. Comparten ciertas proteínas.
• La regulación de los genes de replicación es completamente diferente.

Genes de Mantenimiento Celular

• La gran mayoría de genes son housekeeping genes. Se encargan de que la célula


funcione diariamente.
• Los genes que contienen información para proteínas que hacen este tipo de función
tienen 4 características:

1. En el promotor se va a encontrar la TATA box, a la cual se van a unir unas proteínas


que se van a encargar de controlar la acción de la ARN polimerasa II.
2. Las cajas o islotes GpC (guanina citosina) son importantes. La “p” representa el
enlace fosfodiéster e indica que están en una misma hebra. Se necesita que estén en
una misma hebra porque se transcribe una sola hebra. Se cree que hacen parte de
los enhancers, que aceleran el proceso de transcripción.
3. Los CRSP son proteínas que se van a unir a la región enhancer y van a ayudar a que
se lleve a cabo el proceso de manera más rápida. El ADN tiene carga negativa. Las
histonas tienen carga positiva. Cuando el ADN se desenrolla, la proteína se une al
enhancer para evitar que se vuelva a formar el complejo.
4. Los factores de transcripción se van a unir a la proteína TBP, que asemeja a la sigma
en procariotas. Tienen sitios de unión para los activadores, que se unen a ellos y a los
enhancer para permitir que la ARN polimerasa reconozca el sitio de inicio.

Genes Específicos de un Tejido

• En el caso de tejidos que deben cumplir una función específica, van a existir un tipo de
proteínas específicas que van a ayudar o bloquear el proceso de síntesis.
• Si estamos hablando de genes específicos de un tejido, vamos a encontrar:
1. La TATA box. Aquí se van a unir varias proteínas, la mayoría factores de transcripción
(TF). Los números al lado de TF indican con qué ARN polimerasa funcionan.
2. Es importante un enhancer, al cual se van a unir proteínas específicas de ese tejido.
Es el caso de las hormonas, que solo actúan sobre un tejido específico porque es la
secuencia a la cual se pueden unir.

Genes de Replicación del ADN

• Los genes que codifican para proteínas que funcionan en el proceso de replicación y
regulación del ciclo celular tienen una manera específica de hacer la regulación.
• Las proteínas que actúan ahí nada mas funcionan para los genes que están implicados en
la replicación del ADN.
• Cuando estas proteínas que regulan la replicación y el ciclo celular no se están
produciendo por alguna mutación, la replicación no es regulada y se da el cáncer.
• La mutación puede alterar las secuencias de regulación del ADN a las cuales se deben
unir las proteínas o alterar la secuencia en la que se producen estas proteínas.
• Por lo tanto, la regulación del proceso de replicación es completamente diferente de la
regulación que se hace para el resto de genes que mantienen un organismo.

Proteína TBP

• La proteína TBP (TATA Binding Protein) hace la función del sigma procariota en
eucariotas. Se une al TATA box.
• Se encuentra en los genes de mantenimiento celular y en los genes de tejido específico.
• En los genes de la replicación, no trabaja la TBP, pero sí una proteína muy semejante que
recibe el nombre de DREF.

Elementos de Respuesta

• Hay elementos de respuesta para proteínas de choque térmico, glucocorticoides,


feromonas, entre otros compuestos.
• Estos elementos de respuesta son proteínas que se unen a secuencias determinadas y
activar el proceso de síntesis de una proteína determinada.

Traducción

Ribosomas

• Son ribonucleoproteínas porque están compuestos de ácidos ribonucleicos.


• Se localizan en el citosol celular. Tienen subunidad mayor y subunidad menor.
• La subunidad menor siempre va a contener un solo tipo de ARN ribosomal.
• Hay 2 tipos de ribosomas, de procariotas y de eucariotas. Tienen diferente ARN,
coeficiente de sedimentación y diferentes proteínas conformándolos.
• Los ribosomas se ensamblan en los nucléolos, ya que ahí se lleva a cabo la transcripción
del ARN ribosomal.
Ribosomas de Procariotas

• Subunidad Mayor → ARN ribosomal 23S y 5S y 31 proteínas (L1-L31). 50S.


• Subunidad Menor → ARN ribosomal 16S y 21 proteínas (S1-S21). 30S.
• En total, hay 52 proteínas diferentes y 3 tipos de ARNr en el ribosoma eucariota.
• Este ribosoma tiene un coeficiente de sedimentación de 70S.
• Aunque la subunidad mayor tenga un coeficiente de sedimentación de 50S y la menor de
30S, la unión de ambos da 70S porque tiene que ver con la densidad.

Ribosomas de Eucariotas

• Subunidad Mayor → ARN ribosomal 28S, 5S y 5.8S y 50 proteínas (L1-L50). 60S.


• El ARNr 5.8S está solamente en los protozoarios.
• Subunidad Menor → ARN ribosomal 18S o 19S y 33 proteínas (S1-S33). 40S.
• El ARNr 19S está solamente en los protozoarios.
• La subunidad mayor tiene un coeficiente de sedimentación de 60S y la menor de 40S,
pero el coeficiente de sedimentación de todo el ribosoma es de 80S.

ARN Mensajero

• Es sintetizado en forma primitiva. Sufre unas modificaciones y se vuelve ARNm maduro.


• En forma de ARNm maduro, sale del núcleo hacia el citosol, dirigido por las porinas, que
se encuentran a nivel de la membrana nuclear
• Porinas → Complejos de 18-19 proteínas que forman fibras proteicas y que actúan
polimerizándose (agrandándose) y depolimerizándose (encogiéndose), como lo hace la
actina en el citoesqueleto.
• Cuando las porinas se agrandan y se encogen, las fibras realizan un movimiento.
• El ARNm se adhiere a las fibras y se ayuda de su movimiento para pasar del núcleo al
citosol. Se ensambla con la subunidad menor del ribosoma.
• Las porinas son muy específicas porque todas las sustancias que entran y salen del
núcleo pasan por ahí.

Ensamblaje del Ribosoma

• En la traducción procariota, el ensamblaje se da a nivel de la secuencia Shine-Dalgarno


en el extremo 5’ del ARN mensajero.
• La subunidad menor del ribosoma procariota (16S) tiene la secuencia complementaria.
• Se forman puentes de hidrógeno entre ellas y la subunidad mayor se ensambla para
empezar la síntesis de proteínas.
• En la traducción eucariota, no hay secuencia Shine-Dalgarno. En el extremo 5’ del ARNm
se encuentra la estructura cap (unión 5’-5’ con guaninas), que permite que el ARNm se
enganche a la subunidad menor del ribosoma.
• Luego se ensambla la subunidad mayor para empezar el proceso de síntesis de proteínas.
Polirribosomas

• Un ARNm puede ser leído por más de un ribosoma al tiempo.


• Reciben el nombre de polirribosomas porque actúan al mismo tiempo sobre el ARNm,
sintetizando varias copias del mensaje para sintetizar varias copias de las proteínas.
• Estas proteínas reciben el nombre de proteínas constitutivas, que son las necesarias para
el funcionamiento diario de la célula.

Código Genético

• Es el “diccionario” que permite pasar del lenguaje de los ribonucleótidos al lenguaje de


los aminoácidos.
• Muestra la equivalencia entre los tripletes o codones y sus respectivos aminoácidos.
• Consta de 64 codones, pero solo 61 codifican para aminoácidos.
• Los otros 3 son codones de terminación (UAA, UAG, UGA). Recibieron el nombre de
piedras preciosas y no codifican para aminoácidos.
• Para todas las proteínas procariotas y eucariotas, el codón de inicio es AUG. Codifica para
el aminoácido metionina en eucariotas o formil-metionina en los procariotas.
• La formil-metionina de los procariotas lleva un grupo formilo.
• Ninguna proteína activa o madura conserva la metionina en el extremo N.
• Cuando se sintetiza la proteína, se encuentra en forma inmadura, inactiva o primaria.
• Debe ser procesada para generar una proteína madura, activa y funcional. Durante esta
activación, siempre se pierde la metionina.
• La hebra de ADN que contiene la información de la secuencia que se va a utilizar en el
código genético es la hebra codificante. El gen contiene la información de la proteína.
• Si se va a hacer todo el proceso de copiado para obtener el ARNm que tenga la
información de la hebra codificante, se utiliza la hebra molde.
• También hay códigos genéticos para los desoxirribonucleótidos.

ARN de Transferencia

• Al mismo tiempo que se da el proceso de transcripción de ARNm, se están transcribiendo


muchos ARN de transferencia. Cada uno de ellos tiene su propio gen.
• Los ARN de transferencia son específicos para aminoácidos. Solo se pueden unir a uno.
• En el citosol, va a haber un pool de ARN de transferencia.
• Hay aminoácidos que están codificados por más de un triplete. Solo 20 son proteicos.
• Los ARN de transferencia tienen una región llamada región anticodón, donde se
encuentra el triplete complementario al del codón en el código genético.
• Los ARNt normalmente se encuentran en forma inactiva. Para poder cargarse con un
aminoácido, debe darse una reacción enzimática.
• La enzima responsable del proceso es la aminoacil-tRNA-sintetasa. Es especifica para el
ARNt de cada aminoácido. Ejemplo: Aminoacil-fenilalanina-tRNA-sintetasa.
• La enzima se va a encargar de unir el aminoácido al extremo 3’ del ARN de transferencia,
que pasa a estar activado.
• La unión se va a hacer entre el grupo carboxilo del aminoácido y el extremo 3’ del ARNt.
• Una vez está activado, puede ingresar a la zona A de la subunidad mayor del ribosoma,
en donde se va a ensamblar con el codón utilizando su región anticodón.
• De esa manera, va a comenzar a unir los aminoácidos mediante enlaces peptídicos en la
zona P o peptidili, creando una cadena polipeptídica.
• Los ARNt salen por la zona E.

Pasos de la Traducción

• El ARNt activado llega a la zona A con su aminoácido.


• Cuando llega el siguiente ARNt, con el aminoácido correspondiente al siguiente codón del
ARNm, el ARNt anterior se corre a la zona P y el nuevo ARNt se une a la zona A.
• El ARNt de la zona P, por un proceso de translocación, forma un enlace peptídico entre el
aminoácido que él tiene y el aminoácido del ARNt que llegó a la zona A. Le pasa el
aminoácido al ARNt de la zona A, que va a pasar a la zona P.
• El ARNt que se encontraba en la zona P sale por la zona E (exit).
• La zona P siempre va a estar ocupada.

Etapas de la Traducción

Etapa de Iniciación

• En los procariotas, el inicio se da por la unión de la secuencia Shine-Dalgarno del ARNm a


la secuencia complementaria en el ARN ribosomal 16S, que hace parte de la subunidad
menor del ribosoma. Se da por puentes de hidrógeno.
• Esta unión permite que haya una buena orientación del ARNm y evita que el ARNm se
salga del complejo ribosómico.
• En los eucariotas, el inicio se da por la unión entre la estructura cap del ARNm y la
subunidad menor del ribosoma.
• De esta manera, se puede llevar a cabo el proceso de síntesis de proteínas.

Elongación

• Los ARNt se cargan con el aminoácido correspondiente y lo llevan a la subunidad mayor


del ribosoma (zona A). El primero es metionina.
• Su región anticodón se une con el codón del ARNm.
• Se da el proceso de formación del enlace peptídico en la zona P.
• Los ARNt se van liberando por la zona E y se desprenden del complejo.
• Se va armando la nueva cadena polipeptídica.
• La energía para la traducción se obtiene a partir del GTP.

Terminación

• Se deben tener en cuenta los codones de terminación (UAA, UGA, UAG).


