PREMIO NOBEL: MÉTODO DE LA

TERMINACIÓN EN CADENA O MÉTODO

DIDEOXI.

EL MÉTODO DE SÍNTESIS DE DNA IN

VITRO USANDO EL COMPUESTO
DIDEOXI QUE ORIGINA LA
TERMINACIÓN DE LA ELONGACIÓN
DEL DNA EN ALGNUNOS MOMENTOS.

EL MÉTODO FUE POSTERIORMENTE

AUTOMATIZADO

SANGER COMPARTIÓ SU SEGUNDO

PREMIO NOBEL CON WALTER
GILBERT. EL PRIMER PREMIO NOBEL
LO GANO POR EL DESARROLLO DE LA
SECUENCIACIÓN DE LAS PROTEÍNAS.
FREDERICK SANGER,
SECUENCIACIÓN, MÉTODO
ENZIMÁTICO, NUCLEOTIDO DIDEOXI
(ddNTP), NUCLEOTIDO TRIFOSFATO
(DNTP), ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA, MÉTODO
AUTOMÁTICO DE SECUENCIACIÓN,
RADIOMARCAJE FLUORESCENCIA,
FLUOROCROMOS, DIFERENCIAS
ENTRE EL MÉTODO ENZIMÁTICO Y EL
AUTOMÁTICO.
1. CUATRO TUBOS, UNA MEZCLA DE REACCIÓN
DIFERENTE EN CADA TUBO: 4 NUCLEÓTIDOS
TRIFOSFATO (dATP, dCTP, dTTP Y dGTP), ADN
POLIMERASA I, UN CEBADOR MARCADO
RADIACTIVAMENTE Y SÓLO UN TIPO DE NUCLEÓTIDO
DIDESOXI.

2. EN CADA TUBO SE PRODUCEN UNA SERIE DE

FRAGMENTOS DE DNA DE DIFERENTE LONGITUD, QUE
TERMINAN TODAS EN EL MISMO NUCLEÓTIDO.
3. EN GELES VERTICALES DE ACRILAMIDA.
4. PELÍCULA FOTOGRÁFICA DE AUTORRADIOGRAFÍA.
5. EL ADN DE NUEVA SÍNTESIS CRECE EN LA DIRECCIÓN
5' → 3',
1. MODIFICACIÓN DEL MÉTODO AUTOMÁTICO DE
SANGER (FRAGMENTOS DE ADN DE HASTA
500pb).

2. CADA (ddNTP) UNIDO A UN FLUOROCROMO

DISTINTO.

3. CAPILAR Y UN POLIMERO QUE ACTÚA COMO EL

GEL DE POLIACRILAMIDA.

4. LASER EXCITA EL FLUOROCROMO.

5. INFORMACIÓN AL COMPUTADOR
LA LETRA N SIGNIFICA QUE NO HA SIDO
POSIBLE DETERMINAR EL NUCLEÓTIDO
SA: Automatización completa y la rapidez.
Leyendo orden de 450 nucleótidos en el plazo de
una hora (2-4 horas SE).

SA; Marcación fluorescencia SE: Marcación

radiactividad

SA: Una sola mezcla de reacción, SE: Cuatro

mezclas de reacción.

SA: Leer al mismo tiempo los DNAs producto de 4

reacción SE: un carril en el gel para cada muestra.