• Cuando el ribosoma encuentra estos codones, inmediatamente se detiene todo el
proceso porque no hay ARNt que tenga anticodón para estos codones.
• Culmina el proceso de la síntesis de proteínas.
• La proteína que está recién sintetizada tiene una secuencia señal que le indica dónde va
a realizar su función, dentro o fuera de la célula.

Trafico Intracelular

• Muchas enfermedades genéticas se deben a que las secuencias señales se pierden o no


son reconocidas por los receptores a nivel de membrana.
• En algunas ocasiones, el ribosoma sintetiza la proteína y esta ingresa inmediatamente al
retículo endoplasmático rugoso para ser enviada al exterior a través del aparato de Golgi.
• Las hormonas de tipo proteico son un ejemplo de proteínas que actúan en un lugar
diferente a aquel donde fueron sintetizadas.

Modificaciones Post-Traduccionales de las Proteínas

• Las proteínas recién sintetizadas son inmaduras. No pueden cumplir ninguna función.
• Después de que las proteínas son sintetizadas, deben sufrir unas modificaciones para
obtener funcionalidad. La mayoría de las modificaciones son químicas.
• Casi todas las proteínas eucariotas (más del 80%) sufren modificaciones.

Funciones de las Modificaciones

• Las modificaciones tienen como objetivo cambiar o alterar la función de la proteína.


• Buscan convertir una proteína inactiva en una proteína activa. Por esta razón, regulan la
funcionalidad de la proteína.
• A través de una degradación, pueden quitar la región que no permitía ver el péptido
señal para que este pueda llevar a la proteína al sitio donde va a cumplir su función.
• Esta es la función de localización celular.
• Al cambiar su estructura y plegarse, la proteína tridimensional puede interactuar con
otro tipo de proteínas o moléculas.

Intein Splicing

• Se da una hidrólisis intramolecular.


• Para que la proteína se vuelva activa, debe hidrolizarse una región proteica. Se da por
medio de una autoproteólisis.
• La proteína degrada parte de su estructura y se obtiene una proteína funcionalmente
activa, que puede plegarse completamente y cumplir su función.

Secuencias Consenso

• Están presentes en varios tipos de organismos.


• Indican que realmente hubo o podría haber una modificación.
• Si se conoce la secuencia consenso, se puede predecir lo que va a pasar con la proteína.
• Todas las proteínas que vayan a cumplir una misma función van a tener secuencias
señales similares. Las secuencias señales son secuencias consenso.
• Las secuencias que indican una función específica se conocen como motivos.
• Las moléculas que se unen al ADN tienen el motivo HTH, que indica que su función tiene
que ver con el ADN.

Tipos de Modificaciones

Formación de Enlaces Covalentes

• Se da principalmente en humanos.

Formación de Puentes Disulfuro

• Se forman puentes entre residuos de cisteína.


• Es muy común en la insulina, que es una molécula grande de una hebra polipeptídica.
• La insulina en realidad está formada por 2 moléculas pequeñas.
• La molécula grande sufre hidrólisis y se corta, formando 2 moléculas pequeñas que
permanecen unidas mediante enlaces disulfuro entre los residuos de cisteína.

Unión de Pequeñas Moléculas

• Se unen moléculas pequeñas a las proteínas.


• Se pueden unir grupos fosfato a las proteínas, convirtiéndolas en proteínas fosforiladas.
• Se pueden unir carbohidratos a las proteínas, como pasa en muchas bacterias. La función
antigénica viene dada por azúcares. Se unen mediante glicosilación.
• Se pueden unir grupos hidroxilo, grupos acilo, grupos metilo y grupos amida.
• También se pueden unir a otras proteínas, mediante ubiquitinación o SUMOilación, que
es un proceso mediante el cual pasan por el proteosoma y se modifican para convertirse
en proteínas estables.

Rotura de Enlaces Covalentes

• Se da por proteólisis o autoproteólisis para producir una proteína activa.

Rotura de la Secuencia Señal

• Cuando la proteína llega al sitio donde va a cumplir su función, pierde la secuencia señal
por proteólisis.

Proteólisis Intramolecular

• Se cortan secciones dentro de la propia proteína.


• Es el caso de los neuropéptidos, hormonas como la insulina, morfógenos, activación de
zimógenos y la cascada de coagulación sanguínea.
• Morfógenos → Determinan la posición de los órganos.
• Zimógenos → Enzimas inactivas. Se encuentran principalmente en el tubo digestivo y se
hidrolizan cuando entran al intestino con el pH alcalino.
Localización de las Modificaciones Post-Traduccionales

• La fosforilación y la acetilación se dan en el núcleo porque regulan señales y la división.


• En los lisosomas se rompen los restos de manosa-6-P en proteínas lisosomales.
• La N-formilación se da en la mitocondria.
• La glicosilación, la sulfatación y la palmitoilación se dan en el aparato de Golgi.
• La N-glicosilación y la unión a fosfatidil-inositol se dan en el RER.
• También se dan acetilación, metilación y fosforilación en el citosol.
• La mistirilación se da en los ribosomas.
• También hay glicosilación y unión a fosfatidil-inositol en la membrana plasmática.
• Hay glicosilación, acetilación y fosforilación en el fluido extracelular.
• Hay glicosilación, fosforilación, hidroxilación y sulfatación en la matriz extracelular.
• Los procesos son comunes y se dan en todas las regiones celulares, tanto en el interior de
los organelos como en la parte exterior de la célula.

Preproinsulina

• Es la molécula polipeptídica grande. Es 5 veces más grande que la insulina activa.


• Se forma la insulina activa (2 moléculas) por medio de una proteólisis.

Glicosilación

• Es la unión de azúcares o carbohidratos a la cadena proteica.


• Permite que la proteína cumpla diferentes funciones, entre las cuales se encuentran las
funciones externas.

Translocación al RER

• Las proteínas recién sintetizadas deben ubicarse en el sitio donde van a hacer su función.
• Deben ser guiadas hacia estos sitios por sus péptidos señales.
• Pueden ingresar al retículo endoplasmático, que las envían, cubiertas de una vesícula
membranosa, afuera de la célula o a otros organelos membranosos.
• Sin importar el tipo de transporte que realice la proteína, siempre va a estar mediado por
un péptido señal.

SRP: Partícula Reconocedora del Péptido Señal

• La SRP es la partícula reconocedora del péptido señal. Es un complejo ribonúcleoproteico


que contiene ARN con estructuras secundarias, que permiten la unión del ARN con unas
partículas de tipo proteico con funciones determinadas.
• La SRP permite que la proteína que se está sintetizando, antes de terminar el proceso de
síntesis, se acerque al retículo endoplasmático para terminar de ser sintetizada.
• Después de esto, se dan las modificaciones post-traduccionales.
• Ha sido identificada en todos los seres vivos.
• En los eucariotas, las SRP contienen 6 proteínas (P54, P72, P68, P19, P14 y P9), un ARN
7S, y 300 ribonucleótidos.
• En el ribosoma se lleva a cabo la síntesis de proteínas. Sale el extremo N, que es la
primera parte que se sintetiza, y se une a la proteína P54 por el péptido señal.
• El complejo SRP se encuentra en el citosol y se desplaza hacia un receptor a nivel de la
membrana del retículo endoplasmático rugoso.
• Se une al receptor y permite que unos canales a nivel de la membrana se abran para que
la proteína que se está sintetizando pueda ingresar.
• Una vez ingresa al retículo endoplasmático rugoso, se escinde el péptido señal.
• En los procariotas (bacterias), la SRP tiene ARN 4.5S y 1 sola proteína (FFH), que tiene la
misma función de la P54.
• En arqueobacterias, la SRP tiene ARN 7S y 2 proteínas (SRP19 y SRP54).

Funciones de las Proteínas de la SRP en Eucariotas

• P54 → Se une al péptido señal de la proteína.


• P9 y P14 → Interaccionan con el ribosoma.
• P68 y P72 → Son requeridas para la translocación del citosol al retículo endoplasmático
rugoso. Son las que abren los canales para que la proteína ingrese.
• P19 → No se sabe la función exacta, pero es requerida para formar el complejo proteico.

Proceso de Translocación

1. El ribosoma está ensamblado y se están sintetizando las proteínas. Lo primero que se


sintetiza es el extremo amino, donde generalmente se encuentra el péptido señal.

2. Las partículas SRP están libres en el citosol. En el momento en el que se está sintetizando
la proteína, la SRP, a través de la P54, se une al péptido señal.

3. Se desplaza al receptor SRP a nivel de la membrana del retículo endoplasmático rugoso y


se une a él.

4. El receptor SRP se desplaza hacia una proteína de canal. La interacción entre el receptor
SRP y la proteína de canal causa que se abra el canal. Las proteínas del canal son la Sec61
y la TRAM.

5. Al abrirse el canal, se da el proceso de translocación de la proteína hacia el lumen del


retículo endoplasmático rugoso.

6. La proteína ingresa por el extremo N, donde está el péptido señal. Unas proteasas se
encargan de cortar y degradar el péptido señal.

7. La proteína inmadura termina de ser sintetizada. Con ayuda de unos procesos,


principalmente de glicosilación, la proteína es modificada. Se pliega y se activa.
Segundo Método de Translocación

1. La proteína comienza a ser sintetizada en el ribosoma. Debe pasar por un complejo


proteico que permite revisar la estructura de la proteína para verificar que no se haya
formado una estructura secundaria. El complejo proteico tiene varias ubiquitinas.

2. La proteína que se está sintetizando, a través de una proteína de canal, es secretada en el


interior del retículo endoplasmático rugoso sin intervención de ningún tipo de proteína.

3. Sufre procesos de glicosilación en el retículo endoplasmático. Se pueden formar


interacciones hidrofóbicas, enlaces disulfuro o complejos proteicos más grandes.

4. Las proteínas cargo van a transportar a la proteína al sitio en el cual van a realizar su
función. Las llevan desde el lumen a las regiones más cercanas al aparato de Golgi

5. En el RER forman vesículas, se desprenden del RE y el aparato de Golgi las envía a los
lisosomas (proteínas anómalas) o al exterior de la célula para cumplir su función.

Complejo TAT

• Es un mecanismo específico para bacterias.


• Tiene mucha arginina con carga positiva.
• Cuando la proteína es sintetizada, los cofactores se unen a ella para volverla activa.
• Actúan proteínas canal.
• Las bacterias también sintetizan proteínas con péptidos señal.

Tipos de Proteínas

• Tipo I → Las proteínas a nivel de membrana tienen el grupo carboxilo hacia la parte
externa (citosol) y el grupo amino hacia la parte interna (retículo endoplasmático) .
• Tipo II → Pueden tener el grupo amino hacia el citosol y el grupo carboxilo hacia el RE.
• Tipo III → El plegamiento o la parte compleja de la proteína está hacia el citosol.
• Tipo IV → Forman estructuras complejas a través de la membrana. La mayoría de
proteínas de canal son de este tipo.

Glicosilación en el RER

• Se agregan carbohidratos simples y complejos a la proteína.


• Forman proteínas complejas, que pueden ser enviadas a distintas partes de la célula o al
exterior de la célula.

Proteínas Maduras

Polímeros
• Las proteínas son polímeros constituidos por aminoácidos proteicos.
• El polímero común en las proteínas tiene la estructura #3. Son heteropolímeros.
• Heteropolímeros → Están compuestas de monómeros diferentes que se encuentran al
azar a lo largo de toda la cadena.

Aminoácidos

• Solo 20 aminoácidos pueden hacer parte de las proteínas.


• Poseen un esqueleto en común. Lo que cambia es la cadena lateral R.
• Dependiendo de la cadena, están clasificados en 5 grupos.

No Polares

• La cadena lateral es no polar.


• Son glicina, alanina, valina, leucina, metionina e isoleucina.

Aromáticos

• El grupo lateral tiene un anillo aromático.


• Son fenilalanina, tirosina y triptófano.

Carga Positiva

• La cadena lateral tiene carga positiva.


• Son lisina, arginina e histidina.

Polares Sin Carga

• Son polares, pero sus cadenas laterales no tienen carga.


• Son serina, treonina, cisteína, prolina, asparagina y glutamina.

Carga Negativa

• La cadena lateral tiene carga negativa.


• Son aspartato y glutamato.

Las proteínas de medios acuosos sacan hacia el exterior los grupos cargados para que
puedan interaccionar con el medio y esconden hacia el interior los grupos sin carga.
Cambian su estructura dependiendo del medio en el cual se encuentren.
Los aminoácidos se representan con una sola letra.

Enlaces Peptídicos

• Los aminoácidos se unen por enlaces peptídicos, donde se unen el grupo carboxilo de un
aminoácido y el grupo amino de otro aminoácido.
• Para que se de la formación del enlace peptídico, se desprende agua.
Niveles Estructurales

• Tienen 4 niveles estructurales: primario, secundario, terciario y cuaternario.


• Indican la complejidad de la estructura de la proteína.
• Están relacionados con la función que cumple la proteína.

Estructura Primaria

• Muestra el orden del los aminoácidos en la cadena.


• Es la más sencilla y la inicial para la formación de una proteína activa.

Estructura Secundaria

• Se pueden formar hélices alfa o se pueden formar hojas plegadas beta.


• Para que se formen las hélices alfa, se debe formar un enlace puente de hidrógeno cada
4 aminoácidos entre el aminoácido 1 y el aminoácido 4.
• Para que se formen las hojas plegadas beta, las cadenas polipeptídicas se pliegan sobre sí
mismas. Se forman puentes de hidrógeno entre aminoácidos cercanos.

Estructura Terciaria

• Es la unión de varias hélices alfa, varias hojas plegadas beta o de hélices alfa y hojas
plegadas beta.
• Indica la forma de la proteína en el medio.
• Ya es una proteína funcional.

Estructura Cuaternaria

• Son cadenas polipeptídicas.


• Es una proteína funcional conformada por varias cadenas polipeptídicas.
• El modelo clásico es la hemoglobina, donde hay 2 cadenas alfa y 2 cadenas beta.
• Para que pueda cumplir su función, deben estar las 4 cadenas presentes.
• Las inmunoglobulinas también tienen estructura cuaternaria. Cada una de las cadenas
polipeptídicas tiene una función determinada.

Enlaces Químicos en Proteínas

Enlaces Covalentes

• Puentes Disulfuro → Enlace entre 2 residuos de cisteína. Une las cadenas polipeptídicas
para formar la estructura cuaternaria de una sola proteína. Es un enlace fuerte.
• Enlaces Amida → Es el enlace peptídico entre un carboxilo y un amino de aminoácidos.
Es covalente y planar, por lo que es fuerte y no puede rotar. Le da maleabilidad. Son
responsables de formar la estructura primaria de las proteínas, por lo que es la más difícil
de destruir. Se necesita hacer una hidrólisis a ebullición.

Enlaces No Covalentes

• Puentes de Hidrógeno → Forman la estructura secundaria (hélices alfa y hojas plegadas


beta) y terciaria de las proteínas. En hélices alfa, lo hacen cada 4 aminoácidos. En las
hojas plegadas beta, se pliega la cadena sobre sí misma y se forma el enlace.
• Puentes Salinos (Iónicos) → Hacen la interacción entre los aminoácidos con carga.
• Interacciones Electrostáticas (Van der Waals) → Se relacionan con la masa de los
átomos que conforman ciertas regiones. Repelan o atraen algunos grupos funcionales
para que la proteína se pliegue.
• Interacciones Hidrofóbicas → Las proteínas de canal interaccionan con los lípidos de las
membranas. Entre menos polar y más larga sea la cadena de aminoácidos, más se va a
plegar para evitar el contacto con el agua.

Dominios o Motivos

• Son cadenas polipeptídicas que se identifican en la proteína y tienen una función


determinada. Como son cadenas polipeptídicas, es estructura cuaternaria.
• La ADN polimerasa procariota tiene 13 subunidades simétricas. Cada una de ellas es un
dominio porque cada una cumple una función.
• La mayoría de las proteínas tienen dominios conservados. Tienen secuencias semejantes,
no iguales, pero la función es la misma.
• Las hemoglobinas en las distintas especies también tienen dominios conservados, a pesar
del ambiente en el que vivan.
• Conociendo el dominio o motivo, se puede inferir la función de la proteína.
• Los dominios hoy en día se conocen como motivos.
• La horquilla B es un motivo que consiste de hoja plegada beta, giro y hoja plegada beta.
Se encuentran en regiones que hacen interacción a nivel de membranas.
• Los meandros B son estructuras más complejas. Se encuentran en el interior de las
membranas. Están formados por hojas plegadas beta.
• Los barriles B son los canales a nivel de membrana. Permiten el ingreso de moléculas
grandes a la célula.

Motivos del ADN

• El motivo HTH (hélice, giro, hélice) en una proteína indica que la proteína interacciona
con el ADN.
• El motivo de hélices arrolladas o zipper de leucina funciona como una tijera. Las
proteínas con este motivo también interaccionan con el ADN.
• Otro motivo que indica interacción con el ADN es la mano EF. Necesita iones de calcio
para poder estabilizar la estructura.

Funciones
• Las proteínas son necesarias para la vida. Todas las patologías se basan en proteínas.
• Están relacionadas con todos los procesos vitales al interior de la célula.
• Enzimas digestivas → Amilasa, lipasa, pepsina, tripsina. Convierten las moléculas
complejas en monómeros durante la digestión.
• Transporte → Hemoglobina y albumina. Transportan sustancias por el cuerpo, utilizando
la sangre o linfa como canal.
• Estructurales → Actina, tubulina y queratina. Son componentes de soporte.
• Hormonas → Insulina y tiroxina. Coordinan la actividad entre los sistemas en el humano.
• Defensa → Inmunoglobulinas. Protegen al cuerpo de patógenos.
• Contráctiles → Actina y miosina. Funcionan en la contracción muscular.
• Almacenamiento → Proteínas vegetales (fríjoles), albumina. Proveen alimento al
embrión en las primeras etapas y a las semillas.

Priones

• Priones → Partículas infecciosas de tipo proteico.


• Son proteínas normales que todos producimos. Se encuentran ancladas en la membrana
plasmática de las neuronas, mirando hacia la parte extracelular.
• También se pueden encontrar en tejido sanguíneo, el hígado, los riñones, entre otros.
• Son proteínas anómalas sencillas, pero su anomalía viene dada por mala conformación
tridimensional, no por mutación.
• Están formadas por hélices alfa y hojas plegadas beta.
• La proteína está completa, pero se pliega mal, convirtiéndose en proteína infecciosa.
• Son causantes de las encefalopatías espongiformes transmisibles (EET).
• Cuando la proteína prion normal cambia a una proteína prion anormal, las hélices alfa
cambian por hojas plegadas beta. Quedan más hojas plegadas beta.

Encefalopatías Espongiformes Transmisibles

• Enfermedades que se presentan a nivel cerebral.


• Hay una anomalía a nivel del tejido. Son transmisibles.
• Aun no existe cura para estas enfermedades, solo tratamientos paliativos.

Historia

• En los años 70, se encontraron individuos en una misma familia con ataxia (movimientos
descontrolados), temblor y muerte en cuestión de meses.
• Lo denominaron “virus lento” porque las personas se enfermaban y aparecían los
síntomas después de muchos años (15-20).
• Se encontró la enfermedad en los indígenas Fore de Nueva Guinea.
• Los indígenas la denominaron Kuru, que significa “temblor”. Fue una epidemia.
• Daniel Carleton Gadjusek hizo las observaciones en Nueva Guinea. Vio que comían el
cerebro de los guerreros caídos de otras tribus y que se enfermaban primero las mujeres,
ya que eran las primeras que comían, seguidas de los niños y de los hombres.
• La tribu Fore se extinguió por el Kuru.
• En 1980, Gran Bretaña era productor de carne. Se desató una pandemia de la
enfermedad de las vacas locas. Las vacas y las ovejas sufrían temblores y morían.
• Bloquearon la carne de Gran Bretaña y sacrificaron todo el ganado.
• La causa era que alimentaban a las vacas y ovejas con restos concentrados de las mismas
vacas y ovejas que sacrificaban.
• Stanley Prusiner descubrió que en los individuos con Kuru, las proteínas priones eran
proteínas anormales.

Proteína Prion

• El gen PRNP codifica para la proteína prion (PrP). Se encuentra ubicado en el brazo corto
del cromosoma 20 y está compuesto de 2 o 3 exones (depende de la especie).
• El gen se expresa en un marco de lectura simple. Hay un promotor, un primer nucleótido
y un terminador. La zona promotora es rica en guanidinas.
• La proteína prion humana contiene aproximadamente 250 aminoácidos y es semejante a
la de otros mamíferos. Es una proteína pequeña.
• Es una sialoglicoproteína, que significa que está unida a ácido siálico y a un glucósido y
tiene un peso molecular de 33-35 KD.
• Se encuentra anclada a la membrana plasmática a través de una glicoproteína de
fosfatidil inositol (GPI) ligada a su extremo carboxilo terminal. El amino está libre.
• Las 2 formas de la proteína (normal y anormal) son transcritas desde el mismo gen.
• Las modificaciones ligadas a la enfermedad ocurren a nivel post-transcripcional.
• La estructura del gen y la secuencia de la proteína han sido altamente conservadas.
• Diversas mutaciones del gen PRNP son responsables de las EET en humanos:

1. Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ)


2. Síndrome de Gertsmann-Straussler-Scheinker (SGSS)
3. Insomnio Familiar Fatal (IFF)

• Las proteínas priones tienden a juntarse y formar pilas.


• La proteína tiene unas repeticiones de octapéptidos. Hay 8 aminoácidos que forman una
estructura y se repiten varias veces.
• Tiene un centro hidrofóbico, sitios susceptibles a glicosilación y puentes disulfuro que
permiten que se de el apilamiento.

Nomenclatura

• La proteína prion normal se representa como PrPc (proteína prion celular) o PrPsen
(proteína prion sensible), ya que las proteínas normales son sensibles a la destrucción
por calor, ácidos y proteasas. Es la forma constitutiva del gen PRPN.
• No se conoce la función de la proteína, pero se cree que está relacionada con las
funciones sinápticas de la neurona.
• La forma anómala se representa como PrPsc (proteína prion scrapie) o PrPres (proteína
prion resistente), ya que es altamente resistente a calor, ácidos, proteasas y a la
proteólisis con proteinasa K. Se encuentra en los tejidos de pacientes con EET.
• Como es resistente a ácido, no le pasa nada en el estómago. Se absorbe, pasa al torrente
sanguíneo como proteína prion anormal, se pega a una proteína normal y le cambia la
forma, convirtiéndola en anómala.
Naturaleza de la Proteína

• La PrPc tiene más hélices alfa (4, 40%) que hojas plegadas beta (2, 3%).
• La PrPsc tiene más hojas plegadas beta (43%) que hélices alfa (2, 34%).
• La infección tiene un largo periodo de incubación y es resistente a las radiaciones
ionizantes y ultravioletas que destruyen los virus y ácidos nucleicos.
• Cuando se apilan las proteínas priones anómalas en la membrana, forman estructuras
con espacios amiloides, que hacen que no se transmita bien el impulso nervioso.
• Cuando se apilan las proteínas priones normales, no dejan ningún espacio. Forman
estructuras compactas.
• Las proteínas anormales hacen que las normales se plieguen de manera incorrecta.
Generalidades de la Proteína Prion

• La capacidad infecciosa de la PrPsc se debe a su conformación anormal, la cual genera un


almacenamiento cerebral de formación de placas amiloides insolubles.
• La conformación anormal puede ocurrir espontáneamente como un evento raro, o
frecuente cuando la secuencia de una proteína es alterada por una mutación o está
inducida por un prion infeccioso.
• En las encefalopatías que se dan por una mutación, cambian ciertos aminoácidos y esto
causa que se de un plegamiento distorsionado.
• La infección por PrPsc solo se va a dar si en el huésped hay PrPc semejante a la anómala.
• Hay 20 tipos diferentes de la proteína prion anormal en humanos.

Formas de Infección

• Por infecciones como el Kuru o Creutzfeldt-Jakob.


• Forma iatrogénica (mala praxis).
• Por mutaciones.

Hemoglobinopatías

Hemoglobina

• Es una proteína formada por 2 subunidades 𝛼 y 2 subunidades 𝛽.


• Cada subunidad es una cadena polipeptídica.
• Para que la hemoglobina pueda cumplir su función, deben estar las 4 subunidades.
• Contienen un grupo prostético llamado grupo hemo, un tetrapirrol que mantiene el
átomo de hierro adentro y lleva a cabo el intercambio gaseoso a nivel sanguíneo.

Hemoglobina en Humanos

• Hay hemoglobinas embrionarias, hemoglobina fetal y hemoglobinas del adulto.


• Varían con el estado de desarrollo porque dependen de la afinidad que deba tener la
hemoglobina por el oxígeno.
• En las etapas embrionarias y fetales, hay mayor afinidad por el oxígeno que en adultos
por la manera en la que se lleva a cabo el intercambio gaseoso.
• Para pasar de hemoglobina embrionaria a fetal y a adulta, es necesario reprimir ciertos
genes que codifican para las globinas embrionarias (𝜁 y 𝜀) y activar los genes que
codifican para las globinas fetales (𝛾) o en adultos (𝛽).

Hemoglobinas Embrionarias

• Hb Gower 1 → 2𝜁2𝜀
• Hb Gower 2 → 2𝛼2𝜀
• Hb de Portland → 2𝜁2𝛽
• Tienen mucho que ver con las características poblacionales.

Hemoglobinas Fetales

• HbF → 2𝛼2𝛾

Hemoglobinas del Adulto

• HbA1 → 2𝛼2𝛽
• HbA2 → 2𝛼2𝛿

• Los genes que codifican para 𝛼 y 𝜁 son muy similares. Provienen del mismo gen ancestral.
• Los 𝜀, los 𝛾 y los 𝛿 son similares a los 𝛽. Codifican para el mismo tipo de polipéptido.
• Cuando el 𝛼 o el 𝛽 no se pueden expresar en adultos, los suple uno de los parecidos,
pero el individuo va a tener una hemoglobinopatía, ya que no es normal.
• Si el adulto tiene una globina anormal, puede tener problemas de afinidad por el O2, pero
no tiene consecuencias severas. Causa agotamiento y cansancio.

Globinas

Globinas 𝛂

• Existen 4 genes para globinas 𝛼, localizados en el cromosoma 16, al igual que los 𝜁.
• Como hay 2 cromosomas 16, va a haber 2 en uno y 2 en otro.
• Poseen 142 aminoácidos.
• Se encuentran en la HbA1, HbA2, HbF y Gower 2.
• Las mayoría de las mutaciones en los genes de las globinas 𝛼 producen talasemia
(deleción o ausencia del gen que codifica para la globina).

Globinas 𝛃

• Existen 2 genes que codifican para globinas 𝛽, localizados en el brazo corto del
cromosoma 11, al igual que los 𝜀, los 𝛾 y los 𝛿.
• Poseen 147 aminoácidos.
• Se encuentran en la HbA1 y Portland.
• Las mutaciones en los genes de las globinas 𝛽 también producen talasemia y
hemoglobinas anormales, que en la mayoría de los casos no alteran la salud.
• Las hemoglobinas anormales son más letales en los genes para globinas 𝛽 porque solo
hay un gen por cromosoma 11.

Familias de Genes

• Existió un gen ancestral para globinas. Hubo una inserción o mutación a nivel del gen,
originando 2 tipos de globinas diferentes (𝛼 y 𝛽), que a su vez sufrieron modificaciones,
originando todos los tipos de genes que codifican para globinas.
• Cuando hay un grupo de genes en un cluster que codifican para proteínas con una misma
función, reciben el nombre de familias de genes.
• Hay una familia de genes para globinas 𝛼 y otra familia de genes para globinas 𝛽.

Hemoglobinopatías en el Continente Americano

Hemoglobina S (HbS)

• Es drepanocítica o de células falciformes. Es una alteración en la 𝛽-globina.


• Se cambia una adenina por una timina, cambiando un glutamato por valina.
• El glutamato tiene carga negativa, por lo que va hacia el exterior, mientras que la valina
es no polar, por lo que va hacia el interior. Esto causa un cambio en la conformación de la
proteína, causando un cambio en la funcionalidad de la misma.
• Los individuos homocigotos pueden presentar anemia hemolítica crónica y/o problemas
vaso-oclusivos. Los glóbulos rojos toman una apariencia de estructuras alargadas.

Hemoglobina C (HbC)

• Es una alteración en la posición 6 del gen de la 𝛽-globina.


• Cambia una citosina por una timina, cambiando un glutamato por lisina.
• La lisina tiene carga positiva, así que también va a estar hacia el exterior, pero los
puentes salinos se ven afectados. Pasa desapercibida muchas veces.
• En heterocigotos, es asintomático. Pueden presentar microcitosis y resistencia de los
glóbulos rojos a hemólisis. En homocigotos, puede haber hemólisis y esplenomegalia.

Hemoglobina E (HbE)

• Es una mutación en la posición 26 del gen para la 𝛽-globina.


• En lugar de codificar para glutamato, codifica para lisina.
• Ocurre lo mismo que en la HbC. Pasa casi desapercibida.

Talasemias

• Son trastornos sanguíneos hereditarios que causan la destrucción de glóbulos rojos.


• Talasemias alfa → Medio Oriente.
• Talasemias beta → Mediterráneo. Llega acá por migración.
• Puede darse la pérdida completa del gen.
• Los niños que nacen con talasemia mayor (homocigotos) pueden sufrir de anemia grave
durante el primer año, deformidades óseas, fatiga, insuficiencia del crecimiento,
dificultad respiratoria e ictericia. Puede causar mortinato.

Vías de Reparación del ADN

Resumen

• Las células cancerosas son quimiorresistentes y radiorresistentes.


• La resistencia se da porque reconocen el daño hecho al ADN por la quimioterapia y la
radiación y lo reparan por distintas vías de reparación.
• Usando inhibidores de las vías de reparación del ADN, la quimioterapia sería más eficaz.

Introducción

• La radiación y las quimioterapias citotóxicas inducen la muerte en células tumorales,


pero también causan daño a tejidos normales.
• Pueden causar toxicidad en el sistema gastrointestinal y hematopoyético.
• Los tumores desarrollan resistencia al tratamiento.
• Se buscan alternativas que dañen las células tumorales, pero no las normales.
• Los factores ambientales y errores en la replicación también dañan el ADN, pero las
células tienen vías para repararlo.
• La reparación es una vía de señalización que requiere proteínas sensoras, transductoras y
efectoras, que a su vez forman una red.

Tipos de Daño al ADN por Tratamientos contra el Cáncer

Rompimiento de Doble Cadena del ADN

• RDCs → Rompimientos de Doble Cadena del ADN.


• Pueden llevar a muerte celular o a inestabilidad genómica si no se reparan.
• Los directos son inducidos por radiación ionizante, luz UV, radicales libres y bleomicina.
• Son causados por anticancerígenos de manera selectiva en las células en la fase S para
que no puedan seguir replicándose.
• Los indirectos también se llaman RDCs asociados con la replicación. Se forman después
de un daño inicial al ADN.
• Si una horquilla de replicación se encuentra con un RCS, colapsa y lo convierte en RDC.

Modificaciones de Bases y Entrecruzamiento

• Algunos agentes causan que las bases se modifiquen, se intercalen o se entrecrucen.


• Esto puede causar RDCs porque se frenan las horquillas de replicación.
• Los agentes alquilantes pueden modificar una base, entrecruzar 2 bases o entrecruzar
ADN con proteína. Los que se usan en quimioterapia son mostazas nitrogenadas,
nitrosoureas, aziridinas, triazenos y compuestos de platino.

Bloqueo del Metabolismo de Nucleótidos y Síntesis de ADN

• Algunos agentes inhiben la síntesis del ADN teniendo como blanco enzimas o complejos
ADN-proteína requeridos para la replicación.
• Los antifolatos (metotrexato), fluoropirimidinas (5-fluorouracilo), gemcitabina y
análogos de adenosina bloquean el metabolismo de los nucleótidos, causando así RDCs.
• Los inhibidores de topoisomerasas también bloquean la replicación y la transcripción.
• Evitan que se vuelvan a ligar los extremos después de los cortes del ADN. Causan RDCs y
se usan en el tratamiento de cáncer de pulmón de células pequeñas y de ovarios.
• Antraciclinas → Inhibidores de la topoisomerasa II.
• Camptotecina → Inhibidores de la topoisomerasa I.

Vías de Reparación del ADN

• RNH → Recombinación No Homologa. Repara los RDCs directos.


• RH → Recombinación Homologa. Repara los RDCs asociados con la replicación.
• Los aductos de ADN (formas cancerígenas) son causados por agentes alquilantes y
pueden ser eliminados y reparados por la BER antes de la replicación.
• BER → Vía de Reparación por Escisión de Bases. Elimina la base o secuencia dañada.
• NER → Vía de Reparación por Escisión de Nucleótidos. Elimina cadenas de 24-30 pb.
• RD → Reparación Directa. Repara el ADN dañado sin eliminar la base dañada.

Inhibidores de la Reparación del ADN Combinados con Antineoplásicos

Sensibilizadores a Agentes Alquilantes

• Los agentes alquilantes son la forma de quimioterapia más prescrita en adultos y niños,
en combinación con antraciclinas y esteroides.
• Incluyen la ciclofosfamida, la ifosfamida, el melfalán, el clorambuzil y la descarbizina.
• La temozolida (agente alquilante) cambió la práctica en el tratamiento de gliomas.
• Se combina con pseudosustratos para la O-6-metilguanina-ADN-metiltransferasa
(MGMT), que remueve alquilaciones sobre la posición O6 de la guanina en la vía de
reparación. Estos pseudosustratos no permiten que esto pase y así no se repara el ADN.
• Los compuestos con mejores expectativas son la O6-benzilguanina y lomeguatrib,
también conocido como O6-(4-bromotenil) guanina o PaTrin-2. Son pseudosustratos.
• La resistencia a agentes alquilantes O6 puede ser revertida eliminando la MGMT.
• En un ensayo clínico con O6-benzilguanina en fase I, se determinó la dosis máxima
tolerada de temozolida, así como la dosis efectiva para eliminar la MGMT.
• También se demostró que la mezcla de O6-benzilguanina y lomeguatrib causa
mielosupresión significativa, por lo que se debe reducir la dosis de agentes alquilantes.
• Se está probando la combinación de temozolida con inhibidores de la poli(ADP-ribosa)
polimerasa I (PARP1), que repara el ADN por la vía BER.
• Las lesiones causadas por la temozolida son reparadas por la vía BER. Por esto se inhibe.
• Los inhibidores de la PARP1 son GPI-21016, INO-1001 y AG-014699.

Quimioterapia a Base de Platino

• Los agentes quimioterapéuticos son el cisplatino, el carboplatino y el oxaliplatino.


• No existen agentes que puedan revertir la resistencia a compuestos de platino.
• Los inhibidores de PARP1 combinados con platino matan células tumorales, induciendo
regresión de varios tumores.
• El ABT-888 (inhibidor de PARP1 y PARP2) potencia la regresión de tumores tratados con
temozolida, cisplatino o ciclofosfamida.

Radiosensibilizadores

• La proteinquinasa ADN-dependiente (ADN-PK) funciona en la vía RNH cuando hay un


daño por radiación ionizante.
• Las células defectuosas en ADN-PK son muy sensibles a la radiación.
• Por esto, los inhibidores de la ADN-PK sensibilizan tumores al tratamiento con radiación.
• Un ejemplo es el NU7441, que sensibiliza tumores a inhibidores de la topoisomerasa II.

Inhibidores de la Reparación del ADN como Monoterapia

• Los inhibidores de la reparación del ADN son tóxicos para las células cancerosas y no
tienen tantos efectos adversos en el paciente. Inhiben la proliferación del cáncer.
• Se usan inhibidores de PARP para tratar pacientes con cáncer de mama y ovarios por
deficiencias en los genes BRCA1 o BRCA2.
• Las células con mutaciones de BRCA1 y BRCA2 tienen defectos en la vía RH. Son más
sensibles a los inhibidores de PARP que las células heterocigotas o silvestres.
• Los inhibidores de PARP inducen RCSs, que pueden convertirse en RDCs.
• Estos serían reparados por la vía RH, pero la vía está bloqueada en células cancerosas
deficientes en BRCA1 o BRCA2. Por esto, son sensibles a los inhibidores de PARP.
• Se ha utilizado el inhibidor de PARP AZD2281 en pacientes con cáncer de mama y ovarios
por mutaciones en los genes BRCA1 o BRCA2.
• Se utiliza el inhibidor del PARP1 AG014699 en pacientes con cáncer de mama y ovarios
avanzado o metastásico por mutaciones en los genes BRCA1 o BRCA2.
• No todos los pacientes responden a estos inhibidores como monoterapia.
• Las células defectuosas en proteínas relacionadas con recombinación son muy sensibles a
la inhibición de reparación del ADN.

Inhibidores de las Vías de Reparación de RDCs

• El bloqueo del punto de control en la fase G2 del ciclo celular potencia el efecto de
compuestos que dañan el ADN.
• La cafeína inhibe a la ATM y a la ATR, proteínas fundamentales en la respuesta a RDCs.
• Causa que las células pasen a mitosis sin reparar el ADN, resultando en apoptosis.
• Estudios demostraron radiosensibilización en células con p53 mutado después de la
inhibición del punto del control de G2 con UCN-01 y cafeína.
• La proteína Chk1, importante en la respuesta a RDCs, es uno de los blancos de UCN-01.
• Se utiliza UCN-01 con perifosina para pacientes con recaída y leucemia aguda, con
cisplatino para tumores solidos y con irinotecan para cáncer de mama triple negativo.
• El KU-55933 es un inhibidor específico de ATM. Sensibiliza las células a los tratamientos.
• El complejo MRN es clave en la vía de reparación de RDCs, por lo que es requerido para
activar el punto de control en G2. Es un blanco atractivo para los anticancerígenos.
• NBS1 también puede ser un blanco efectivo en la terapia contra el cáncer.
• Mirin es un inhibidor específico del complejo MRN que inhibe la activación de ATM e
inactiva la actividad de endonucleasa de la MRE11.

Perspectivas

• La excesiva producción de lesiones durante la replicación mata las células cancerosas.


• Los inhibidores de la reparación del ADN incrementan el daño en las lesiones replicativas,
causando la muerte de las células.
• El incremento en la expresión de oncogenes induce estrés replicativo. Si se usan
inhibidores de reparación en estas células, las lesiones serian más tóxicas y morirían.

Reparación del ADN

Daños en el ADN

• La función de la reparación es mantener la información genética intacta. Está relacionada


con la replicación porque en la reparación se da algo de replicación.
• Muchos agentes pueden producir daños. Se producen por:

1. Errores en la Replicación → Se incrementan si el balance de dNTP se desordena. Si


hay un dNTP en exceso, la polimerasa se altera y lo incorpora.
2. Daños Espontáneos → Miles de bases se pierden espontáneamente.
3. Daños Endógenos → Se producen por la generación de radicales libres como
subproductos de la respiración aerobia. Aceleran la ruptura de las cadenas de ADN.
4. Daños Exógenos:

a) Radiaciones Ionizantes → Los rayos X y Y causan RCSs y RDCs, dañan bases y


generan radicales libres.
b) Radiaciones UV → Causa la formación de enlaces intracadena (dimerización de
pirimidinas) en orden de abundancia: T-T, C-T, C-C.
c) Agentes Alquilantes → Etil metano sulfonato (EMS), metilnitrosourea (MNU) y
N-metil-N’-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG).
d) Ácido Nitroso → Provoca desaminación de bases.
e) Agentes Voluminosos → Forman lesiones voluminosas. Benzopireno.
f) Agentes Formadores de Enlaces Covalentes Intercadena → Paran la replicación.
Tipos de Daños

• Cambios de Una Base → Afectan la secuencia pero no la estructura. No afectan la


transcripción ni la replicación. Ejercen su daño sobre futuras generaciones.
• Distorsiones Estructurales → Impiden la replicación y la transcripción. Los ejemplos son
los dímeros de pirimidinas y los enlaces covalentes entre bases de cadenas opuestas.

• El daño causa problemas hasta que es reparado. Debe repararse para evitar mutaciones.
• Los mecanismos de reparación son redundantes. Pueden participar varios para una sola
lesión. Esto es un mecanismo de seguridad por si falla algún mecanismo.
• Los mecanismos de reparación no funcionales producen mutaciones. Un exceso de
mutaciones puede llevar a la formación de un tumor.

Mecanismos de Reparación

Reparación Directa

• Se revierte la lesión. La enzima fotoliasa repara los dímeros de timina producidos por la
luz UV. La fotoliasa reconoce la distorsión. La luz UV activa la enzima, que rompe el anillo
de ciclobutano y se libera.

Mecanismos de Escisión

• Inducen la eliminación de la zona donde está la lesión, como un dímero de timina.


• Algunas bases modificadas se reparan así. La O6-metilguanina se repara por una
metiltransferasa que elimina el metilo, que se transfiere a la enzima dejándola inactiva.
• Hay 2 tipos de mecanismos de escisión:

1. BER (Reparación por Escisión de Bases)

• La base modificada se escinde. Cuando las citosinas se oxidan y se convierten en


deoxiuracilos, la N-uracilglicosidasa rompe el enlace glicosídico que une a la base
con el azúcar, originando un hueco en el ADN.
• Las AP endonucleasas reconocen al ADN al que le falta una base y lo cortan. Las
exonucleasas degradan el ADN a partir del corte.
• La zona que dejan es reparada por la ADN polimerasa y sellada por la ligasa.
• En cada célula se generan 10,000 sitios AP diarios. Los repara el reparosoma,
que está formado por 4 proteínas:

a) UDG → Elimina el uracilo.


b) HAP1 → Corta la cadena azúcar-fosfato.
c) Polimerasa B → Introduce el nucleótido que faltaba.
d) Ligasa → Sella el corte.

2. NER (Reparación por Escisión de Nucleótidos)

• Se corta la cadena azúcar-fosfato. Los genes implicados son los Uvr.


• Los mutantes en Uvr son sensibles a la luz UV, por lo que confieren resistencia.
• 2 UvrA rastrean el ADN hasta encontrar la distorsión. UvrB queda unido a la
zona lesionada, pero UvrA se desprende. Se recluta UvrC.
• UvrC hace 2 cortes endonucleotídicos a ambos lados de la lesión (5 nts en
dirección 3’ y 8 nts en dirección 5’).
• UvrD (helicasa II) desplaza al oligonucleótido que incluye la distorsión.
• La ADN polimerasa I rellena el hueco a partir del extremo 3’ OH libre.
• La ligasa lo sella. Esto también se da en eucariotas.
• Los pacientes con xeroderma pigmentosa tienen mutaciones en genes
implicados en las vías de reparación por escisión de nucleótidos.
• La XPA reconoce la lesión, la helicasa TFII abre el ADN en la zona adyacente a la
lesión y XP G y XP F cortan y eliminan la zona de lesión.
• Se libera el oligonucleótido de 24 nts y RFA coloca la pinza PCNA para que la
ADN polimerasa III rellene el hueco.

Reparación de Despareamiento de Bases

• Es cuando la ADN polimerasa comete errores y coloca nucleótidos que no corresponden.


• La actividad exonucleasa de la ADN polimerasa evita los errores, pero si no lo hace se
tiene que eliminar.
• En E. coli, los genes Mut eliminan los despareamientos.

Mecanismo de Reparación del Sistema Mut

1. Unión de Mut S al error. Mut S recluta a Mut H y Mut L. El ensamblaje del complejo
activa la endonucleasa de Mut H.
2. Mut H introduce una mella en la cadena sintetizada, del lado 5’ del GATC. La metilasa
DAM tarda unos minutos en actuar. Es el tiempo de reconocimiento del error.
3. La degradación de la cadena con el nucleótido errado comienza en la mella y continúa,
mediada por EXO VII hacia el lado 5’ o EXO I hacia el lado 3’ del error.
4. La región de simple cadena expuesta es protegida del error por SSB.
5. El hueco es llenado por Pol III y sellado por la ligasa.

• En humanos, el proceso es similar, pero sin la metilación. Pueden estar implicadas las
discontinuidades en la cadena.
• Los cánceres colorrectales están asociados a mutaciones en genes como los Mut S y L.
• El mecanismo de reconocimiento se basa en la interacción de Mut S con PCNA.
• Hay veces que no se distingue la base dañada y se da la mutación.
• La desaminación de 5-metilcitosina a timina genera un par G-T y el sistema de reparación
lo convierte en G-C. Mut S siempre traslada la T.
• La actividad reparadora por Mut Y traslada la A.

Reparación Inducida

• Son de emergencia. Tienen más proteínas implicadas en recombinación y reparación.


• Si la E. coli tiene más lesiones de lo normal, se induce la respuesta SOS.
• La zona dañada está en la banda molde, no la complementaria.
• Se puede reparar por recombinación, suministrando el molde correcto de un ADN
homólogo, o por replicación errónea, donde la polimerasa copia un molde defectuoso.
• La respuesta SOS consiste en la inducción de la expresión de unos genes que están
reprimidos por la proteína lex A, formando un operón. Lex A se autorregula.
• El represor lex A se proteoliza con la presencia de Rec A activado y se induce la expresión
de los genes. Es una respuesta reversible.
• En la respuesta SOS se induce la expresión de los siguientes genes:

1. Uvr → Reparación por escisión de nucleótidos.


2. Rec A → Puede suministrar un molde a la zona dañada para que sea reparada.
3. UmuD/C → Genera mutaciones.
4. sfi A → Hace que se pare la división celular.

• La respuesta SOS también induce los lisógenos de lambda. El ADN de lambda se integra
con el bacteriano. Para mantenerlo, se requiere el represor del fago lambda.
• RecA degrada el represor del fago y se da la lisis celular y salen los fagos a otra célula.
• Cuando hay muchas lesiones en eucariotas, se activa la proteína p53, que activa a p21.
• P21 para el ciclo celular en G1 y se impide la replicación del ADN para dar tiempo para
reparar los errores.
• P53 activa mecanismos de reparación y causa apoptosis.
• La apoptosis se da en células con muchas lesiones en el ADN, en el desarrollo y en el
proceso de selección de repertorio de los linfocitos.
• Por lo tanto, p53 protege el ADN e impide la proliferación de células defectuosas. Es
conocida como el ángel guardián del genoma.

Mutágenos, Carcinógenos y Teratógenos

Agentes Mutagénicos

• Pueden ser agentes físicos, químicos o biológicos que alteran la información genética a
nivel del ADN en un organismo.
• Los agentes mutagénicos causan daños en el ADN en forma de mutaciones.
• Carcinógenos → Causan cáncer.
• Teratógenos → Agentes fisicoquímicos que causan mutaciones en el ADN que se reflejan
en la descendencia. Los niños nacen con defectos porque el material genético de alguno
de los padres tenia una mutación.
• Aunque todos estemos expuestos a estas sustancias, no necesariamente se va a dar la
mutación en todos. Está relacionado con la dieta alimenticia (minerales).

Agentes Físicos

• Las radiaciones pueden venir de distintas fuentes. A la que estamos más expuestos es a
la luz solar (UV). Emite radiaciones que pueden ser potenciadas o disminuidas.
• El vidrio es un potenciador de la radiación, mientras que las nubes la disminuyen.

→ Señal de peligro por radiación.

• Entre más cerca se encuentre la persona de la fuente de radiación, más perjudicial será.
• También puede ser por rayos X, rayos gamma, cambios de temperatura y rayos cósmicos.
• Los cambios drásticos de temperatura suelen hacer rupturas del ADN.
• En los países tropicales, un individuo puede sufrir 65.000 mutaciones en un solo día.
• La radiación ultravioleta causa que se formen dímeros de pirimidinas en el ADN.

Agentes Químicos

• El humo del cigarrillo (fumadores pasivos), los compuestos utilizados en el laboratorio y


las cenizas y gases en las quemas son ejemplos de agentes mutagénicos.
• Los fumadores pasivos sufren más efectos perjudiciales que los fumadores activos. Se
puede desarrollar cáncer en pulmones, lengua, garganta o tiroides.
• Casi todos los agentes usados para marcar ADN son agentes mutagénicos.
• El exceso de alcohol está asociado con la represión de genes que protegen al organismo
de agentes nocivos causantes del cáncer.
• El yoduro de potasio, el sulfato de cobre, las sales de plomo, el uretano, el gas mostaza,
la acridina, los peróxidos orgánicos y la colchicina también son agentes mutagénicos.
• En el microondas, los plásticos producen dioxinas en forma de gases. Las dioxinas son
cancerígenos solubles en agua. El líquido que se evapora gotea en la comida.
• Las facturas vienen recubiertas de un polvo que es sumamente tóxico en cantidades
elevadas.

Agentes Biológicos

• El Helicobacter pylori es una bacteria del sistema digestivo que tiende a enquistarse y a
alimentarse de las células que se encuentran allí. Se forman úlceras y cáncer gástrico.
• El Virus del Papiloma Humano (HPV) también es un agente mutagénico. Los síntomas se
desarrollan principalmente en los hombres.
• La Hepatitis B puede causar cáncer hepático. El virus de Epstein Barr causa linfomas.

Agentes Teratógenos

• Son aquellos que aumentan la incidencia de malformaciones congénitas cuando se


administran o actúan en animales en estado de gestación.
• Las únicas mutaciones que se pueden transmitir a la descendencia están en los gametos.
Daños en el ADN

Radiaciones

• La radiación ultravioleta hace que se formen dímeros de pirimidina.


• Las radiaciones ionizantes (rayos X y gamma) causan la rotura de cadenas de ADN.
• La diferencia entre la radiación UV y las ionizantes viene dada por la longitud de onda.
• Con ambas radiaciones va a haber fractura, rotura o daño a nivel del ADN.
• El organismo se encarga de reparar el daño, pero como quedan fragmentos sueltos y la
enzima no sabe en que dirección van, se reorganiza la información genética.
• En la gran mayoría de las casos, hay información genética que queda bloqueada porque
se coloca en sentido contrario. La información no se puede expresar.

Análogos de Bases

• Son muy semejantes a las bases nitrogenadas normales. No son específicos.


• Son incorporados en los nucleótidos como si fueran bases nitrogenadas.
• Los más comunes son el 5-bromouracilo y la 2-aminopurina.
• El 5-bromouracilo se incorpora en lugar de timina y la 2-aminopurina en lugar de adenina.
• Se utilizan como drogas para combatir el cáncer porque se incorporan al ADN de la célula
cancerígena y la ADN polimerasa que lleva a cabo la replicación no las reconoce.
• Esto causa que se detenga el proceso de replicación y se de apoptosis de la célula.

Agentes Alquilantes

• Son capaces de transferir grupos alquilo (metilo, vinilo, etilo) de una molécula orgánica a
las bases nitrogenadas, causando que las bases nitrogenadas cambien su configuración.
• Si a una citosina se le agrega un grupo metilo, funciona como una timina.
• Si la ADN polimerasa cree que la citosina es una timina, la va a aparear con adenina y va a
quedar un par C-A. La célula se va a volver a duplicar, el ADN se va a replicar y, cuando las
hebras se separen, se va a formar un par A-T, en lugar de un par G-C.
• Hay casos en los que se da reparación, pero no en todos.
• De las 65.000 mutaciones que sufre un individuo en un día, 1.100 no son reparadas y
permanecen en el organismo.
• Esto indica que las mutaciones se encuentran en lugares que no son esenciales para el
mantenimiento de la especie humana.
• El etilmetanosulfonato es un agente alquilante monofuncional, mientras que las
mostazas de nitrógeno, la mitomicina y la nitrosoguanidina son bifuncionales.

Colorantes Intercalantes

• La acridina y el bromuro de etidio son moléculas grandes con anillos.


• El bromuro de etidio penetra fácilmente las células y tiene altísima afinidad por las bases
nitrogenadas. Se mete entre las 2 hebras de ADN, rompiendo los puentes de hidrógeno.
• Cuando se vuelven a formar los enlaces puentes de hidrógeno, se arman mal.
• Una adenina se aparea con una timina diferente a la que tenía como pareja antes, y la
región adyacente no se puede aparear. El fragmento de ADN sin aparearse se degrada.
• El fragmento de ADN que se degrada puede contener la información necesaria para
regular la expresión de alguna proteína.
• Las ventajas del bromuro de etidio son que dura mucho tiempo y que es más económico
que los químicos que se han fabricado para reemplazarlo.
• Las desventajas son los efectos nocivos y que no se puede descartar fácilmente.

Agentes Cancerígenos

Pulmón

• Arsénico → Patilla
• Asbesto → Cemento
• Benzopireno → Humo de cigarrillo
• Cromato de zinc → Limpiadores (también en riñón y estómago)

Hígado

• Cloruro de vinilo
• Bebidas alcohólicas

Boca, Faringe, Laringe y Esófago

• Bebidas alcohólicas
• Consumo de tabaco
• Tabaco de mascar

Mutaciones

• Mutaciones Puntuales → Cambia un solo nucleótido dentro de la cadena. Puede ser


bueno o malo. Puede pasar inadvertido.
• Mutaciones Cromosómicas → Los cromosomas pueden acortarse o alargarse. Una parte
de un cromosoma se puede desprender y hacer parte de otro cromosoma.
• Variación del Número de Copias → Hay varias enfermedades relacionadas con la
variación del número de copias de una secuencia (Huntington).

Mutaciones Puntuales

• Sustitución → Se cambia un nucleótido por otro. Puede pasar desapercibido. Puede


haber cambio a nivel de los reguladores.
• Inserción → Se inserta un nucleótido dentro de la secuencia, alterando el marco de
lectura. La proteína que se va a sintetizar va a ser completamente distinta a la anterior.
• Deleción → Pérdida de un nucleótido dentro de la secuencia, causando corrimiento del
marco de lectura. Cambia toda la información de la proteína.
Mutaciones Cromosómicas

• Inversión → Hay rompimiento de un fragmento de ADN y la enzima no sabe en qué


sentido van entonces los puede invertir. Se bloquea la información genética.
• Deleción → Se ven los cromosomas más pequeños porque se pierden regiones enteras
como consecuencia de a radiaciones ionizantes o ultravioleta.
• Duplicación → Hay segmentos de cromosomas que se duplican, haciendo que estos se
vean más grandes de lo que realmente son.
• Translocación → Una región del cromosoma se pierde y se instala en otro cromosoma.
La información deja de expresarse. Es el tipo de mutación más común en deformaciones.

Variación del Número de Copias

• Amplificación → El gen tiene más información de la que normalmente tenía.


• Expansión de Tripletes → Se repiten los tripletes en forma de tándem. Está relacionado
con la enfermedad de Huntington y con el síndrome del X frágil.

Mutaciones y Herencia

• Si las mutaciones se dan en las células somáticas, no se transmite a la descendencia.


• Si la mutación se da a nivel de las células sexuales, se va a pasar de generación en
generación. Se denominan hereditarias.

Estudios Científicos sobre las Mutaciones

• El humo del cigarrillo tiene un gas que se llama benzopireno, que altera las bases de
guanina en el gen P53. El gen P53 es el gen primordial en la supresión de los tumores.
• Si se altera la información del gen P53, la proteína P53 no funciona. El daño que ocurre
en el ADN no se va a poder reparar y la célula se va a dividir de manera descontrolada.
• Los rayos ultravioleta causan la hidrólisis de la citosina para convertirse en citosina
hidratada, que funciona como si fuera un uracilo.
• Se aparea con adenina en lugar de guanina. En los siguientes rounds de replicación, se va
a tener la mutación del par, que conlleva a cambios en la secuencia de la proteína.
• Las dioxinas de los microondas son los que generan distintos tipos de cáncer. Todos los
recipientes que se usen deben resistir la temperatura (vidrios templados).
• La desaminación de la citosina hace que se convierta en uracilo.

Alteraciones que Requieren Reparación del ADN


• Daño oxidativo → Pérdida del doble enlace.
• Ataque hidrolítico → Rompimiento del enlace. Pérdida de la base nitrogenada.
• Metilación por medio de SAM → Cambia la base nitrogenada.
• Ocurren en el ADN de manera espontánea.
• Dependen del medio en el que se encuentre el ADN, que a su vez depende de la
alimentación de la persona.

Depuración Causada por un Agente Químico

• Se pueden perder las bases nitrogenadas y formarse sitios apurínicos o apirimidínicos


cuando se rompe el enlace glucosídico y se desprende la base nitrogenada.
• Solamente queda el esqueleto azúcar-fosfato.
• En un round de replicación, el lugar complementario al sitio apurínico o apirimidínico va a
ser ocupado por cualquier base nitrogenada. Se va a dar una mutación puntual.

Desaminación Causada por un Agente Químico

• Se da la pérdida de un grupo amino. Si se desamina la citosina, va a actuar como uracilo.


• Se va a aparear con adenina en vez de aparearse con guanina.
• Si se desamina SAM, va a actuar como una timina.
• Va a haber una modificación en la secuencia del ADN.

Formación de Dímeros de Pirimidinas

• Se forma un compuesto llamado ciclobutano.


• Ocurre cuando hay 2 pirimidinas adyacentes.
• La formación del ciclobutano es muy difícil de reparar porque se forma por enlaces
covalentes, que solo se pueden romper fácilmente con una enzima específica.
• En bacterias, se da con la fotoliasa, que actúa en presencia de luz.
• En humanos, no existe esta enzima.

Reparación del ADN

Reparación Directa

• Hay una alteración de la base nitrogenada porque está metilada.


• La O-6-metilguanina-metiltransferasa (MGMT), a través de un residuo de cisteína, se une
al grupo metilo y rompe el enlace entre el grupo metilo y la base nitrogenada.
• La enzima ALKBH remueve grupos alquilo para los grupos B homólogos en humanos. Le
agrega un grupo OH y se rompe el enlace entre el grupo alquilo y la base nitrogenada.

Sistema de Reparación BER

• Hay una base mal apareada, entonces se da la escisión de la base.


• La enzima se une al sitio en el que ocurrió el daño, escinde la base mal apareada y coloca
el nucleótido correcto (Pol). Una ligasa vuelve a unir los espacios que se abrieron.
• Lo único que se rompe es el enlace fosfodiéster.

Sistema de Reparación NER


• Se elimina todo el nucleótido y parte de los nucleótidos que están al lado.
• Se da un corte que se lleva el fragmento y una polimerasa copia complementario al
molde, generando una cadena de ADN normal. La ligasa lo vuelve a sellar.
• Se rompen los enlaces glicosídicos a lado y lado de donde se encuentra el error.

Sistema de Reparación de Apareamiento Erróneo

• Los genes involucrados son los genes MUT.


• Los MUT se colocan a lado y lado del daño, se corta un fragmento grande de ADN y la
polimerasa copia complementario al molde. Se sella con la ligasa.

Sistemas de Reparación

• Si hay un daño en una sola hebra de ADN, funciona el sistema de reparación BER.
• Si el daño es en las 2 hebras, funcionan los sistemas de recombinación homóloga y NHEJ
(recombinación no homologa).
• Cuando la recombinación es entre homólogos, no hay cambio de la secuencia. Una hebra
sirve de molde para sintetizar la complementaria.
• Cuando es entre no homólogos, hay un cambio de un fragmento grande de ADN porque
se copia la información de otro fragmento de ADN de otro gen. El daño es grave.
• Cuando hay bases mal apareadas, inserciones y deleciones, funciona el sistema de
reparación de apareamiento erróneo, NER y reparación directa reversa.
• Cuando el daño es una mutación puntual o algo no complejo, actúa el sistema de
reparación por escisión de bases (BER).
• Si el daño es complejo, va a actuar el sistema de reparación por escisión de nucleótidos
(NER), la reparación de apareamiento erróneo, inversión (cross-read entre hebras de
ADN), recombinación entre homólogos y por último, reparación cuando los extremos del
ADN buscan formación complementaria en otro lugar de la cadena.

Mutaciones

• Se dan a 3 niveles:

1. Alteraciones a Nivel Celular

• Existe una gran diferencia entre las alteraciones en las células somáticas y las
alteraciones en los gametos.
• Cuando el daño ocurre en células somáticas, no pasa a la descendencia.
• Cuando ocurre en gametos, toda la descendencia va a estar afectada.
2. Alteraciones a Nivel del ADN

• Pueden ocurrir a nivel del cromosoma. El cromosoma altera su estructura.


• El cromosoma puede volverse más grande o más pequeño.
• Pueden ocurrir a nivel génico. Se altera la expresión del gen o la información que
está codificada dentro del mismo.

3. Alteraciones a Nivel de Localización

• Define el tipo de ADN que sufre la alteración. Pueden darse a nivel nuclear (ADN
genómico) o a nivel mitocondrial (ADN mitocondrial).
• El ADN mitocondrial codifica para proteínas que funcionan en la mitocondria.

Mutaciones Génicas

Mutaciones Puntuales

• Son la mayoría de las mutaciones que ocurren diariamente.


• Ocurren en sitios específicos llamados puntos calientes.
• Siempre que la célula sea afectada por un agente, el lugar en que se va a llevar a cabo la
mutación va a ser el mismo. Ej. Gen que codifica para la proteína p53 (cromosoma 19).
• El gen que codifica para la proteína p53 tiene 3 puntos calientes en su cadena.
• Siempre que se alteren esos puntos, la proteína no va a funcionar. Esto es letal.
• En estas mutaciones, hay cambio de un nucleótido por otro en la secuencia de ADN.
• Se puede inducir un cambio en la conformación o estructura de una proteína.
• El cambio de un nucleótido por otro puede hacer que se genere un sitio de corte y
empalme en un exón del ARN. Se da la pérdida de una región del gen.
• Todas las mutaciones puntuales pueden llamarse mutaciones por sustitución.
• Transiciones → El cambio es purina por purina o pirimidina por pirimidina.
• Transversiones → El cambio es purina por pirimidina o pirimidina por purina.

Mutaciones Silenciosas

• La mutación se da en el tercer nucleótido del codón.


• Sin importar que ha habido un cambio, el codón codifica para el mismo aminoácido.
• La proteína no resulta afectada. No se altera la expresión del gen.
• En algunos casos, la mutación se da en el primer nucleótido del codón, pero aun así
codifica para el mismo aminoácido y la proteína no se modifica.

Mutaciones sin Sentido

• La mutación hace que el codón resultante sea un codón de terminación.


• El resultado es una proteína truncada que suele ser anómala o inactiva. Se degrada.
• Los codones de terminación son UAA, UAG y UGA.
Mutaciones Neutras

• Se dan cuando el codón resultante de la mutación codifica para otro aminoácido.


• Conservativas → Los aminoácidos tienen propiedades fisicoquímicas semejantes.
• No Conservativas → Poseen propiedades fisicoquímicas diferentes. Cambian la
conformación de la proteína.

Mutaciones por Deleción

• Hay pérdida de un nucleótido que causa corrimiento del marco de lectura.


• Se altera la estructura primaria, secundaria y terciaria de la proteína. Se inactiva.
• El cambio puede ser leve si se sacan 3 nucleótidos o un múltiplo de 3.

Mutaciones por Inserción

• Se inserta un nucleótido dentro de la secuencia y hay corrimiento del marco de lectura.


• Al igual que la deleción, se altera la estructura primaria, secundaria y terciaria de la
proteína, que deja de ser funcional.

Mutaciones Cromosómicas

Deleción en el Cromosoma

• Se pierde una región o un fragmento del cromosoma.


• Se da como consecuencia de radiaciones ionizantes.
• El cromosoma disminuye de tamaño y cambia su estructura.
• Una deleción en el cromosoma 1 puede causar un neuroblastoma o un melanoma (p22).
• En el cromosoma 3, puede causar un carcinoma de células pequeñas en el pulmón.
• En el cromosoma 11, puede causar un tumor de Wilms.
• En el cromosoma 12, puede causar tumores testiculares.
• Todas las deleciones en los cromosomas conllevan a tipos de cáncer.

Inserción en el Cromosoma

• Se pueden dar durante o después de la replicación, reparación o recombinación.


• Los sitios en los que se tienden a dar las inserciones y las deleciones en los cromosomas
tienden a ser siempre los mismos.

Inversión en el Cromosoma

• El fragmento del cromosoma se desprende y cuando se inserta en otra región, no se


inserta en la misma dirección, sino que cambia.
• No se va a expresar ninguna proteína. La información es disfuncional.
• Se da como resultado de radiaciones ionizantes.
Duplicación en el Cromosoma

• Es la repetición de fragmentos de ADN en los cromosomas como consecuencia de un


proceso de crossing over desigual entre secuencias homólogas.
• Las secuencias homólogas se recombinan originando la duplicación del gen.
• Hay cambio de tamaño porque se altera la cantidad de material genético.
• Es lo que hacen las bacterias para burlar el sistema inmune del hospedero.

Translocación entre Cromosomas

• Hay un desprendimiento de un fragmento del cromosoma que pasa a otro cromosoma.


• Los cromosomas reciben secuencias que no les corresponden.
• Si se llega a expresar, no codifica para ningún tipo de proteína.
• Puede ser la causa de cáncer de ovario.

Apoptosis

• Existen unas proteínas anti-apoptóticas que bloquean las señales de muerte y unas
proteínas pro-apoptóticas que son inductoras de muerte.
• Son las que van a mantener el equilibrio que va a permitir que la célula actúe normal.
• Los inconvenientes se presentan cuando se alteran estas proteínas porque se pierde el
equilibrio y se dan cambios a nivel celular.
• Todas las proteínas hacen parte de la familia Bcl-2 porque tienen dominios semejantes.

Proteínas Anti-Apoptóticas

• Todas las proteínas anti-apoptóticas hacen parte de una familia de proteínas llamada Bcl-
2. Las Bcl-XL también hacen parte de las bloqueadoras de las señales de muerte.
• Todas tienen las mismas subunidades. Son multidominio.

Proteínas Pro-Apoptóticas

• También hacen parte de las Bcl-2.


• Pueden ser multidominio o de dominio BH3 solo (un solo dominio).

Inducción de Apoptosis

Vía Extrínseca

• Se generan una serie de señales relacionadas con el sistema inmune que van a generar
otras señales extracelulares que van a inducir el proceso apoptótico.
• En las membranas celulares, se encuentran unas proteínas llamadas factores de necrosis
tumoral (TNF). Una de las proteínas de esta familia es la Fas (primera señal apoptótica).
• La Fas se encuentra en toda la superficie de la membrana fluida. Se puede mover.
• Cuando hay un daño a nivel celular y el sistema inmune lo detecta, los linfocitos
citotóxicos envían una señal en forma de ligando (ligando del Fas).
• El ligando del Fas se une a su receptor Fas y hace que todos los receptores de la
membrana se aglutinen, formando trímeros.
• Las proteínas de los trímeros tienen un dominio interno. Atraviesan la membrana.
• En la parte interna de la membrana, la región se llama dominio de muerte porque es la
primera molécula que va a inducir una cascada de señales de muerte.
• Al dominio de muerte, se une una proteína llamada factor asociado al dominio de
muerte, y se forma un complejo entre el dominio de muerte, el factor asociado a
dominio de muerte y una enzima inactiva que se llama procaspasa 8.
• Cuando la procaspasa 8 se une a este complejo, el complejo va a hacer proteólisis de la
procaspasa, generando 2 subunidades, una larga y una corta.
• Para que se pueda formar una caspasa 8 completamente activa, deben unirse 4 de estos
fragmentos, 2 grandes y 2 pequeños, formando un tetrámero.
• Como la caspasa 8 es una caspasa activadora, activa a la procaspasa 3 para convertirla en
caspasa 3 activa. La principal proteína del proceso apoptótico es la caspasa 3.
• Casi todos los procesos que se llevan a cabo a nivel de la degradación del núcleo y del
citoesqueleto tienen que ver con la caspasa 3.
• También es posible que la caspasa 8 recién activada actúe a nivel del retículo
endoplásmico para que se libere la procaspasa 12. La activa a caspasa 12, que a su vez
activa a la procaspasa 3 para convertirla en caspasa 3.
• Otra opción es que la caspasa 8 active a la procaspasa 7 para formar la caspasa 7, que es
otra caspasa efectora de apoptosis. Se encarga de la deshidratación del citoplasma.
• La caspasa 8 también puede activar unas proteínas pro-apoptóticas, como la Bid.
• La proteína Bid va a activar a unas proteínas (Bax, Bak) que se van a anclar a nivel de la
membrana mitocondrial. Se aglutinan y generan orificios o poros.
• A través de los poros, se liberan todos los elementos del periplasma mitocondrial, entre
los que se encuentra el citocromo C.
• Como la mitocondria deja de funcionar, la célula deja de realizar los procesos biológicos y
va a inducir el fenómeno de apoptosis.
• Las proteínas CASPER y FLIP inhiben a la procaspasa 8. Los virus producen estas proteínas
para que la célula no haga apoptosis.

Vía Intrínseca

• Se generan una serie de señales intracelulares que van a inducir el proceso. Estas señales
generalmente vienen dadas por alteraciones a nivel del ADN nuclear.
• Las alteraciones pueden generar oncogenes (oncoproteínas).
• La célula sintetiza una proteína señal llamada Bim, que es pro-apoptótica.
• La proteína Bim inactiva a todas las proteínas anti-apoptóticas Bcl-2, Bcl-XL y activa a las
proteínas pro-apoptóticas Bax y Bac.
• Bax y Bac se anclan en la membrana de la mitocondria, se aglutinan y forman poros.
• A través de los poros, sale todo lo que está acumulado en el espacio periplásmico de la
mitocondria, incluyendo el citocromo C.
• Cuando aumenta la cantidad de citocromo C a nivel del citosol, forma un complejo con
un factor activador de apoptosis (Apaf-1), ATP liberado y la procaspasa 9.
• Este complejo recibe el nombre de apoptosoma y degrada a la procaspasa 9 para
convertirla en caspasa 9. La caspasa 9 activa a la caspasa 3, que induce la apoptosis.
• La proteína Bim mantiene el equilibrio entre los factores de muerte y los inductores de
muerte. Siempre está sintetizada.
• Cuando se forman los poros en la mitocondria, se secreta una proteína llamada Smac o
Diablo. Su función es activar al inhibidor de apoptosis IAP. Induce a que la célula
mantenga el daño, lo que la hace inviable.
• Dependiendo de si hay más concentración de citocromo C o Smac, se regula la apoptosis.
• Existe un factor contrario a IAP que se llama AIF. Induce la apoptosis.

Funciones de las Caspasas

• Caspasa 7 → Hace que las células apoptóticas se deshidraten y se contraigan para que la
señal de muerte no llegue a las células vecinas.
• Caspasa 3 → Voltea la membrana plasmática para que los fosfolípidos miren hacia fuera
y puedan señalizar a los macrófagos. Degrada el citoesqueleto y forma los cuerpos
apoptóticos. Degrada a un inhibidor (ICAD) de DNAsas. Degrada el núcleo y fragmenta el
ADN. Los pedazos de ADN quedan dentro de los cuerpos apoptóticos.
• Caspasa 6 → Puede ser activada por la caspasa 3. Degrada a la proteína NuMa, que se
encarga de mantener unidos a los nucleosomas.

Cáncer

• Se caracteriza por una división descontrolada de las células porque no funcionan los
reguladores del ciclo celular. Las células cancerígenas proliferan de manera permanente.
• Se puede dar tanto por factores internos, como por factores externos.
• Las células cancerígenas pueden inducir a otras células para que cumplan funciones
anómalas, que vienen dadas por la capacidad de generar unas toxinas.
• Inducen a sus células vecinas a que produzcan factores de crecimiento de vasos
sanguíneos para poder irrigar y llevar nutrientes a las células cancerígenas.
• El cáncer es una enfermedad regulada por los propios genes.
• Es la primera causa de muerte en el mundo.

Causas del Cáncer

• Virus → Oncovirus
• Bacterias → Helicobacter pylori
• Químicos
• Factores físicos → Radiaciones.
• Herencia → Genes reguladores del ciclo celular mutados.
• Dieta → Azúcar. Se debe ingerir antioxidantes.
• Hormonas → Regulan el ciclo.

• Todas estas causas influyen sobre el ADN.


• Hay 3 tipos de genes responsables de que se produzca el cáncer:
1. Genes Supresores de Tumores
2. Oncogenes o Protooncogenes
3. Genes Encargados de la Reparación del ADN

• Cualquier alteración a estos genes va a generar cáncer.

Células Cancerígenas

• Cumplen con 4 características:

1. Autonomía → No se rigen por los reguladores que mantienen un tejido. Tienen su


propio sistema. Se regulan y proliferan de manera descontrolada.

2. Clonalidad → Una sola célula desencadena el cáncer. Prolifera y da lugar a un clon


de células malignas. Se ve mucha mitosis en un mismo tejido.

3. Anaplasia → Carecen de diferenciación estructural y funcional. Los volúmenes del


núcleo y del citoplasma no son habituales.

4. Metástasis → Capacidad de crecer y diseminarse a otras partes del cuerpo.

• La mitosis de las células cancerígenas dura menos que la de las células normales. Pasa de
durar horas a durar minutos. Están en división constante.

Características Distintivas del Cáncer

• Las señales de proliferación se mantienen. No hay control regulador por p53.


• Evitan los supresores de crecimiento. La célula esconde los receptores de estos.
• Activación de la invasión y de la metástasis. La célula se disemina a otros tejidos.
• Las células tienen inmortalidad. Crecen de manera descontrolada.
• Produce angiogénesis (formación de vasos sanguíneos), enviando señales a las células
normales para que generen una señal que permite el crecimiento de los vasos.
• Resisten las señales de muerte, como las del proceso apoptótico.

Genes y Proteínas Reguladoras

• Protooncogenes → Inducen a que se de la división celular.


• Genes Supresores de Tumores → Inhiben la división celular.
• Se expresan para mantener la homeostasis de la división celular.
• Cuando estos genes o sus proteínas se alteran, se altera la proliferación.
• El cáncer es una enfermedad genética del ciclo celular.
• Cuando hay una mutación en el protooncogén, se convierte en un oncogén.
• Los oncogenes son genes anómalos. La cantidad elevada de las oncoproteínas no puede
ser regulada por la cantidad de las proteínas supresoras de tumores. Se forma un tumor.
• Cuando hay una mutación en el gen supresor de tumores, la proteína deja de funcionar, y
como se sigue produciendo protooncoproteína, el resultado va a ser el mismo.
• Sin importar dónde se de la mutación, el resultado va a ser el mismo.
• Hay genes supresores de tumores con muchos puntos calientes.

Ciclo Celular

• Existen unos checkpoints, en los que las ciclinas y las cinasas dependientes de ciclinas van
a controlar todo el ciclo celular.
• Permiten que las células que se encuentran en la fase G1 puedan pasar a la fase S, que es
la de duplicación del ADN.
• El checkpoint de la mitosis puede generar 2 señales:

1. Que la célula no vaya a mitosis porque no es viable (apoptosis).


2. Que la célula vaya a mitosis.

• En algunos individuos, las proteínas de checkpoint no funcionan y dan vía libre para que
la célula con ADN dañado entre al proceso de mitosis.
• Hay otro checkpoint para pasar a la fase G1 nuevamente. Si la célula tiene un daño, se
envía a la fase G0.
• Cuando estos procesos no se dan correctamente, el niño nace con defectos.

Control del Ciclo Celular

• En este proceso influyen las hormonas.


• Es regulado por las ciclinas y las Cdk (cinasas dependientes de ciclinas).
• La ciclina D se va a producir en el comienzo de G1 y se acumula.
• La Cdk4, que también es producida durante G1, está inactiva por su conformación. Debe
sufrir una proteólisis para activarse.
• Cuando hay cantidades elevadas de ciclina D, se une con Cdk4 y la activa.
• La unión de la ciclina D a Cdk4 hace que el checkpoint haga posible el paso a mitosis.
• La ciclina D se degrada, volviendo inactiva a Cdk4.
• Esto se da por las altas concentraciones del factor de maduración proteico (MPF).
• La activación y la inactivación de la Cdk4 por la ciclina es lo que regula el ciclo celular.
• Durante la mitosis, hay altas concentraciones de ciclina, que bajan bruscamente por las
concentraciones elevadas del factor de maduración proteico.

Proteínas del Cáncer

Protooncogenes

• Son genes normales que provienen de los virus.


• Cumplen funciones normales a nivel celular.
• Producen protooncoproteínas normales reguladoras.
• Si sufren alguna mutación, se activan y se convierten en oncogenes.
Oncogenes

• Expresan oncoproteínas, que causan una proliferación descontrolada de la célula porque


no responden a los reguladores.
• Se han secuenciado aproximadamente 60 genes diferentes.

Tipos de Protooncogenes

Factores Estimuladores del Crecimiento Celular

• Los TGF favorecen o inhiben la transcripción de ciertos genes relacionados con el


desarrollo y el crecimiento celular.
• Los Smads son pequeños cuerpos proteicos que inducen el crecimiento celular.

Receptores de los Factores de Crecimiento

• El protooncogen erbB codifica para el receptor del factor de crecimiento EGF.


• Por mutaciones del gen, siempre van a estar activos.

Proteínas Citoplasmáticas en Procesos de Transducción de Señales

• La mutación hace que el oncogén exprese una proteína que siempre está excitada.
• Una de estas proteínas es la proteína Ras.
• Siempre va a estar enviando señales.

Factores de Transcripción

• Los oncogenes fos, jun y myc codifican para proteínas que regulan la señalización, el
control del ciclo celular y la apoptosis.

Activación del Ciclo Celular e Inhibición de Apoptosis

• La Bcl-1 codifica para la ciclina D1.


• La Bcl-2 inhibe la apoptosis.

Genes Oncosupresores

• Regulan la actividad de los oncogenes. Se conocen como genes supresores de tumores.


• Cuando hay alteraciones que generan cambios en los genes oncosupresores, hay cáncer.
• Una mutación puede producir la pérdida de la función de la proteína, pero las proteínas
sintetizadas a partir del alelo normal suplen la carencia.
• Para que se pierda la función totalmente, se deben mutar los 2 alelos.
Estadísticas

• En Colombia, el cáncer que más se presenta es el cáncer de próstata, seguido del cáncer
de mama, cáncer cervical, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón, etc.
• El cáncer con mayor mortalidad es el de hígado y el de páncreas.

Sistema Inmune

Conceptos

• Antígenos → Moléculas de tipo proteico o polisacarídico capaces de desencadenar una


respuesta inmune en el individuo.
• Epítope → Zona del antígeno que es reconocida por el anticuerpo.
• Anticuerpo → Moléculas de tipo proteico que reconocen y se unen a antígenos
específicos, los cuales a su vez estimulan su acción. También se conocen como Ig.
• Parátopo → Área del anticuerpo que reconoce al antígeno.
• La unión antígeno-anticuerpo actúa como señal para las células fagocíticas.

Sistema Inmune

• Está conformado por algunos órganos del cuerpo y tejido linfoide.


• Los órganos son el timo, la médula ósea, bazo, nódulos linfáticos, amígdalas, etc.
• Crean una respuesta contra agentes que atentan contra el organismo.
• Los linfocitos son las células predominantes del sistema inmune. Transitan entre el
sistema circulatorio y los canales linfáticos.

Células Madre

• Células Totipotentes → Pueden dar lugar a todos los tipos celulares. Pueden originar un
organismo completo. Se puede expresar cualquier tipo de gen.
• Células Pluripotentes → Pueden originar distintos tipos de células especializadas por
mitosis. Se encargan de la regeneración y reparación de los tejidos.
• Células Multipotentes → Pueden originar solamente algunos tipos de células
relacionadas entre sí, especialmente si provienen de un mismo tejido embrionario.

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